ELISA间接法检测抗子宫内膜抗体与临床应用

将子宫内膜用胶原酶消化后依序过250μm、40μm 筛网,获内膜腺体,匀浆后上清流穿抗人血浆亲和层析柱,即得纯化人子宫内膜抗原。用此抗原建立了检测抗子宫内膜抗体的 ELISA 法,不孕妇女(n=129)与流产妇女(n=113)阳性率分别为43.4%和37.1%;男性对照(n=43)为0%;正常孕妇(n=52)为3.8%;中、老年妇女(n=120)为6.7%。     

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测[(82.09%)、(84.31%)],差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测[(75.00%)、(91.49%)、(60.00%)],但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具...     

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测(82.09%)、(84.31%),差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测(75.00%)、(91.49%)、(60.00%),但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具有更高的...     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

卵清蛋白多克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量。方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证。结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1%BSA+1%蔗糖。该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml。重复性好,板内变异系数为3.428%~25.953%,板间变异系数为5.375%~ 27.614%。特异性好,准确度高,检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43%~102.96%。稳定性好,预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976%~14.409%。结论 建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法,可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

快速抑制性ELISA法检测人血清抗dsDNA抗体及其临床意义

应用一种快速改良ＥＬＩＳＡ法检测２４４例人血清抗ｄｓＤＮＡ抗体（包括ＩｇＧ、ＩｇＡ及ＩｇＭ类）。结果示，本法特异性及阳性率优于目前常规ＥＬＩＳＡ法及间接免疫荧光法。ＳＬＥ患者血清中抗ｄｓＤＮＡ抗体阳性率为８６．２％（１１２／１３０），活动期ＳＬＥ患者阳性率为９４．７％（５４／５７）。抗上ＤＮＡ抗体主要见于ＳＬＥ（占９５．０％），也见于ＤＬＥ、ＳＣＬＥ、ＲＤ及ＭＣＴＤ患者血清中。８９例非ＣＴＤ的其它患者或健康人中有３例假阳性。本法优，久之一是避免了抗ｓｓＤＮＡ或ＲＮＡ抗体影响，结果更为准确，阳性率大为提高，有利于ＳＬＥ诊断及疗效判断。     

沙丁胺醇多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

目的:制备特异性好的沙丁胺醇多克隆抗体,优化并建立间接ELISA快速检测沙丁胺醇(SAL)浓度的方法。方法:采用小剂量长周期的方式免疫新西兰大白兔,优化ELISA检测方法,检测一系列SAL浓度,建立标准曲线,并对方法的精密度和回收率进行测定。结果:所制备的沙丁胺醇多克隆抗体的IC50为12.21 ng/ml,建立了间接ELISA检测SAL浓度的标准曲线,样本的回收率在95%～105%之间,变异系数﹤3%。结论:本研究建立了快速、灵敏的间接ELISA检测SAL浓度的方法。     

竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白

目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段.方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度....     

胃泌素释放肽前体双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用

目的：胃泌素释放肽前体（ pro-gastrin releasing peptide , PGRP）作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法（ enzyme-linked immune sorbent assay , ELISA ）方法检测患者血清PGRP抗原浓度。方法通过人工合成PGRP抗原决定簇对本实验室自行研制的单克隆抗体进行筛选;采用改良过碘酸钠法对筛选到的单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记,建立PGRP双抗体夹心酶联免疫吸附检测法;并与IBL公司PGRP试剂盒对比检测结果。结果新型ELISA检测标准抗原浓度范围为33～1．7×104 pg／mL,检测小细胞肺癌患者血清PGRP浓度灵敏度100％,特异度98．4％,IBL试剂盒检测灵敏度100％,特异度92．2％。结论新型ELISA方法可用于小细胞肺癌患者血清PGRP浓度检测。     

胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤组织黏蛋白MUC1、MUC2的表达及意义

目的:观察胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤组织黏蛋白MUC1、MUC2的表达,探讨其可能的临床意义.方法:免疫组织化学EnVision两步法检测MUC1、MUC2蛋白在18例胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)和9例胰腺导管腺癌组织中的表达.结果:18例IPMN中有4例表达MUC1,占总数的22%,其中包括1例侵犯周围组织的IPMC;9例胰腺导管腺癌全部表达MUC1,占总数的100%,两者间有统计学差异(P<0.01).18例IPMN中有17例表达MUC2蛋白,占总数的94.4%;9例胰腺导管腺癌中有1例表达MUC2蛋白,占总数的11.1%,两者间有统计学差异(P<0.01).不同类型IPMN(IPMA、IPMB、IPMC)中MUC2蛋白表达率有统计学差异(P＜0.05).结论:IPMN肿瘤组织MUC2蛋白高表达,且表达强度与病理分型相关;MUC1蛋白值得进一步研究作为判断IPMN良恶性的参考指标.     

双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价

目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法。并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异，以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRGl多克隆抗体（PcAb）、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶（HRP）标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1：750，1：1200，1：350，标准蛋白曲线的回归方程为：y=0．53566＋0．00046x，R2=0．9939，P〈0．0001。应用该方法初步检测结果显示：肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组（P〈0．01），且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组（P〈0．01）。该方法的敏感度（SE）为84．51％，特异度（SP）为35．00％。结论建立了一种敏感度高，重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法；Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达，且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。     

胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用

目的　建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法　提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果　ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论　胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 ,改变胆汁致石性     

抗精子抗体ELISA检测法及其应用

建立了用精子可溶性抗原包被的ELISA法,检测了100例处女血清,均为阴性,17例有生育能力者和1000例不育患者血清的阳性率分别为5.9％和22％,抗体检出率符合国外多数学者的结果。重复性试验定性符合率达97％。表明用该法检测抗精子抗体具有敏感、特异、稳定等特点,可获较为满意的结果。     

Establishment of a sandwich ELISA method for detection of vascular endothelial growth factor in serum samples of hepatocellular carcinoma patients

Objective To establish a sandwich ELISA method for detecting vascular endothelial growth factor （VEGF） in sera of population and the patients with hepatocellular carcinoma （HCC）. Methods Full length and two truncated human VEGF cDNA sequences were amplified from a commercial plasmid pBLAST49-hVEGF by PCR and inserted into the prokaryotic-expression plasmid pET-32a or pGEX-2T. Various VEGF proteins were expressed and purified from E. coli in His-Trx or GST fusion forms. The specific VEGF antibodies were elicited in experimental rabbits and mice by immunization of the full length VEGF fusion protein His-Trx-VEGF1-165. After purification of antibodies with chromatograph of Protein G, a sandwich ELISA technique was established. Serum VEGF levels were evaluated in 229 adults and 291 HCC patients. Results SDS-PAGE displayed that the molecular weights of the expressed full length （His-Trx-VEGF1-165）, N-terminal （His-Trx-VEGF1-100） and C-terminal （GST-VEGF100-165） human VEGF fusion proteins were about 38KD, 31KD, and 33KD, respectively. Western blots confirmed that the prepared antisera were able to recognize both prokaryoticly and eukaryoticly expressed recombinant VEGF proteins. Assays of serially diluted His-Trx-VEGF1-100 by the established sandwich ELISA method showed that the linear range of the standard curve was 0.625-320 ng/mL, with the squared correlation coefficient R^2=0.991. Screening of a serum panel containing 291 serum samples of HCC patients and 229 health adults revealed that the average VEGF level in HCC patients was higher than that in healthy controls, with a statically significant difference. Conclusion The established sandwich ELISA reflects the level of serum VEGF and provide scientific basis for screening metastasis and recurrence of HCC using serum VEGF as an index.     

B细胞激活因子水平ELISA检测方法的建立及临床初评

目的:建立血清B细胞激活因子(Blymphocyte stimulator,BlyS)水平的ELISA检测方法,并初步探讨其临床价值.方法:以商品化的抗人BlyS单克隆抗体、生物素化抗人BlyS多克隆抗体,采用双抗夹心法自行建立BlyS血清水平的ELISA检测方法;并对80例风湿性疾病患者[50例系统性红斑狼疮(SLE)、20例类风湿关节炎(RA)、10例干燥综合征(SS)]、60例自身免疫性肝病患者[35例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、25例自身免疫性肝炎(AIH)]和40例正常人的血清BlyS水平进行检测.结果:成功建立血清BlyS水平的ELISA检测法且重复性较好,80例风湿性疾病患者的血清BlyS水平为(8.23±1.42)ng/ml,60例自身免疫性肝病患者为(3.40±0.79)ng/ml,40例正常人的血清BlyS水平为(3.19±0.88)ng/ml.与正常人相比,风湿性疾病组的BlyS血清水平明显升高(P＜0.01),而自身免疫性肝病组的BlyS血清水平升高则不明显.结论:本研究所建立的BlyS血清水平ELISA检测方法简便、可靠、准确,为后续研究BlyS与自身免疫性疾病尤其是风湿性疾病的关系奠定了基础.     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立及临床应用

目的　建立检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心ELISA ,探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株Mp单抗 ,用双抗体夹心ELISA法检测Mp抗原 ,优化该方法检测Mp抗原的最佳实验条件。对Mp标准株及 14 7份临床标本进行测定 ,观察双抗体夹心ELISA方法的敏感度和特异度 ,以及该方法与聚合酶链反应 (PCR)检测法的符合率。结果　包被单抗量为 2 0 μg·ml-1,酶标记单抗 1∶2 0 0稀释时 ,阳性对照与阴性对照吸光度之比 (P/N值 )最大 ;检测Mp抗原敏感度达 2 μg·ml-1,和其它支原体没有交叉反应。 14 7份临床标本PCR检测阳性率为 13 .6% (2 0 /14 7) ;双抗体夹心ELISA法检测阳性率为 12 .2 % (18/14 7) ,两者符合率达 95 .9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA法检测Mp抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

血清多胺在肺癌诊断中的应用

目的 :探讨血清多胺水平在肺癌诊断中的应用价值。方法 :建立肺癌大鼠模型 ,运用RP HPLC方法测定大鼠血清多胺水平 ,采用SPSS软件包进行统计学处理。结果 :实验组出现肿瘤的 16只大鼠血清精胺水平((5 .70± 1.77) μmol/L) 显著高于正常对照组大鼠血清精胺水平 ((4.83± 1.2 6 ) μmol/L) (P <0 .0 5 )。实验组未出现肿瘤的大鼠 (14只 )精胺水平 ((4.6 1± 1.83) μmol/L)与正常对照组精胺水平相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,实验组出现肿瘤的大鼠 (16只 )血清精胺水平显著高于实验组未出现肿瘤的大鼠 (14只 )血清精胺水平 (P <0 .0 5 )。实验组出现肿瘤的大鼠 (16只 )血清精脒水平 ((8.33± 2 .6 4) μmol/L)显著高于正常对照组大鼠血清精脒水平 ((5 .5 3± 2 .30 ) μmol/L) (P <0 .0 5 ) ,实验组未出现肿瘤的大鼠 (14只 )精脒水平 ((5 .39± 2 .30 ) μmol/L)与正常对照组大鼠血清精脒水平相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而实验组出现肿瘤的大鼠 (16只 )精脒水平显著高于实验组未出现肿瘤的大鼠血清精脒水平 (P <0 .0 5 )。精胺和精脒 2项综合指标阳性率为 6 8.8%。结论 :血清多胺水平是肺癌诊断的一个有用指标。