肿瘤细胞培养上清对小鼠骨髓来源的树突状细胞分化发育的影响

目的：探讨肿瘤细胞对树突状细胞（dendritic cells,DC)分化发育的影响。方法：在诱导小鼠骨髓DC发育的过程中,加入肿瘤细胞培养上清,观察DC生成情况,产与政党培养条件下的DC比较共刺激分子,Ⅱ类分子、黏附分子的表达,刺激同种T细胞增殖,以及抗原提呈功能水平,通过ELISA法检测肿瘤细胞分泌的细胞因子。结果：经小鼠黑色素细胞瘤B16和肺癌细胞3LL的分泌上清培养后,DC表达共刺激分子CD40,CD86,CD80,和黏附子CD5R的水平下降,分泌Th1细胞因子IL－12的水平也降低;并且DC的抗原提呈功能和刺激同种混合淋巴细胞反应的功能下降,上述肿瘤细胞均可分泌抑制性细胞因子IL－10。结论：在肿瘤细胞的微环境中存在免疫抑生因子,对DC分化发育和抗原提呈功能起负性调节作用。     

人恶性肿瘤细胞的克隆培养

在双层软琼服上用食管癌、乳腺癌、卵巢癌等60例肿瘤标本作细胞克隆培养,其中73%形成≥5克隆/50万接种细胞。而≥30克隆/50万接种细胞的阳性率为58%。对克隆形成观察时间的比较研究表明,培养12～14天判定结果比较合适。此外,比较了单层软琼脂与双属软琼脂的克隆培养效果。初步结果表明,单层软琼脂在所用的营养条件下克隆形成率几乎与双层软琼脂的效果相当。     

人结肠癌SW620细胞表面抗原CD133的表达具有可塑性

目的:探讨CD133抗原在人结肠癌细胞SW620中表达是否具有可塑性。方法:对SW620细胞进行流式细胞活化荧光分析,分选出CD133-和CD133+细胞亚群。对这2种亚群细胞进行单层培养传代、悬吊法三维球培养及无糖或无血清培养液培养后,应用免疫染色与荧光定量PCR法检测CD133表达变化。结果:结肠癌SW620细胞中存在CD133-与CD133+两种亚群。分选后的CD133-与CD133+亚群细胞在单层培养时CD133表达无明显变化;在三维球培养时,CD133-亚群细胞中出现明显的CD133抗原及mRNA表达(P<0.05);而在无血清培养时,CD133-与CD133+两亚群细胞的CD133表达无变化;在无糖培养时,CD133-亚群细胞中出现CD133阳性表达。结论:人结肠癌SW620细胞中表面抗原CD133表达具有可塑性,可受不同培养条件的调节。     

天然药物莪术醇抑制肿瘤细胞生长及RNA合成影响的初步研究

目的探索莪术之有效活性成分莪术醇对部分肿瘤细胞生长抑制及对RNA合成的影响.方法采用四氮唑盐还原法(MTT)及提取检测RNA等方法,研究天然药物单体莪术醇对13种妇科肿瘤细胞和2种正常乳腺细胞生长抑制及其RNA含量的影响.结果天然药物莪术醇明显抑制MCF7、OV-UL-2、MM231、HeLa细胞的生长(P<0.05);莪术醇抑制肿瘤细胞生长的最佳抑制浓度为50 μg/mL;莪术醇能明显抑制MCF7、MM231、HeLa肿瘤细胞RNA的合成(P<0.05);天然药物莪术醇对正常乳腺细胞MCF12a、MCF10a生长无影响.结论莪术醇在体外能抑制MCF7、MM231、HeLa、OV-UL-2细胞的增殖,并能阻止MCF7、MM231、HeLa细胞RNA的合成.     

MicroRNA对肿瘤细胞活性的影响

MicroRNA(miRNA)是一类非编码蛋白的短序列RNA片段,长度大约为21～23个核苷酸。它是通过结合到目标mRNA上抑制该mRNA翻译,起着调控基因功能的作用。本试验将4种miRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide ofmiRNA,AMR)转染至不同的肿瘤细胞后,用MTT法测定细胞活性来检测miRNA对肿瘤细胞活性的影响。1材料与方法1.1肿瘤细胞人胃癌细胞株MGC803、人胶质瘤细胞株U373、人上皮样宫颈癌细胞株HeLa、人结肠癌细胞株SW620均来自本中心细胞室。1.2主要试剂RPMI1640培养基(Gibco,美国);胎牛血清(中国医学科学院血液研究所);胰…     

SLC基因修饰对肿瘤细胞疫苗免疫效果的初步研究

目的：构建次级淋巴组织趋化因子（secondary lymphoid—tissue chemokine,SLC）基因修饰的趋化型恶性黑色素瘤疫苗,并初步研究其免疫效果。方法：SLC基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,并用适当条件的丝裂霉素处理,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。在体外,利用趋化小室法检测趋化型疫苗培养上清对小鼠脾淋巴细胞的趋化活性。在体内,用趋化型疫苗免疫小鼠,检测脾淋巴细胞的CTL活性,并观察疫苗免疫对B16移植瘤生长的影响。结果：筛选获得了SLC基因转染的小鼠黑色素瘤B16细胞,以100μg／mL丝裂霉素处理1.5h,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。趋化型疫苗在体外培养48h后,其培养上清对淋巴细胞具有明显的趋化活性。与野生型疫苗相比,用趋化型疫苗免疫后,小鼠脾淋巴细胞的CTL活性更强,小鼠免疫后再次接种B16细胞,肿瘤的生长受到更明显的抑制。结论：成功构建了SLC基因修饰的趋化型黑色素瘤疫苗,并在体内外初步检测到该疫苗对抗肿瘤免疫的影响和对移植瘤生长的抑制,该疫苗有可能被应用于恶性黑色素瘤的免疫治疗。     

基因技术在逆转肿瘤细胞多药耐药性上的应用

MDR(multiple drug resistance)调节剂或化学增敏剂可通过抑制P-gp输出泵的活动来逆转经典的耐药表型.应用MDR调节剂的一个障碍在于所需治疗剂量下的内在毒性.例如,环孢菌素A可引起心脏功能衰竭、高血压、高胆红素血症和免疫抑制等.并且肿瘤细胞可形成针对所用化学增敏剂的抵抗,即所谓的第三抵抗.因此,很有必要发展一些有选择性的、低毒高效的策略来克服MDR.研究表明,肿瘤细胞产生MDR的根本原因是某些基因不协调表达,导致某些与MDR相关的蛋白质和酶上调或下降,从而产生耐药.因此从理论上讲,在基因水平逆转MDR将是解决问题的关键.目前此方面的研究主要集中在MDR1基因及某些癌相关基因.反义核酸技术给耐药逆转提供了新的高效特异性的方法,较传统的MDR逆转方法有较多优势.近来发展起来的RNA干涉技术,为肿瘤多药耐药的基因逆转提供了新的方法.     

72000IV型胶原酶的分泌和活化与肿瘤细胞转移潜能关系的研究

目的探讨肿瘤细胞转移潜能与７２０００ＩＶ型胶原酶的关系。方法采用明胶酶谱分析法,检测两组５种不同转移潜能的人癌细胞系,分泌７２０００ＩＶ型胶原酶的情况,以及人正常纤维母细胞在不同癌细胞的作用下,分泌的７２０００ＩＶ型胶原酶活性的改变。结果高转移潜能的癌细胞（ＰＧ、ＷＭ４５１和ＷＭ９８３ａ）分泌７２０００ＩＶ型胶原酶的量明显高于低转移潜能的癌细胞（ＰＡａ和ＷＭ３５）;在受ＰＧ和ＷＭ４５１细胞作用的纤维母细胞的条件培养液中,活化型７２０００ＩＶ型胶原酶的产量明显高于其他癌细胞作用的纤维母细胞。结论７２０００ＩＶ型胶原酶的表达和分泌与肿瘤细胞的转移潜能密切相关;高转移潜能的癌细胞（ＰＧ）和转移瘤细胞（ＷＭ４５１）可能通过分泌某些可溶性介质,刺激纤维母细胞,促进酶原型７２０００ＩＶ型胶原酶的活化,从而更有效地降解ＩＶ型胶原,达到转移的目的。     

循环肿瘤细胞株的建立

循环肿瘤细胞(CTC)具有的特异性(上皮间质转化、与骨髓来源细胞的融合、抗失巢凋亡)决定了将其作为原代目标进行培养的必要性,所培养出的细胞株将为进一步研究恶性肿瘤的转移机制提供良好的物质基础,为患者的靶向治疗提供个体化的新方向.     

骨巨细胞瘤中单核基质细胞的分离培养及其性质研究

目的对骨巨细胞瘤中单核基质细胞的性质和来源进行探讨。方法体外分离培养8例骨巨细胞瘤的单核基质细胞，用胶原酶分离方法和差速贴壁法分离纯化细胞，将分离培养的骨巨细胞瘤单核基质细胞与狗股骨薄磨片共培养，观察骨巨细胞瘤单核基质细胞的噬骨能力、TRAP染色和RT—PCR检测降钙素受体（CTR）和细胞核因子KB受体活化因子（RANK）。结果利用酶消化的方法可以获得较高纯度的单核基质细胞；TRAP染色阳性；体外培养具有噬骨能力；采用RT—PCR方法可检测到降钙素受体和细胞核因子KB受体活化因子。结论利用胶原酶-Ⅱ消化的方法结合差速贴壁方法可以获得较纯的单核基质细胞，可用于生化和分子生物学研究，是进行骨巨细胞瘤细胞学研究的细胞来源。     

Methotrexate resistance in vitro is achieved by a dynamic selectionprocess of tumor cell variants emerging during treatment

Genetic instability leads to tumor heterogeneity, which in turn provides a source of cell variants responsible for drug resistance. However, the source of resistant cells during the process of acquired resistance is poorly understood. Our aim has been to characterize the mechanism by which acquired resistance to methotrexate emerges during the course of cancer cell treatment in vitro. We recently demonstrated that, in vitro, HT-29 colon cancer cells become transiently sensitive to methotrexate by depleting the extracellular milieu of survival factors; on the other hand, the cell population under treatment can reversibly adapt to grow below a critical cell density in the presence of the drug. Here, we show that this adapted cell population gives rise to permanent resistant populations through repeated cycles of cell death and growth. This increased cell turnover, but not merely cell proliferation, is required for the appearance of increasing degrees of stable resistance that are progressively selected by drug pressure. Such a process, taking place in multiple steps, is here designated "dynamic selection." The analysis of sensitive and resistant HT-29 cell populations revealed that methotrexate induces genomic instability--characterized by centrosome amplification and aberrant chromosome recombination--leading to a low-level amplification of the 5q chromosome arm as one of the earliest genetic events selected during treatment. Therefore, this model provides a mechanism by which a tumor cell population lacking resistant subpopulations before treatment is able to acquire the genetic changes required for stable drug resistance.     

三维细胞模型在肿瘤实验中的应用

三维细胞培养是目前公认的能较好模拟体内肿瘤细胞微环境及细胞间相互作用的体外模型。与传统二维细胞培养相比,它在观察肿瘤细胞生物学行为、耐药及放射不敏感、体内基因表达等研究中具有明显优势,能为肿瘤基础实验研究提供极具价值的体外模型。     

悬浮培养在肿瘤干细胞研究中的应用及局限性

肿瘤干细胞被认为是肿瘤起源、生长和转移的关键因素,已成为当下肿瘤研究的热点之一.由于大多数肿瘤干细胞缺乏特异性的标志物,且组织定位和形态特征不明确,因此无法直接从肿瘤细胞中分离,当前常利用肿瘤干细胞与普通肿瘤细胞功能上的差异区分这2类细胞.悬浮培养法是常用的组织干细胞及肿瘤干细胞的体外研究方法,它能够直观地在单细胞层面上反映细胞的自我更新及增殖能力,因此被广泛用于肿瘤干细胞的鉴定、富集和纯化.然而,悬浮培养获得的细胞与体内真正的肿瘤干细胞存在本质的差别,获得的肿瘤球并不一定具克隆性,且并不是所有具备干细胞性质的细胞都能在悬浮条件下存活.因此,当使用悬浮培养研究肿瘤干细胞时,必须意识到它的局限性,本文旨在对这一问题的研究作一综述.     

人脐带间充质干细胞分离培养及表面标志检测

 目的　探讨体外分离培养人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）的方法,并检测hUCMSC的表面标志。方法　分离脐带华通胶（Wharton's jelly）,将其剪碎后利用组织块贴壁法培养获得hUCMSC,生长至一定密度后进行传代,采用流式细胞术检测第3代hUCMSC表面标志。结果　由人脐带华通胶可方便、有效地获得hUCMSC,其体外生长形态类似成纤维细胞,并可稳定增殖和传代。hUCMSC表面标志CD29、CD44、CD105高表达,而表面标志CD45、CD34、HLA-DR、HLA-G、CD80、CD86不表达。结论　利用人脐带华通胶组织块培养可有效获得hUCMSC,为组织工程提供丰富的细胞来源。     

人骨肉瘤细胞株中类肿瘤干细胞的分离培养及鉴定

目的：从人骨肉瘤株U2-OS中分离并鉴定类肿瘤干细胞。方法：用无血清培养法从骨肉瘤细胞株中分离出肿瘤细胞球，流式细胞术检测骨肉瘤细胞株中Stro-1的阳性表达率，MTT法检测其增殖能力，免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法研究Stro-1阳性细胞中Stro-1 mRNA的表达，并将Stro-1阳性细胞和阴性细胞分别接种于NOD／SCID小鼠。结果：U2-OS中CD44的阳性百分率为5．67％，Stro-1阳性细胞形成的细胞球具有增殖和分化的能力，Stro-1阳性细胞中呈现Stro-1 mRNA的高表达，Stro-1阳性细胞能形成骨肉瘤。结论：骨肉瘤细胞株中存在类骨肉瘤干细胞，并具有自我更新和多向分化的能力。     

健康人和肝癌患者CIK体外增殖能力及对原代肝癌细胞抗肿瘤作用的比较研究

目的探讨源自健康人和肿瘤患者的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外增殖能力及对原代肝癌细胞的抗肿瘤作用的差异,进一步了解CIK的抗肿瘤作用.方法分离健康人和肝癌患者外周血单个核细胞经细胞因子激活诱导培养为CIK,流式细胞分析检测CIK免疫表型;用机械研磨法将新鲜肝癌组织标本分离成单细胞悬液;四甲基偶氮唑盐法榆测两种CI...     

树突状细胞融合瘤苗的制备及其在肿瘤免疫治疗中的应用

树突状细胞（DC）融合瘤苗的制备主要包括DC体外诱导扩增及肿瘤细胞体外培养、诱导融合、瘤苗纯化等流程。在黑色素瘤、胃癌、肾癌等肿瘤的动物实验及临床前期试验中融合瘤苗表现出良好的抗肿瘤免疫效果。     

人大细胞肺癌多药耐药株H460/cDDP的建立及其生物学特性

目的：建立人大细胞肺癌多药耐药株H460/cDDP．并对其生物学特性进行测定。方法：以人大细胞肺癌细胞株H460为亲本细胞．采用顺铂大剂量问歇诱导法建立多药耐药细胞株H460／cDDP。光镜下观察其形态学变化；MTT法测定药物敏感性；锥虫蓝拒染实验测定细胞生长曲线、倍增时间；进行染色体核型分析；棵鼠成癌实验测定其体内成瘤活性。结果：历时近6个月建成人大细胞肺癌多药耐药株H460／cDDP．经鉴定其对顺铂的耐药指数为10．21，对5-氟尿嘧啶，多柔比星(阿霉素)、依托泊苷(足叶乙甙)、甲氨蝶呤有不同程度的交叉耐药。H460／cDDP较亲本细胞分裂高峰延迟，倍增时间由20．78小时延长至3646小时．细胞形态改变，染色体变化不突出。经过反复冻存．复苏．上述特性保持稳定．并具有体内成瘤活性，成瘤时间较亲本细胞有所延迟。结论：新建大细胞肺癌多药耐药株H460／cDDP呈中等度耐药、多药耐药表型稳定且具有体内成瘤活性，可用于下游实验。