IL-18对肾小管上皮细胞Col-IV及MCP-1表达和分泌的影响

目的 探讨白细胞介素18（IL-18）对肾小管上皮细胞Col-IV及MCP-1表达和分泌影响。 方法 应用终浓度为0、0.1、1、10、100ng/mL的IL-18处理体外培养人类近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）24h、48h和72h。应用RT-PCR法检测IL-18对HK-2细胞Ⅳ型胶原（Col-IV）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达;采用ELISA法测定细胞培养上清中Col-IV及MCP-1分泌水平。 结果 IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-IVmRNA和MCP-1 mRNA的表达,IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-IV的分泌,呈剂量依赖性地促进HK-2细胞MCP-1分泌,但其蛋白分泌量在24h即达高峰,未见时间依赖关系。 结论 IL-18可能部分通过促进细胞外基质的过度分泌和炎症细胞趋化,参与促进肾间质纤维化的进程。     

IL-18对肾小管上皮细胞Col-Ⅳ及MCP-1表达和分泌的影响

目的探讨白细胞介素-18(IL-18)对肾小管上皮细胞Col-Ⅳ及MCP-1表达和分泌影响。方法应用终浓度为0,0.1,1,10,100ng/ml的IL-18处理体外培养人类近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)24,48,72h,用RT-PCR法检测IL-18对HK-2细胞Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达;采用ELISA法测定细胞培养上清中Col-Ⅳ及MCP-1分泌水平。结果IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-ⅣmRNA和MCP-1mRNA的表达,IL-18呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞Col-Ⅳ的分泌,呈剂量依赖性地促进HK-2细胞MCP-1分泌,但其蛋白分泌量在24h即达高峰,未见时间依赖关系。结论IL-18可能部分通过促进细胞外基质的过度分泌和炎症细胞趋化,参与促进肾间质纤维化的进程。     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

大鼠脊髓损伤后炎症细胞趋化因子MCP-1的表达及其意义

目的:探讨炎症细胞趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在脊髓损伤早期的表达变化及其在脊髓继发性损伤炎症免疫反应中的作用机制.方法:采用改良Nystrm法制备大鼠胸段脊髓后路压迫损伤模型,运用RT-PCR技术检测脊髓损伤后6 h的MCP-1 mRNA的表达水平,免疫组化方法检测损伤后3、6、12 h和1、3、5、7 d各个时间段MCP-1阳性细胞与损伤局部单核/巨噬细胞数目的变化.结果:脊髓损伤后,MCP-1 mRNA水平明显升高,MCP-1阳性细胞高峰时间出现在脊髓损伤后12 h至3 d,同时,单核/巨噬细胞高峰时间出现在损伤后3～7 d.结论:MCP-1、单核/巨噬细胞均参与了脊髓损伤后早期的继发反应,单核/巨噬细胞出现的高峰时间滞后于MCP-1阳性细胞.     

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。     

糖尿病肾病患者单核细胞趋化蛋白-1与小管间质损害关系的研究

目的探讨局部单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达和分泌与人糖尿病肾病(DN)病变的关系.方法采用免疫组化和原位杂交检测人DN肾组织MCP-1蛋白和mRNA表达,并用免疫组化检测CD68;尿液和血清MCP-1水平测定采用ELISA法.结果DN肾小管间质MCP-1表达明显增高(P＜0.01),小管间质病变越重,MCP-1表达越高(P＜0.01).DN肾小管间质CD68表达明显增高(P＜0.01),小管间质病变间差异明显(P＜0.01).DN肾小球MCP-1、CD68表达较正常对照明显增高(P＜0.05).DN尿液MCP-1水平明显较正常对照组增高(P＜0.01),与间质纤维化密切相关,且与临床蛋白尿程度呈正相关.结论DN患者肾组织内MCP-1表达与肾病变发生发展密切相关,尤其与肾小管间质病变的形成有关,这可能与MCP-1具有强烈趋化和激活单核/巨噬细胞而致肾小管间质损害有关,尿液MCP-1水平可能是反映肾小管间质病变程度的最佳指标之一.     

连翘苷对金黄色葡萄球菌刺激的人单核巨噬细胞炎性反应的抑制作用

目的探讨连翘苷对金黄色葡萄球菌引起的人单核巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达增高的抑制作用,研究其在感染性疾病时对机体的保护作用。方法采用金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞,构建感染性疾病的体外模拟炎症模型,实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测TLR2和TLR4表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定连翘苷对金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞释放炎性介质白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞集落刺激因子-1(MCSF-1)的影响。结果 RT-PCR检测结果显示,金黄色葡萄球菌能够使人单核巨噬细胞表达TLR2和TLR4升高,但经连翘苷预处理后,TLR2和TLR4的表达显著下降(P<0.05),当连翘苷为200 mg·L~(-1)时,TLR2与TLR4的抑制剂阳性对照OxP APC和MST510组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果显示,当连翘苷为50 mg·L~(-1)时,抑制金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8水平明显增强(P<0.05),且随着连翘苷浓度升高,抑制效果更为明显(P<0.001,P<0.01),呈浓度依赖关系;当连翘苷为100 mg·L~(-1)时,抑制金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞分泌IL-6、MCSF-1水平明显增强(P<0.05,P<0.01),且随着连翘苷浓度升高,抑制效果更为明显(P<0.01,P<0.001),呈浓度依赖关系。结论连翘苷能够抑制人单核巨噬细胞活化产生的炎症反应,其抗炎作用机制可能是通过抑制TLR2和TLR4信号通路而发挥效用。     

MCP-1在炎性反应中的研究进展

单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)属于CC趋化因子家族的一个小细胞因子。近年来研究表明,MCP-1是重要的促炎细胞因子,在机体发生炎症时单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、B细胞、平滑肌细胞等都能分泌产生,且MCP-1对单核/巨噬细胞具有特异性趋化激活作用。尤其在类风湿性关节炎、肾小球肾炎、动脉粥样硬化、急性冠状动脉综合征、深静脉血栓等疾病的发生和发展过程中发挥重要作用。该文对MCP-1分子生物学和临床重要性的研究进展予以综述。     

皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的 进一步明确天然糖皮质激素对巨噬细胞免疫功能的影响及其时效和量效关系.方法 收集大鼠腹腔巨噬细胞,分别用10～1 000 ng/ml的皮质酮(corticosterone,CORT)刺激,检测细胞的黏附、趋化和吞噬功能;使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量.结果 50 ng/ml的皮质酮显著增强巨噬细胞的黏附功能(P＜0.05),10 ng/ml和50 ng/ml的皮质酮刺激细胞后,其趋化功能均显著增加(P＜0.05).同时,50 ng/ml的皮质酮还可显著增强巨噬细胞的吞噬功能(P＜0.05)和促进巨噬细胞分泌TNF-α(P＜0.01),而使用高浓度皮质酮(500 ng/ml和1 000 ng/ml)处理时,巨噬细胞的上述功能增强趋势减弱或无增强;在0.5～5 h范围内,皮质酮处理1 h时细胞的吞噬功能和分泌TNF-α的功能增强最明显,刺激更长时间后其功能的增强趋势逐渐减弱.结论 一定剂量的天然糖皮质激素急性刺激可明显增强免疫功能.     

单核细胞趋化蛋白-1与IgA肾病的研究进展

单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是CC类细胞趋化因子,对单核/巨噬细胞(Mο/Mφ)具有特异性趋化激活作用,参与了IgA肾病的炎症过程。本文对MCP-1及其受体CCR2的结构和功能以及在IgA肾病的发生发展中的作用、针对MCP-1的干预进行综述。     

疏风解毒胶囊治疗上呼吸道感染480例临床观察

目的评价疏风解毒胶囊治疗上呼吸道感染的临床疗效和安全性。方法采用分层区组随机、双盲、阳性药平行对照、多中心临床试验设计。上呼吸道感染患者480例,其中试验组360例,对照组120例。试验组口服疏风解毒胶囊,对照组口服双黄连胶囊,疗程均为3d。结果对体温异常者起效时间比较,两组差异有统计学意义（P〈0.05） 解热时间比较,两组差异无统计学意义（P〉0.05） 中医证候单项疗效——咳嗽记分,两组间比较有高度统计学意义（P〈0.01）。结论疏风解毒胶囊治疗上呼吸道感染疗效确切,未发现毒副作用。     

CYP1A1、GSTM1和GSTT1基因多态性与甘肃省武威市食管癌易感性的关系

目的探讨甘肃省武威市食管癌组织中生物代谢酶Ⅰ相酶细胞色素（CYPIA1）和Ⅱ相酶谷胱甘肽转硫酶MI（GSTM1）、谷胱甘肽硫转移酶TI（GSTT1）基因多态性与食管癌的关系。方法采用PCR-RFLP、multiplex—PCR方法检测216例正常对照f血液）和189例食管癌组织中代谢酶基因CYPIA1和GSTM1、GSTT1的多态性。结果食管癌病例组与正常对照组中：CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性的频率分别为74．1％和67．6％,差异无统计学意义;GSTM1纯合缺失基因型分别占58．7％和41．2％,差异有统计学意义（P〈0．05）,该基因型可能与食管癌易感性的增高有关（OR1．956）;GSTT1纯合缺失基因型分别占51．9％和43．5％,差异无统计学意义,该基因未明显增加对食管癌的易感性（OR1．169）;GSTM1、GSTT1联合缺失基因型在病例组和对照组中的频率分别为38．6％和19．6％,差异有统计学意义（P〈0．05）;同时携带CYPIA1MspⅠ多态突变基因型与GSTM1、GSTT1缺失基因型的个体患食管癌的风险增加（OR2．385,95％CI1．094-3．495）。结论单独的CYP1A1MspI多态突变基因型或者GSTT1缺失基因型与食管癌的易感性不相关;GSTM1纯合缺失基因型及其与GSTT1缺失基因型、CYP1A1MspⅠ多态突变基因型同时存在可增加个体患食管癌的风险,提示GSTM1纯合缺失基因型可能为食管癌发病的易感因素之一,且与其他缺陷基因型存在协同作用。     

S1P1真核表达载体的构建及在HEK293细胞膜上的表达

目的构建含人Ⅰ型1-磷酸鞘氨醇受体(SIPI)-全长cDNA序列及HA和/或EGFP标签的真核表达载体,并观察其在HEK293细胞上的表达。方法合成2条HA寡核苷酸,克隆入S1P1-Myc-EGFP-N1载体。以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,用PCR的方法扩增HA-S1P1并克隆入pcDNA3.1(+)载体。限制性酶切消化、PCR、测序的方法鉴定,载体经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测S1P1在HEK293细胞上的表达。结果限制性酶切消化、PCR、测序结果证实载体构建成功。S1P1表达在HEK293稳定细胞株的表面。结论成功构建带有HA和/或EGFP标签的S1P1真核表达载体,表面表达S1P1的HEK293稳定细胞株可作为我们进一步研究的细胞模型。     

抗流1号对发热患者预防甲型H1N1流感的临床分析

目的：研究抗流1号对197例发热患者甲型H1N1流感的预防。方法：体温T≥37.5℃的患者197例,根据患者有无接触甲型H1N1病例,分为密切接触组25例,一般接触组48例,非接触组124例。进行体格检查、查血常规和胸片,服用抗流1号中药制剂（红景天、大青叶、虎仗和贯众）,根据症状和病情给予中医辨证治疗或抗生素及抗病毒治疗,观察患者一般情况,比较治疗情况。结果：密切接触组中性粒细胞和淋巴细胞降低的患者明显多于非接触组（P〈0.01）;用抗病毒治疗的患者密切接触组与非接触组比较有显著差异（P〈0.01）,中医辨证治疗的患者密切接触组与非接触组比较有差异（P〈0.05）。结论：以扶正和清热解毒为主的抗流1号能有效的预防甲型H1N1的传播可以起到降低发病率、减轻病情,值得推广应用。     

程序性死亡因子配体1修饰供者DC对大鼠异体胰岛移植存活的影响

目的探讨共刺激信号阻断剂PDL1基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)对胰岛移植存活的影响。方法以BN、Lewis大鼠为胰岛移植供、受体;用PDL1(程序性死亡因子配体1)基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达PDL1;将供、受体DC于胰岛移植前24h经股静脉分别注入受体(设为组1、组2),供、受体DC混合后注入受体(组3),注射生理盐水的为空白对照组(组4);观察各组糖尿病鼠高血糖改善情况及存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果与对照组相比,组1和组3血糖维持正常时间和受体存活时间显著延长〔组1:(22.47±11.72)d和(41.25±12.98)d,P<0.01;组3:(37.67±14.71)d和(52.31±15.47)d,P<0.001)〕差异有统计学意义,组2移植胰岛存活时间无延长〔(3.75±1.33)d与(7.33±1.97)d,P>0.05〕差异无统计学意义。术后第20天,组1、组3脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照(0.27±0.08和0.23±0.06与0.70±0.09,P<0.001),而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无统计学意义(0.66±0.07和0.66±0.07与0.69±0.05,P>0.05)。结论PDL1基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植胰岛的存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植胰岛获得更长的存活时间。     

甲型H1N1流感病例临床分析

目的 分析甲型H1N1流感的流行和临床特点.方法 回顾性分析首都医科大学附属北京佑安医院2009年5至8月间收治的137例甲型H1N1流感病毒感染者的临床资料.结果 流行早期患者以输入性病例为主,主要来自美国、澳大利亚、加拿大,英国,后期为续发病例为主.发病年龄以儿童和青少年为主;临床主要表现为发热(108例)、咳嗽(93例)、咽部不适(67例).最常见的体征:咽充血(99例)和扁桃体肿大(46例).平均热程(3.3±1.5)d,症状消失时间平均(4.4±1.9)d.平均住院时间(5.5 ±2.1)d.实验室检查:39例(39.5%)外周血白细胞计数降低(3.3±0.4)×109/L,淋巴细胞百分比升高;甲型H1N1流感病毒核酸均阳性;胸部X线表现为肺纹理增强、模糊和肺炎表现.治疗:中药组、西药+中药组、对症或未用药组3组疗效对热程、症状消失时间、甲型H1N1流感病毒核酸转阴时间差异均无统计学意义.结论 甲型H1N1流感可为隐性感染和显性感染,传染性强、临床症状轻,临床过程多为自限性、轻症病例,类似季节性流感.     

高糖对人肾小球内皮细胞膜表面多糖-蛋白复合物厚度及核心蛋白Syndecan-1和Glypican-1表达的影响

目的 观察高糖刺激对体外培养人肾小球内皮细胞(HRGECs)膜表面多糖-蛋白复合物厚度及对HRGECs表面核心蛋白Syndecan-1和Glypican-1表达的影响.方法 体外培养HRGECs,随机分为3组,分别为;高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、甘露醇组(30mmol/L甘露醇),分别培养72 h后,用特异性异硫氰酸盐荧光标记的麦胚凝集素(WGA-FITC)进行免疫荧光染色,共聚焦激光显微镜(CLSM)进行三维(3D)重建,观察HRGECs表面多糖-蛋白复合物厚度的变化.利用倒置荧光显微镜观察各组HRGECs膜表面核心蛋白Syndecan-1和Glypican-1免疫荧光染色情况.实时荧光定量PCR法检测各组细胞Syndecan-1和Glypican-1 mRNA的含量,Western blot检测Syndecan-1和Glypican-1蛋白的表达.结果 与正常糖浓度组相比,高糖组HRGECs表面多糖-蛋白复合物厚度减少36.8%(P＜0.05).高糖组HRGECs表面Syndecan-1和Glypican-1免疫荧光染色弱于正常糖浓度组和甘露醇组.高糖组HRGECs Syndecan-1和Glypican-1表达弱于正常糖浓度组和甘露醇组(P＜0.05),且未检测到高糖组Glypican-1蛋白的表达.结论 高糖可导致HRGECs表面多糖-蛋白复合物的缺失(厚度减少)和HRGECs膜表面核心蛋白Sydecan-1和Glypican-1的表达减弱.     

胡芦巴对Caco-2细胞NPC1L1基因的mRNA表达水平的影响

目的探讨胡芦巴的降脂机制,观察经胡芦巴水溶液处理后,Caco-2细胞中NPC1L1(胆固醇吸收的主要载体基因)的mRNA表达水平。方法将胡芦巴水溶液暴露于Caco-2细胞中24、42、48小时,未处理组作为对照组,从细胞中分离mRNA进行Real-Time PCR分析,采用ABI PRISM7000生物程序分析系统测定Caco-2细胞的NPC1L1的mRNA表达水平。结果经胡芦巴水溶液处理的Caco-2细胞NPC1L1的mRNA表达水平与对照组(未治疗组)相比降低47%。结论胡芦巴可降低Caco-2细胞的NPC1L1的mRNA表达水平。     

透邪通络法对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1的影响

目的：研究“主客交”理论指导下透邪通络法抗肝纤维化的机制及效果。方法：选用SD雄性大鼠,40％CC4。腹腔注射造模,正常组和模型组予生理盐水灌胃,对照组予秋水仙碱灌胃,透邪通络组予加减三甲散灌胃,8周后处死大鼠,显微镜下观察肝组织形态,免疫组化法检测MMP-1、TIMP-1的表达,用图像分析软件和统计软件处理结果。结果：与模型组相比,透邪通络组升高MMP-1表达与降低TIMP-1表达均有显著差异（P〈0．01）,对照组升高MMP-1表达有差异（P〈0．05）、降低TIMP—1表达有显著差异（P〈0．01）;与对照组比较,透邪通络组提高MMP-1表达、降低TIMP-1表达均有差异（P〈0．05）。结论：透邪通络法能明显改善HF大鼠的病理,具有显著的抗肝纤维化,其机制可能与提高MMP-1表达、降低TIMP-1表达而调控ECM的代谢有关。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL／lpr小鼠粘附分子表达的影响

目的探讨解毒祛瘀滋阴方可能的作用机制。方法以MRL/lpr小鼠80只,分成4组采用RT—PCR技术检测各组肾组织ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平。结果解毒祛瘀滋阴方合用激素组ICAM-1和VCAM—1mRNA表达低于其他各组。结论解毒祛瘀滋阴方合用激素能有效降低MRL／lpr小鼠肾组织ICAM-1和VCAM—1mRNA表达水平。