五倍子酸诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的 探讨五倍子酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT法检测五倍子酸对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率.结果 五倍子酸能抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性.五倍子酸可诱导SMMC-7721细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义.结论 五倍子酸可抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡.     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。     

茜草蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞抗氧化作用

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞的抗氧化作用。方法采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力,TAB法检测丙二醛（MDA）活力。结果茜草蒽醌能增加肝癌SMMC-7721细胞SOD活力,降低MDA活力。结论茜草蒽醌具有抗氧化的作用,可能是蒽醌抗肿瘤的重要机制之一。     

双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 观察双萘酰亚胺类化合物(C8)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC 7721细胞的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测Bcl 2蛋白表达量;流式细胞术分析细胞内Bcl 2蛋白量;酶联免疫法检测Caspase9和Caspase 3表达量. 结果 C8抑制SMMC 7721细胞增殖,半数抑制浓度为15 umol/L.C8作用浓度在10,15、20 umol/L时,SMMC 7721细胞的凋亡比例分别为16.8%、29.4%和35.8%,对照组为2.1%,SMMC 7721细胞的凋亡率明显高于对照组,P<0.01.细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降.酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化.结论 C8可诱导人肝癌SMMC 7721细胞的凋亡,为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物.     

苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响

目的探讨苦参素注射液(MI)联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关基因c-myc、bcl-2和bax表达的影响。方法分别采用MI、顺铂及MI联合顺铂干预SMMC-7721细胞。TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测c-myc、bcl-2和bax mRNA表达,二步法免疫组化检测c-myc、bcl-2和bax蛋白表达。结果苦参素组、顺铂组和联合用药组细胞凋亡率显著上升,与对照组(不干预)比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合用药具有单纯相加或协同作用;联合用药组的细胞凋亡率显著增加,bax mRNA和蛋白表达显著升高,c-myc、bcl-2 mRNA和蛋白表达显著减少,与DDP单药组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论苦参素注射液联合顺铂具有单纯相加或协同诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用,其机制可能与bax基因表达上调和c-myc、bcl-2基因表达下调有关。     

3-溴丙酮酸对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用

目的观察3-溴丙酮酸（3-BrPA）对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法对经0．25mmol／L～8．00mmol／L3-BrPA溶液处理的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,并在荧光显微镜和电镜下观察细胞内部结构的变化。结果3-BrPA对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,其中在0．75mmol／L浓度下的抑制作用最强;经处理后的细胞,在荧光染色下显示坏死细胞增多,在电镜下显示细胞染色质分散,少量核染色质凝聚。结论3-BrPA对SMMC-7721肝癌细胞有抑制作用。     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的机制

目的:讨论羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖及促进其凋亡作用机制.方法:使用不同浓度(0、2、5、10、20μg/m L)的羽扇豆醇在不同处理时间(24、36、48 h)下,处理S M M C-7721细胞株后,通过MTT法检测SMMC-7721细胞增殖情况;对使用不同浓度的羽扇豆醇处理48 h后的SMMC-7721细胞,利用流式细胞仪检测S M M C-7721细胞的细胞周期以及细胞凋亡情况,还使用Western blot检测细胞细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear a n t i g e n,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2(B-c e l l lymphoma-2,Bcl-2)基因及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白的表达情况,最后我们通过免疫组织化学的方式检测在裸鼠体内接种的SMMC-7721细胞瘤体的微血管密度(microvessel density,M V D)值,检测羽扇豆醇对抑制肿瘤血管生成的作用.结果:相较于对照组,通过不同浓度的羽扇豆醇处理后的SMMC-7721细胞增殖水平均受到不同程度的抑制,而且既显示出量效关系又显示出时效关系;受到羽扇豆醇体外诱导处理后的SMMC-7721细胞能够使G0/G1期受到阻滞,甚至出现凋亡现象,SMMC-7721细胞的PCNA和Bcl-2蛋白表达情况下调,Bax蛋白的表达情况上调(P0.05).肿瘤瘤体MVD值下降(P0.01).结论:SMMC-7721细胞的增殖会因为羽扇豆醇的处理而受到抑制,并且还会因为羽扇豆醇的处理而出现凋亡.羽扇豆醇还可以抑制肿瘤瘤体血管生成.     

苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞体外生长及细胞黏附分子表达的影响

采用CCK-8法检测苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞体外杀伤作用AnnexinV／PI双染色法检测苦参碱对体外培养的SMMC-7721细胞的体外诱导凋亡作用;流式细胞仪检测细胞膜表面E-Cadherin、CD44、CD14、V6租CD54的表达。结果 苦参碱在体外能明显抑制SMMC-7721细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡,具有明显的剂量和时间相关性。苦参碱作用48h后,SMMC-7721细胞膜表面的E-Cadherin表达增高,CD44、CD44、V6和CD54表达减少。提示苦参碱能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,同时能增加E—Cadherin的表达,减少其CD44、CD44、V6和CD54的表达。阻止其对邻近正常组织的浸润及远处转移,从而发挥抗癌作用。     

茜草蒽醌对SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制。方法将茜草蒽醌作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞，采用MTY法检测其对肝癌细胞生长的抑制作用，应用TRAP-PAGE银染半定量法和RT—PCR半定量法检测端粒酶活性及端粒酶亚单位即端粒酶相关蛋白1（TP1）基因、端粒酶RNA（hTR）基因、端粒酶催化亚单位（hTERT）基因变化。结果茜草蒽醌能抑制肝癌细胞的生长，呈现与浓度、时间的依赖趋势；降低端粒酶活性，使hTERT基因的表达量明显下降（P〈0．01），而hTR、TP1基因的表达无显著变化（P〉0．05）。结论茜草蒽醌能显著抑制肝癌细胞的生长并抑制端粒酶的活性，可能与其下调hTERT基因的表达有关。     

RNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 研究shRNA干扰GRP78对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法 将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT 法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关shRNA组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P<0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P<0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关shRNA组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P<0.05)。 结论　shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

肿瘤坏死因子相关配体与阿司匹林合用对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的 观察肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)与阿司匹林合用对肝癌SMMC-772l细胞的作用。方法 氨甲喋呤法检测SMMC-772l细胞存活分数；流式细胞仪检测SMMC-772l细胞的凋亡率和细胞周期；WesternBlot法检测凋亡相关基因的表达。结果 单用300ng／ml TRAIL、3、10mmol／L阿司匹林SMMC-772l细胞存活分数分别为82．76％、81．34％和71．29％，合用的存活分数分别为43．5％、37．8％。3、l0mmol／L阿司匹林与300ng／ml TRAIL合用诱导的细胞凋亡率明显大于单用两药诱导的细胞凋亡率之和(单用300ng／ml TRAIL、3mmol／L和10mmol／L阿司匹林凋亡率分别为21．25％、1．89％和6．08％，合用的凋亡率分别34．76％，38．56％)并使G0/Gl期细胞增加l3、10mmol／L的阿司匹林使SMMC-772l细胞Bcl-2的表达明显减弱，但对Bax的表达无影响。结论 TRAlL与阿司匹林合用对肝癌SMMC-772l细胞有明显的协同杀伤作用，其机制可能与阿司匹林抑制Bcl-2的表达有关。     

生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对抗肿瘤药物敏感性的研究

背景：生存素是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，生存素基因有可能成为肿瘤反义基因治疗的理想靶基因。目的：研究生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对常用抗肿瘤药物敏感性的作用，探讨生存素反义核酸用于肿瘤基因治疗的可能性。方法：应用基因重组技术构建pEGFP-C1-生存素反义核酸重组质粒，以脂质体转染法转染SMMC．7721细胞，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测生存素mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。将生存素反义核酸分别与7种常用抗肿瘤药物共同作用于SMMC-7721细胞，用四唑蓝(MTT)比色法测定细胞杀伤率。结果：生存素反义核酸可抑制SMMC-7721细胞中生存素mRNA的表达，从而导致细胞凋亡增加，其作用呈剂量依赖性。生存素反义核酸可增加SMMC-7721细胞对7种常用抗肿瘤药物的敏感性，明显增强药物的杀伤作用。结论：生存素反义核酸能靶向抑制野生型生存素基因的表达，提高肝癌细胞对常用抗肿瘤药物的敏感性，有可能成为肿瘤基因治疗的新方法。     

复方苦参注射液对人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞作用的实验研究

选用人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞,分别采用MTT法、流式细胞仪检测复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞体外增殖抑制率、细胞周期、凋亡率的影响。提示18．75～300μl／ml的复方苦参注射液在作用48h时对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的增殖抑制率在12．3％～82．5％,随着浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐上升,呈剂量依赖性。复方苦参注射液终浓度75μl／ml作用后的人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞G0～G1期明显增高,S期、G2～M期的细胞比例明显减少,凋亡率（58．21％）明显高于对照组（4．17％）。提示复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用,并影响细胞周期,促进其凋亡。     

抑制素在人肝癌细胞SMMC-7721和Huh-7中的表达及其编码序列扩增

目的检测抑制素在人肝癌细胞SMMC-7721及Huh-7中的基因表达,扩增抑制素全长编码序列。方法分别提取肝癌细胞SMMC-7721及Huh-7细胞总RNA,逆转录合成cDNA。使用Real time PCR,以GAPDH为内参检测抑制素的mRNA表达情况。采用RT-PCR方法扩增抑制素全长编码序列。结果 Real time PCR结果显示,SMMC-7721和Huh-7肝癌细胞株中均有抑制素的表达,且SMMC-7721细胞中抑制素表达量是Huh-7细胞中的6.652倍。RT-PCR方法扩增得到约835 bp的抑制素全长编码序列,条带特异,无非特异性扩增。结论人肝癌细胞株SMMC-7721中抑制素的表达量较高。     

Caspase-3参与白花败酱草皂苷诱导Hela细胞凋亡

目的研究白花败酱草总皂苷对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法观察白花败酱草水提液和总皂苷对Hela细胞生长增殖的抑制作用;光镜和透射电镜观察总皂苷和水提物诱导Hela细胞发生凋亡的情况;观察总皂苷和水提物对Hela细胞半胱天冬酶(Caspase-3)活性的影响。结果白花败酱草总皂苷在体外剂量依赖性地抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,并通过对凋亡关键酶Caspase-3的激活,实现其促进Hela细胞凋亡的作用,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。结论 Caspase-3参与白花败酱草皂苷诱导Hela细胞凋亡的作用。     

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的调控作用

目的研究3种化疗药物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在肝癌细胞凋亡过程中的调节作用及相互之间的关系. 方法用MTT法、流式细胞术检测法、端粒重复序列扩增法(TRAP法)、生物发光分析法及western blot检测法. 结果 3种化疗药物使肝癌细胞增殖受抑并诱发凋亡(细胞凋亡率分别为21.12%、28.83%、12.30%)的同时,端粒酶活性也有不同程度减低(抑制率分别为0.28%±0.08%,0.25%±0.16%,0.24%±0.11%);处于活化状态的磷酸化ERK1/2蛋白表达水平下降. 结论 ERK通路可能是化疗药物下调端粒酶活性,进而促进细胞凋亡的机制之一.     

SMMC-7721肝癌细胞系中p53与乙型肝炎病毒相互作用的研究

目的 进一步观察乙型肝炎病毒(HBV)与p53的作用关系，以便更深入地了解HBV对原发性肝细胞癌发生的影响。方法 选用SMMC-7721肝癌细胞系(表达野生型p53，HBV阴性)为靶细胞，采用脂质体转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒(pCMVHBVa)、变异型HBV质粒(pCMVHBVb)共转染细胞，用annexin V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；各组分别共转染报告基因：PG13-CAT，含有p21基因启动子的p21-LUC，通过CAT酶以及荧光素酶的检测，观察p53活性情况以及对p21启动子的活化情况；western blot方法检测各转染组p53蛋白表达情况。结果 单独的pCMVp53质粒转染SMMC-7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；HBVa质粒与pCMVp53共同转染可使细胞中p53蛋白表达水平，p53对报告基因PG13-CAT的活化作用以及对p21基因启动子的激活作用增强，细胞凋亡率增加，细胞生长受到抑制，而与pCMVHBVb共转染时则不能。结论 HBV在细胞内的复制可能通过使p53蛋白半衰期延长，及p53蛋白的表达及作用增强，促进p53下游基因p21的转录，导致细胞凋亡率增强，细胞生长受到抑制;p53可能通过某种机制对HBV的复制具有一定的促进作用。     

人参皂甙Rh2对人肝癌细胞SMMC-7721信号传导的影响

人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强免疫力等多种生物学活性。人参皂甙是人参中主要的活性有效成分。我们曾发现人参总皂甙在体外能诱导人肝癌细胞株HepG2分化，最近又发现人参皂甙单体Rh2(G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用。GRh2诱导SMMC-7721细胞分化过程中，癌细胞的信号传导系统必然会发生改变。通过研究G-Rh2对糖皮质激素受体(GR)、受体型酪氨酸激酶-胰岛素样生长因子Ⅰ     

姜黄素诱导SSMC7721细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞株(SSMC7721)细胞的诱导分机制,为肝癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对SSMC7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜观察SSMC7721亚细胞结构改变。结果姜黄素对SSMC7721细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,电子显微镜下可见经姜黄素作用后的细胞高度空化,线粒体肿胀,核染色质趋边,可见凋亡小体。结论姜黄素能够抑制SSMC7721细胞增殖,阻止SSMC7721细胞G1期向S期转化进程,诱导SSMC7721细胞凋亡及亚细胞结构改变。