感染弓形虫家兔血清循环抗原、免疫复合物及抗体消长规律的实验研究

本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察人工感染弓形虫家兔血清循环抗原(CAg)、免疫复合物(CIC)及抗体(CAb)的消长规律。发现在临床病程中,CAg消长情况与文献已证实的弓形虫的增殖消长情况相一致。对弓形虫活动性感染具有最好的诊断价值。感染兔临床各期的不同水平CAg、CIC及CAb构成的综合指标显示不同的免疫学特征,可用于弓形虫病临床分期。本文根据实验结果对血清学试验检测CAg、CIC及CAb的诊断价值及指标作了系统的评价。     

棘球蚴病CAb、CAg与CIC检测结果的评价

对棘球蚴病患者用ABC-ELISA法检测CAb,ABC-夹心双抗体法和Pernice法分别检测CAg和CIC,阳性率分别为87.0％(40/46)、15.6％(7/45)和17.8％(8/45)。在检测CAb阴性的6例中CAg阳性者4例,表明CAb与CAg同时检测可提高阳性检出率达95.6％(43/45)。 CAb阴性病例主要是肺棘球蚴病,占83.3％(5/6)。CAg的检出率仅15.6％,但特异性高,未出现交叉反应和假阳性反应。检测CIC不但检出率不高,而且非特异性反应与检测CAb时相似。     

双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.     

日本血吸虫感染兔尿液中具有诊断价值的循环抗原组分分析

目的 分析日本血吸虫感染兔尿液中具有诊断价值的循环抗原(CAg)组分,为建立尿液CAg免疫学诊断方法奠定基础。方法 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析尿液中蛋白抗原组分;甘氨酸盐酸缓冲液(简称甘盐液)解离尿液中循环免疫复合物(CIC),通过抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solube egg antigen,SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),采用免疫印渍技术(Western blot)对解离后的CAg组分进行分析。结果  SDS-PAGE结果显示,正常兔尿液中未见明显蛋白条带:感染兔尿液在未作CIC解离前,有2条主带和3条次带,主带分子量为146kDa和60kDa,次带分子量为108kDa、72 kDa和67 kDa;而利用甘盐液解离感染兔尿液中的CIC后,仅见1条主带和1条次带,分子量分别为68kDa和86kDa。对甘盐液处理后的感染兔尿液作Western blot分析,结果显示其与日本血吸虫感染兔血清和抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体反应的蛋白条带均为68kDa,而与正常兔血清和免疫前IgY反应不产生条带。结论 日本血吸虫感染兔尿液中存在具有诊断价值的CAg组分,有望建立基于IgY的尿液CAg免疫学诊断方法。     

磁珠-ELISA检测日本血吸虫循环虫卵抗原的研究

循环抗原(circulating antigen,CAg)是宿主体内活虫(包括虫卵)所产生的具抗原性的代谢物质。它的存在表明血吸虫现症感染,并能大致反映感染虫荷,而且宿主有效化疗后CAg可被宿主迅速清除。故CAg检测不仅可作为诊断的依据,还可用于疗效考核。目前国内外已建立了多种检测CAg的方法如双夹心-ELISA、斑点-ELISA、反向间接血凝试验等,并采用不同样本(血液和/或尿液)进行血吸虫CAg的检测,均取得一定的     

聚乙二醇沉淀试验检测日本血吸虫感染家兔循环免疫复合物动态变化的初步报告

应用聚乙二醇(PEG)沉淀试验对51只感染10条或50条两性日本血吸虫的家兔和5只感染25条或50条单性日本血吸虫的家兔,在感染后2～14周连续检测了CIC的水平。感染家兔的CIC平均消光值显著高于未感染家兔的PEG沉淀物平均消光值,前者随着感染时期的增长而升高,并与感染度密切相关。单性感染家兔的CIC水平要低于两性感染家兔的CIC水乎,两者的高峰均在感染后第12周,第12周后CIC水平均趋下降。     

日本血吸虫不同免疫原对小鼠Th1/Th2免疫偏移的影响

目的　观察单、双性日本血吸虫感染小鼠后Th1/Th2细胞因子水平的动态变化 ,探讨日本血吸虫不同免疫原对Th1/Th2免疫偏移的影响及与虫卵肉芽肿形成的相关性。方法　用ELISA夹心法检测单、双性日本血吸虫感染小鼠及单性感染 8w双性再感染 0～ 12w ,小鼠脾淋巴细胞培养上清Th1细胞因子IL - 2、IFN -γ和Th2细胞因子IL - 4表达水平。结果　单性感染小鼠 6～ 12w在脾淋巴细胞培养上清中可测出一定量的IL - 2和IFN -γ ,但无明显动态变化 ,而IL - 4未能测出 ;双性感染小鼠IL - 2和IFN -γ在感染后 4～ 6w开始上升 ,8w达高峰 ,随后下降 ,IL - 4则在感染后 8w时迅速上升且随着感染时间延长而明显升高 ,单性感染 8w双性再感染 4w时 ,小鼠脾淋巴细胞培养上清IL - 2、IFN -γ和IL - 4表达水平即迅速升高且在双性再感染 8～ 12w逐渐增强。结论　日本血吸虫不同免疫原对Th1/Th2免疫偏移的影响作用不同 ,Th1优势应答可能主要由虫体抗原诱导 ,Th2优势应答可能主要由虫卵抗原 (SEA)所诱导 ,后者是诱导宿主产生免疫病理反应的主要因素     

血吸虫病与乙型肝炎相互关系的研究

目的了解血吸虫病与乙型肝炎的关系及其流行规律。方法在血吸虫病流行区、控制区和非流行区的城市和农村人群采用Dot－ELISA检测血吸虫CAb、CAg及ELISA法检测HBV5项指标。结果3个试区受检者HBV阳性率分别为20．2％、29．1％、32.1％,控制区和非流行区显著高于流行区。3个试区城市比较,非流行区（32.5％）高于流行区（11．7％）和控制区（16．7％）;3个试区农村比较,以控制区最高。流行区和控制区农村高于城市,而非流行区农村和城市相同。在流行区农村,血吸虫感染阳性人群HBV阳性率（23．4％）与未感染血吸虫人群阳性率（24．3％）无显著差异,但发现合并感染都集中在CAb形成的人群中。结论各地HBV感染与环境因素及该地区对疾病的认识与预防有关。血吸虫病与乙型肝炎似乎无明显的内在联系,但有外在的协同作用。     

单性和双性日本血吸虫感染兔特异性抗体的动态研究

血吸虫病鼠肝组织内虫卵及血吸虫成虫冰冻切片抗原免疫酶染色试验(TEFS-IEST及AWFS-IEST)均能显示单性和双性日本血吸虫感染家兔特异性抗体的动态,滴度高峰均在感染后10wk。特异性抗体水平与感染度及感染期密切相关,抗虫卵抗体水平高于抗成虫者,双性感染抗体水平高于单性感染者,TEFS-IEST的检测敏感性显著高于AWFS-IEST及双面胶纸条法环卵沉淀试验。     

囊虫病人治疗前后循环抗原的动态观察

以单克隆抗体双夹心ELISA（McAb-ELISA）检测脑囊虫病人用阿苯达唑治疗前后血清中循坏抗原（CAg）的动态变化，结果显示，病人经1－3个疗程的治疗，CAg的OD均值由治疗前的0．499依次下降为0．291、0．073和0．051，而CAg的阴转率随疗程的增加而提高，1个疗程后为20．0％，2个疗程后为57．9％，3个疗程后为87．5％。选择8例脑囊虫病人同步对比检测血清CAg和CAb在不同疗程后的变化，结果CAg水平下降明显，3个疗程后，除1例外，全部转阴，而CAb水平下降缓慢，无1例转阴。因此，CAg的检测可作为囊虫病的疗效考核方法。     

日本血吸虫感染动物血清中循环抗体（CAb）及循环抗原（CAg）水平的动态研究

应用膜片固相抗原免疫酶测定法（Ｄ－ＩＥＡ）和ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫感染家兔血清中ＣＡｂ和ＣＡｇ水平时,高峰分别在感染后１０～１２周和１０周,ＣＡｂ和ＣＡｇ水平均与感染度和感染期密切相关。实验结果表明,感染宿主血清中ＣＡｂ／ＣＡｇ水平的消长规律并不一致,宿主在感染中期（感染后１０～２０周）显示ＣＡｂ检测为优势,在感染早期（感染后１０周内）则以ＣＡｇ检测为优势。本项研究可为选用适宜的ＣＡｂ／ＣＡｇ检测途径,提供依据。应用改进方法Ｄ－ＩＥＡ检测血吸虫感染者血清中特异性抗体时,可取得满意效果。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

Studies on the dynamic changes in specific antibodies in sera from animals infected with unisexual and bisexual cercariae of Schistosoma japonicum

The IEST using both liver tissue-egg frozen section of mice infected with Schistosoma japonicum and adult worm frozen section of Schistosoma japonicum (TEFS-IEST and AWFS-IEST) were performed to study the dynamics of specific antibodies in sera from rabbits infected with unisexual and bisexual cercariae of Schistosoma japonicum. Both peaks of specific antibodies appeared at the 10th week after infection. The levels of specific antibodies were much higher in bisexual infection than in unisexual infection and closely related to the intensity and duration of infection. The levels of anti-egg antibodies were higher than those of anti-adult worm antibodies. The serological reactivity of egg antigen is higher than that of adult worm antigen. TEFS-IEST shows higher sensitivity and specificity than AWFS-IEST and DGS-COPT for the diagnosis of schistosomiasis.     

日本血吸虫感染家兔红细胞上非游离性循环抗原的分离及动态水平研究

采用特定方法成功地从５０和１００条尾蚴感染的家兔红细胞上分离出非游离性循环抗原（ＮＦ－ＣＡｇ），并应用抗ＳＥＡ和ＡＷＡ的多克隆及单克隆抗体进行ＥＬＩＳＡ，对ＮＦ－ＣＡｇ水平的动态进行了观察。结果表明，ＮＦ－ＣＡｇ的水平在感染后８～１０ｗｋ间达高峰，１０ｗｋ后下降到较低水平。提示检测ＮＦ－ＣＡｇ的优势是在感染早期（１０ｗｋ内）。结果还显示，ＮＦ－ＣＡｇ水平与感染程度密切相关。在检测ＮＦ－ＣＡｇ时，特异性的多克隆抗体具有与单克隆抗体相似的检测效果。本文为探索血吸虫循环抗原的新途径和新内容及其归宿问题，提供了重要依据。     

血清、尿中日本血吸虫循环抗原水平动态的实验研究

本研究采用ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的方法,平行地对日本血吸虫病家兔血清和尿液中的日本血吸虫肠相关趋阴极抗原的水平动态进行检测。结果显示,家兔在感染血吸虫第４周后尿液中有２８．６％（２／７）可检出ＣＡｇ,１０至１２周达到高峰７１．４％（５／７）;血清中ＣＡｇ于感染后第２周可检出,８至１０周达到高峰,以后缓慢下降。提示家兔在感染１０周左右可能是尿液中ＣＡｇ检出的理想时期。     

日本血吸虫感染兔唾液中循环抗体检测的可行性研究

目的： 探索唾液作为检测日本血吸虫循环抗体样本的可行性。方法： 建立血吸虫兔感染模型, 收集感染后不同时期、再感染及治疗后不同时期的唾液和血清, 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测其中的循环抗体及其效价, 并将检测结果加以比较。结果： 唾液与血清样本检测的敏感性分别为９４７ ％ 与１００ ％ , 经χ２ 检验, 两者间差别无显著性意义。唾液与血清样本检测的特异性均为９４７ ％ , 两者一致。结论： 唾液作为样本可用于日本血吸虫循环抗体的检测。