逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

肝细胞癌组织中HCV复制中间体的研究

本文报道在逆转录反应时仅加入与负链（复制中间体）ＨＣＶＲＮＡ互补的有义外引物，待将逆转录酶变性灭活后，再加入反义外引物，然后进行两轮聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。用这种逆转录反应和套式ＰＣＲ方法，检测了ＨＣＣ组织和对照血清中负链ＨＣＶＲＮＡ的存在状况。结果负链ＨＣＶＲＮＡ在１０例（其中３例为已测血清总ＨＣＶＲＮＡ阳性，余７例为随机选择）ＨＣＣ组织中检出５例，而在５例（其中３例与组织配对）总ＨＣＶＲＮＡ的ＨＣＣ阳性病人血清则均阴性。表明ＨＣＣ组织中确有ＨＣＶ复制，从而进一步提示ＨＣＶ感染与我国ＨＣＣ的发生密切相关。     

丙型肝炎病毒核酸定量分析的临床意义

目的探讨慢性丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ）与病情及治疗的关系。方法应用美国ＡｃｕＧｅｎ公司提供的定量ＰＣＲ试剂盒，通过荧光检测仪对５０例丙型肝炎患者的血清ＨＣＶＲＮＡ作定量检测。结果５０例患者血清ＨＣＶＲＮＡ均值为（１０００５±３３１６）×１０７拷贝／Ｌ，ＨＣＶＲＮＡ水平与ＡＬＴ呈正相关（ｒ＝０６８６７，Ｐ＜００５）。有输血史的患者ＨＣＶＲＮＡ水平明显高于无输血史者。ＨＣＶＲＮＡ血清水平低者对ＩＦＮ－α反应较好。结论ＨＣＶＲＮＡ定量检测在一定程度上反映肝脏炎症活动度及肝损害程度，有助于指导抗病毒治疗。     

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染杨桂玲，陈文 ，杨碧云，曹瑞生，文艺丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染是输血后非甲非乙型肝炎的主要原因。在免疫抑制群体如恶性血液病，尤其是化疗或骨髓移植治疗后，以及再生障碍性贫血，常需输血治疗，大大增加了感染的机...     

丙型肝炎病毒C33c抗原及HBxAg在人原发性肝细胞癌中的分布及意义

作者应用免疫组化法对１０２例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）组织进行了ＨＣＶ及ＨＢＶ抗原定位研究。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原及ＨＢｘＡｇ在ＰＨＣ中的阳性检出率分别是８１．４％及７４．５％，Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ阳性占所检病例９４．１％，二者同时阳性为６１．８％，１０２例ＰＨＣ中５０例有癌旁肝组织，其Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ的阳性检出率分别是６２％和９２％。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原定位于肝癌细胞的胞浆内，在胞浆内局灶分布或充满整个胞浆，有的紧靠核膜，胞核未见阳性信号。Ｃ３３ｃ抗原阳性细胞在ＰＨＣ中呈散在、局灶分布为主，在癌旁肝组织呈弥漫分布为主。     

定量聚合酶链反应在检测丙型肝炎病毒感染血清中的应用

定量聚合酶链反应在检测丙型肝炎病毒感染血清中的应用李伯安马洪滨薛净乔小红程云作者单位：１０００３９北京解放军第３０２医院附表ＰＣＲ定性与ＰＣＲ定量比较项目ＨＣＶＲＮＡ定量结果（拷贝／微升）＜１０１１０１～１０５＞１０５合计巢式（＋）４７７１６９７定性...     

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系谢小明，苏先狮，张铮，郑宣鹤，陈一德丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是输血后肝炎和散发非甲非乙肝炎的主要致病因子。近年来国内外已报道，在肝细胞癌（ＨＣＣ）患者特别是乙型肝炎病毒标志阴性者中，抗－ＨＣＶ有高检出率。作者为进...     

慢性肝病患者血清和肝组织乙,丙型肝炎标志物的检测及意义

目的:探讨血清免疫学标志物与血清、肝组织HBV DNA、HCV RNA的关系。方法:对病理诊断为慢性肝炎、肝炎后肝硬化的22例患者进行了血清免疫学标志物、斑点杂交HBV DNA的检测,并采用PCR技术对血清、肝组织的HBV DNA、HCV RNA分别进行了检测。结果:8例病理诊断为慢性肝炎的患者血清HBsAg、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe、抗-HBs、抗-HCV阳性者分别为3例、4例、0例、1例、2例、0例,斑点杂交HBV DNA阳性1例,血清、肝组织PCR HBV DNA阳性分别为4例、6例,HCV RNA阳性分别为3例、4例,14例病理诊断为肝炎后肝硬化的患者血清HBsAg\抗-HBc、HBeAg、抗-HBe、抗-HBs、抗-HCV阳性数分别为14例、4例、2例、7例、0例、3例,斑点杂交 HBV DNA阳性7例,血清、肝组织PCR HBV DNA阳性分别为10例、10例,PCR HCV RNA阳性4例、4例。结论:对乙、丙肝免疫学标志物的分析应结合PCR检测结果;慢性肝病病理学改变与感染HBV和/或HCV有关,以HBV感染为多见,少数为HCV感染;血清和肝组织PCR HBV DNA、HCV RNA具有一致性,血清检测结果基本可反映肝内病毒复制状况。     

肝细胞癌组织中HCV基因型的逆转录原位PCR检测

目的 从分子病理学水平探讨HCV基因型与HCE发生的关系.方法 采用逆转录原位PCR法对95例HCC及其非癌组织中1b型和2a型HCV进行检测,同时采用Okamoto法对HcC组织RNA抽提物中HCV基因型加以验证.结果 HCC中HCV阳性率为44%(42/95),检出3种HCV基因型,包括1b(13例,31%)、2a(23例,55%)、混合型(1b+2a,2例,5%)和3a(4例,10%),1b型检出率(14%)与2a型者(24%)无显著性差异(χ2=3.427,P＞0.05),两型与HCE主要病理学参数的相关性相似.2a型阳性细胞在癌和非癌区的分布相似,而1b型在癌组织多呈局灶分布,在非癌区多呈局灶/弥漫分布.HCG中1b型HCV的核一胞质型/核型阳性信号较2a型者明显多见(χ2=4.073,P＜0.05).去除逆转录并用RNase A处理后,1b型和2a型HCV仍分别有5例和9例可见阳性信号.结论 我国两种常见的HCV基因型与HCC发生的相关性相似,HC/3中HCV相关DNA及其与宿主基因组整合的可能性不能除外.     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA定量分析：竞争性聚合酶链反应

目的：探讨ＨＣＶ复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）定量检测２７例慢性丙肝患者（ＣＨＣ）血清ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＣＨＣ患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平变化范围１０２～１０６ｃｏｐｉｅｓ／５０ｕｌｓｅｒｕｍ。１３例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）患者血清ＨＣＶＲＮＡ平均水平（５．０６８±１．０４，Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ）明显低于１０例慢性活动性肝炎患者（ＣＡＨ）（５．７９±０．２５）和４例肝硬化（Ｃｉｒ）患者（５．８３±０．７５），Ｐ值均＜０．０５。血清ＨＣＶＲＮＡ水平同ＡＬＴ水平间呈正相关（ｒ＝０．４９９７，Ｐ值＜０．０５）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，ＨＣＶ复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中ＨＣＶ仍活跃复制，并与肝病进展相关。     

丙型肝炎病毒——石蜡包埋肝组织原位杂交

为探讨ＨＣＶ感染的组织病毒学表现，以狄高辛素标记ＨＣＶｃＤＮＡＣ亚基因探针，对３４例血清学诊断的非甲非乙肝炎病人的石蜡包埋肝组织进行原位杂交。检出乙型肝炎４例，丙型肝炎１４例，乙型和丙型混合１３例。乙型肝炎均ＨＢｓＡｇ（—）。ＨＣＶ（＋）细胞多肿胀变性，常有淋巴细胞包绕，其分布邻近汇管区或炎症病灶。提示ＨＣＶ感染同时致细胞病变和免疫介递损害。     

有偿供血员,丙型肝炎及肝癌患者HCV基因分型

为了解本地区ＨＣＶ基因亚型的分布情况，作者对采自６６例有偿供血员、８７例输血后丙型肝炎、１５例散发性丙型肝炎和９例原发性肝癌患者的共１７７份ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清标本，进行了ＨＣＶ基因亚型分析。结果发现除２例输血后丙肝患者系ＨＣＶ－Ⅲ感染外，其余被检者均为ＨＣＶ－Ⅱ感染。此结果表明ＨＣＶ－Ⅱ是本地区的ＨＣＶ伏势株     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

HCV RNA及其编码蛋白在肝癌和癌旁肝组织中的表达

本文采用光敏生物素标记的ＨＣＶｃＤＮＡ探针和免疫金银显色法对４２例肝癌和癌旁肝组织中的ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ进行了检测，发现ＨＣＶＲＮＡ可以感染肝癌细胞，其分布状态及其抗原表达亦与肝组织一致。这些阳性细胞在组织中的感染状态多呈区域性，在此区域又可呈片状、簇状或散在分布。     

肝癌组织中丙型和乙型肝炎病毒基因状况研究

采用逆转录巢式ＰＣＲ技术检测了５１例ＨＣＣ患者的肝癌及癌周肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正负链，同时以巢式ＰＣＲ技术检测了这些组织中的ＨＢＶＤＮＡ。结果，１１．８％（６／５１）检出组织中ＨＣＶＲＮＡ正链：其中５例在癌周肝组织，２例在癌组织中检测出ＨＣＶＲＮＡ负链，由于负链ＲＮＡ为ＨＣＶ的复制中间体，不释放到细胞外，其检出ＨＣＶ感染与ＨＣＣ关系的研究提供了进一步的病因证据，组织中ＨＢＶＤＮＡ检出率高达９２．２     

聚合酶链反应检测慢性丁型肝炎血清HDV RNA的实验研究和临床观察

本文建立一种高度敏感和特异性的检测丁型肝炎病毒(HDV)RNA的方法,提高了丁型肝炎的诊断水平。以HDV RNA保守区ORF5′末端第929～1640位核苷酸为靶基因设计一对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了35例慢性丁型肝炎患者血清HDV RNA,并同时检测HBVM。35例中共检出HDV RNA421例(60％),10例HDAg阳性者HDV RNA全部阳性,25例抗-HD阳性者中有11例HDV RNA阳性(44％)。表明采用RT-PCR可以准确、快速、敏感地检测出HDV RNA,具有很强的特异性。35例中HBV DNA的检出率为34.2％,而HDV RNA的检出率为60％,HBV DNA和HDV RNA同时阳性者共9例占25.7％,提示慢性乙型肝炎病人合并丁型肝炎时,HBV的复制受到不同程度的抑制而HDV的复制较为活跃。     

HCV感染的慢性肝病患者肝组织HCV RNA和HCV C33c检测

为探讨丙型肝炎病毒在肝组织分布和致病机理，用地高辛标记的 ＨＣＶ５＇－ＮＣ区ｃＤＮＡ探针和抗ＨＣＶ Ｃ３３ｃ单克隆抗体对２４例ＨＣＶ感染的慢性肝病患者肝组织进行了原位核酸杂交和免疫组化研究，发现ＨＣＶ ＲＮＡ和Ｃ３３ ｃ阳性信号主要定位于肝细胞浆，ＨＣＶ感染的阳性肝细胞呈散在、局灶和弥漫三种形式分布，与丙氨酸转氨酶水平、肝组织学类型没有明显联系：ＨＣＶ感染的细胞周围有较多的淋巴细胞和单核细胞浸润。