TGF-β2对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞的影响

目的探讨豚鼠巩膜成纤维细胞(guineapigscleralfibroblast,GSF)体外培养的方法,研究转化生长因子-β2(transforminggrowthfactor-β2,TGF-β2)对体外培养GSF的增生及胶原蛋白合成的影响。方法GSF原代培养,取生长状态良好的3~6代GSF分别加入不同浓度的TGF-β2(0.00~50.00μg·L-1)。应用MTT法和氯胺T法分别观察比较GSF的增生及胶原蛋白合成情况。结果TGF-β2体外能促进GSF的增生,最佳作用浓度为10.00μg·L-1。在0.01~10.00μg·L-1浓度范围内促进胶原蛋白的合成,呈剂量依赖性。结论TGF-β2体外能够促进GSF增生及胶原蛋白的合成。     

视黄酸对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞的影响

目的　探讨豚鼠巩膜成纤维细胞体外培养的方法 ,研究视黄酸 (retinoicacid ,RA)对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞(Guineapigscleralfibroblasts ,GSF)增生的影响 ,以期探索近视的发病机制和眼外伤并发症等与纤维增生有关眼病治疗的新途径。方法　豚鼠巩膜成纤维细胞原代培养 ,在 3 -6代GSF在细胞生长的各个时期加入不同浓度的RA ,用流式细胞术 (flowcy tometryFCM)测定细胞周期 ,计算出GSF不同生长时期在不同RA浓度培养时的增生率。结果　在细胞生长的各个时期中GSF的增生率随RA浓度的增加而降低 (P <0 .0 5 )。结论　RA对GSF的增生有明显抑制作用。     

AG490对豚鼠巩膜成纤维细胞生长的影响

目的研究α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)生长状态的影响。方法选取原代培养传3-4代的GSF用于实验,应用台盼蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和流式细胞仪检测和观察不同浓度(0μmol·L-1、15μmol·L-1、25μmol·L-1、50μmol·L-1、75μmol·L-1)AG490对体外培养的GSF生存活力和细胞增殖力以及细胞周期的影响。结果 15μmol·L-1、25μmol·L-1AG490对体外培养的GSF干预48h,细胞存活率为94.6%和94.1%,与0μmol·L-1AG490(95.5%)比较差异均无统计学意义(均为P>0.05);且均未见促进或抑制细胞增殖能力的作用,与0μmol·L-1AG490组比较差异亦均无统计学意义(t=3.91、3.89,均为P>0.05)。25μmol·L-1AG490作用GSF细胞48h后,G1期和S期细胞百分比及细胞增殖指数与0μmol·L-1AG490比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论一定浓度范围(≤25μmol·L-1)的AG490对正常GSF的存活率和增殖能力及细胞周期没有明显影响,提示AG490作为一种特异性的阻断JAK2/Stat3信号转导通路的酪氨酸酶受体抑制剂,对正常生理情况下的细胞(几乎没有Stat3磷酸化形式存在)没有明显的毒副作用。     

bFGF对实验性近视眼巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对豚鼠镜片诱导型近视眼(1ens-in duced myopia,LIM)后极部巩膜成纤维细胞增殖程度的影响,从而探讨bFGF在近视眼的发病机制中的作用.方法 2周龄豚鼠10只随机选取一眼用镜片诱导方法制备动物近视模型(实验眼,LIM),对侧为自身对照(对照眼,SC).造模45 d,实验前后均检测每只豚鼠双眼屈光状态、眼轴长度.用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞,并传2代.用免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定.将每只眼培养的细胞分为空白组(A组)、1 ng·mL-1bFGF组(B组)、10 ng·mL-1bFGF组(C组)、100 ng·mL-1bFGF组(D组),利用MTT法检测各组细胞增殖的程度.结果 镜片诱导前豚鼠双眼屈光度无明显差异,经过45 d镜片诱导,实验眼形成明显近视,实验眼与对照眼比较,诱导出(-6.70±1.93)D的相对近视,眼轴相对延长了(1.53±0.31)mm,实验前后变化差异有统计学意义(P＜0.05).所培养细胞经免疫细胞化学鉴定为成纤维细胞.实验组中B组与A组之间细胞增殖差异无统计学意义,C组、D组和A组之间差异有统计学意义,C组、D组细胞数量分别增长24.9%、14.2%;对照组中B组与A组之间细胞增殖差异无统计学意义,C组、D组和A组之间差异有统计学意义,C组、D组细胞数量分别增长27.4%、12.5%.结论 凹透镜诱导可引起豚鼠明显轴性近视.bFGF可以有效促进豚鼠巩膜成纤维细胞的增长,其中10 ng·mL-1的促增长作用最强,但对实验眼和对照眼来说,其促增长作用无明显差异.     

胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞增生的影响及其机制

背景胰高血糖素与近视的发生密切相关,在一定浓度范围内可抑制近视的发展,但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞（GSFCs）生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织,采用组织块培养法进行GSFCs的培养和传代,采用免疫组织化学法检测培养的细胞中波形蛋白抗体、细胞角蛋白抗体及S-100抗体的表达。用完全随机法将培养的细胞分组,分别在不同组的培养孔中加入5、10、50、100、200μg／L胰高血糖素培养GSFCs24h,不加胰高血糖素培养的为对照组。利用MTT比色法观察各质量浓度胰高血糖素作用后及50btg／L胰高血糖素作用1、2、3、5、7dGSFCs的生长情况,酶联免疫检测仪测量波长490nm处各孔细胞的吸光度（A490）值,并用ELISA法检测培养72h不同质量浓度胰高血糖素对GSFCs中基质金属蛋白酶2／组织金属蛋白酶抑制剂2（MMP-2／TIMP-2）表达水平的影响,以酶标仪测定450nm波长处各孔细胞的A450值。结果GSFCs传代培养后密度较低时呈枝状排列,密度较高时呈束状或漩涡状排列,波形蛋白抗体反应阳性。随着胰高血糖素质量浓度的增加,细胞的A490值逐渐升高,差异有统计学意义（F=32．340,P=0．013）,胰高血糖素质量浓度〉10μg／L时,细胞的A490值较对照组明显升高,差异均有统计学意义（t=5．575、6．627、16．074、12．003,P〈0．05）。培养孔中加入50μg／L胰高血糖素后随着培养时间的延长,细胞的A450值升高,差异有统计学意义（F时间=10．610,P=0．024）,且与对照组比较细胞的A490值升高,差异有统计学意义（F。=9．068,P=0．039）。胰高血糖素质量浓度在5～200μg／L时,随胰高血糖素质量浓度的增加,MMP-2含量逐渐减少,差异有统计学意义（F=153．639,P=0．036）,但TIMP-2含量的变化差异无统计学意义（F=24．770,P=3．250）。结论胰高血糖素可促进体外培养的GSFCs的增生,其作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是下调MMP-2在GSFCs中的表达,MMP-2／TIMP-2失衡所致。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bF     

人眼巩膜成纤维细胞中视黄酸受体的分布及其对巩膜成纤维细胞的生长调控

目的研究正常人眼巩膜成纤维细胞视黄酸受体亚型的表达,进一步研究视黄酸对人巩膜成纤维细胞的生长调控作用,从而阐明其和近视发生发展的关系。方法应用定点解剖及游走促进法分离培养人巩膜成纤维细胞,取3～5代生长良好的细胞,运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测培养的巩膜成纤维细胞视黄酸受体亚型的表达;在培养液中分别加入0．01、0．10、1．00、10．00和100．00nmol／L的视黄酸,6d后进行细胞计数。每株细胞重复3次,共用3株细胞,观察视黄酸对巩膜成纤维细胞的生长调控作用。结果培养的巩膜成纤维细胞呈双极型或纺锤型,平均分裂时间为2～3d左右,细胞生长旺盛,近融合时细胞成规则排列的纺锤型。RT—PCR提示体外培养的人巩膜成纤维细胞表达所有的视黄酸受体亚型。视黄酸能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,对细胞生长的抑制作用呈明显的剂量效应关系,RA浓度≥0．10nmol／L时,与无RA的对照组相比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论所有的视黄酸受体亚型在人巩膜成纤维细胞上均有分布,视黄酸能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β在近视眼巩膜中作用的研究进展

近视是世界最常见眼病之一,其发病机制尚不完全清楚。有研究发现,细胞生长因子与近视的发生发展密切相关,其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与转化生长因子β（TGF-β）作为关键的信号分子可以通过调控巩膜细胞外基质的合成与降解参与近视眼巩膜重塑,但具体转导途径和机制还不十分清楚。现就bFGF和TGF—β在近视眼巩膜中的表达及其调控巩膜重塑的可能机制进行综述。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β在近视眼巩膜中作用的研究进展

近视是世界最常见眼病之一,其发病机制尚不完全清楚。有研究发现,细胞生长因子与近视的发生发展密切相关,其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与转化生长因子β（TGF-β）作为关键的信号分子可以通过调控巩膜细胞外基质的合成与降解参与近视眼巩膜重塑,但具体转导途径和机制还不十分清楚。现就bFGF和TGF-β在近视眼巩膜中的表达及其调控巩膜重塑的可能机制进行综述。     

近视眼相关Lumican基因突变对人巩膜成纤维细胞中bFGF和TGF-β2的影响

目的:探讨腺病毒介导的Lumican基因突变（c.596T>C）对人巩膜成纤维细胞（HSF）中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和转化生长因子β2 （TGF-β2）的影响,明确该突变在近视眼发生和发展中的作用。方法:实验研究。应用组织块培养法分离培养HSF。取3~5代细胞转导病毒,转导突变型Lumican（c.596T...     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子—Ⅰ及其协同作用对？…

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子－１（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１,ＩＧＦ－１）及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ,ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法 ＢＬＥＣ原代培养,取第４例细胞种入２４孔板,加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－１,     

转化生长因子-β2对实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响

背景以往对近视眼巩膜力学特性变化的研究局限于其巩膜整体和条带的力学特性变化方面,目前对近视眼细胞水平力学特性的研究日益受到重视。目的明确TGF-β2对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响。方法2周龄豚鼠12只,随机选取一侧眼用镜片诱导方法制备近视动物模型,对侧眼为对照。造模30d后,用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞并传2代,采用免疫组织化学法以兔抗鼠波形蛋白、结蛋白、角蛋白、S-100抗体进行细胞鉴定。将不同质量浓度的TGF-β2（分别为0、1、10、100mg／L）加入无血清DMEM中作用24h,利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的力学特性。结果模型眼0mg／LTGF—p：组与对照眼0mg／LTGF—p：组比较,模型眼的巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数明显升高,二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。模型眼与对照眼在TGF-β2作用下,0mg／L组与1mg／L组、10mg／组比较,细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型眼和对照眼培养细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数与TGF-β2的质量浓度均呈正相关（r=0．743、r=0．533;r=0．654、r=0．576）,模型眼和对照眼中的0mg／L组与100mg／L组比较细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均无统计学意义（P〉0．05）,模型眼1mg／L组、10mg／L组与对照眼1mg／L组、10mg／L组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数之间差异有统计学意义（P〈0．05）;模型眼组100mg／LTGF-β2与对照眼的100mg／LTGF-β2组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随着TGF—B,质量浓度的增加,近视眼巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数值明显升高,1mg／L和10mg／LTGF-β2可以降低正常巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量及黏弹性参数,导致细胞力学特性的更大变化。     

全反式视黄酸对体外培养人巩膜成纤维细胞的抑制作用

目的:观察全反式视黄酸(all-trans retinoicacid,RA)对体外培养的人巩膜成纤维细胞(human scleral fibroblasts,HSF)的形态、增殖能力和自我更新能力以及细胞周期的影响,探讨RA对巩膜成纤维细胞的作用。方法:原代培养HSF,波形蛋白和角蛋白对细胞进行鉴定。用不同浓度RA培养HSF,相差显微镜下动态观察其形态和数量变化;MTT法检测HSF在不同浓度RA培养后的细胞增殖和自我更新能力;FCM方法检测不同浓度RA对HSF细胞周期的影响。结果:MTT法显示RA对HSF有明显的抑制作用,该效应呈剂量依赖性反应。RA培养后HSF细胞数目减少,细胞收缩,突起减少,部分裂解,胞浆内有空泡和颗粒形成,细胞之间的间隙增宽,细胞变得细长,呈束状或不规则排列。FCM结果显示和对照组比较,随着RA浓度和时间的增加,G0/G1期细胞的比例逐渐上升,而S期和G2期细胞比例相应下降,细胞被阻滞在G0/G1期。结论:RA可抑制体外培养HSF的增殖和DNA合成。     

腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究

目的比较四种不同血清型腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)的转染效率及安全性,筛选合适的基因转染载体。方法原代分离培养GSF并鉴定,利用AAV2、AAV5、AAV8、AAV9介导EGFP基因并按不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、100、1000、10 000转染GSF,空白对照组加入空白培养基,转染后2 d、3 d、4 d、5 d荧光显微镜下观察GFP表达强度及细胞生长状态,流式细胞术检测细胞转染率及凋亡率,CCK-8法检测细胞活力。结果 AAV感染GSF后2 d各组均可见弱荧光,荧光强度随时间延长及MOI值增大而增强,而AAV9-EGFP组全程弱荧光,空白对照组全程无荧光。转染后5 d,MOI=10 000时各组荧光最强,基因转染率组间整体比较,差异具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,AAV8-EG...     

实验性近视眼巩膜成纤维细胞力学特性的动态变化

目的 研究豚鼠镜片诱导型近视眼(LIM)前部及后极部巩膜成纤维细胞的力学特性的动态变化.方法 实验研究.取2周龄豚鼠30只,分为A、B、C 三组,每组10只,用离焦的方法制备凹透镜诱导近视(LIM)动物模型,对侧眼为f自身对照眼(SC眼),再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照组(NC组),将A、B、C 三组分别造模6、15、30 d后,用组织块培养法培养每组豚鼠前部及后极部巩膜成纤维细胞,,并传2代.利用细胞微管吸吮的疗法测定各组巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量和细胞表观黏性.各组数据结果计算记录为均数±标准误((x)±s)和等级资料表示,对照组与实验组间差异分别行配对t检验,组间差异行完全随机单因素方差分析.结果 LIM各组间的细胞力学特性比较,及与SC组比较,发现无论是平衡杨氏模量还是细胞表观黏性,LIM组前部于诱导6 d[(0.2252±0.0836)kPa,μ=(1.3119±0.4862)kPa.s]、15 d[(0.2373±0.0903)kPa,( 1.3583±0.5652)kPa.s]时与SC组[(0.2220±0.0593)kPa,( 1.4122±0.4326)kPa]比较无明显变化,诱导30 d[ (0.3874±0.0965)kPa,( 2.6278±0.8063 )kPa.s]时与6、15 d及SC组比较均增高,其差异有统计学意义(P＜0.05);LIM组后极部于诱导6 d [(0.3432± 0.0786)kPa,( 1.9237±0.5203 )kPa.s]时与SC组[(0.2283±0.059 )kPa,μ=1.3248±0.3535)kPa.s]比较无明显变化,但诱导15 d [(0.4797±0.1241)kPa,(3.3221±0.7179)kPa.s]、30 d[(0.5663±0.1127)kPa,[4.6264±1.2205) kPa.s]时与6 d组、SC组比较均增高,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LIM组前部及后极部巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数分别在诱导30 d和诱导15 d后有明显升高,即有“硬化”现象.     

豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞前部及后极部MMP-2 mRNA及蛋白表达变化的研究

目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用组织块培养法培养豚鼠的前部及后极部GSF,利用免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western blot蛋白印迹法检测前部及后极部GSF中MMP-2表达变化。结果 MMP-2的表达定位于细胞浆和细胞核。实验组中前部GSF饲养15d阳性表达率较高,30d阳性表达率最高;后极部GSF饲养6d表达率开始较高,至15d阳性表达率最高,以后保持较高的阳性表达率,各诱导时间点之间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);自身对照组各组自身前部及后极部比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论体外培养的豚鼠GSF稳定表达MMP-2 mRNA及其蛋白,且前部GSF于诱导15d开始阳性表达率较高,后极部GSF于诱导6d开始阳性表达率较高,后极部GSF较前部表达明显增多。     

TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达

目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bFGF以及0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、1ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ns/mJ的TGF-β,两组均设空白对照.6 d后进行细胞计数.选用t-test进行统计分析.每株细胞重复3次,共重复3株细胞,观察bFGF和TGF-β对巩膜成纤维细胞的生长调控作用.结果 bFGF能明显促进人巩膜成纤维细胞的生长,随浓度增加呈明显剂量效应关系.bFGF大于10 ng/ml时(包括10 ng/ml),和无bFGF的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).TGF-β能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,抑制细胞生长的作用亦呈明显的剂量效应关系.TGF-β大于0.3 ng/ml时(包括0.3 ng/ml),和无TGF-β的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 本实验结果显示,bFGF对人巩膜成纤维细胞生长具有明显促进作用,而TGF-β则表现为明显抑制作用.进一步证实外源性bFGF和TGF-β可能作用于巩膜组织,并通过调控巩膜成纤维细胞的生长及巩膜细胞外基质合成代谢单独或协同作用参与巩膜重塑过程.     

TGF-β1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。     

慢病毒介导绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究

目的 观察慢病毒载体转染豚鼠巩膜成纤维细胞的有效性及对细胞活性的影响.方法 转染组用慢病毒携带绿色荧光蛋白(lentiviral mediated green fluorescent protein,Lenti-GFP)转染豚鼠巩膜成纤维细胞,对照组加入空白培养液,转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、200、400加入Lenti-GFP,转染2d、3d、4d、5d、6d和7d后,在倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测转染效率,MTT法检测病毒对细胞增殖的影响.结果 Lenti-GFP转染细胞后48 h可以看见绿色荧光;在同一MOI值下,随时间延长转染效率增高,第5天达到高峰;在MOI为400,转染5d时转染效率达82.86％;转染5d行MTT检测显示:MOI为50 ～400时,同一转染时间各组IOD值与对照组比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 慢病毒载体可以在体外稳定而有效地转染豚鼠巩膜成纤维细胞,且不影响细胞活性,是巩膜成纤维细胞理想的基因转染载体.