RNA干扰沉默基质金属蛋白酶2基因对卵巢癌OVCAR-3细胞诱导体外血管形成能力的影响

 目的　探讨沉默基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因对卵巢癌OVCAR-3细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,以及对细胞诱导的体外血管形成能力的影响。方法　合成特异性靶向基因的小干扰RNA （siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞（MMP-2沉默组）,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替转染siRNA的试剂作为空白对照组;采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后48 h MMP-2及VEGF的mRNA和蛋白表达水平,通过体外血管形成实验检测卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力。结果　与阴性对照组相比,MMP-2沉默组转染48 h,OVCAR-3细胞MMP-2和VEGF mRNA表达量分别下降了78.8 %和75.5 %（P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了81.2 %和78.3 % （P＜0.05）;体外血管形成实验显示,沉默MMP-2基因后卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力明显降低（P＜0.05）。结论　沉默MMP-2基因可抑制卵巢癌细胞VEGF表达,并能够抑制卵巢癌细胞诱导的体外血管形成能力,抑制MMP-2基因有助于抗血管形成,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

小RNA干扰沉默CD147基因对膀胱癌T-24细胞生物学行为的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147 siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞.实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147 siRNA).采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平.结果:成功构建了Ad-CD147 siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147 siRNA可使T-24细胞CD147 mRNA和蛋白表达量下调＞90％(P＜0.01),细胞增殖速率下降＞40％(P＜0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P＜0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5％和37.1％(P＜ 0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2％(P＜ 0.01)和56.5％(P＜0.01).结论:Ad-CD147 siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.因此,CD147有可能成为膀胱癌基因治疗的一个新靶点.     

RNA干扰沉默EGFR基因对卵巢癌细胞侵袭力的影响

[目的]通过小于扰RNA（siRNA）沉默EGFR基因的表达，探讨其对卵巢癌SKOV3细胞体外侵袭力的影响。[方法]体外构建靶向EGFR基因的siRNA质粒和阴性对照质粒，Lipofectamine2000介导转染到SKOV3细胞中。实验分3组：空白对照组、非特异性转染组、特异性转染组。RT-PCR和免疫细胞化学法检测EGFR基因和蛋白水平表达。平板克隆形成法检测细胞生长增殖能力，Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力。[结果]特异性转染组细胞EGFR基因mRNA和蛋白表达的抑制率分别为52．3％和51．8％．克隆形成抑制率和侵袭抑制率分别为47．4％和40．1％。[结论]siRNA可以有效抑制SKOV3细胞EGFR基因的表达，抑制其增殖能力和体外侵袭能力。     

基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9的表达与胆囊癌转移、浸润的关系

目的 探讨胆囊癌组织中基质金属蛋白酶—2(MMP—2)及基质金属蛋白酶—9(MMP—9)的表达及其与胆囊癌浸润、转移的关系。方法 选取手术切除的胆囊癌标本42例及慢性胆囊炎标本15例，采用免疫组织化学的方法(SABC法)检测MMP—2及MMP—9蛋白的表达。并结合临床病理学指标进行统计学处理分析。结果 胆囊癌组织中MMP—2及MMP—9的阳性表达率显高于慢性胆囊炎。低分化及末分化组MMP—2的阳性率显性高于高分化组及中分化组。浆膜层浸润组、淋巴结转移组及肝脏转移组MMP—2的阳性率分别显性高于无浆膜层浸润组、无淋巴结转移组及无肝脏转移组。浆膜层浸润组及淋巴结转移组MMP—9的阳性率显高于无浆膜层浸润组及无淋巴结转移组。胆囊癌组织中MMP—2和MMP—9的表达有显的相关性。(P＜0．05)．二同时阳性表达组其浆膜层浸润、淋巴结和肝脏转移发生率显高于其中之一或均阴性组(P＜0．05)。结论 MMP—2的表达与胆囊癌的分化、浸润、淋巴结及肝脏转移密切相关。MMP—9的表达与胆囊癌浸润及淋巴结转移密切相关。MMP—2和MMP—9在胆囊癌组织中表达正相关，在胆囊癌的侵袭和转移过程中起协同作用。     

胸腺瘤组织中PTEN基因基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达

目的 探讨PTEN基因、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在胸腺瘤中的表达及其与胸腺瘤临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学SP方法,检测45例胸腺瘤和16例非瘤胸腺(对照组)组织中PTEN、MMP-2和MMP-9的表达.结果 PTEN、MMP-2和MMP-9在胸腺瘤组织中的阳性表达率分别为53.5%、48.9%和62.2%,在对照组中的阳性表达率分别为93.8%、6.3%和25.0%,差异均有统计学意义(P<0.05).PTEN和MMP-2的表达与胸腺瘤的恶性程度(世界卫生组织分型)有关(P<0.05),与胸腺瘤的侵袭性(Masaoka分期)有关(P<0.01).MMP-9的表达与胸腺瘤的恶性程度和侵袭性无关(P>0.05).结论 PTEN、MMP-2和MMP-9与胸腺瘤的发生、发展可能有关,且PTEN和MMP-2与胸腺瘤的恶性程度和侵袭性相关.     

RNA干扰HIF-1α降低宫颈癌细胞基质金属蛋白酶-2的表达

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)是普遍存在于实体瘤组织中的缺氧应答调控因子,在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。本研究探讨RNA干扰HIF-1α对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在宫颈癌HeLa细胞中表达的影响,初步探讨其机理。方法:①将15只裸鼠随机分为3组,分别用HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞接种。②用免疫组化法检测各组移植瘤组织中HIF-1α、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、钙紧张素(β-catenin)和MMP-2的表达。③将HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞,HIF-1α-HeLa细胞分别在乏氧(1%O2)及常氧条件下培养48h,用Western blot检测各组细胞中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin和MMP-2的表达。结果:①免疫组化法检测结果显示,接种HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞的裸鼠移植瘤组织中HIF-1α的表达分别为(69.0±12.1)%、(62.8±12.3)%、(17.4±8.8)%,E-cadherin的表达分别为1.00±0.07、1.00±0.10、3.21±0.25,β-catenin的表达分别为4.21±0.92、4.31±0.87、1.29±0.72,MMP-2的表达分别为4.84±0.67、4.50±0.71、1.00±0.83。②HIF-1α和MMP-2的表达呈正相关(r=0.521,P=0.035)。③Western blot分析结果显示,在抑制HIF-1α表达的HIF-1α-HeLa细胞中,乏氧与常氧条件下HIF-1α、β-catenin和MMP-2蛋白低表达,E-cadherin蛋白高表达;而在HeLa细胞和pGenesil-1-HeLa细胞中得到相反的结果。结论:在人宫颈癌HeLa细胞中干扰HIF-1α后MMP-2的表达下降。     

基质金属蛋白酶-7基因在胃肠道肿瘤中的表达

恶性肿瘤浸润和转移的过程伴有细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的降解。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）家族是引起ECM降解的主要酶类之一。MMP是一大类锌依赖性内肽酶家族，活性部位都含有一个Zn^2＋，均能降解一种或几种细胞外基质成分。在人类，到目前为止共发现16种，主要分为4个亚类：1）间质胶原酶。如MMP-1、MMP-8、     

Survivin和基质金属蛋白酶-9基因在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9、凋亡抑制基因Survivin与卵巢癌局部侵袭、发生、发展的关系.方法 收集正常上皮来源卵巢组织(n=20)、良性上皮性卵巢囊肿(n=30)、卵巢交界性肿瘤(n=11)和上皮性卵巢癌(n=64),采用免疫组织化学SP法进行定性分析,然后利用RT-PCR法检测Snrvivin和MMP-9基因的表达.结果 Survivin在正常卵巢组织、卵巢良性囊肿、卵巢交界性肿瘤及卵巢癌中阳性表达率分别为20.00%、20.00%、36.67%及76.56%,MMP-9在上述各组中阳性表达率分别为25.00%、23.33%、45.45%及79.68%;与正常卵巢组织、良性上皮性卵巢囊肿比较,卵巢癌组织中Survivin和MMP-9的表达增高明显(P<0.05).Survivin、MMP-9基因的表达分别为:正常卵巢组织(0.21±0.03)、(0.23±0.03);良性卵巢囊肿(0.19±0.05)、(0.21±0.05);卵巢交界性肿瘤(0.38±0.02)、(0.44±0.02);上皮性卵巢癌(0.58±0.02)、(0.59±0.04);与正常组比较均增加,良性上皮性卵巢囊肿、卵巢癌组织中Survivin和MMP-9的表达增高明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢肿瘤中Survivin和MMP-9的过度表达,促进了卵巢肿瘤的形成与发展.

Abstract：

Objective To detect the expression of MMP-9 and Survivin in ovary cancer and investigate their relationship in local invasion, genesis and development of ovarian cancer. Methods The tissues samples from 64 cases of epithelial ovarian cancer,30 cases of carcinoid, 11 cases of borderline tumor and 20 cases of normal were collected, expressions of MMP-9 and Survivin were detected by immuohistochemistry SP method and RT-PCR. Results The expression positive rates of Survivin were 20.00 %, 20.00 %, 36.67 % and 76.56 %, and the positive rates of MMP-9 were 25.00 %, 23.33 %, 45.45 % and 79.68 % in normal ovarian tissues, carcinoid, borderline tumor and epithelial cancer of ovary, respectively. The positive rates of MMP-9 and Survivin were were higher in ovary epithelial cancer carcinoid than those in carcinoid and normal ovarian tissues(P <0.05). The mRNA of Survivin were (0.21 ±0.03), (0.19± 0.05), (0.38±0.02) and (0.58±0.02), and the mRNA of MMP-9 were (0.23±0.03), (0.21±0.05), (0.44±0.02) and (0.59±0.04) in normal ovarian tissues, carcinoid, borderline tumor and epithelial cancer of ovary, respectively.The mRNA levels of Survivin and MMP-9 were higher in carcinoid and epithelial cancer of ovary than those in normal ovarian tissues. Conclusion The over expressions of Survivin and MMP-9 are related to genesis and development of ovarian cancer.     

RNAi沉默Her-2基因对卵巢癌细胞SKOV3的动物实验研究

目的观察细胞株SKOV3/si RNA Her-2基因的沉默作用及生物学效应。方法分别将SKOV3/si RNA及对照组SKOV3种植NOD-SCI D小鼠皮下,监测两组瘤体积,3个月后处死NOD-SCI D小鼠,称瘤质量,并采用RT-PCR方法鉴定抑制Her-2表达的效果。结果建立的抑制Her-2基因表达的SKOV3细胞株(SKOV3/si RNA)成瘤力下降。结论动物实验证实RNAi沉默Her-2基因可影响卵巢癌的成瘤力,RNAi技术有可能成为治疗卵巢癌的新途径。     

沉默轴突导向蛋白4D基因对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨沉默轴突导向蛋白4D(Sema4D)基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响,并验证Sema4D干扰RNA对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 针对Sema4D基因构建短发夹RNA(shRNA)重组载体pshRNA Sema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法筛选RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染卵巢癌SKOV3细胞(重组载体组),并以空载体组(转染空载体pcDNA3.1质粒)和未转染组(未作任何处理)为对照.采用RT-PCR法和Westem blot法分别检测转染前后SKOV3细胞中Sema4D mRNA和蛋白表达,并榆测转染前后SKO3细胞的增殖、侵袭和转移能力.建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,将满足成瘤标准的15只裸鼠随机分为pshRNASema4D组(重组载体组)、空载体组和未转染组,每组5只,分别向瘤块内注射pshRNASema4D-B(50μg/次)、空载体(50μg/次)和磷酸盐缓冲液(PBS,100μl/次),每3 d注射1次,共3周,观察移植瘤生长情况.结果 酶切鉴定和测序分析证实,靶向Sema4D的3个ShRNA重组载体pshRNASema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒构建成功.RT-PCR法筛选显示,重组载体pshRNASema4D-B质粒干扰效果最佳.重组载体组转染24、48和72 h时,SKOV3细胞中Sema4DmRNA的相对表达水平分别为0.401.4±0.051、0.120±0.035和0.014±0.015,重组载体组转染72 h时的Sema4D mRNA相对表达水平明显低于空载体组(0.521±0.019)和未转染组(0.536±0.040,P<0.05).Western blot法检测显示,重组载体组转染24、48和72 h时,细胞中Sema4D蛋白的相对表达水平分别为0.196±0.023、0.074±0.015和0.040±0.014,重组载体组转染72 h时的Sema4D蛋门相对表达水平明显低于空载体组(0.275±0.009)和未转染组(0.282±0.015,P<0.05).与空载体组和未转染组比较,重组载体组细胞增殖、侵袭和迁移能力受到抑制(P<0.05).注射pehRNASema4D-B后,裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤块重量较空载体组和未转染组明显降低(P<0.05).结论 RNA干扰技术能成功沉默SKOV3细胞中Sema4D基因的表达,通过下调Sema4D基因的表达呵抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移,Sema4D干扰RNA能抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,Sema4D基因可能成为人卵巢癌基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一.

Abstract：

Objective To observe the effect of DNA Sema4D gene silencing by RNA interfering on the proliferation, migration and invasion of human ovarian cancer SKOV3 cells, and to study the effect of pshRNASema4D on the growth of SKOV3 cells in transplanted tumor in nude nice. Methods Recombinant plasmid pshRNASema4D-A, B and C were respectively transfected into SKOV3 cells by lipofetamine 2000, while cells transfected by plasmid vector pcDNA3.1 and cells untreated as control groups. RT-PCR was adopted to select the recombinant plasmid which showed the most optimal inhibition effect. RT-PCR and Western blotwere used to detected the mRNA and protein expression of Sema4D in SKOV3 cells tranfected for 24, 48 and 72 hours. MTT assay was used to investigate the proliferation of the SKOV3 cells after trasnsfection. Transwell cell migration and invasion assays were used to investigate the migration and invasion abilities of the SK0V3 cells after trasnsfection. Human ovarian cancer model was established in nude mice, and the nude mice were treated with pshRNASema4D-B once every 3 days for 3 weeks. The bulk of the transplanted tumor was measured. Results Three Sema4D-targeted short hairpin RNA (shRNA) A, B and C were successfully inserted into the plasmid vector pshRNA, and the coding sequences of the obtained shRNA were consistent with the designed fragment. The results indicated that both recombinant plasmid pshRNASema4D-A and B could effectively knock down the expression of Sema4D gene in human ovarian cancer cells, of which pshRNASema4D-B was the better choice, while no effect of pshRNASema4D-C was seen. RT-PCR results showed that the relative mRNA expression of Sema4D gene in SKOV3 cells transfected with pshRNA-Sema4D for 24, 48 and 72 hours were 0. 401 ±0.051, 0. 120 ±0.035 and 0.014 ±0. 015, respectively, which were significantly lower than that in SKOV3 cells transfected by empty vector and non-transfected cells at 72 hours after transfection. (0.521 ±0.019, 0.536 ±0.040,respectively, P<0.05). The Westen blot analysis manifested that the relative expression of Sema4D protein of SKOV3 cells transfected by pshRNASema4D for 24, 48 and 72 hours were 0. 196 ± 0. 023, 0. 074 ± 0. 015 and 0. 040 ± 0.014, respectively, which were significantly lower than that in SKOV3 cells transfected by empty vector and non-transfected cells at 72 hours after transfection. (0. 275 ± 0. 009, 0. 282 ± 0. 015, respectively, P < 0. 05 ). Comparing with the empty vector-transfected and non-transfected cells, the proliferation, invasion and migration ability of SKOV3 cells transfected with pshRNA-Sema4D were obviously weakened. The pshRNASema4D-B significantly suppressed the growth of the SKOV3 cells-transplanted tumors in nude mice, and the IR( inhibitory rate ) of pshRNASema4D-B group was ( 61.0 ± 3.3 ) % ( P < 0.05). Conclusions Sema4D can be successfully silenced by RNA interfering in human ovarian cancer SKOV3 cells. Downregulation of Sema4D can inhibit the proliferation, migration and invasion of ovarian cancer cells. The pshRNASema4D can significantly suppress the growth in transplanted tumor of human ovary cancer in nude mice. Sema4D may become a candidate gene of gene therapy of human ovarian cancer.     

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果　 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论　纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。     

siRNA沉默结肠癌转移相关基因1表达对人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响

目的 检测结肠癌转移相关基因1（MACC1）在卵巢癌细胞株中的表达,并探讨用siRNA技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响.方法 应用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）及Western blot法检测OVCAR3、ES-2、SKOV3、HO-8910卵巢癌细胞株中MACC1的表达,合成MACC1特异性siRNA并转染OVCAR3细胞,利用RT-qPCR筛选并鉴定MACC 1基因有效沉默后,应用体外黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验、体外血管拟态实验检测MACC1基因沉默后OVCAR3细胞的体外黏附、迁移、侵袭及血管生成能力的变化.结果 OVCAR3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达MACC1.MACC1基因沉默后,OVCAR3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制;Transwell迁移实验中,MACC1 siRNA干扰的OVCAR3细胞（干扰组）转入底层膜的细胞数为（245.5±12.8）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（500.3±16.5）、（496.3±13.1）个,均P＜0.05]; Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜的细胞数为（185.3±14.1）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（405.7±9.1）、（416.3±11.5）个,均P＜0.05];体外血管拟态显示干扰组细胞多呈散在分布,连接减少,形成的完整结构少.结论 利用siRNA技术抑制MACC1基因表达可有效抑制卵巢癌OVCAR3细胞的体外转移和侵袭能力,MACC1有望成为卵巢癌治疗的靶基因.     

黏附诱导卵巢癌细胞基质金属

目的 观察黏附纤黏连蛋白后肿瘤细胞基质金属蛋白酶（MMP）基因的表达,揭示细胞侵袭发生的机理。方法 纤黏连蛋白与A2780人卵巢癌细胞相互作用后,用反转录PCR观察MMP mRNA的表达;从HT1080细胞基因组DNA克隆MMP9启动子区基因,构建MMP－9－gGL2报告基因载体,瞬时转染A2780细胞,通过测定萤火虫酶活性,观察纤黏连蛋白对MMP9启动子活性的影响。结果 A2780细胞不表达MMP基因,,黏附后细胞内MMP－9mRNA含量明显增加,这一作用与黏附时间有关。克隆MMP－9基因启动子并转染细胞,黏附后转染细胞内MMP－9基因启动子活性明显增强。结论 细胞－细胞外基质黏附可刺激MMP基因转录活性,诱导MMP基因表达,进而促进细胞侵袭。     

应用RNAi技术研究乳腺癌转移抑制基因1对卵巢癌细胞侵袭转移的影响

目的研究乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）对人类卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞侵袭、转移的影响。方法应用脂质体介导法将BRMS1-siRNA转染人卵巢癌细胞株OVCAR3细胞内（实验组）,设转染不干扰任何基因的NC-siRNA的OVCAR3细胞为阴性对照组,未进行任何转染的为空白对照组。通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法筛选并鉴定BRMS1基因有效沉默后,用Transwell侵袭、迁移实验检测BRMS1基因沉默前后3组细胞侵袭、迁移能力的变化。结果人卵巢癌细胞OVCAR3中BRMS1基因成功沉默。BRMS1基因沉默后,Transwell侵袭实验中,实验组转入底层膜的细胞数为（190±8．5）个,明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（144±7．8）个、（146±6．8）个;t=8．747,t=8．869;P=0．0001,Transwell迁移实验中,实验组转入底层膜的细胞数为（231±8．9）个,明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为（177±9．7）个、（182±7．9）个;t=9．314,t=9．224;P=0．000]。结论BRMS1基因能抑制人类卵巢癌细胞的侵袭和转移,有望成为卵巢癌治疗的靶基因。     

RNA干扰技术在乳腺癌基因治疗中的研究进展

 【摘要】　RNA干扰技术作为一种简单、有效的代替基因敲除的手段为肿瘤的基因治疗提供了新思路,文章综述RNA干扰的机制、特点及在乳腺癌基因治疗等方面的应用进展。     

Adhesion induces matrix metalloproteinase-9 gene expression in ovarian cancer cells

The processes of cell invasion includes adhesion, proteolysis of extracellular matrix (ECM) and migration. It is not only related to cancer cells metastasis, but also involved in infiltration of immune effector cells,embryogenesis and angiogenesis. During the invasioncells attach and spread on the ECM, secrete proteinase to hydrolyze ECM, and then move through interstitial stroma. Matrix metalloproteinases (MMP), especially MMP-2 and MMP-9, play an important role in this processe[1,2].…     

RNA干扰技术在以survivin为靶点的肿瘤基因治疗中的应用

survivin选择性地在大部分肿瘤中表达,越来越多的研究者将其作为肿瘤基因治疗的理想靶点.RNA干扰技术以其高效、特异性强的特点成为在消化系统肿瘤、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、妇科肿瘤等各种恶性肿瘤中研究survivin基因沉默的理想手段.     

RNA干扰与肿瘤基因治疗

RNA干扰(RNAi)是指双链RNA在细胞内特异性诱导同源互补的mRNA降解,从而阻断相应基因表达的现象。随着研究不断取得进展,RNAi作为新型肿瘤基因治疗方法显示着巨大的潜力．     

RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用

目的 构建针对骨保护素（OPG）基因的一个载体编码三条短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒,观察其对MDA—MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰（RNAi）位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1．1、pGenesil-1．2、pGenesil-1．3连接形成pGenesil-1．1-shRNAl、pGenesil-1．2-shRNA2、pGenesil-1．3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil—1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA—MB一231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT—PCR和Westernblot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA—MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义（P〈0．05）,RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91％和73％。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA—MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。