胆汁泡蛋白成核活性及其氨基酸序列分析的研究

分离胆汁泡蛋白,研究其成核活性和末端氨基酸序列。方法:应用超速离心法分离胆石症患者胆汁泡,运用SDS-PAGE电泳分离其中胆汁泡蛋白,并经HPLC系统纯化,研究其成核活性和N-端氨基酸序列。结果:分离到一种分子量为33.5kd的胆汁泡蛋白,其促成核活性为0.30,N-端氨基酸具有较多的极性氨基酸(天冬酰、苏、丝和谷氨酰等)。结论:33.5kd胆汁泡蛋白有明显的促成核活性,其N-端极性氨基酸可能参与促成核机制。     

胆汁成核效应蛋白的分离纯化与成核活性比较

目的 纯化并比较各种成核效应蛋白的活性,筛选最具病理学意义的促成核因子。方法 通过ConA-Sepharose 4B亲和层析和Sephadex G-200、Sephadex G-100分子筛凝胶过滤以及超速离心法从胆固醇性结石病人胆汁中分离提纯70 kDa、200 kDa促成核蛋白以及33.5 kDa泡蛋白,在模拟胆汁体系中观察成核因子促进胆固醇结晶生长、析出过程,比较其成核活性。结果 四种候选的成核效应蛋白中,33.5 kDa泡蛋白是活性最强的促成核因子,成核活性强弱依次为33.5 kDa泡蛋白>200 kDa糖蛋白≈α1-酸性糖蛋白>70 kDa糖蛋白,当浓度为100／μg／ml时,33.5 kDa泡蛋白成核活性指数Ig、Ic、It分别为1.52、1.63、0.57,并随着蛋白浓度的增加,促成核活性亦随之增强(F=678.18,P<0.05),且呈剂量依赖效应。结论 胆汁中存在多种促成核作用的糖蛋白,其中33.5 kDa泡蛋白可能与胆石形成关系最为密切。     

许旺细胞分泌的蛋白对运动神经元营养作用

目的探讨许旺细胞分泌相对分子质量为67×103蛋白对培养脊髓运动神经元营养作用.方法提纯许旺细胞分泌相对分子质量为67×103蛋白,取SD胎鼠(12～14d)脊髓腹侧运动神经元培养,鉴定,将脊髓运动神经元与不同浓度的相对分子质量为67×103蛋白液联合培养,用MTT法检测该蛋白生物活性.结果许旺细胞源性蛋白(67×103)在不同的浓度下吸光度(A)值不同,显示明显的量效关系,其最佳活性浓度为20ng/ml.结论许旺细胞分泌的相对分子质量为67×103蛋白具有维持运动神经元存活作用.     

胆汁泡蛋白促成核作用及其主体活性成分的分析

目的　分析 33 5× 10 3 泡蛋白促成核活性以及多肽、糖链改变对其活性的影响。　方法　制备人工模拟胆汁 ,在偏光显微镜下观察结晶成核生长过程 ,计算成核活性 ;酶法水解蛋白多肽与糖链结构 ,通过结晶生长试验检测 33 5× 10 3 泡蛋白促结晶生长作用以及糖链水解、多肽降解产物的活性改变。　结果　 33 5× 10 3 泡蛋白具有强促成核活性 ,成核活性强达 0 310 ,在不同模拟胆汁体系中 ,成核活性基本相同 ;其结晶生长试验活性指数It、Ig、Ic分别为 0 5 7、1 5 2及 1 6 3(P <0 0 5 )。糖苷酶切、肽链酶解后其成核活性均几乎丧失。　结论　 33 5× 10 3 泡蛋白可能参与成石过程 ,其中多肽、糖链调节其成核活性。     

胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白成核活性及糖链结构的比较

目的 比较胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白促成核活性,并分析其糖链结构特点.方法 进行胆固醇结晶生长试验,检测胆石症病人和正常人相对分子质量为33 500的泡蛋白成核时间,并计算其促成核活性.采用HRP凝集素探针介导的Western-Blot印迹法分析不同来源泡蛋白糖链的结构特点.结果 胆石症病人来源的33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其平均成核时间为(3.75±0.66)d,成核活性为0.303±0.075;而正常人来源者则仅具较弱的促成核活性,平均成核时间为(8.38±0.86)d,成核活性为0.677±0.086,两者比较,差异显著(P＜0.05).胆石症病人来源的33 500泡蛋白DSA(+)、ConA(-),属于复杂型多天线聚糖;而正常人来源者为ConA(+)、DSA(-)的二天线糖链.结论 胆石症病人来源的33 500泡蛋白较正常人来源者具有更强的促成核活性,两者糖链结构特点亦有明显不同,提示泡蛋白促成核活性的改变可能由于其糖链结构特点的变化引起.     

尿核基质蛋白检测在膀胱癌诊断中的应用价值评定

目的:研究尿核基质蛋白(NMP22)在膀胱癌临床诊断和预后判定中的应用价值。方法:采用双单抗夹心酶联免疫法(ELISA)检测84例膀胱肿瘤怀疑患者和20例正常健康志愿者尿液中NMP22的含量,同时行尿脱落细胞学检测。结果: 84例中,病理检查证实膀胱肿瘤56例, 良性泌尿系疾病28例。膀胱癌患者尿中NMP22水平(53. 0×103U/L)明显高于良性泌尿系疾病(8. 8×103U/L)和正常人群(7. 7×103U/L), NMP22水平与膀胱癌浸润深度和分化程度呈正相关;以104U/L为阳性临界值,NMP22诊断膀胱肿瘤的敏感性要明显高于尿脱落细胞学检查。结论:NMP22是膀胱癌患者尿中的良好瘤标,与膀胱癌侵袭能力和恶性程度密切相关,可以作为膀胱癌诊断和预后评估的指标。     

成核效应蛋白在泡凝聚融合过程中作用的初步研究

为了探讨成核效应蛋白在泡凝聚、融合过程中的作用，作者研究了胆汁中主要的促成核蛋白系统—ＣｏｎＡ结合蛋白对模拟胆汁泡的形态与脂类组成的影响，发现ＣｏｎＡ结合蛋白在加快泡凝聚与融合的同时，也使泡胆固醇增加，磷脂减少，泡胆固醇／磷脂比增高，认为成核效应蛋白促泡凝聚与融合的本质是改变了泡胆固醇饱和度。作者的初步研究还发现泡相蛋白虽量微却具有强的促成核活性；几种已知的成核效应蛋白在泡相与微胶粒相的分布有差异；胆固醇结石患者与色素结石患者相比，泡蛋白的量与促成核活性均增高。通过泡蛋白亲和染色技术，还发现ＣｏｎＡ结合蛋白能与模拟胆汁泡形成脂质－蛋白复合体。作者认为，泡中成核效应蛋白的存在或量与质的改变，在泡凝聚与融合过程中起重要作用。     

乳腺神经内分泌癌三例

例 1　 患者女 ,5 0岁 ,因发现左侧乳房包块 1年入院。查体 :左乳腺外上象限触及 2 5ｃｍ× 3 0ｃｍ× 1 5ｃｍ包块 ,质中 ,边界不清 ,腋窝无肿大淋巴结。术后病理诊断 :左乳腺神经内分泌癌 ,免疫组化染色 (阳性细胞 <2 5 %为 +,2 5 %～5 0 %为 ++,>5 0 %为 +++) :突触素 (Ｓｙｎ) ++,神经元特异性烯醇化酶 (ＮＳＥ) +,嗜铬粒蛋白Ａ(ＣｇＡ) ++。例 2 　 患者女 ,6 0岁 ,因发现左侧乳房包块 5 0ｄ入院。查体 :左乳头内陷 ,左乳腺内下象限触及 3 5ｃｍ× 5 0ｃｍ×0 8ｃｍ包块 ,表面皮肤可见散在的红色小结节 ,边界不清 ,表面不光滑 ,酒窝…     

腰麻—硬膜外联合麻醉在妇科子宫切除术中的应用

腰麻硬膜外联合麻醉(ＣＳＥＡ)是近年开展的一种椎管内阻滞技术,我们对60例妇科子宫切除术患者比较了ＣＳＥＡ和连续硬膜外麻醉(ＥＡ)的临床资料。资料与方法择期子宫全切术60例,年龄3998±537岁,身高1634±414ｃｍ,体重6777±479ｋｇ,ＡＳＡⅠ～Ⅲ级,随机分为ＣＳＥＡ和ＥＡ两组。硬膜外麻醉穿刺间隙Ｌ2～3,局麻药2%利多卡因(含1∶20万肾上腺素)。ＣＳＥＡ组采用美国ＢＤ17Ｇ×312ｗｅｉｓｓ硬膜外穿刺针和25Ｇ×41116ｗｈｉｔａｃｒｅ腰穿针。先行硬膜外穿刺成功后退出针蕊插入腰穿针,通过硬脊膜入蛛网膜下腔注入05%布比卡因重比重液5ｍｇ…     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞增殖细胞周期的影响及其抑瘤作用

本研究旨在观察人骨形成蛋白(ＢＭＰ) 2对人脑胶质瘤细胞增殖、细胞周期的影响及其抑瘤作用 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44由本所保存。 18只ＢＡＬＢ/Ｃ胸腺缺陷裸小鼠 ,4～ 6周龄 ,体重 (18± 2 )ｇ ,购自本校动物实验中心。重组人骨形成蛋白 2 (ｒｈＢＭＰ 2 )由本校生物化学教研室蒲勤博士提供 ,16 40培养基及胰蛋白酶购自Ｇｉｂｃｏ公司。四甲基唑蓝 (ＭＴＴ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)购自华美生物公司。2 .细胞培养 :参照司徒镇强[1] 方法。3.ＭＴＴ实验 :以 5× 10 3 个对数生长期细胞接种于…     

胆汁成核活性蛋白中糖链的致石作用

目的 探讨糖链在胆石形成中的作用。方法 分别将5mg辣根过氧化酶（HRP）标记蔓陀罗凝集素（DSA）、麦胚凝集素（WGA）和伴刀豆凝集素（ConA），鉴定糖链结构与类型，并在透射电镜下观察亲和染色的模拟胆汁泡形态学变化；通过结晶生长试验检测胆汁泡蛋白（0.1g／L）促成核活性及其糖链水解、多肽降解产物的活性改变。结果 胆汁泡蛋白糖链为DSA强结合、ConA(一），属多天线复杂型聚糖。HRP－DSA标记的泡蛋白糖链，直接反映泡蛋白促进胆汁泡聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的动态过程。胆汁泡蛋白具明显促成核活性，其It、Ig、Ic分别为0.57、1.52及1.63（P＜0.05）。糖苷酶切、肽链酶解后其成核活性均几乎丧失。结论 糖链可能参与成核效应蛋白的致石作用过程。     

胆汁成核效应蛋白的研究进展

一、促成核蛋白体系的组成1.非力豆球蛋白Ａ(ＣｏｎＡ)结合蛋白:这组蛋白质因无甘露糖基与ＣｏｎＡ不能结合,且易受蛋白水解酶链霉蛋白酶(ｐｒｏｎａｓｅ)作用而致活性丧失。胆囊粘膜分泌的粘蛋白是文献最早报道的非ＣｏｎＡ结合促成核蛋白〔1〕,模拟胆汁体系中结晶生长实验证实粘蛋白不仅具有促成核作用,而且能抑制胆固醇结晶的形成〔2〕。Ｇｒｏｅｎ等〔3〕在Ｔ管胆汁中发现另外一种分子量约为30000的非ＣｏｎＡ结合蛋白,对热稳定,37℃孵育24ｈ促成核活性几乎不受影响。因与抑成核蛋白共存于非ＣｏｎＡ结合部分,分离纯化较困难,其理化性质…     

33.5KDa胆汁泡蛋白促成核活性及其对泡形态学影响的研究

目的探讨３３．５ｋＤａ泡蛋白在胆固醇成核过程中的作用。方法利用超速离心技术结合ＰＡＧＥ电泳及区带定位法制备３３．５ｋＤａ泡蛋白；并将其加入Ｓｍａｌ模拟胆汁及综合模拟胆汁作为试验组，相应地以人体白蛋白为对照组，用偏光显微镜观察胆固醇成核时间，在透射电镜下观察模拟胆汁泡的大小、形态及数量。结果Ｓｍａｌ试验组成核时间为３．８３±０．３１天，对照组为１２．３３±０．５６天（Ｐ＜０．００１）；综合试验组平均成核时间为３．１７±０．１７天，而对照组长达１０．３３±０．２１天（Ｐ＜０．００１）。随着时间的推移，Ｓｍａｌ试验组及综合试验组泡逐渐增大、聚集、融合，最终形成巨大复层泡。两组均较相应的对照组变化显著（Ｐ＜０．０５）。结论３３．５ｋＤａ泡蛋白具有很强的促进泡形成、聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的作用（成核活性约为０．３１０）。     

单光子发射计算机断层仪监测皮瓣血流

为探讨真皮下血管网皮瓣的血流 ,我们介绍单光子发射计算机断层仪 (ＳＰＥＣＴ)监测其血流的实验研究。1　材料与方法1 1　实验材料　同位素99锝 ,巨球蛋白微粒ＭＡＡ(北京核医学研究所提供 ) ,肝素生理盐水 ,心导管 ,ＳＰＥＣＴ(美国康普公司 )。1 2　实验设计　取白色健康家猪 10只 ,体重 10～ 2 0ｋｇ,按随机原则设计真皮下血管网皮瓣 (ｎ =4 0 )为实验组 ,传统皮瓣 (ｎ =4 0 )为对照组 ,两组部位对称 ,皮瓣大小 12ｃｍ× 4ｃｍ ,蒂距脊柱 8～ 10ｃｍ。每只猪 8个皮瓣 ,其中实验组 4个 ,对照组 4个 ,共计实验组 4 0个 ,对照组 4 0个。1 3…     

结直肠癌骨髓微转移检测的临床意义

我们应用免疫组织化学方法 ,联用细胞角蛋白 (ＣＫ )、膜上皮抗原 (ＥＭＡ)、癌胚抗原 (ＣＥＡ)单克隆抗体对结直肠癌骨髓微转移进行检测。一、材料和方法1.骨髓血标本 :结直肠癌患者 6 1例 ,其中男 2 9例 ,女 32例。高分化腺癌2 6例 ,中分化腺癌 30例 ,低分化和粘液腺癌 5例。ＤｕｋｅｓＡ期 2 4例 ,Ｂ期 2 6例 ,Ｃ期 11例。对照组男 2例 ,女 7例 ,其中结肠息肉 5例 ,胃溃疡 4例。术前 1周抽取骨髓血标本。2 .试剂 :免疫组织化学链霉卵白素 过氧化物酶标 (ＳＰ)试剂盒、ＣＫ、ＥＭＡ、ＣＥＡ单克隆抗体均购自美国Ｚｙｍｅｄ公司。3.骨髓血…     

骨生成诱导因子的研究进展

Ｏｓｔｅｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅｆａｃｔｏｒ(暂译为骨生成诱导因子 ,ＯＩＦ)是一种分泌蛋白 ,属亮氨酸富集蛋白家族 ,它最早是从牛的骨基质中分离得到的一种相对分子质量为1 2× 10 4的糖蛋白 ,人们发现它的生长刺激活性来源于骨形态发生蛋白 2、3,此蛋白又被命名为ｏｓｔｅｏｇｌｙｃｉｎ(ＯＧ) 〔1〕。这种蛋白具有组织特异性的糖基化位点和翻译后修饰 ,它在不同的组织中以不同的形式出现 ,如 ,在骨中是相对分子质量为 12的ｏｓｔｅｏｇｌｙｃｉｎ ,在角膜中是相对分子质量为 2 5× 10 4的ＫＳＰＧ或称ｍｉｍｅｃａｎ〔2〕。作为一种分泌…     

黑曲霉β-D甘露聚糖酶的纯化及基本性质

设计了利用硫酸铵分级沉淀，凝胶过滤层析和羟基磷灰石吸附层析相结合及二次羟基磷灰石吸附层析二种分离方案，使一种黑曲霉β－Ｄ甘露聚糖酶得到纯化，纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示基本为单一蛋白带。凝胶过滤法测的全酶相对分子质量为４９０００，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得相对分子质量为５１０００．聚丙烯酰胺等电聚焦测得此纯化酶等电点为３．８．     

胆汁中氨肽酶N的分离、提纯及其促成核作用的初步研究

目的　观察氨肽酶N(APN )在胆石形成中的成核活性。方法　应用伴刀豆凝集素A亲和层析、羟基磷灰石柱层析及高压液相法从胆石症患者胆汁中分离、提纯胆汁中的APN ,并用模拟胆汁观察APN的成核活性。结果　最终APN纯化倍数达 2 94倍 ,酶的活性为12 .9nM·min-1·μg-1,分子量为 130kDa。随后在模拟胆汁观察到APN有明显的促成核活性。结论　APN在胆固醇结石形成中具有促成核作用。     

神经生长因子对脊髓损伤后神经元N-甲基-D-天门冬氨酸受体和一氧化氮生成的影响

我们用原位杂交法通过检测神经生长因子 (ＮＧＦ)作用于损伤脊髓前后Ｎ 甲基 Ｄ 天门冬氨酸受体 (ＮＭＤＡＲ) 1及固有型一氧化氮 (ＮＯ)合酶 (ｎｃＮＯＳ)ｍＲＮＡ的表达变化来探讨ＮＧＦ保护损伤脊髓的机理 ,现报道如下。一、材料和方法1 .动物及分组 :Ｗｉｓｔａｒ大鼠 65只 ,体重 2 0 0～ 2 50 ｇ ,雌雄不分 ,随机分成 3组 :正常组 :5只 ,不作手术 ,作为测量脊髓ＮＭＤＡＲ1和ｎｃＮＯＳ的正常数值 ;生理盐水 (ＮＳ)组 :30只 ,经蛛网膜下腔导管注入生理盐水 ;ＮＧＦ组 :30只 ,经导管注入ＮＧＦ。2 .动物模型的建立 :以 1 0 ｇ× 2 .5ｃ…     

基于胆汁泡相糖蛋白特征而研制诊断胆结石ELISA药盒的可行性分析

目的:分析胆汁泡相糖蛋白的特征并评估其ELISA药盒临床应用的可行性。方法:应用凝集素探针介导的点印迹法分析泡蛋白糖链的组成与结构,利用酶解方法测定泡蛋白各组分的构成,并分析其氨基酸组成。利用Westernblot法分析胆汁与血清泡蛋白的同源性,根据ELISAkit测定泡蛋白的含量分布,并以ROC曲线判别ELISAkit的临床应用价值。结果:化学分析泡蛋白由多肽和寡糖组成,其中多肽分子量约为21u,糖链约占总蛋白含量的37.3%,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖。泡蛋白具胆汁与血清分布两相性,胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清33.5u泡蛋白含量分别为(213.4±70.1)μg/ml、(179.8±97.9)μg/ml,明显高于胆色素性结石症组和正常对照组(P<0.05),而后两者间差异无显著性(P>0.05)。ELISAkit判断胆固醇性结石的胆汁相敏感度和特异度分别为85%和90%,而血清相为61.7%和93.3%。结论:胆汁泡蛋白是一种新认识的胆结石促成核因子,其在不同人群中具有表达谱的异质性,ELISAkit辅助诊断胆石症具有一定的临床应用价值,但尚需更多病例的积累和验证。