巨噬细胞趋化检测方法的建立及皮质酮对其趋化功能的影响

目的 建立改良Boyden趋化小室(Boyden chamber)法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响.方法 分离成年Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔巨噬细胞.应用48孔Boyden chamber趋化板检测趋化功能.下室加入27μL的10nM FMLP作为趋化剂或含1%牛血清清蛋白的RPMI-1640作为阴性对照,将50μL不同细胞密度的大鼠腹腔巨噬细胞悬液(3、6、12×106/mL)置于上室以确定最适细胞密度,将趋化装置置于5%CO2、37℃细胞培养箱内孵育2、3h以确定最适孵育时间.同时,以0、10、50、1 000ng/mL皮质酮处理大鼠腹腔巨噬细胞,应用Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能.结果 巨噬细胞对10nM FMLP趋化剂呈细胞密度依赖性增加,上室巨噬细胞密度为6×106/mL时为最适细胞密度,并且最适孵育时间为3h.低浓度皮质酮(10、50ng/mL)处理大鼠腹腔巨噬细胞其趋化指数显著高于对照组(P＜0.01),而高浓度皮质酮(1 000ng/mL)处理后巨噬细胞趋化指数与对照组相比差异不明显.结论 成功建立了改良Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能方法,皮质酮可呈剂量依赖性地影响巨噬细胞趋化功能,在无免疫刺激状态下,低浓度皮质酮能增强巨噬细胞趋化功能.     

脾切除对单核巨噬细胞系统功能的影响

观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾切除后在伴和不伴脓毒血症情况下，单核巨噬细胞系统（ＭＰＳ）清除＾９９ｍＴｃ亚锡植酸钠的功能及血浆纤维连结蛋白（ＰＦＮ）和透明质酸（ＨＡ）的变化。结果脾切除后（尤其合并感染时），Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞吞噬力减弱，血中清除半衰期延长，肝脏器官和每克组织ｃｐｍ值百分率减少，这与ＰＦＮ相对降低、ＨＡ急剧增加（Ｐ〈０．０５）有关。提出，ＨＡ增高参与了脾切除后ＭＰＳ的机能改变、免疫功能受抑和     

氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表达的影响

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以阐明二者在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在巨噬细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮＡ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析的方法检测巨噬细胞ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达，用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ－１蛋白的含量。用微孔滤膜法进行单核细胞的趋化试验。结果当巨噬细胞分别暴露于ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ２４小时后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达明显增加，同时单核细胞迁移距离的明显增加。而当巨噬细胞分别暴露于ＬＤＬ和ＶＬＤＬ２４小时，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达只有轻微的增加，单核细胞迁移距离亦无明显的增加。结论巨噬细胞能表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白，ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ能诱导该细胞更强地表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白     

氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表…

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以瘅二者在动脉粥样硬化发生中的作用，方法在巨噬细胞培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮ     

脾切除对单核巨噬细胞系统功能的影响

观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾切除后在伴和不伴脓毒血症情况下，单核巨噬细胞系统（ＭＰＳ）清除９９ｍＴｃ亚锡植酸钠的功能及血浆纤维连结蛋白（ＰＦＮ）和透明质酸（ＨＡ）的变化。结果脾切除后（尤其合并感染时），Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞吞噬力减弱，血中清除半衰期延长，肝脏器官和每克组织ｃｐｍ值百分率减少，这与ＰＦＮ相对降低、ＨＡ急剧增加（Ｐ＜０．０５）有关．提出，ＨＡ增高参与了牌切除后ＭＰＳ的机能改变、免疫功能受抑和出切后凶险感染的发生．     

维拉帕米对人单核巨噬细胞蛋白质DNA,RNA合成的影响

目的；观察维拉帕米对人单核巨噬细胞ＤＮＡ，ＲＮＡ及蛋白质合成过程的影响，方法：维拉帕人单核细胞孵育２４ｈ或４ｄ，测定细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ－ＵＲ，＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入人单核巨噬细胞状态及细胞内蛋白质含量，结果：维拉帕米在低浓度对ＤＮＡ，ＲＮＡ合成有抑制作用，呈浓度依赖性，高浓度时作用明显，对ＲＮＡ作用较ＤＮＡ显著（Ｐ〈０．０５），对蛋白质合成在高浓度时有抑制作用，维拉帕米与成熟过程中人单核巨噬细     

丹参素对单核I巨噬细胞功能影响的体外实验

丹参素是丹参水溶性有效成份，本实验了丹参素对单核巨噬细胞产生细胞因子功能的体外调节作用，结果表明，丹参素能激活单核巨噬细胞产生ＴＮＦα，ＩＬ－１，ＩＬ－６，ＩＬ－８，但较由内毒素刺激单核巨噬细胞产生细胞因子的能力差，另外，丹参素还能抑制由内毒素诱导的细胞因子的产生，从而说明，丹参素具有双相调节作用，一方面增强机体的防御能力，另一方面具有抗炎等作用。     

白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CCR5表达的影响

目的:观察白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CC型趋化因子受体5(CCR5) 表达的调节作用.方法:采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再经贴壁法纯化单核/巨噬细胞.采用IFN-γ(1×105U/L)诱导单核/巨噬细胞表达CCR5,再分别加入不同浓度的白藜芦醇(0.5,5,25,50和100 μmol/L)进行干预.培养24 h后收集细胞,RT-PCR法检测外周血单核/巨噬细胞CCR5 mRNA表达水平;流式检测单核/巨噬细胞CCR5表达阳性率.同时将CCR5荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-CCR5)转染各组细胞,检测各转染组的荧光素酶相对活性.结果:中、高浓度白藜芦醇处理组(25,50和100 μmol/L)的CCR5 mRNA表达水平、CCR5阳性细胞率和CCR5-luc报告基因的荧光素酶相对活性比对照组均有所降低,低浓度白藜芦醇处理(0.5和5 μmol/L)对单核/巨噬细胞CCR5的表达无明显影响.结论:中、高浓度白藜芦醇可抑制外周血单核/巨噬细胞CCR5的表达.     

锌对腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的初步研究

目的：探讨饲料锌对腹脸巨噬细胞（Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＰＭΦ）吞噬功能的影响及其机理，方法；建立大鼠缺锌，高锌模型，测定大量ＰＭΦ吞噬率，吞噬指数及ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，结果（１）缺锌（ＺＤ）组ＰＭΦ吞噬率，吞噬指数均非常显著地低于配对（ＰＦ）组及自由喂养（ＡＬ）组，经补锌后得以恢复，高锌（ＺＥ）组明显低于ＡＬ组。（２）ＰＭΦ经体外脂多糖（ＬＰＳ）作用后胞内ｃＡＭＰ含量，ｃＡＭＰ     

瘦素预处理对兔急性肺栓塞血清炎性因子表达的影响

目的：通过观察外源性瘦素对兔急性肺栓塞（APE）后IL-6及IL-8水平的影响,探讨其在肺损伤时的保护机制。方法：选取健康新西兰兔24只,随机分为两组,模型组与瘦素预处理组,每组12只。两组分别采血离心后取上清液,用ELISA方法检测血清炎性因子。结果：瘦素预处理组IL-6及IL-8水平比较模型对照组明显下降,且P值〈0.05,具有统计学意义;症状所见瘦素预处理明显轻于模型对照组。结论：外源性瘦素通过对急性肺栓塞后血清IL-6及IL-8的水平下调,从而对损伤的肺组织起到了保护作用。     

趋化因子IL-8和MCP-1在鼻咽癌中表达的初步研究

目的 该研究拟探讨趋化因子IL-8和MCP-1在鼻咽癌病人与正常人血清中表达的情况。方法 采用RT-PCR和Westem Blot检测39例鼻咽癌组织、2株鼻咽癌细胞系和17例正常鼻咽黏膜组织中的IL-8和MCP-1表达状况。ELISA检测趋化因子IL-8、MCP-1在鼻咽癌病人与正常人血清中表达的情况。结果 在mRNA水平，RT-PCR显示IL-8、MCP-1在鼻咽癌组织表达明显高于正常鼻咽黏膜组织（P〈O．05），在蛋白质水平，Western blot分析发现MCP-1表达明显高于正常鼻咽黏膜组织（P〈0．01）；Epstein-Barr（EB）病毒阳性的鼻咽癌组织表达IL-8、MCP-1较EB病毒阴性的鼻咽癌组织表达增高，且差异有显著性（P〈0．05）；ELISA检测鼻咽癌患者血清中IL-8、MCP-1发现，其表达较正常人明显增高（P〈0．05），而EB病毒阳性的鼻咽癌患者血清中的IL-8、MCP-1表达水平与EB病毒阴性的鼻咽癌患者血清中的表达水平差异有显著性（P〈0．05）。结论 趋化因子IL-8、MCP-1在鼻咽癌组织和血清中表达增高，EB病毒感染能促进二者的表达增加。     

冠心病病人支架置入术早期炎性因子变化及临床意义

目的 观察冠心病病人支架置入术前后炎性指标的变化。方法选择2003年10月至2004年12月期间于我院行支架置入术的心绞痛及心肌梗死病人35例,以同期行冠脉造影病人18例为对照组,分别于手术前后不同时间点采集静脉血样,用ELLISA法检测白细胞介素-8（IL-8）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP）。结果术后炎性因子较术前升高明显（P〈0．01）,高危病变组和中危病变组的IL-8和CRP高于低危病变组（P〉0．05）;CEC组和CGB组高于CGA组（P〈0．05）。结论PCI导致冠脉局部炎性反应增强,危险病变及复杂操作病变炎性反应程度亦高。     

IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响

目的:研究IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响.方法:(1)复苏并培养人单核细胞株THP-1细胞并诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)RT-PCR法检测A-CAT-1 mRNA在单核细胞、巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1和泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体中的表达.结果:(1)单核细胞株THP-1细胞被诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)与单核细胞比,巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1的ACAT-1 mRNA表达均明显增高,尤以泡沫细胞加IL-1中增高明显;与泡沫细胞加IL-1比,泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体的ACAT-1 mRNA表达下降.结论:(1)IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA的表达有上调作用,IL-1单克隆抗体可以拮抗这种效应.(2)IL-1可上调ACAT-1 mRNA表达水平,可能是巨噬细胞脂质过负荷后A-CAT-1上调的始动因子之一.     

白细胞介素6对人单核/巨噬细胞系细胞表面Toll样受体4表达的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)对人单核/巨噬细胞系(THP-1)细胞表面Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:流式细胞仪检测不同浓度IL-6(0ng/L、10ng/L、100ng/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L)干预THP-1细胞24h,以及10μg/L的IL-6干预THP-1细胞不同的时间(0、3、6、12、24、48h)后细胞表面TLR4的表达水平。结果:各浓度IL-6均能不同程度的促进细胞表面TLR4的表达(P<0.05),以10μg/L组干预最为显著(P<0.01);10μg/LIL-6干预不同的时间后均可促进其表达,以干预24h后的差异最显著(P<0.01)。结论:IL-6可以促进人THP-1细胞表面TLR4表达,且具有一定的浓度和时间依赖性。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

单核细胞趋化蛋白-1趋化巨噬细胞迁移与侵袭的体外实验研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对巨噬细胞（NR8383）体外迁移和侵袭作用的影响．方法体外传代培养NR8383细胞,免疫组化检测NR8383细胞上MCP一1特异性受体（CCR2）的表达,细胞迁移和Transwell小室侵袭实验分别观察MCP-1及CCR2拮抗剂（RS504393）对NR8383细胞迁移和侵袭作用的影响．结果免疫组化检测显示NR8383细胞膜上存在有CCR2表达;细胞迁移和侵袭实验证明MCP-1促进NR8383细胞迁移和侵袭,而RS504393抑制NR8383细胞迁移和侵袭;不同浓度MCP-1（200～800μg/L）诱导下,NR8383细胞迁移能力随MCP-1浓度增高而增强（P〈0．05）．结论MCP-1对巨噬细胞迁移和侵袭具有促进作用,其作用与MCP-1受体CCR2结合有关．     

银杏叶提取物注射液对大鼠脑出血后血肿周围组织IL-8、ICAM-1的影响

目的观察银杏叶提取物注射液（金纳多）对大鼠脑出血后血肿周围组织中IL-8、ICAM-1含量的影响,以探讨其治疗脑出血的机制。方法90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,每组又分为6、12、24、72h以及7d五个时间点。采用肝素化VII型胶原酶脑内注入法制作大鼠脑出血模型,应用免疫组化技术测定大鼠脑出血后血肿周围组织中IL-8、ICAM-1的表达含量。结果假手术组大鼠针道周围组织各个时间点仅见少量IL-8、ICAM-1表达;模型组IL-8表达12h开始增加,24h达高峰,维持至3d后下降,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。模型组ICAM-1表达6h开始增加,72h达高峰,持续至7d仍有表达,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;与模型组比较,治疗组各个时间点脑内IL-8、ICAM-1含量较同期显著降低（P〈0.01或P〈0.05）。结论脑出血后大鼠血肿周围组织IL-8、ICAM-1表达均上调。银杏叶提取物对脑出血后神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与减少IL-8、ICAM-1的产生,抑制炎症反应有关。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的　观察瘦素 (leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法　培养人成骨细胞 ,并观察其形态及功能变化。采用 MTT比色法检测不同浓度的 L eptin对人成骨细胞增殖的影响 ,同时观察不同浓度 L eptin条件下骨钙素浓度的变化 ,并用细胞总蛋白较正。结果　体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型 ,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性、培养液中加入 β-甘油磷酸及 L-抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。在加入不同浓度 L eptin后第 1、2、3天 ,人成骨细胞增殖无显著变化。L eptin可刺激骨钙素分泌 ,呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ,但无时间依赖性 (P>0 .0 5 )。结论　 L eptin对人成骨细胞增殖无影响 ,但可刺激人成骨细胞功能。     

胃腺癌组织瘦素、瘦素受体表达及其临床意义

目的:研究瘦素和瘦素受体蛋白在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测60例胃腺癌组织中瘦素、瘦素受体蛋白的表达,以其细胞阳性表达率积分和染色强度积分乘积半定量计算其蛋白表达水平,分析其蛋白表达水平与临床病理参数的关系。结果:56例(96.7%)胃腺癌组织具有瘦素蛋白表达,55例(91.7%)具有瘦素受体蛋白表达,其中55例(91.7%)具有瘦素和瘦素受体的双重表达。UICC分期中Ⅳ期瘦素蛋白表达水明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.05)。发生远处转移胃腺癌组的瘦素蛋白表达水平均值显著高于未发生远处转移胃腺癌组[(8.00±1.19)vs(6.44±1.33),P<0.01]。结论:①胃腺癌组织存在瘦素和瘦素受体的双重表达;②胃腺癌组织瘦素蛋白表达水平有助于判断其预后;③瘦素可能在胃腺癌远处转移过程中起重要作用。