癌基因ras产物P21蛋白的结构和生物活性

癌基因ras几乎存在于所有的核细胞:大多数脊椎动物、昆虫(如果蝇),甚至酵母细胞中. 自从1986年从膀胱癌DNA中分离获得12位编码突变的ras基因之后,又先后从结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、胰腺癌、血癌、食道癌、纤维肉瘤等肿瘤组织中分离到活化的ras基因,即突变的ras基因.当然还有许多活     

ras基因改变与肺癌的关系(综述)

<正> 自本世纪初在鸡肉瘤中发现具有RNA基因组的逆转录病毒—Rous肉瘤病毒以来,相继又证实病毒感染可使正常细胞转变为癌细胞。并在Rous肉瘤病毒基因组内发现可诱导肿瘤发生的基因—病毒癌基因。随着基因转染和基因杂交技术的发展和应用,在正常哺乳动物细胞基因组中也发现了与逆转录病毒癌基因有同     

K-ras基因点突变在肺癌中的研究进展

Ras基因最初是在和Kirston和Hayvey大鼠肉瘤中首先发现的 ,转导了ras基因的NIH 3T3细胞能发生恶性转化 ,从而确定了其癌基因的地位。进一步研究发现多数人类肿瘤中均有ras基因的突变激活 ,其中最常见于胰腺癌、结肠癌和肺癌[1] 。Ras基因家族由K ras、H ras、N ras三个密切相关的成员组成 ,其中K ras基因与肺癌的关系最为密切 ,现将K ras基因在肺癌中的研究进展综述如下。1　K ras基因的激活与p2 1蛋白K ras基因定位于人类的第 1 2号染色体上 ,含有 4个编码外显子和 1个 5′端非编码外显子 ,共同编码含 1 89个氨基酸组成的ras蛋白 ,因…     

癌基因在细胞转化中的协同作用

近来人们提出致癌的多阶段性,在癌基因的研究中得到的结果也说明正常细胞的转化需要多个癌基因的协同作用。ras基因家族的成员可使获得不死性的小鼠细胞发生转化。但不能使正常的初代细胞发生转化。我们选用了两个克隆的癌基因协同转化大鼠初代细胞时,可获得转化细胞。 实验用细胞系NIH3T3、Rat-1和大鼠胚胎初     

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。     

myc和ras癌基因共整合转基因小鼠的建立

MMTV－H3－c－myc和MMTV－v－Ha－ras癌基因DNA混合显微注射到小鼠受精卵中，并移植到假孕母鼠输卵管内，获得出生后断奶健康小鼠95R（♀55，♂40）。经过斑点杂交显示myc正反应小鼠17只（♀12，♂5），ras正反应小鼠12只（♀7，♂5）。在全部25只癌基因正反应小鼠中，有4只为myc＋ras双重正反应，均为雌性。继续进行Soutnern印迹分析，确认myc正反应小鼠为“建成者”转基因小鼠。许多转基因小鼠发生各种肿瘤。     

ras癌基因p21在前列腺癌中的表现

人实体瘤的瘤转化诱导主要基因是ras癌基因族的成员。我们应用免疫组织化学法测定了正常前列腺细胞及前列腺瘤细胞中无改变的及已突变的ras癌基因蛋白(p21)的表现。以本实验研究中所用的单克隆抗体浓度测定时,正常前列腺受试人及前列腺良性增生的19名病人的上皮细胞和基质细胞中未发现p21抗原。在前列腺癌Ⅰ级的6名病人中有2人,前列腺癌I级的6名病人中有4人,I级以上的全部17名病人中都检出抗原。半定量免疫组织化学法证明癌瘤中p21抗原的表现与核退行性发育密切相关,与腺分化程度成负相关。但是,退行发育明显的肿瘤中p21的表现常常是不均匀的,并含有抗原的低染区。将p21抗原与瘤的癌胚抗原和前列腺特异性抗原加以比较后,证明ras p2l是唯一与组织学上瘤分级相关的表型标志。因此,ras癌基因p21可能代表生物学上有关的肿瘤标志的一个新组,而且在判断前列腺癌病人预后中可能是组织病理检查的一项有价值的辅助方法。     

人类大肠癌细胞系中ras基因表达的研究

ras基因家族是癌基因家族中较为活跃的一支,近年来已有许多实验证明,在多种肿瘤中都能检测到ras基因的异常激活和表达。本实验分别构建了含不同ras基因片段的重组质粒pN-ras 8.8、pEJ-Ha-ras 6.6和pV-kiras 1.0,并从中提纯探计进行放射性标记,用斑点印迹杂交和Northern印迹杂交检测了人类大肠癌细胞系(Lovo)中ras基因的表达情况,以期为探索人类大肠癌发生和发展的机理提供参考。     

K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义

目的 探讨K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义.方法 应用组织芯片免疫组织化学技术检测180例胃印戒细胞癌组织中ras蛋白的表达;PCR扩增和DNA直接测序法检测癌组织中K-ras基因12、13密码子的突变情况.结果 ras蛋白阳性50例(27.8％),ras蛋白阳性表达率在肠型印戒细胞癌中显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).在淋巴结转移阳性组织中,ras蛋白阳性表达率明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05);随着肿瘤侵袭、演进及临床分期的升高,ras蛋白阳性表达率明显增高(P<0.05).K-ras基因突变型22例(12.2％).所有突变位点均位于12密码子,突变类型包括:GGT→AGT 1例,GGT→TGT 1例,GGT→GCT 2例,GGT→GTT 8例,GGT→GAT 10例.13密码子未发现突变.肠型印戒细胞癌K-ras基因突变率显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).K-ras基因突变型病例ras蛋白阳性表达率明显高于K-ras基因野生型病例(P<0.05).Spearman等级相关分析显示,ras蛋白表达与K-ras基因突变呈正相关(r=0.61,P<0.05).结论 ras蛋白的过表达可能与胃印戒细胞癌侵袭潜能、淋巴结转移相关,ras蛋白表达和K-ras基因突变与肿瘤的免疫表型变化存在相关性,它们在癌细胞表型转化过程中可能起到一定作用.     

小鼠腹水型网状细胞肉瘤的电子显微镜观察

1963年,中国医学科学院输血及血液学研究所建立了小鼠腹水型网状细胞肉瘤(Ascitic reticulumsarcoma,ARS)模型,并发现瘤细胞的超薄切片里有池内型病毒样颗粒。1966年和1969年曾分别报道应用ARS瘤细胞制成的无细胞提取液注射新生的昆明种乳鼠,相应地诱发了小鼠淋巴细胞性白血病(代号L6565)和粒细胞性白血病(代号T638)。我们在进一步研究这两种白血病与ARS瘤株的病毒病因关系时发现,ARS瘤细胞内除有已报道过的池内A型病毒样颗粒外,还发现有C型病毒样颗粒存在。现将电子显微镜观察结果简略报道如下。     

抑癌基因P53与乳癌

P53基因是一种重要的癌基因,早期研究曾认为它是一种显性癌基因,其表达产物为一种肿瘤抗原[1]。随后的研究表明P53可与致瘤性的DNA病毒SV40大T抗原、腺病毒EIB及人乳头状瘤病毒E1蛋白结合形成稳定的复合物,将野生型的P53基因转染至ras和腺病毒所转化的细胞中可以降低转化灶的形成,从而提示P53可能具有抗癌基因的功能[2～5]。有趣的是发现具有转化作用的P53基因均是突变体[6]。BenDavid在小鼠Friend病毒感染的红白血病细胞中发现了P53基因的频繁失活,提出P53是抑癌基因[7],而野生型P53对细胞基因有负性调节作用,其表达能抑制其它癌…     

3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮对小鼠ras、wt-p53基因表达的影响

目的研究3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(3-chloro-4-dichloromethyl-5-hydroxy-2(5H)-furanone,MX)对小鼠多组织的ras与野生型p53基因(wt-p53)表达的影响,从基因水平探讨MX致癌的机制。方法昆明种雄性成年小鼠,每天按21mgMX/kg的剂量经腹腔注射染毒,连续6d,生理盐水作溶剂对照。末次染毒24h后处死。运用原位杂交技术检测MX对小鼠肝、肾和小肠组织的ras基因与wt-p53基因表达的影响。结果MX染毒组小鼠的肝、肾和小肠的ras-mRNA表达水平(0.165±0.007,0.155±0.011,0.196±0.035)明显高于溶剂对照组(0.147±0.007,0.136±0.004,0.132±0.026),且差异有统计学意义(P<0.05)。wt-p53-mRNA表达水平在MX染毒组略为降低,但与溶剂对照组相比没有统计学意义。结论MX可诱导小鼠肝、肾和小肠组织中ras基因转录活性增强,但未能诱导野生型p53基因的异常表达。     

致癌基因(oncogenes)研究近况(综述)

某些逆转录病毒(retrovirus)带有使细胞癌变的DNA序列,即为病毒的癌基因(v-oncogen或v-onc)。病毒癌基因与粒子病毒无关,不影响病毒复制,却与正常细胞的DNA序列同源,故可看作病毒的寄生物。目前已从诱生动物肿瘤的逆转录病毒中分离得十几种癌基因,以分离得的动物及所诱生肿瘤名称而命名。如大鼠Harvey肉瘤病毒的癌基因(V—Ha—ras)等。以病毒癌基因互补DNA(cDNA)为探针,使用DNA杂交及转染等技术,证实脊椎动物以至人类正常细胞的DNA中皆有     

健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/MAPK通路的影响

目的研究健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/MAPK信号通路相关基因表达的影响。方法采用RT-PCR法,用凝胶电泳分析系统比较目的基因与-βactin基因的吸光度比值来反映基因的表达。结果ERK、SOS1、c-fos基因表达降低(P<0.05),MEKr、af、ras、Grb2基因的表达未见明显差异(P>0.05)。结论健脾化瘀方能通过抑制ras/MAPK信号通路的上ERK、SOS1、c-fos的表达,从而起到抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡的作用。     

ras和myc癌基因对肝细胞系的转化活性及转化细胞的诱瘤性的研究

分别用 ras 和 myc 癌基因对一株 SV-40转化的肝细胞系进行了转化试验以及转化细胞的诱瘤性试验。我们的结论是:①1株 SV-40转化的肝细胞系——CWSV1细胞系能被 ras 和myc DNA 分别转化;②ras 和 myc DNA 的转染不影响 CWSV1细胞的分泌白蛋白的功能;③ras DNA的转染诱发了 CWSV1细胞的致瘤潜能。     

磷酸化细胞外信号调节激酶和P21ras在高血压血管平滑肌细胞中表达增强

目的探讨高血压血管平滑肌细胞增生和ERK激活的机制。方法采用免疫组织化学和Westernblotting技术,对比观察肾血管性高血压和自发性高血压大鼠肾细小动脉平滑肌细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和P21ras表达。结果实验期间,Wistar肾血管性高血压组动脉血压从(104±18)mmHg升高到实验结束时的(198±33)mmHg,自发性高血压大鼠16周龄时的血压为(163±23)mmHg。肾血管性高血压组肾小球发生了明显的纤维化(P<0.05),自发性高血压大鼠肾小球纤维化等与对照组无显著性差异。肾血管性高血压组入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为7.09%、14.57%、29.44%和13.63%,均明显高于对照组(P<0.01)。自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为16.09%、24.17%、32.44%和18.61%,均明显高于对照组(P<0.01);肾血管性高血压组和16周龄自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉平滑肌细胞中P21ras的阳性率明显高于对照组(P<0.01);Westernbloting检测可见高血压组和16周龄自发性高血压大鼠肾组织磷酸化ERK1/2和P21ras蛋白含量明显高于对照组(P<0.01)。结论在大鼠两肾一夹型高血压和自发性高血压时,P21ras基因表达增加使部分血管平滑肌细胞丝裂原激活蛋白激酶系统激活,导致部分小动脉血管平滑肌细胞增生。     

小鼠白血病病毒感染细胞的DNA提取及其转染作用的初步研究

从感染SRS白血病病毒的SRSV/3T3细胞系提取的DNA,在体外感染小鼠NIH/3T3细胞,在第3周出现转化细胞和呈集落性生长的转化灶。将转化细胞接种SW-1近交系新生乳鼠或裸鼠(BALB/c),在局部产生纤维肉瘤。实验结果提示,在SRSV/3T3细胞的DNA中可能含有转化基因片段。     

胃癌与幽门螺杆菌感染及p53、ras 基因突变的关系

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp) 感染和p53、ras 基因突变在胃癌发生中的作用.方法 采用聚合酶链反应- 单链构象多态性分析法(PCR-SSCP) 进行p53( 外显子7) 及ras( 第12 密码子) 进行基因突变分析,并应用快速尿素酶试验(RUT) 法和HE 染色法检测Hp 感染.结果 83 例胃癌组织中,p53 基因与ras 基因发生突变阳性率分别为67.47%、63.86%,男女无差异,有远处转移中二者阳性率更高,而对照组中均无p53 与ras 突变发生.胃癌组织中Hp 感染率为71.08%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),且Hp 阳性感染组织中p53 和ras 的突变率明显高于Hp 阴性组织,差异均具有统计学意义(P<0.01 ;P<0.05).结论 Hp 感染和p53、ras 基因突变可能是胃癌的发生机制之一,Hp 感染可导致多基因联合突变.用PCR-SSCP 法联合检测胃黏膜组织中p53、ras 基因的突变将有助于胃癌诊断和预测胃癌远处转移.     

转化生长因子β1与肝纤维化

1978年De Larco等学者在小鼠肉瘤病毒转化的细胞株条件培养基中鉴定出具有促进细胞生长和转化特性的物质,称之为转化生长因子(transforming growthfactor,TGF)。后来的研究发现这种TGF包括两种成分：TGFα、TGFβ,具有促进细胞转化作用的是TGFα。TGFα和TGFβ是在分子组成、受体结构、生物学效应上都具有很大差异的两种不同蛋白质家族。     

转化生长因子β的研究进展

1978年，De Larco与Todaro在小鼠肉瘤病毒转化的细胞条件培养基中鉴定出SGF(sarcoma growth factor)，因其具有转化细胞特性，又被称为转化生长因子(transforming growth factor，TGF)，包括两个成分：α和β。二者在分子组成、受体结构和生物学活性上有很大差异，分属不同的蛋白家族。现已发现TGF-β实际上是由许多具有共同生物学特性的信号分子组成