人白细胞L－myc遗传多态性分析

从人白细胞中分离ＤＮＡ，经ＥｃｏＲＩ酶切后，进行Ｌ－ｍｙｃＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交，得出人Ｌ－ｍｙｃ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果发现，经ＥｃｏＲＩ酶切产生Ｌ－带（１０ｋｂ）及Ｓ－带（６ｋｂ）。对Ｌ－ｍｙｃＲＦＬＰ与肺癌恶变与预后的关系进行了讨论。     

胰腺癌K-ras基因12密码子突变率的研究

目的阐明中国胰腺癌患者Ｋ－ｒａｓ基因１２密码子突变频率，为临床应用打下基础。方法两轮ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对３２例石蜡包埋胰腺癌标本和１５例阴性对照作基因分析。结果３２例胰腺癌标本中３０例检测到Ｋ－ｒａｓ基因１２密码子突变，阳性率为９３．８％，而１５例阴性对照无１例检测到突变。结论中国胰腺癌患者Ｋ－ｒａｓ基因１２密码子突变率高达９０％左右，该突变的有无可作为在基因水平上鉴别诊断胰腺癌的一个可靠标志。     

α-内收蛋白基因及G蛋白β3亚单位基因多态与原发性高血压的关系

目的探讨α-内收蛋白（ADD1）基因G460W和G蛋白β3亚单位（GNB3）基因C825T多态与高血压的关系。方法 运用多聚酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态分析方法（PCR-RFLP）对来自山东省青岛港的正常血压（495例）和高血压（256例）人群进行基因分型。结果 高血压组和对照组ADD1基因G460W和GNB3基因C825T多态型及等位基因频率分布均符合Hardy—Weinberg平衡。高血压患者中具有WW基因型个体的频率（35．2％）高于对照组（27．4％）,差异有统计学意义（X^2=4．768,P=0．029,OR=1．43）。在高血压组和对照组中GNB3基因CC、CT、TF基因型频率和C、T等位基因频率差异无统计学意义（基因型,P=0．755;等位基因,P：0．561）。结论 ADD1基因G460w多态可能是高血压的危险因素,460W等位基因可能与收缩压的增加有关,而GNB3基因C825T多态可能在高血压的发生中不起主要作用。     

人白细胞L—myc遗传多态性分析

从人白细胞中分离DNA，经EcoRI酶切后，进行L-mycSouthern杂交，得出人L-myc限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）图谱。结果发现，经EcoRI酶切产生L-带（10kb)及S一带（6kb)。对L-mycRFLP与肺癌恶变与预后的关系进行了讨论。     

情感性精神病与Ha—ras基因限制性片段长度多态性关系的研究

用人C-Ha-ras-1全长基因组DNA作探针，对38例双相型情感性精神病人和正常对照人群66个进行RFLP分别，SacⅠ酶解产生5.2kb,5.7kb,6.2kb和6.8kb四种等位多态片段，但各等位片段的频率与北美人比较有较大差别，BP病人和正常之间，等位片段分布及等位片段组成的基因型分布均无显著差异。对4个BP家系进行分析，其中两个家系可见到等位片段分离现象，但基因传递和情感性精神病之间的关系难以确定，研究结果不支持情感性精神病与Ha-ras基因连锁。     

情感性精神病与Ha－ras基因限制性片段长度多态性关系的研究

用人Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ－１全长基因组ＤＮＡ作探针，对３８例双相型情感性精神病人和正常对照人群６６人进行ＲＦＬＰ分析，ＳａｃＩ酶解产生５．２ｋｂ，５．７ｋｂ，６．２ｋｂ和６．８ｋｂ四种等位多态片段，但各等位片段的频率与北美人比较有较大差别。ＢＰ病人和正常人之间，等位片段分布及等位片段组成的基因型分布均无显著差异。对４个ＢＰ家系进行分析，其中两个家系可见到等位片段分离现象，但基因传递和情感性精神病之间的关系难以确定。研究结果不支持情感性精神病与Ｈａ－ｒａｓ基因连锁。     

人载脂蛋白E基因型测定方法的建立

目的：建立一种准确、简便和经济的适用于大范围测定载脂蛋白Ｅ基因型的方法。方法：自中血中采用ＴＫＭ法提取人基因组ＤＮＡ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ确定载脂蛋白Ｅ的基因型,硝酸银染色聚丙烯酰胺凝胶,若银染效果不佳可用硝酸脱色后重染。结果：ＴＫＭ法获得ＤＮＡ在产量和质量上均能满足ＰＣＲ需求;电泳凝胶经银染可得清晰的ＤＮＡ特异带,据此能准确确定样品载脂蛋白Ｅ的基因基因型;用硝酸溶液脱色后的凝胶经重染仍可得到清晰的图     

载脂蛋白B基因多态性与冠心病和血浆脂质水平的关联

关于冠心病与载脂蛋白B(ApoB)基因多态性关联的研究，国际上已有不少报道，但研究结果不尽相同。一般采用PCR技术检测ApoB基因上Xbal酶切位点、EcoR1酶切位点和3宋端串联重复序列(3′VNTR)位点多态性，也有的包括Ins／Del位点。上述检测手段把ApoB基因多态性分为3种形式：①限制性片段长度多态性(restriction fragment length poly-     

中国人胃癌组织和正常组织基因组DNA中癌基因Ha—ras的RFLP研究

本文报道以 pHS-49为探针,分析中国人群中36例胃癌患者癌组织和25例正常人体组织基因组 DNA 中 Ha-ras 基因的 BamHI 限制性片段长度多态性。发现了10种不同长度的等位片段和17种基因型,其中4种小于6kb 的 BamHI 片段是迄今国外未见报道的,这可能是中国人群遗传多态性的一个特征。此外,在胃癌组织中发现 Ha-ras 的一些等位基因和基因型的频率明显高于正常人群。对两名胃癌患者家系中的11名成员作了RFLP 分析,发现有些成员出现3条和4条限制性片段的杂合个体,表明这些个体的染色体上含有的 Ha-ras 基因不止一份拷贝。对上述现象的可能原因作了分析和讨论。     

人肺癌及癌旁组织p21蛋白表达的免疫组化检测

以相当于 ras p21蛋白一段氨基酸序列的合成肽的单克隆抗体 EB_(24?),用 ABC 免疫组化技术检测50例福尔马林固定-石腊包埋的人肺癌组织切片的 p21蛋白表达。46例癌组织的 p21表达,比癌旁病理形态证明“正常”的肺泡及正常肺泡明显增强.其中以肺腺癌最为显著。42例非小细胞肺癌中38例呈阳性反应(90.5%),强阳性约占60%;而8例小细胞肺癌中只有1例阳性(12.5%)。一般说肺腺癌对化疗最不敏咸.小细胞肺癌对化疗较为敏感。这种差别与 p21的表达是否有关联值得进一步探讨。     

癌基因c-myc、Ha-ras在人肺鳞状细胞癌中的增强表达

本文初步研究了人肺鳞癌中c-myc及Ha-ras癌基因的表达。斑点杂交自显影密度分析的结果表明,人肺鳞癌总RNA中Ha-ras及c-myc基因的mRNA分别是正常人肺组织的32倍及10倍。这两种基因表达的增加在人肺恶性变中的作用,尚有待深入研究。     

非小细胞肺癌中p14ARF基因的表达及意义

①目的 检测p14^ARF基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中表达情况,并探讨其在NSCLC发生、发展过程中的作用。②方法应用蛋白印迹方法检测了28例NSCLC组织标本p14^ARF蛋白的表达水平。③结果肺鳞癌和肺腺癌中p14^ARF蛋白阳性率分别为61．5％和80．0％,与癌旁正常组织（100％）比较差异有显著性（X^2=12．27、6．02,P〈0．05）;p14^ARF表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p14^ARF蛋白Ⅰ在期病例中强阳性占阳性比例为62．5％,在Ⅲ期病例中强阳性占阳性比例为16．0％。④结论p14^ARF基因在NSCLC发生、发展过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起更为重要的作用。     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。     

抑癌基因P16表达与肺癌患者预后

目的：观察Ｐ１６蛋白在肺癌组织的表达情况，了解该基因与肺癌的预后关系。方法：应用ＳＰ免疫组织化学方法对７６例肺癌中抑癌基因ＣＤＫＮ２Ｐ１６蛋白表达进行研究。结果：７６例肺癌Ｐ１６蛋白表达阳性率为４４７％。Ｐ１６蛋白表达与肺癌的病理分级及预后有显著差异（Ｐ＜００５），与临床分期有一定相关性。结论：Ｐ１６抑癌基因对肺癌的发生发展起着某种关键作用     

非小细胞肺癌肺耐药相关蛋白定量分析及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织肺耐药相关蛋白（LRP）表达及其临床意义。方法 应用组织芯片技术结合免疫组化PV-9000二步法检测术前未经化疗的72例NSCLC组织中LRP的表达,并采用图像分析技术进行定量测定。结果 LRP主要在NSCLC的细胞浆表达,细胞膜有少量表达,总阳性表达率为77．78％。LRP表达强度与组织学类型有关,在腺癌中阳性颗粒的平均吸光度与积分吸光度均高于鳞癌（t=6．977、6．114,P〈0．001）;LRP表达强度与肿瘤细胞分化程度有关,随分化程度的降低平均吸光度与积分吸光度均降低（F=4．717、5．324,P〈0．05）;其表达强度与临床分期、有无淋巴结转移、肿瘤大小及年龄无关（F：1．901、2．165,t=0．837-2．165,P〉0．05）。结论 检测LRP在NSCLC组织中的定量表达,能准确地反映NSCLC组织的耐药性及对化疗的敏感性,在指导肿瘤化疗方面具有重要的临床意义。     

Fas和Ki-67在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨Fas和Ki-67在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVison法检测Fas和Ki-67在60例NSCLC及18例癌旁正常肺组织中的表达。结果在NSCLC组织中,Fas表达率显著低于癌旁正常肺组织(χ2=6.94、14.30,P<0.05),并与NSCLC的病理分级、临床分期及淋巴结转移有关(χ2=7.17~10.90,P<0.05);Ki-67表达率显著高于癌旁正常肺组织(χ2=18.80、14.20,P<0.01),并与NSCLC的病理分级、临床分期及淋巴结转移有关(χ2=8.47~13.10,P<0.05)。分化程度低、已发生转移的肺癌Fas表达水平显著降低,而Ki-67表达水平显著升高。在NSCLC组织中,Fas和Ki-67表达水平呈负相关(2χ=3.93,P<0.05)。结论Fas和Ki-67表达异常与肺癌发生、发展及转移关系密切,对判断肺癌恶性程度及预后有重要参考价值。     

EphA2和E-cad在非小细胞肺癌中的表达及其临床病理学意义

目的：探讨EphA2和E—cad在NSCLC（non—smallcelllungcRnceY,非小细胞肺癌）中的表达情况及与临床病理特征的关系,并研究EphA2过表达与E—cad表达的相关性,探讨EphA2过表达可能的机制,筛选出能反映肿瘤预后的相关指标。方法：运用免疫组织化学Envision法检测62例NSCLC中EphA2和E—cad的表达情况。结果：1．EphA2在62例NSCLC的阳性表达率为50％（31／62）,EphA2的阳性表达率与有淋巴结转移、临床分期晚、5a生存率有关（P〈0．05）,而与患者吸烟与否、肿瘤的组织学类型和分化程度无关（P〉0．05）。EphA2阴性组的生存时间长于阳性组,有统计学意义（P〈0．01）。2．E—cad在62例NSCLC的异常表达率为53．2％,E—cad的异常表达率与有淋巴结转移、临床分期晚和5a生存率有关（P〈0．01）。与患者吸烟与否、肿瘤的组织学类型和分化程度无关（P〉0．05）,E—cad正常表达组的生存时间长于异常表达组,有统计学意义（P〈0．01）。3．EphA2与E—cad的表达呈负相关性（P〈0．01）。结论：在NSCLC中EphA2的过表达及E—cad的低表达与肿瘤的淋巴结转移、临床分期及术后生存时间有关,因此可作为判断NSCLC预后的指标。     

STAT3与WWOX在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究STAT3与WWOX在非小细胞肺癌及肺正常组织中的表达及两者之间的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法,检测STAT3、WWOX在40例非小细胞肺癌组织、20例正常肺组织中的表达情况,并分析其与各临床病理指标之间的关系。结果：①STAT3在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于肺正常组织（P〈0.01）,WWOX在非小细胞肺癌组织中的表达明显低于肺正常组织（P〈0.01）。②STAT3在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌（P〈0.01）,WWOX基因的表达与淋巴结转移相关（P〈0.01）,在有淋巴结转移的肺癌组织,其表达更少或缺失。③STAT3蛋白与WWOX在非小细胞肺癌中的表达呈负相关（P〈0.01）。结论：①非小细胞肺癌中有组成性激活的STAT3信号通路,提示STAT3信号通路在非小细胞肺癌发生、发展中发挥重要作用;②STAT3与WWOX在非小细胞肺癌中的表达呈负相关。     

抗肺癌单克隆抗体的研制

采用新鲜肺癌组织制成的细胞悬液及肺腺癌细胞株做为免疫原,免疫Balb/c小鼠。取脾细胞与经活体增殖的无支原体污染的高活力SP2/O骨髓瘤细胞融合,联合应用酶联免疫吸附和多组织切片免疫组化染色法进行筛选,得到两株分泌对肺癌具高特异性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体与被检测的大多数人体正常组织无交叉反应,可初步用于肺癌病理鉴别诊断。