脑发育不同阶段慢性铅暴露对大鼠在体海马不同时间一氧化氮含量及合酶活性的影响

目的:比较脑发育不同阶段低浓度慢性铅暴露对大鼠在体海马一氧化氮含量及合酶活性的影响。方法:分别在仔鼠出生21 d、42 d、63 d时测定对照组、断乳后暴露组、母体暴露组和持续暴露组仔鼠血铅含量和海马NO含量和NOS活性,并与对照组进行比较。结果:各暴露组在不同时间血铅含量均高于对照组(P<0.05)。断乳后铅暴露组和持续铅暴露组NOS活性与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05),出生21 d时明显高于对照组,而42 d和63 d明显低于对照组。持续暴露组NO含量与对照组比较,差异有显著性,出生21 d时明显高于对照组,而42 d和63 d明显低于对照组。结论:脑发育任一阶段的慢性铅暴露均对海马NO含量和NOS活性有影响。与发育成熟海马相比,未成熟期海马对铅的神经毒性更为敏感,突触可塑性更易受损。     

脑发育不同阶段慢性铅暴露对大鼠在体海马不同时间一氧化氮含量及合酶活性的影响

目的：比较脑发育不同阶段低浓度慢性铅暴露对大鼠在体海马一氧化氮含量及合酶活性的影响。方法：分别在仔鼠出生21 d、42 d、63 d时测定对照组、断乳后暴露组、母体暴露组和持续暴露组仔鼠血铅含量和海马NO含量和NOS活性,并与对照组进行比较。结果：各暴露组在不同时间血铅含量均高于对照组（P〈0.05）。断乳后铅暴露组和持续铅暴露组NOS活性与对照组比较,差异均有显著性（P〈0.05）,出生21 d时明显高于对照组,而42 d和63 d明显低于对照组。持续暴露组NO含量与对照组比较,差异有显著性,出生21 d时明显高于对照组,而42 d和63 d明显低于对照组。结论：脑发育任一阶段的慢性铅暴露均对海马NO含量和NOS活性有影响。与发育成熟海马相比,未成熟期海马对铅的神经毒性更为敏感,突触可塑性更易受损。     

慢性染铅对小鼠血铅、脑铅含量及海马超微结构变化的影响

目的:研究脑发育早期低水平铅暴露通过母体对仔鼠血铅、脑铅含量及海马超微结构变化的影响.方法:石墨炉原子吸收仪测定不同浓度低水平铅暴露后的小鼠子代的血铅、脑铅含量,电镜观察海马超微结构.结果:各组仔鼠随着铅暴露水平的增加,血铅、脑铅含量也都相应增加,均高于对照组(P＜0.05).海马超微结构发生改变.结论:低水平铅暴露对脑的功能产生损伤,改变海马超微结构,并可持续至成年阶段.提示孕母及婴儿是铅暴露的高危人群,铅可由母体传递给子代.     

母体铅暴露对仔鼠海马组织中糖原合成酶激酶-3βmRNA表达的影响

目的:观察母体铅暴露对仔鼠学习记忆及海马组织内精原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA表达的影响.方法:雌性小鼠40只,自妊娠第1天开始经饮水染铅,高、中、低剂量铅暴露组分别饮用0.3、1.0和3.0 g/L的醋酸铅水,对照组饮蒸馏水,至仔鼠出生后第21天断乳为止.抽取各组仔鼠10只,在出生后第7、14、21天分别测其血液和海马组织中铅水平;在出生后第21天时,进行Y型迷宫实验,并采用RT-PCR方法测定海马组织中GSK-3βmRNA的相对表达量.结果:4组仔鼠第7、14、21天血铅和海马组织铅水平随时间和染毒剂量的增加而变化(血清:F组间=315.204,F时间=16.427;F交互=53.125,P均<0.05.海马:F组间=256.205;F时间=7.312;F交互=10.213,P均<0.05);与对照组相比,各剂量铅暴露组血液和海马组织铅水平显著升高(P<0.05).第21天4组仔鼠的学习记忆能力(TI和T2)差异有统计学意义(F组间=43.312,F时间=72.345,F交互=83.532,P均<0.05),记忆保持率(T3)差异亦有统计学意义(F=18.264,P=0.013);低、中、高剂量铅暴露组T1、T2高于对照组,T3低于对照组(P均<0.05).4组仔鼠海马组织中GSK-3β mRNA的表达量比较,差异有统计学意义(F=37.263,P<0.001),低、中、高剂量铅暴露组均较对照组明显升高(P<0.05).结论:母体铅暴露导致铅在仔鼠体内蓄积,蓄积的铅通过诱导海马内GSK-3β mRNA的高表达,造成神经系统功能的损害,从而引起仔鼠学习记忆能力下降.     

慢性铅暴露大鼠海马脑区自噬相关蛋白表达的研究

目的:观察慢性铅暴露后子代大鼠海马脑区铅含量变化,采用自噬/溶酶体途径关联蛋白标记物探讨慢性铅暴露对海马脑区自噬/溶酶体途径关联信号蛋白表达的影响。方法:以慢性铅暴露子代大鼠为研究对象,随机编号分组为对照组、低剂量铅暴露组(0.5 g/L)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L)。断乳期仔鼠分笼饲养,仔鼠饮用低、高含量的醋酸铅饮用水直至60天成熟期。分别取血样与海马脑组织样本使用石墨炉原子吸收分光光度法进行铅含量测定,免疫印迹及免疫荧光组化方法分别检测慢性铅暴露后海马脑区自噬相关蛋白Beclin 1、LC3、LAMP2及cathepsin B的表达变化情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠血铅含量显著升高(P<0.01)。同时,低剂量与高剂量铅暴露模型组大鼠海马脑铅含量显著升高,分别为(1.26±0.31)μg/g(低剂量组)与(1.83±0.18)μg/g(高剂量组)vs对照组(0.52±0.13)μg/g。此外,免疫印迹结果显示,高剂量铅暴露组大鼠海马脑区的早期自噬标志物Beclin 1及LC3-Ⅱ/LC3-I比值较对照组显著增加(P<0.05或P<0.001)。激光共聚焦显微镜结果显示,慢性铅暴露高剂量组较正常对照组的自噬相关蛋白cathepsin B在海马锥体神经元的阳性表达明显增加。结论:慢性铅暴露诱导大鼠海马脑区发生自噬/溶酶体途径关联信号蛋白表达变化,可能与海马脑区铅含量的增加存在内在关联性。     

氯化甲基汞对发育阶段大鼠海马组织蛋白激酶C活性的影响

目的:阐明氯化甲基汞(MMC)致脑发育损伤与海马组织蛋白激酶C（PKC）活性变化之间的关系,探讨MMC致脑发育损伤机制。方法:选用Wistar雌性大鼠120只,随机分为3个MMC剂量实验组和1个对照组,每组30只,实验组母鼠从妊娠前90 d 至仔鼠出生后30 d 连续喂饲含有不同剂量MMC (0.75,1.50和3.00 mg/kg ) 的普通饲料,取其生后(PND) 3 、7 、14 、21 和30 d 仔鼠海马组织提取胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai 法观察MMC 对发育大鼠海马PKC 活性的影响。结果:随着脑汞含量的增加,仔鼠实验组和对照组海马组织胞膜胞浆PKC的活性随仔鼠生后时间的延长,逐渐增高,生后30 d达峰值。1.50 mg/kg 剂量组生后21和30 d仔鼠以及3.00 mg?kg-1剂量组仔鼠海马组织胞膜和胞浆PKC活性较对照组明显增高（P<0.05）。结论:长期接触低剂量MMC可引起发育阶段大鼠海马组织胞浆及胞膜PKC活性升高。MMC可能通过影响大鼠脑发育过程中PKC 活性介导其神经毒性作用。     

牛磺酸对仔鼠脑发育及组织超微结构的影响

目的　观察牛磺酸对仔鼠脑发育及组织结构的影响。方法　大鼠分为对照组和牛磺酸组,自受孕开始喂实验饲料,母鼠生育后继续食用该组饲料。仔鼠随其母鼠分为对照组和牛磺酸组,测量仔鼠在生后 14d、28d脑及海马的重量,透射电镜观察仔鼠海马超微结构的变化。结果　生后 14d、28d牛磺酸组仔鼠脑和海马的重量比对照组仔鼠重;电子显微镜下牛磺酸组仔鼠海马神经元有丰富的粗面内质网、核糖体和线粒体等细胞器,线粒体嵴清晰可见。结论　牛磺酸影响仔鼠脑组织超微结构的变化,缺乏可妨碍脑的发育。     

铅对大鼠海马区SSmRNA阳性神经元的影响

【目的】观察染铅大鼠海马各区生长抑素 (SS)mRNA阳性神经元的表达情况。【方法】Wistar大鼠饮用 2mg/ml醋酸铅 3m后 ,采用原子吸收、免疫组化和原位杂交技术检测各组血和脑中的铅含量 ,海马CA1区和CA3 区SSmRNA阳性神经元数目。【结果】与正常对照组比较 ,铅暴露组大鼠血铅和脑铅含量明显升高 ,(P <0 0 5 ) ,海马CA1区及CA3 区SSmRNA阳性神经元数目明显减少 (P <0 0 5 )。【结论】SSmRNA在染铅大鼠海马CA1区和CA3 区中的表达明显下降。     

孕期酒精暴露对子鼠海马神经元凋亡的影响

目的:研究孕期酒精暴露对子鼠海马神经元凋亡的影响.方法:采用健康C57BL/6J小鼠,用胃饲酒精法建立孕期酒精暴露模型.90只孕鼠随机分为3组: 对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组.低、高剂量酒精组分别按2.0 g/kg与4.0 g/kg的剂量给予体积分数为25%的乙醇,1次/d,直至子鼠出生,对照组自由饮食.3组取新生鼠、生后7 d与生后14 d的小鼠各10只,取海马组织进行caspase-3免疫组化染色,以观察海马神经元的凋亡.结果:低剂量酒精组和高剂量酒精组各年龄子鼠海马神经元caspase-3阳性率明显高于对照组(P＜0.01);高剂量酒精组海马神经元caspase-3阳性率明显高于低剂量酒精组(P＜0.01).结论:孕期酒精暴露可激活发育期海马神经元caspase-3,诱发神经元凋亡,可能与出生子鼠智力障碍密切相关.     

产前束缚应激下调子代大鼠海马生长相关蛋白43的表达

目的：通过检测产前束缚应激子代大鼠脑内海马中生长相关蛋白（GAP-43）的表达,探讨该应激降低大鼠空间学习记忆能力的原因。方法：选用SD大鼠20只,正常饲养7d,使其怀孕,并完全随机分为应激组（n=10）和对照组（n=10）,在母鼠怀孕的13～19d,白天使母鼠钻入一直径7cm,长19cm的圆柱形容器中,实施束缚应激。对照组则正常饲养。待母鼠生产后,于仔鼠出生后1、7和30d时将其处死．取脑组织应用Western Blotting方法检测海马中GAP-43的表达。均有显著性．另外30d两组在处死前先进行Morris水迷宫实验。结果：Morris水迷宫实验中,应激组与对照组相比,寻找站台的潜伏期有明显的延长（P〈0．05）。策略方面,应激组多选择随机式,对照组多选择直线式,差异有统计学意义（P〈0．05）。仔鼠应激组脑海马GAP-43的表达在1和7d高于对照组,在30d时低于对照组（P〈0．叭）。结论：产前束缚应激刺激早期可使GAP-43反应性升高,但长期看,会下调子代大鼠脑海马GAP-43的表达,使神经元轴突发育异常．最终导致子代大鼠认知缺损。     

低锌对未成熟大鼠视网膜锌离子转运体3(ZnT-3)mRNA表达的影响

目的:通过观察视网膜锌离子转运体3(ZnT-3)mRNA表达对低锌饮食的反应,探索低锌是否会引起ZnT-3转录水平的调节.方法:将36只雄性SD大鼠(4周龄)随机分为三大组分别喂养2周(第1组)、4周(第2组)、6周(第3组),每组大鼠又随机分为两个亚组分别给予正常锌含量饮食和低锌饮食,第3组低锌饮食大鼠从第4周开始恢复正常饮食.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ZnT-3以及碳酸酐酶2(CA2)、碳酸酐酶14(CA14)的mRNA相对表达量.结果:大鼠锌摄入低下2周后,与空白对照组相比视网膜CA2和CA14的mRNA水平有所降低,而ZnT-3 mRNA表达量有所增高;锌摄入低下4周后,视网膜ZnT-3、CA2和CA14 mRNA表达量均明显下降;恢复正常锌饮食后2周,实验组视网膜ZnT-3、CA2和CA14的mRNA的表达回升与对照组无差异.结论:饮食锌的变化将导致大鼠视网膜ZnT-3在转录水平上的调节.含锌酶CA2和CA14mRNA表达也同时发生变化.为保持视网膜组织内锌含量的稳定,ZnT-3mRNA表达量随饮食含锌量降低的时间和程度而改变.     

膳食锌缺乏对阿尔茨海默病模型鼠大脑内锌转运体mRNA表达的影响

目的研究不同膳食锌含量对成年APPswe/PsEN1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠大脑内锌相关转运体mRNA表达的影响。方法成年APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠[J004462 B6C3-T9(APPswe,PSEN1dE9)85D60/J]33只,随机分为膳食锌缺乏组1(ZD1)、膳食锌缺乏组2(ZD2)、膳食补锌组(ZS)和阳性对照组(PC),及10只正常对照组(NC),应用RT-PCR方法检测小鼠大脑中ZnT-1、MT1和ZIP1 mRNA的表达;原子吸收分光光度法测定血清锌浓度。结果 PC中ZnT-1表达较NC有显著性升高(P<0.01),MT1和ZIP1在PC和NC中表达无显著差异。缺锌喂养后,ZnT-1的表达与PC组比有显著下降(P<0.01),下降随缺锌时间的延长而加剧,补锌后ZnT-1表达有所上升,存在着时间-反应关系和剂量-反应关系。缺锌喂养50d后,大脑中MT1与ZIP1 mRNA表达并无明显改变,但持续缺锌喂养至80d后,mRNA表达均明显下降(P<0.01),补锌喂养可恢复至缺锌前水平。结论成年APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠大脑内存在着ZnT-1的异常高表达,膳食锌缺乏可下调大脑内ZnT-1、MT1、ZIP1的mRNA表达。     

脑源性神经营养因子与海马苔藓状纤维突触重组的关系

目的：探讨海马苔藓状纤维（mossy fiber,MF)突触重组过程与脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的关系。方法大鼠脑室内分别注射BDNF反义寡核苷酸、正义寡核苷酸和磷酸盐缓冲液,采用Timm‘s染色法观察BDNA反义寡核苷酸对于红藻氨酸（kainic acid,KA)癫痫模型以及非KA模型海马MF发芽过程的影响。结果采用计算机显微图像分析系统对Timm‘s染色脑片海马齿状回内分子层（inner molecular layer,IML)异常Timm染色颗粒定量测定发现,KA能导致大鼠海马MF出现明显的发芽现象,KA模型组IML异常Timm颗粒吸光度（68．0）显著高于非KA模型组（25．5）（P＜0．001）;耐脑室内注射BDNF反义寡核苷酸能够抑制大鼠KA模型海马MF发芽过程,注射BDNF反义寡核苷核的KA模型组IML异常Timm颗粒吸光度（42．0）显著低于注射正义寡核苷酸的KA模型组（68．0;P＜0．001）;KA能导致大鼠海马BDNF表达上调。结论在MF突触重组过程中,BDNF的作用很可能是促进了癫痫时反复惊厥所导致的MF发芽过程,脑室内注射BDNF反义寡核苷酸对海马MF突触重组的影响作用很可能是通过抑制BDNF蛋白合成而产生的。     

孕妇血铅 锌水平与稽留流产的关系研究

目的分析稽留流产与孕妇血铅、锌水平的相关性,了解金湾区铅污染、锌缺乏程度对孕妇的影响,为预防稽留流产寻找依据,为是否需要在我区孕妇孕前及孕期常规筛查血铅、锌等微量元素提供理论依据。方法选取2012年1月—2013年3月确诊为稽留流产的患者296例作为观察组,正常早期妊娠孕妇302例作为对照组。对2组孕妇进行静脉血铅、锌的检测,分析稽留流产与血铅、锌水平的相关性。结果稽留流产患者血铅含量高于正常早期妊娠孕妇,2组比较差异有显著性(P<0.01);孕妇血清锌浓度在孕早期变化不显著(P>0.05),观察组孕妇血清锌浓度明显低于对照组(P<0.05)。结论稽留流产与血铅、锌水平密切相关,可通过对孕前妇女血铅、锌测定,防止稽留流产,指导优生优育。     

壬基酚对子代大鼠皮质部神经生长相关蛋白的影晌

目的母鼠孕期和哺乳期暴露NP,观察其对子代神经生长相关蛋白（GAP-43）的影响。方法将交配成功的31只孕鼠根据妊娠H期分层后随机分配到4组,即对照组,NP低、中、高剂量组（NP0、25、50、100mg／kg／day）,单笼饲养,空腹灌胃,NP暴露时间为受孕第6天到出生后21d哺乳期结束（GD6-PND21）,免疫组织化学法检测21d、60d皮质部GAP-43的变化,并分析上述变化与NP暴露之间的关系。结果高剂剂量组21d和60d龄的仔鼠皮质部GAP-43免疫反应阳性细胞平均数目、积分光密度低于同期对照组仔鼠（P〈0．05）;GAP-43蛋白表达与NP暴露剂量有负相关关系,差异有统计学意义（r=-0．711、-0．568,P〈0．05）。结论NP孕期暴露影响子代大鼠脑组织GAP-43的表达,且剂量越高,GAP-43表达越低。     

哺乳期母鼠饲以组氨酸料对仔鼠脑海马区含锌量及AChE的影响

应用组织学和组织化学方法研究锌在仔鼠脑海马中的分布状况和锌对有关神经递质的作用，特别是在超微结构水平上研究锌在仔鼠脑海马组织中的分布特点及与锌有关的参与神经递质代谢的酶的分布状况。Ｔｉｍｍ硫化银染色显示组氨酸料组仔鼠海马苔藓纤维中颗粒密度明显减少，其乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）反应产物的分布和反应强度均与常锌料组无显著差别。电镜下显示１０ｄ龄仔鼠脑海马硫化锌颗粒位于颗粒细胞苔藓纤维末端的突触小泡中，其ＡＣｈＥ阳性神经元的反应产物主要定位于神经元的核膜和粗面内质网的网池中。这表明在本实验条件下，缺锌未影响到ＡＣｈＥ的活性。     

苯巴比妥对癫癎大鼠海马苔藓纤维突触重组和认知发育的影响

目的探讨苯巴比妥(PB)对不同发育期癫痫大鼠海马内苔藓纤维(MF)发芽与认知功能的影响。方法Wistar大鼠按出生后日龄分组(P5、P15、P25、P60)，以红藻氨酸(KA)制备癫痫模型，实验结束取脑制片，行Timm染色，观察海马齿状回内分子层染色改变。认知功能测验采用跳台法。结果KA致痫对P5、P15组海马内MF发芽现象、大鼠学习记忆功能无明显影响，但可使P25、P60组大鼠海马内MF发芽现象加剧，伴学习、记忆成绩明显下降，PB可加剧这一现象。PB对未致痫大鼠海马内MF发芽现象和学习记忆功能无明显影响。结论海马MF突触重组是PB影响不同发育时期癫痫大鼠学习记忆功能的重要原因。     

出生前后双酚A暴露对小鼠不同时期血清白介素-17白介素-23的影响

目的研究出生前后高剂量双酚A（BPA）暴露对小鼠不同时期血清白介素-17（IL-17）和白介素-23（IL-23）水平的影响,初步探讨BPA发育免疫毒性机制。方法将确认妊娠的ICR母鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BPA剂量组（高、中、低组分别为2.0、0.5和0.125 g/L BPA）;母鼠自妊娠第0 d（GD0）至仔鼠断乳（出生后第21 d,PND21）经饮水暴露于BPA。分别于PND7、PND21和PND42取仔鼠外周血用ELISA检测IL-17和IL-23含量。结果在PND7和PND21时,随母鼠BPA暴露剂量的增加,仔鼠血清IL-17和IL-23含量逐渐上升,2.0 g/L BPA组与空白对照组和溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。在PND42时,各BPA暴露组仔鼠血清IL-17和IL-23含量与空白对照组和溶剂对照组差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论出生前后BPA暴露可能引起子代断乳前体内Th17细胞分泌的细胞因子含量升高。     

高氧暴露对新生大鼠肺SP-C表达的影响

目的探讨高氧暴露对新生大鼠肺组织表面活性蛋白C（SP-C）表达的影响。方法将新生的72只SD大鼠随机分为空气组、高氧组,每组36只。每组又分为3、7、14d三个亚组。于空气或高氧暴露后3、7、14d取肺组织,采用免疫组化方法观察肺组织中SP-C表达的变化。结果高氧组3d SP-C表达强度较空气组增强（P〈0.05）,高氧组7dSP-C表达强度与空气组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,高氧组14d SP-C表达强度较空气组减弱,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论高氧暴露可导致新生大鼠肺SP-C表达减弱或功能缺失,SP-C表达异常可能是高氧肺损伤的重要因素。     

孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力及海马组织中P-JNK表达的影响

目的:研究孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力及海马组织中磷酸化JNK蛋白(P-JNK)表达的影响。方法:0.3(低剂量铅暴露)、1.0(中剂量铅暴露)和3.0(高剂量铅暴露)g/L醋酸铅溶液以自由饮水方式对母鼠孕哺期染毒,每组10只,并设未染毒对照组。每组取10只仔鼠用于实验,仔鼠出生第21天用水迷宫实验检测其学习记忆能力,并检测其血液和海马组织中铅的含量,采用Western Blot法测定其海马组织中P-JNK蛋白的表达水平。结果:迷宫实验中,各组仔鼠错误次数和平均逃避潜伏期时间比较,差异有统计学意义(F=302.475和26.902,P<0.001);组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组仔鼠血及海马组织铅水平比较,差异有统计学意义(F=53.139和9.392,P=0.003和0.001),组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组仔鼠海马组织中P-JNK蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=67.103,P<0.001),各剂量铅暴露组P-JNK蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:铅经血脑屏障,可能通过上调海马中JNK磷酸化水平并激活其信号传导通路,造成子代神经系统的损伤,从而影响学习记忆功能。