重组人核心蛋白多糖固相拮抗转化生长因子β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用

目的模拟人体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1(TGF-β1)接触方式,观察核心蛋白多糖固相拮抗TGF-β1刺激瘢痕成纤维细胞的效果.方法制备成纤维细胞胶原网格(FPCL)体外三维培养模型,将其分为4组.对照组向FPCL中加入培养液;核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,再加入培养液;TGF-β1组向FPCL中加入含5 μg/L TGF-β1的培养液;TGF-β1+核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,然后加入含5μg/L TGF-β1的培养液.在培养12、24、48、72、96 h时观察各组FPCL的收缩情况,并用蛋白质印迹法与逆转录聚合酶链反应分别检测FPCL中瘢痕成纤维细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达水平.结果各培养时相点下,TGF-β1组FPCL收缩比对照组明显增强,核心蛋白多糖组FPCL收缩则比对照组明显减弱.TGF-β1组的PAI-1、α-SMA的蛋白及相应mRNA表达水平(3 482±211、4 320±272;0.89±0.15、0.56±0.11)显著高于对照组(1 764±147、1 699±146;0.29±0.06、0.21±0.06,P＜0.01);其余两组相应检测指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论重组人核心蛋白多糖混入胶原凝胶,可显著抑制TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用,表明在体外核心蛋白多糖具有拮抗TGF-β1的作用.提示皮肤组织损伤后,由于创面机械性缺少核心蛋白多糖,TGF-β1活性上调,可能是瘢痕增生的一个重要因素.     

醋酸铅对雄性小鼠生殖功能的毒性作用

目的　探讨醋酸铅对雄性小鼠生殖功能的毒性作用。　方法　不同浓度醋酸铅 ( 1 .5、6及 2 4mg/kg)腹腔注射 4周龄雄性小鼠 ,共 1 0次。 50d后与正常雌鼠合笼交配 ( 1∶2 ) ,观察雌鼠受孕率、胚胎总数、异常胚胎数 (率 )、胎鼠重量 ;测定睾丸指数、附睾精子数量、精子活动率和精子畸形率。　结果　对照组、醋酸铅各组合笼 2 1d,雌鼠受孕率和胚胎总数无显著差异 (P >0 .0 5)。醋酸铅 2 4mg/kg组异常胚胎数 (率 )显著高于对照组和 1 .5mg/kg组 (P <0 .0 5) ,胎鼠重量和雄鼠睾丸指数显著低于对照组 (P <0 .0 5)。其他实验组异常胚胎率、胎鼠重量和雄鼠睾丸指数与对照组比较无显著性差异。各实验组附睾精子数显著低于对照组 (P <0 .0 5,P <0 .0 0 5) ,附睾精子畸形率显著高于对照组 (P<0 .0 5,P <0 .0 0 5) ,中、高浓度醋酸铅组附睾精子活动率显著低于对照组 (P <0 .0 5)。　结论　醋酸铅 2 4mg/kg处理雄鼠对睾丸、精子数量和质量、合笼雌鼠胚胎产生影响。 1 .5及 6mg/kg只影响精子数量和质量而不影响生殖功能和子代。合笼雌鼠异常胚胎率增高和胎鼠重量下降可能与醋酸铅引起精子质量下降有关     

异丙酚对大鼠脑突触体Na~ ,K~ -ATP酶活性的影响

目的 :了解异丙酚是否通过影响脑突触体Na ,K ATP酶活性而产生中枢抑制效应。方法 :SD大鼠 30只 ,随机分为三组 ,分别腹腔注射 (ip)异丙酚 5 0mg/kg、10 0mg/kg和生理盐水 10ml/kg。结果 :ip异丙酚 5 0mg/kg能明显抑制海马、脑干突触体的Na ,K ATP酶活性 (P <0 0 1) ,ip异丙酚 10 0mg/kg能使大脑皮层、脑干及海马突触体的Na ,K ATP酶活性明显降低 (P <0 0 1)。异丙酚 10 0mg/kg组的大脑皮层、脑干及海马突触体的Na ,K ATP酶活性均明显低于异丙酚 5 0mg/kg组 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :异丙酚对中枢神经系统的抑制作用 ,可能与其抑制脑突触体Na ,K ATP酶活性有关     

去甲泽拉木醛与雷公藤多甙的免疫抑制作用比较

目的　研究雷公藤根皮中的单体去甲泽拉木醛 (T 96 )的免疫抑制作用 ,并比较其与雷公藤多甙 (TⅡ )抑制大鼠移植肾排斥的强弱。方法　以C5 7BL/6小鼠脾细胞为反应细胞 ,灭活的BALB/c小鼠脾细胞为刺激细胞 ,混合培养时加入不同剂量的T 96 ,并设雷公藤多甙 (TⅡ )对照组 ,观察它们对淋巴细胞转化的抑制作用。另建立同种异体大鼠肾移植模型 ,观察T 96在体内对排斥反应的抑制作用 ,并与TⅡ对比。结果　当T 96的终浓度为 0 .2 5、0 .5、1.0 μg/ml,能明显抑制混合淋巴细胞培养淋巴细胞的转化 ,与不作处理的对照组比较 ,差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,也较同浓度的TⅡ抑制效果强 (P <0 .0 1)。体内实验中 ,当T 96用量为 10mg·kg-1·d-1和 2 0mg·kg-1·d-1时 ,移植肾的存活时间为 (14 .8± 1.0 4 )d和 (18.0± 1.5 1)d ,与对照组比较 ,差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,2 0mg·kg-1·d-1组的存活时间较接受TⅡ 4 0mg·kg-1·d-1和 6 0mg·kg-1·d-1组都长 (P <0 .0 5 )。结论　T 96具有免疫抑制作用 ,其作用较雷公藤多甙强 ;在一定剂量范围内其免疫抑制作用随剂量加大而增强。     

内毒素对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响

目的　探讨不同浓度的内毒素 /脂多糖 (LPS)对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响。　方法　分别以 0 .0、0 .1、1.0、10 .0、5 0 .0、10 0 .0 μg/ml的LPS刺激体外培养的U937,作用 2 4h后运用四氮噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖活力 ,应用流式细胞仪测定细胞凋亡率 ,并用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清中转化生长因子 β1(TGF β1)和血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。　 结果　与LPS为 0 .0 μg/ml时比较 ,当其浓度为 0 .1～ 10 0 .0 μg/ml时可刺激U937细胞凋亡、促进其分泌TGF β1(P <0.0 5～ 0.0 1),其中低浓度 (0 .1～ 10 .0 μg/ml)的LPS可促进U937增殖 (P <0.0 5～ 0.0 1),但对VEGF的分泌无明显影响 (P >0.0 5);高浓度 (5 0 .0、10 0 .0μg/ml)的LPS对U937的增殖无促进作用 (P >0.0 5 ),但能提高VEGF的分泌能力 (P <0.0 1)。结论　LPS可激活U937并促使其分泌TGF β1,刺激浓度以 0 .1～ 10 .0 μg/ml为宜 ;LPS仅在较高浓度时能促进U937细胞分泌VEGF。     

α-平滑肌肌动蛋白N-末端肽对伤口收缩的影响

目的：探讨α－平滑肌肌动蛋白（α－smooth muscle actin, α－SMA）的特异性抗体－α－SMANH2＿末端序列Ac-EED多肽（α－SMA－AcEEED）对伤口收缩的影响。方法L（1）Wistar大鼠背部制作去全厚皮伤口，硬塑料框固定创缘。伤后8－10d，实验 同外用N末端含AcEEED的α－SMA融合(α－SMA-FP,1mg/ml），对照组1、2分别外用胶原凝胶（0.5mg/ml）、N末端含AcDEDE的α－SMA融合蛋白（α－SKA－FP,1mg/ml）。伤后10d，测量各组去掉外固定框1、6、24h时的伤口面积，以取框后伤口面积与伤口原面积的百分比表示伤口收缩率。（2）分离伤后9d肉芽组织中的成纤维，在可变形性硅胶培养皿中培养。观察α－SMA－FP（10μ g/ml）处理成纤维细胞前、后及洗去α－SMA－FP后收缩状态的改变。结果：（1）去除外固定框后1、6、24h时，对照组1、2伤口收缩率相比较差异均无显性意义（P＞0．05）；实验组收缩率与两对照组比较匀有显性意义（P＜0．05）。（2）用α－SMA－FP处理前，镜下可见成纤维细胞有众多粗大皱折。α－SMA－FP处理后5min皱折明显减少，变浅；30min后，皱折完全消失。去除α－SMA－FP后，皱折逐渐恢复。以胶原凝胶和α－SMA－FP处理该细胞无此现象。结论：提示α-SMA-AcEEED在体内可特异性地抑制肉芽组织收缩，在体外能可塑性地抑制成纤维细胞的收缩。     

NGF与雌激素对离体培养的人头皮毛囊影响的实验研究

目的　观察神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)、雌激素 (17β E2 )与米诺地尔对离体培养人头皮毛囊生长的影响。方法　建立离体人头皮毛囊培养模型 ,加入NGF、17β E2 和米诺地尔 ,通过目镜测微器测量毛囊长度 ,利用3H TdR掺入检测毛囊 2 4hDNA合成率。结果　NGF(10 0ng ml)与米诺地尔 (12 5 μg ml)对离体培养的人头皮毛囊的生长有促进作用 (P <0 0 5 ) ;而 17β E2 (0 5μg ml)则显示有抑制作用 (P <0 0 5 ) ;NGF与雌激素组毛囊的生长长度与阴性对照比则无明显变化(P >0 0 5 ) ;3H TdR掺入检测与长度检测结果完全一致。结论　NGF(10 0ng ml)与米诺地尔 (12 5 μg ml)对离体培养的人头皮毛囊的生长有促进作用 ,而 17β E2 (0 5ng ml)则显示有抑制作用 ,NGF(10 0μg ml)可干预 17β E2 (0 5 μg ml)抑制毛囊生长的影响。     

自身免疫性前列腺炎大鼠模型的建立

目的:使用前列腺蛋白提纯液建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。方法:选用36只Wistar大鼠,随机分为对照组、低浓度组和高浓度组,每组12只。对照组注射生理盐水,低浓度和高浓度组实验大鼠于0、14 d分别注射等剂量15 mg/ml及80 mg/ml浓度的前列腺蛋白提纯液,4周后处死大鼠,前列腺组织HE染色,取大鼠外周血检测血清炎症因子IL-8、IL-10,血清免疫球蛋白IgA、IgM,辅助性T细胞Th1/Th2等指标。结果:高浓度组有3只大鼠死亡,对照组与低浓度组均无死亡。前列腺大体观察对照组无明显变化,低浓度组大鼠前列腺体积增大,质地稍硬,高浓度组大鼠前列腺质地坚硬,与周围组织粘连。实验组病理切片显示前列腺组织腺体结构破坏,有炎性细胞浸润。大鼠血清IL-8指标低浓度组[(129.07±11.48)pg/ml]、高浓度组[(147.58±17.70)pg/ml]与对照组[(94.12±7.04)pg/ml]比明显升高(P0.05);大鼠血清IL-10指标低浓度组[(227.14±18.19)pg/ml]、高浓度组[(187.14±16.32)pg/ml]与对照组[(252.48±21.72)pg/ml]相比显著降低(P0.05)。大鼠血清IgA与对照组[(0.19±0.14)mg/ml]相比,低浓度组[(0.25±0.37)mg/ml]和高浓度组[(0.31±0.42)mg/ml]明显升高(P0.05);大鼠血清IgM指标低浓度组[(0.23±0.41)mg/ml]、高浓度组[(0.34±0.58)mg/ml]与对照组[(0.17±0.33)mg/ml]相比,显著升高(P0.05)。外周血辅助性T细胞Th1/Th2未见明显改变。结论:低、高浓度组大鼠造模均获成功。使用低浓度的前列腺蛋白提纯液造模的动物死亡率低,病理改变及血清炎症因子变化符合自身免疫性前列腺炎的表现,可作为制备自身免疫性前列腺炎的可靠模型浓度。     

阿片类镇痛药体外对精子运动的影响

目的:观察阿片类镇痛药体外对人精子运动功能的影响。方法:试验选取20例精子活力正常的精液标本,每例精液均一式19份,1份为对照,余分别与3种浓度下的6种不同阿片类镇痛药于37℃温箱孵育4 h,分别于15 min(t1)、2 h(t2)、4 h(t3)3个时间点用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力。结果:①1×10-5、2×10-3、0.05 mg/ml芬太尼作用的精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著降低(P<0.05);②1×10-5、2×10-3、0.05 mg/ml阿芬太尼作用的精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著降低(P<0.05);③1×10-5、2×10-3、0.05 mg/ml舒芬太尼作用的精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著降低(P<0.05);④1×10-5 mg/ml布托啡诺作用的精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均无显著变化(P>0.05),2×10-3、0.05 mg/ml布托啡诺3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著降低(P<0.05);⑤1×10-5 mg/ml地佐辛作用的精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均无显著变化(P>0.05),0.05、0.5 mg/ml地佐辛3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著降低(P<0.05);⑥3×10-5、0.05 mg/ml喷他佐辛处理精子,其3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均无显著变化(P>0.05),而0.5 mg/ml喷他佐辛3个时间点的(a+b)级精子百分率与对照组相比均显著增加(P<0.05);⑦0.05 mg/ml布托啡诺作用精子15 min可产生精子活力完全抑制(制动效应),以及2×10-3mg/ml布托啡诺作用精子2 h,0.05、0.5 mg/ml地佐辛作用精子2 h时均产生制动效应;而芬太尼、阿芬太尼、舒芬太尼在0.05 mg/ml作用精子并未发现此效应。⑧0.05 mg/ml舒芬太尼、布托啡诺、地佐辛、芬太尼、阿芬太尼作用精子15 min活力衰减程度:舒芬太尼、布托啡诺、地佐辛与阿芬太尼相比均有显著性的差异(P<0.05),芬太尼与阿芬太尼相比无显著性差别(P>0.05)。结论:不同阿片受体镇痛药在相同作用时间内,低浓度布托啡诺、地佐辛对精子运动无影响,高浓度呈现完全抑制精子活力,而相同低浓度芬太尼、阿芬太尼、舒芬太尼均显著抑制精子活力,所测相同浓度范围内仅部分抑制精子活力。与此相反,高浓度喷他佐辛可促进精子运动。     

去细胞异体神经和碱性成纤维细胞生长因子修复神经缺损

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对去细胞异体神经修复神经缺损的促进作用。　方法　根据bFGF因子用药浓度分为 10 0 0、5 0 0、2 5 0和 10 0U/ml与盐水对照组每组 5只日本大耳白兔。采用抗神经微丝免疫组化染色观察各组神经纤维再生的距离 ,抗S 10 0免疫组化染色观察许旺细胞的分布。研究不同浓度和剂量的外源性bFGF对去细胞支架移植后早期神经再生的影响。　结果　高浓度bFGF组 (10 0 0U/ml和 5 0 0U/ml)的神经再生距离在术后 10d明显大于盐水对照组 ,(P <0 0 1)。而低浓度bFGF组 (2 5 0U/ml和 10 0U/ml)与盐水对照组无明显差别 (P >0 0 5 )。　结论　去细胞异体神经移植后早期应用一定浓度和剂量的bFGF能明显提高再生轴突在支架内的生长速度。