硫酸铟对小鼠成纤维细胞毒性作用的研究

[目的]了解硫酸铟对小鼠成纤维细胞（L929）的细胞毒性、DNA损伤及活性氧含量的影响。[方法]以体外培养的L929细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法（MTT法）观察不同染毒浓度（1、2、4、8mmol／L硫酸铟）在不同时间段（2、24、48h）染毒对L929细胞的毒性作用;采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测在2h作用下,不同浓度（1、2、4mmol／L硫酸铟）染毒致DNA损伤的情况及活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量的变化。[结果]硫酸铟对L929细胞生长具有抑制作用,在各个浓度及时间段内光密度值随染毒浓度增加及染毒时间延长而降低,阴性组与染毒组差异有统计学意义（P〈0．05）。单细胞凝胶电泳结果显示,彗星拖尾率、彗尾DNA％、尾长、Olive尾矩随染毒浓度增加而增加,阴性组与染毒组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）,且ROS含量随染毒浓度增加表现递增。[结论]本实验条件下,硫酸铟能够明显抑制L929细胞增殖,存在明显的剂量-效应关系和时间-效应关系,并在短时间内能够引起DNA单链断裂及ROS含量增多。     

苯并（a）芘致人支气管上皮细胞DNA损伤及与组蛋白H2A单泛素化水平的关系

[目的]通过体外细胞培养途径,探讨苯并（a）芘（benzo[a]pyrene,B[a]P）作用下人支气管上皮细胞（16HBE）DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化表达水平的关系。[方法]取对数生长期16HBE细胞,采用2μmol/L B[a]P染毒不同时间（0、1、2、4、8、12、24、48h）进行实验,用碱性单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤水平,并以Olive尾矩值（olivetail moments,OTM）评价DNA损伤程度;用Western-blot法检测组蛋白H2A单泛素化水平。[结果]单细胞凝胶电泳结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,随着染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA损伤程度均明显增高,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;Western-blot结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,与对照组相比,组蛋白H2A的单泛素化水平增高,且在染毒2h后,差异有统计学意义（P〈0.01）;回归分析显示,单泛素化H2A的表达水平与DNA损伤程度存在高度相关,决定系数（R2）为0.910,P〈0.01。[结论]B[a]P染毒致16HBE细胞DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化水平之间存在密切关系。     

苯并[a]芘染毒致小鼠脑组织胞核DNA损伤

目的研究苯并[a]芘（BaP）染毒对小鼠脑组织胞核DNA的损伤。方法将50只昆明种小鼠随机分为5组，每组10只，染毒组分为高、中、低3个剂量组，并设溶剂对照及空白对照组。染毒组用BaP的植物油溶剂进行腹腔注射处理，高、中、低剂量组每次分别腹腔注射BaP7．8，3．2和1．3mg／kg，每周4次。溶剂对照组用植物油溶剂作平行处理，空白对照组不做处理。实验中观察记录小鼠一般情况及神经系统症状，染毒10周后取各组小鼠脑组织制作切片及细胞悬液，DNA断点末端核糖核酸转移酶地高辛标记法（TUNEL）及单细胞凝胶电泳（SCGE）2种方法检测小鼠脑组织神经细胞DNA的损伤。结果（1）高剂量BaP染毒组小鼠有明显的全身及神经系统中毒症状。（2）TUNEL法检测，染毒组与对照组以及不同剂量BaP染毒组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤率差异均有统计学意义（P〈10^-16～10^-62）。（3）SCGE法检测，高剂量BaP染毒组与对照组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤程度差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高剂量BaP具有神经系统毒性。BaP染毒可引起小鼠脑组织胞核DNA损伤，损伤率及损伤程度随染毒剂量增加而增加。     

镉致人肝癌细胞DNA损伤不同检测方法比较

目的观察镉对人肝癌细胞SMMC-7721DNA的损伤作用,探讨CASP软件在单细胞凝胶电泳（SCGE）结果分析中的应用。方法用SCGE检测不同浓度CdCl2作用SMMC-7721细胞24h后对DNA的损伤。用传统计数分级的方法分析SCGE结果,计算DNA脱尾率;用CASP软件分析,得出彗星头部（HDNA%）和尾部DNA百分含量（TDNA%）、彗星尾长（TL）、彗星全长（CL）、尾矩（TM）Olive尾矩（OTM）6个指标。结果CdCl2作用于SMMC-7721细胞24h后,肿瘤细胞DNA的彗尾逐渐变长。除40μmol/L剂量组处。传统方法分析得5,10,20μmol/L剂量组肿瘤细胞脱尾率逐渐加大,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;CASP分析得10,20μmol/L剂量组细胞彗星头部DNA百分含量逐渐降低,尾部DNA百分含量增加,彗星尾长和全长及尾矩和Olive尾矩值均增大,细胞DNA损伤逐渐加重,各项指标与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论镉可以导致人肝癌细胞SMMC-7721DNA的损伤。CASP软件分析结果与传统方法一致,并可以提供多个指标,具有简便客观的优点。     

铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白β位点裂解酶-1蛋白及基因表达的影响

[目的]探讨铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白（APP）β位点裂解酶-1（beta-site amyloid precursor proteincleaving enzyme-1,BACE1）蛋白及基因表达的影响。[方法]采用PC12细胞进行培养及麦芽酚铝[Al（mal）3]染毒,将细胞分为6组,分别为：200μmol/L生理盐水组;0、50、100、200和400μmol/L Al（mal）3组。分别采用酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR）于染毒12、24和48 h后测定BACE1蛋白含量及基因表达。[结果]细胞计数试剂盒-8（CCK-8）细胞活力测定结果显示,不同浓度Al（mal）3染毒PC12细胞,可使其细胞活力呈现随染毒时间延长而逐渐下降的趋势。qRT-PCR结果显示,100μmol/L Al（mal）3组在染毒48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组、0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;200、400μmol/L Al（mal）3组染毒12、24、48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。ELISA测定结果显示,染毒12 h后400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒24 h后200、400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;染毒48h后400μmol/L Al（mal）3组的BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]Al（mal）3对PC12细胞具有明显毒性作用,该作用可能与麦芽酚铝致PC12细胞BACE1蛋白和基因表达增强有关。     

HSP70在苯并(a)芘致细胞DNA损伤中的保护作用

[目的]研究热休克蛋白70(HSP70)对苯并(a)芘[B(a)P]所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤的保护作用。[方法]用含HSPTO基因cDNA的pcDNA3．0／HSP70重组质粒转染A549细胞,提高A549细胞HSP70表达水平,以空载体质粒pcDNA3．0转染作载体对照。对肺腺癌A549细胞(A549)、空载体质粒pcDNA3．0转染A549细胞(A549／pcDNA)和HSP70过表达A549细胞(A549／HSP70),用不同浓度的B(a)P(1、5、10、50、100μmol／L)染毒24h,MTT法测定细胞存活率、单细胞琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA损伤。用溶剂二甲基亚砜处理细胞组作为未染毒细胞组。[结果]B(a)P染毒作用时,A549/HSP70细胞在50、100μmol／L浓度组存活率明显高于A549细胞。A549、A549／pcDNA和A549/HSP70细胞的DNA损伤程度都伴随B(a)P染毒浓度增加而增加。与各自未染毒细胞相比,染毒A549和A549／pcDNA细胞的Olive尾矩值均有明显增加(P<0．05),A549／HSP70细胞在5、10、50、100μmol／L浓度时,Olive尾矩值明显升高(P<0．05)。与A549细胞组相比,在各染毒浓度下,A549/HSP70细胞Olive尾矩值均有降低(P<0．05)。A549／pcDNA细胞Olive尾矩值均无明显改变。[结论]HSP70对苯并(a)芘所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤具有保护作用。     

单细胞凝胶电泳技术检测肺细胞DNA损伤的改进

目的应用改进的单细胞凝胶电泳（彗星试验,SCGE）检测有害物质对肺细胞DNA的损伤效应。方法以碱性SCGE为基础,对实验条件进行摸索、优化,并在图像分析中采用CASP软件与微米标尺结合对实验结果进行分析。结果应用改进的SCGE检测肺细胞损伤程度,获得典型的彗星图像并筛选出评价DNA损伤的分析指标。中剂量组尾长为（5．33±1．55）肿,较对照组尾长[（2．17±0．28）μm]明显增加（P〈0．05）;Olive尾矩中剂量组（0．83±0．31）和低剂量组（0．69±0．40）较对照组（0．17±0．08）均有显著性增加（P〈0．05）。结论改进后的SCGE方法实现了图像的自动分析并将其量化,筛选出的指标可用于肺细胞DNA遗传毒理、修复和细胞凋亡的研究。     

锌对氟诱导小鼠成釉细胞DNA损伤的影响

目的研究锌与氟联合作用对小鼠成釉细胞DNA损伤的影响。方法体外培养小鼠成釉细胞,分别设立对照组和0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠单独染毒组及5.00、10.00、20.00μmol/L硫酸锌单独染毒组以及0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠+5.00、10.00、20.00μmol/L硫酸锌联合染毒组。小鼠成釉细胞经硫酸锌预处理24 h后,再与氟化钠联合作用。染毒24 h后收获细胞,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA损伤情况。结果与对照组比较,氟化钠单独染毒小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值均明显升高(P<0.05),而硫酸锌单独染毒组以上指标均明显下降(P<0.05)。硫酸锌+氟化钠联合作用小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值低于对照组与相同剂量氟化钠单独染毒组(P<0.05)。与相同剂量氟化钠+10μmol/L硫酸锌联合染毒组比较,5.00和20.00μmol/L硫酸锌+氟化钠联合染毒组Olive尾矩均较高(P<0.05)。结论适量的锌对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤有拮抗作用。     

黄曲霉毒素B_1致体外人胚肝细胞DNA损伤的初步研究

目的研究黄曲霉毒素B1（AFB1）对人胚肝细胞（L-02细胞）的毒性作用特点,为建立AFB1致L-02细胞DNA损伤的体外实验模型打下基础。方法以L-02细胞为靶细胞,采用完全随机实验设计将其分为3组：（1）空白对照组;（2）溶剂对照组;（3）AFB1染毒组,分别使用5,10,20,40mg/L 4个剂量染毒。各组细胞染毒培养24h后,收集细胞进行单细胞凝胶电泳（SCGE）试验,观察细胞DNA损伤情况;同时收集细胞培养上清液,用全自动生化分析仪测定谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）含量。结果（1）SCGE试验结果显示,染毒浓度达到40mg/L时L-02细胞出现DNA损伤,其尾长和Olive尾矩值与空白对照和溶剂对照相比有显著差异（P〈0.01,P〈0.05）;（2）各AFB1染毒组细胞培养上清液的AST和ALT含量,分别与空白对照组比较均未出现显著性差异（P〉0.05）。结论 AFB1染毒浓度达到40mg/L的浓度时,就能够诱导L-02细胞DNA出现损伤,但肝功能AST和ALT却未见异常。实验结果表明,在L-02细胞未出现急性损伤的低浓度AFB1染毒状态下,其致肝细胞DNA损伤的作用就已显现。     

组蛋白去乙酰化酶2基因在苯并（a）芘致神经细胞凋亡中的量效和时效表达

[目的]通过体外培养细胞途径研究组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）基因在苯并（a）芘[B（a）P]所致神经细胞凋亡中的量效和时效表达。[方法]大鼠原代培养的神经元细胞分为两批：第一批分4个组,以B（a）P同时加入s9对细胞染毒,分别为二甲基亚砜（DMSO）组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,使其终浓度为0、10、20、40gmol／L,继续培养48h;第二批分5个组,以20gmol／LB（a）P染毒,分别于染毒0、6、12、24、48h处理细胞。用流式细胞术检测神经细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR法检测caspase-3,HDAC2基因的量效和时效表达情况。[结果]①流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,中、高剂量组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈O．05）;与低剂量组相比,高剂量组凋亡率增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒24、48h组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈0．05）。②与DMSO组相比,高剂量组caspase-3、HDAC2mRNA的表达量明显增加（P〈0．01）;与低剂量组相比,高剂量组caspase-3mRNA表达量明显增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒48h组caspase-3、HDAC2mRNA表达量明显升高（P〈0．01,P〈0．05）。[结论]B（a）P可引起神经细胞凋亡,HDAC2基因表达上升,该基因可能在B（a）P所导致的神经细胞凋亡中起重要作用。     

用彗星试验检测苯并(a)芘致小鼠体细胞DNA的损伤

[目的]建立彗星试验检测苯并（a）芘腹腔染毒小鼠体细胞DNA损伤的方法。[方法]雄性昆明种小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组和高、中、低剂量3个染毒组，每组4只。3个染毒组和溶剂对照组分别腹腔注射二甲基亚砜（0．01ml／g体重）和苯并（a）芘（250、125、62．50mg／g体重）。染毒3h后，处死小鼠，取出肝、肾和小肠组织制备单细胞悬液用于彗星试验。IMI彗星分析软件分析彗星尾距（oliver tail moment，TM）评价细胞DNA损伤的程度。[结果]高剂量组小鼠肝、肾和小肠细胞的彗星尾距值均增加，中、高剂量组小肠细胞的彗星尾距值均是溶剂对照组的5．22倍（P〈0．05）；中、高剂量组小鼠肾细胞的尾距值分别是溶剂对照组的8．27和7．16倍（P〈0．05）。高剂量组肝细胞的彗星尾距值是溶剂对照组的3．99倍。低剂量组仅小肠细胞的彗星尾距均值（1．285μm）增加（P〈0．05）。[结论]彗星试验可检测苯并（a）芘腹腔染毒小鼠肝、肾和小肠细胞的DNA损伤。     

Nec-1对铝作用下神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响

[目的]研究坏死性抑制剂Necrostatin-1（Nec-1）对铝（Al）作用下的神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响。[方法]体外原代培养小鼠神经细胞,通过2mmol／LAl3＋作用于神经细胞制造铝损伤模型,加入不同剂量的Nec-1,用细胞活力检测（CCK-8）和逆转录．聚合酶链反应（RT．PCR）的方法观察Nec-1对染铝神经细胞的作用。[结果]细胞活力检测：以2mmol／LAl3＋染毒组作为对照,30μmol／LNec-1组的细胞活力与对照组比较,差别有统计学意义（P〈0．05）,60、90μmol／LNec-1组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）.RT-PCR结果：2mmol／LAl3＋染毒组caspase-3基因的表达为0．98±0．120,而Nec-160μmol／L组和Nec-190μmol／L组caspase-3的表达分别为0．50±0．077和0．44±0．050,同对照组相比,两组caspase-3的表达均下降（P〈0．01）。2mmol/LAl3＋染毒组的LC3-Ⅱ基因的表达为1,82±0．047,而60μmol／LNec-1组和90μmol／LNec-1组的LC3．口表达分别为1．00±0．022和0．97±0．035,同对照组相比,两组LC3-Ⅱ的表达均呈下降（P〈0．01）。[结论]Nec-1可使铝作用下的神经细胞活力上升,并使神经细胞的自吞噬和凋亡基因表达下降。     

热休克蛋白70的表达在二氢二醇环氧苯并(a)芘致DNA损伤中的作用

目的研究热休克蛋白70（HSP70）的表达在二氢二醇环氧苯并（a）芘（BPDE）致DNA损伤中的作用。方法培养人肺腺癌A549细胞，作如下处理：BPDE染毒组：以不同剂量BPDE（0、2、4、8pmol／L）染毒2h；预热＋BPDE染毒组：细胞预热（42℃ 2h，37℃恢复1h）后，再按BPDE染毒组同样处理，各组均设溶剂对照。采用单细胞凝胶电泳技术和Western blot法分别检测DNA的损伤情况与HSP70的表达。结果（1）DNA损伤情况：BPDE染毒组DNA损伤程度随BPDE染毒剂量增加而加强，明显高于溶剂对照，差异有统计学意义（P〈0．01），组间相互比较，差异亦有统计学意义（P〈0．01），且DNA损伤程度与BPDE染毒剂量呈正相关（r=0．96，P〈0．05）；预热＋BPDE染毒组DNA损伤程度随BPDE染毒浓度递增，与预热溶剂对照相比，差异有统计学意义（P〈0．01），但在4、8μmol／L的BPDE组间，DNA损伤程度的差异无统计学意义（P〉0．05），与BPDE染毒组比较，各剂量下DNA损伤程度均明显增加。（2）HSP70表达情况：BPDE染毒组在2、4μmol／L的BPDE作用时HSP70表达逐渐升高，与溶剂对照相比，差异有统计学意义（P〈0．05），但在8μmol／L剂量时，表达下调，与溶剂对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；预热＋BPDE染毒组HSP70的表达均比预热溶剂对照明增加，在4μmol／L的BPDE作用时HSP70表达水平最高，与2、8μmol／L剂量组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。与BPDE染毒组相比，各剂量下HSP70的表达水平均明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论HSP70对BPDE所致A549细胞DNA损伤的保护作用并不明显。     

CYP2E1 Ras Ⅰ基因型对苯酚诱导的酶活性和DNA损伤作用的影响

[目的]研究3种CYP2E1Ras，基因型对苯酚诱导永生化人淋巴细胞的CYP2E1酶活性及DNA损伤作用的影响。[方法]加入不同浓度的苯酚对CYP2E1Ras，不同基因型的永生化人淋巴细胞进行24—72h染毒，采用四甲基偶氮唑蓝法（Methyl Thiazolyl Tetrazolium，MTY）测定细胞毒性并确定苯酚染毒剂量；采用苯胺分光光度法测定CYP2E1酶活性；采用单细胞凝胶电泳（SCGE）法测定DNA损伤作用。[结果]0．05％苯酚24h染毒对CYP2E1Ras，野生、杂合及突变基因型细胞均产生生长抑制作用，苯酚对细胞24～72h染毒的最大无作用浓度为0．01％。各基因型细胞经一定浓度苯酚诱导后酶活性升高（P〈0．05），其中野生型细胞经0,005％和0．01％浓度的苯酚染毒可出现酶活性增高的效应，突变型和杂合型细胞经0,01％浓度染毒可出现酶活性增高的效应，且染毒72h时，在0．01％苯酚染毒剂量下各基因型细胞的CYP2E1酶活力出现明显差异，其中野生基因型细胞的CYP2E1酶活力显著高于突变型、杂合型基因型细胞（P〈0．05）。各基因型细胞经一定浓度苯酚染毒后可出现DNA损伤效应，与对照相比，细胞的拖尾率、尾DNA含量及尾长显著升高（P〈0．05），且染毒48h、72h时，野生基因型细胞的DNA损伤效应与突变型、杂合型细胞相比更为明显（P〈0．05）。苯酚诱导后细胞的DNA损伤与CYP2E1酶活性之间呈现明显正相关性。[结论]CYP2E1Rasj不同基因型明显影响苯酚对人淋巴细胞CYP2E1酶的诱导活性和DNA的损伤程度，其中CYP2E1Ras，野生基因型细胞的作用最为明显。     

氯化铝致原代培养小鼠神经细胞毒性作用及对mGluR3表达的影响

[目的]探讨铝对原代培养神经细胞的毒性作用及对代谢型谷氨酸受体3（metabotropic glutamate receptors,mGluR3）基因表达的影响。[方法]采用结晶氯化铝（AlCl3·6H2O）分别对原代培养昆明小鼠的神经细胞染毒,使其终浓度分别为0mmol/L（对照组）、0．5mmol／L（低剂量组）、1．0mmol／L（中剂量组）和2．0mmol／L（高剂量组）,染毒48h后,采用CCK培试剂盒,使用酶联免疫仪检测细胞活力,采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法测定mGluR3基因的表达。[结果]与对照组比较,高剂量组细胞活力明显下降（P〈0．05）;RT-PCR测定结果显示高剂量组相对于对照组mGluR3表达量明显降低（P〈0．05）。[结论]铝对原代培养的神经细胞产生细胞毒性可能与mGluR3基因表达降低有关。     

苯并[a]芘对人支气管上皮细胞H19与SAHH表达的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)对人支气管上皮细胞(16HBE)长链非编码RNA(lncRNA)H19和S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)表达的影响,并初步探究H19和SAHH的关系。[方法]用不同浓度(1、2、4、8、16、32μmol/L)BaP染毒16HBE细胞24 h,设置未处理组(仅加培养液)和溶剂对照组;以16μmol/L BaP染毒16HBE细胞不同时间(1、2、4、8、12、24 h),以0 h为对照组。用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测H19的表达水平;通过免疫印迹试验(Western blot)检测SAHH的蛋白表达水平;采用lncRNA原位荧光杂交(FISH)技术结合激光共聚焦显微镜观察H19和SAHH的定位。[结果]RT-PCR结果显示,溶剂对照组与未处理组相比,H19表达差异无统计学意义。随着染毒浓度和时间的增加,16HBE细胞H19表达呈现逐渐升高的趋势。8、16、32μmol/L BaP染毒24 h及16μmol/L BaP染毒4、8、12、24 h时,H19表达量分别高于溶剂对照组和0 h组(均P0.05)。BaP染毒浓度为32μmol/L时,H19表达量达到峰值,较溶剂对照组增加了78.0%;16μmol/L BaP染毒24 h时,H19表达量达到峰值,较0 h组增加了48.3%。Western blot结果显示,溶剂对照组与未处理组的SAHH表达差异无统计学意义。随着染毒时间和浓度的增加,16HBE细胞SAHH表达逐渐降低(P0.05)。BaP浓度为32μmol/L时,SAHH表达降至最低,较溶剂对照组降低了37.2%;16μmol/L BaP染毒24 h时,SAHH表达降至最低,较0 h组降低了33.1%。免疫荧光结果显示,H19和SAHH均在细胞质及细胞核中表达,表达主要分布在核周质及核膜;与0 h组相比,16μmol/L BaP染毒细胞24 h后H19在核周质处的荧光加强,而SAHH的荧光明显减弱,两者在胞质、胞核中共定位的荧光强度增加。[结论]BaP染毒可引起16HBE细胞H19表达升高而SAHH表达降低;H19与SAHH在细胞内的共定位表达提示两者可能存在相互作用。     

五氯酚钠对鲤鱼肾细胞DNA损伤的体内和体外研究

目的 研究五氯酚钠对鲤鱼肾细胞DNA的损伤效应.方法 选择健康鲤鱼,体内染毒实验:分别设3个五氯酚钠(Na-PCP)染毒组(14.4、28.8、144.0μg/L)和1个对照组(蒸馏水),每组3尾鲤鱼,染毒72 h.体外染毒实验:收集健康鲤鱼肾细胞悬液,分别设3个Na-PCP染毒组(14.4、28.8、144.0μg/L)和1个对照组(蒸馏水),染毒1.5 h.体内、外实验结束后,均采用单细胞凝胶电泳试验检测细胞DNA损伤程度,指标包括Olive尾距、彗尾长、尾距、彗尾DNA含量.结果 体内染毒结果显示,14.4、28.8、144.0μg/L组Olive尾距、彗尾长、尾距、彗尾DNA含量均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).体外染毒结果显示,除28.8 μg/L组外,14.4、144.0 μg/L组Olive尾距、彗尾长、尾距、彗尾DNA含量均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).体内染毒的0、14.4μg/L组Olive尾距小于体外染毒,差异均有统计学意义(P＜0.05);而体内染毒的28.8、144.0 μg/L组Olive尾距大于体外染毒,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 五氯酚钠能够诱导鲤鱼肾细胞DNA损伤.     

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的 探讨不同浓度苯并[a]芘（BaP）对人肺癌（淋巴结转移）NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法 取对数期生长的NCI-H292细胞，分别以不同剂量BaP（0、4、8、16和32 μmol/L） 染毒24、48和72 h后，采用实时无标记细胞分析系统（RTCA）法检测细胞存活率，ELISA法检测细胞内白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）水平。本实验按照5×3析因设计。结果 与对照组相比，各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低（P<0.001），细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系（r1=-0.986、-0.974和-0.993，P<0.01）；与同剂量组24 h时比较，各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高（P<0.001）， 细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系（r2=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000，P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.001），在48 h和72 h时BaP高剂量（8~32 μmol/L）染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低（P<0.01），72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；同时，各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.01）： 在染毒72 h，BaP染毒剂量为0~16 μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；4、8 μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。结论 BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降，且随着染毒剂量增加毒性作用增强；BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8，其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。     

双酚A及纳米二氧化钛对人胚肝L-02细胞内活性氧含量及DNA损伤的联合作用

[目的]观察双酚A（BPA）、纳米二氧化钛（nano-TiO2）单独及联合作用对人胚肝L-02细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量及DNA损伤的影响。[方法]生长良好的L-02细胞，分别单独加入0．1、1、10μmol／L的BPA，1、5、10mg／L的nano-TiO2，以及上述各浓度的BPA和nano-TiO2混合染毒24h；采用流式细胞仪检测各组L-02细胞内ROS含量，采用彗星试验观察各组DNA断裂损伤程度。[结果]10μmol／L BPA单独染毒组，1mg／L nano-TiO2与1、10μmol／L BPA，以及5、10mg／L的nano-TiO2分别与0．1、1、10μmol／L BPA联合作用于L-02细胞后，均可引起ROS含量升高，DNA断裂损伤加重，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001）；而nano-TiO2单独染毒组对于L-02细胞ROS的升高、DNA损伤作用与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。析因分析结果显示两种受试物混合染毒存在协同作用。[结论]BPA和nano-TiO2联合作用可增加各自对L-02细胞内ROS水平和DNA损伤断裂水平的影响，对细胞的损伤作用增大。     

苯并(a)芘作用下的人支气管上皮细胞DNA损伤与XPF、XPG和ERCC1蛋白表达的关系

目的探讨苯并(a)芘(Benzo[a]pyrene,B[a]P)作用下人支气管上皮细胞(16HBE)DNA损伤与着色性干皮病F、G蛋白[Xeroderma pigmentosum group F,G(XPF,XPG)]和切除修复交叉互补蛋白1(Excision repair cross-complementing 1,ERCC1)表达的关系。方法用B[a]P(0,1,2,4,8,16,32,64μmol/L)染毒16HBE细胞24h,用噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)法检测B[a]P对细胞的毒作用。用Comet实验检测细胞DNA损伤并以Olive尾矩值(Olive Tail Moments,OTM)评价DNA损伤程度。用Western-blot检测XPF、XPG和ERCC1蛋白的表达水平。结果B[a]P浓度大于4μmol/L的各组细胞活性均显著性降低(P<0.05)。各染毒组细胞DNA损伤程度则明显增高(P<0.05)。在不同浓度B[a]P染毒细胞中目的蛋白的表达量有差异。在1μmol/L和2μmol/L B[a]P组细胞XPF、XPG表达增高,且2μmol/L组XPG水平与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但随染毒剂量增大(32,64μmol/L),XPF和XPG表达量明显降低(P<0.05)。ERCC1表达随染毒剂量的增高而逐渐增加,在16μmol/L达到峰值,随后逐步下降。回归分析显示XPF、XPG和ERCC1的表达与OTM值之间决定系数分别为0.691、0.745和0.642。结论B[a]P引起的XPF、XPG和ERCC1蛋白表达水平的变化与DNA损伤之间存在密切关系。