硒化壳聚糖逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的:研究硒化壳聚糖对人慢性粒细胞白血病耐阿霉素细胞株( K562/ADM) mdr-1基因/P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响,为逆转肿瘤多药耐药提供新的途径.方法:硒化壳聚糖100,200 mg·L-1作用K562/ADM细胞24 h,应用RTPCR法和免疫印迹法检测mdr-1/P-gp表达的改变;应用高效液相色谱法检测细胞内阿霉素积聚浓度;应用MTT法检测阿霉素对K562/ADM细胞增殖的影响.结果:硒化壳聚糖可增强K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性,增加细胞内阿霉素集聚浓度,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用效果显著强于100 mg·L-1硒化壳聚糖(P＜0.01);硒化壳聚糖能明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp的表达(P＜0.01),100 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(40.87 -3.19)％和(35.08±0.09)％,200 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(78.24±3.42)％和(79.61±0.23)％.结论:硒化壳聚糖可明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp表达,增加细胞内阿霉素含量,恢复细胞对化疗药物敏感性,逆转mdr-1编码蛋白P-gp介导的多药耐药.     

白藜芦醇通过下调 mdr1/P - gp表达逆转 K562/ADM细胞凋亡抑制

目的：研究白藜芦醇对多药耐药K562/ADM细胞的诱导凋亡效应及其分子机制。方法：以白血病多药耐药细胞K562/ADM为白藜芦醇作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,形态学和DNA片段化观察细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;FCM测定P-gp蛋白表达水平;比色法测定Caspase-3活性。结果：白藜芦醇显著抑制K562/ADM细胞增殖,白藜芦醇诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化和DNA片段化等特征性改变。白藜芦醇下调K562/ADM细胞mdr1基因表达、抑制P-gp合成,并上调caspase-3基因表达、增强caspase-3活性。结论：白藜芦醇通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM多药耐药细胞的凋亡抑制。     

黄连解毒汤中黄酮成分逆转 K562/ADM多药耐药的实验观察

目的:观察黄连解毒汤中黄酮成分逆转肿瘤多药耐药的作用,探讨本方逆转肿瘤多药耐药的物质基础。方法:以人慢性粒细胞白血病红白血病细胞株K562的耐阿霉素(adriamycin,ADM)细胞株(K562/ADM)为细胞系,通过MTT实验观察黄芩苷、京尼平苷对K562/ADM细胞ADM的敏感性的影响,计算细胞增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50)及耐药逆转倍数,并对细胞内ADM浓度变化进行测定。结果:黄芩苷、京尼平苷均能部分逆转K562/ADM细胞。黄芩苷、京尼平苷的IC50值分别为5.06,6.74 mg.L-1。黄芩苷、京尼平苷的耐药逆转倍数分别为1.95,1.46倍。与相应的对照组相比,K562/ADM细胞经黄芩苷(50 mg.L-1)、京尼平苷(100 mg.L-1)作用后,细胞内ADM的荧光强度高于对照组,其中黄芩苷组提高到3.6%,京尼平苷组提高到1.7%。结论:黄连解毒汤逆转肿瘤多药耐药的物质基础可能与其含有的黄芩苷、京尼平苷有关。     

三七总皂甙体外逆转K562/VCR细胞多药耐药的实验研究

目的:从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂甙(PNS)对人白血病细胞K562(敏感细胞)及K562/VCR(耐药细胞)的影响.方法:以MTT法测定三七总皂甙注射液对K562及K562/VCR的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;用流式细胞仪测定PNS作用后敏感细胞和耐药细胞内阿霉素的浓度;以流式细胞仪测定敏感细胞和三七总皂甙作用的耐药细胞表达多药耐药糖蛋白P-gp(P-170)的阳性率.以上实验均用维拉帕米作为阳性对照.结果:①三七总皂甙在300μg/ml浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量.②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为28.7ng/ml和1141.8ng/ml,耐药倍数为39.7倍.③三七总皂甙能够增强阿霉素(DOX)对K562/VCR的细胞毒作用.④三七总皂甙能够增加耐药细胞K562/VCR细胞内的阿霉素的蓄积浓度.⑤三七总皂甙(200μg/ml)可下调多药耐药基因mdr-1表达的P-gp糖蛋白的量,而未发现维拉帕米的类似作用.结论:三七总皂甙能够部分逆转耐药细胞K562/VCR的多药耐药性.     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系

目的 研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3 K/Akt信号途径的关系.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变.结果 随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P＜0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用.结论 硒化壳聚糖可通过抑制PI-3 K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用.     

硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性

目的研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变。结果单独应用1μmol·L-1ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)%、(24.35±2.37)%和(26.37±2.39)。1μmol·L-1ST1571联合25~400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调NF-КB蛋白表达(P0.01)。结论硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的。     

复方三根制剂对MDR细胞株K562/ADR和K562/VCR逆转作用的研究

目的：研究复方中药——复方三根制剂对多药耐药(MDR)细胞株的逆转作用。方法：应用MTT比色法，观察复方三根制剂对MDR细胞的逆转作用。运用流式细胞仪(FCM)，测定其对耐药细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响，以及对耐药株细胞表达P=gp的影响。结果：复方三根制剂可部分恢复K562／ADR和K562／VCR耐药细胞对ADR的敏感性，而对VCR抗药性的逆转作用不明显；可增加K562／ADR和K562／VCR耐药细胞内ADR的积聚，并对外排ADR有一定影响；可部分下调p-gp的表达。结论：复方三根制剂可部分逆转耐药细胞的抗药性。     

半夏醇提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02的耐药性

目的:观察非细胞毒性浓度(抑制率≤5％)半夏醇提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法:将细胞悬液接种于72孔培养板中,细胞数为2 ×108个/L,半夏醇提取液(2.5,5,10,20,40μg·L-1)处理K562/A02细胞72 h后,采用MTT法测定半夏醇提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏醇提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白p170表达的变化与细胞内柔红霉素的浓度,应用SPSS 16.0软件包对实验结果进行统计学处理.结果:半夏醇提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为6.5 μg·L-1,非细胞毒性浓度半夏醇提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度( IC50),使K562/A02细胞的IC50由原来的(30.9±0.11) μg·L-1降低至(10.1±0.21) μg·L-1,其逆转倍数为3.06倍;半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,细胞膜糖蛋白p170的表达从91.21％下调至45.12％ (P ＜0.01);柔红霉素外渗试验显示,半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,可使细胞内化疗药物的浓度明显增加.结论:半夏醇提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,半夏醇提取液逆转白血病细胞耐药性是通过下调了白血病细胞膜糖蛋白p170的表达,使其将化疗药物泵出细胞外的功能受到了抑制,从而使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度,从而可以杀灭耐药的白血病细胞系.     

白花蛇舌草注射液逆转K562/ADM细胞多药耐药的作用和机制

目的:研究白花蛇舌草注射液能否逆转K562/ADM细胞多药耐药性,初步探讨白花蛇舌草注射液逆转多药耐药的机制.方法:四唑盐比色法(MTT法)检测药物对K562/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪分析细胞的凋亡和bcl-2的蛋白表达.结果:加入无毒剂量的白花蛇舌草注射液后ADM对K562/ADM细胞的IC50由41.50 μg/mL降至30.34 μg/mL,逆转倍数为1.37;加白花蛇舌草注射液后,K562/ADM细胞凋亡比例增加,bcl-2蛋白表达下降.结论:白花蛇舌草注射液在一定程度上逆转了K562/ADM细胞的多药耐药性,逆转耐药的机制可能是它下调了bcl-2的表达,促进细胞凋亡.     

益气养阴解毒方对K562/A02裸鼠移植瘤逆转作用研究

目的:研究益气养阴解毒方对K562/A02多药耐药移植瘤的逆转作用。方法:建立K562/A02裸鼠移植瘤多药耐药模型;选用维拉帕米作阳性对照,用流式细胞仪(FCM)检测各组移植瘤耐药细胞P糖蛋白(P-gp)与bcl-2的表达情况和移植瘤细胞内注射用盐酸多柔比星(ADM)蓄积浓度及移植瘤耐药细胞的凋亡情况。结果:移植瘤P-gp表达与维拉帕米组相比,生理盐水组与中药小剂量组有差异(P<0.05);bcl-2的表达与维拉帕米组相比,中药大剂量组有差异(P<0.05);益气养阴解毒方能使移植瘤耐药细胞内ADM的浓度升高。结论:益气养阴解毒方具有部份逆转白血病K562/A02移植瘤多药耐药性的作用,其逆转移植瘤裸鼠多药耐药性的机制不是通过下调肿瘤细胞膜上P-gp的表达实现的,而与降低bcl-2的表达、促进耐药细胞凋亡有关。     

P21、P53、PCNA在膀胱癌中的表达及意义

目的研究同一膀胱癌中癌基因蛋白产物和抗癌基因蛋白产物的表达与增殖活性的临床病理意义。方法应用免疫组织化学En-Vosion法检测5例正常膀胱组织和116例膀胱癌组织中PCNA、P21和P53蛋白的表达水平。结果5例正常膀胱组织中未发现P21、P53和PCNA的表达;116例膀胱癌组织中P21、P53和PCNA阳性检出率分别为62.1%,55.2%和58.6%。P53和PCNA均定位于肿瘤细胞核内,P21蛋白定位于细胞膜上。P21、P53和PCNA阳性表达与膀胱癌的病理分级、临床分期和患者术后生存率关系密切。结论检测P21、P53和PCNA有助于评估膀胱癌的预后。     

VEGF、PCNA、P21、P53在翼状胬肉中的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）、增殖细胞核抗原（PCNA）、P21蛋白和P53蛋白在翼状胬肉中表达的。方法免疫组化法检测50例进行期翼状胬肉标本（翼状胬肉组）和50例正常结膜标本（正常对照组）中VEGF、PCNA、P21蛋白、P53蛋白的染色强度及染色阳性率,以免疫组化评分（IHS）表示免疫组化表达的强弱。对结果进行比较及统计学分析。结果VEGFIHS数值：翼状胬肉组4．71±1．74,正常对照组1．91±0．71（P=0．001）。PCNAIHS数值：翼状胬肉组6．24±1．32,正常对照组2．11±0．83（P=0．001）。P53蛋白IHS数值：翼状胬肉组5．21±1．02,正常对照组2．01±0．63（P=0．001）。P21蛋白IHS数值：翼状胬肉组2．14＋0．72,正常对照组6．01±1．11（P=0．001）。结论VEGF、PCNA、P21蛋白和P53蛋白均在翼状胬肉中有异常表达,VEGF、PCNA和P53蛋白为高表达,P21为低表达。     

Absolute stereochemistry of gastric antisecretory compound P371A1 and its congener P371A2 from streptomyces species P371

Absolute configurations of the gastric antisecretory compound P371A1 (1) and its congener P371A2 (2) from Streptomyces sp. P371 were determined on the basis of identification of the methyl glycosides 9, 10, and 11 obtained by the acid degradation of 1 and 2, as well as application of the modified Mosher method to the P371A2 C-glycoside MTPA esters 7 and 8 and observation of the excitation chiralities in the P371A2 C-glycoside benzoate derivatives 5 and 6.     

Panax属西洋参,人参及三七的蛋白电泳指纹鉴别

目的:建立Panax属西洋参、人参及三七的蛋白电泳指纹鉴别法。方法:Western blot及Tris-tricine电泳辅助SDS-PAGE,并测定各区带分子量。结果:经标准化处理的Panax属蛋白电泳图分为三个特征指纹区,由28KD至58KD及其中55KD等2～3条多肽组成三种药材共有蛋白指纹区,对该属鉴别意义重大。28KD以下指纹区西洋参由4～5条区带组成,这是该品种独特的指纹图,58KD以上指纹区对人参鉴别有意义。结论:蛋白电泳指纹图可用于Pnax属药材,特别是西洋参的专属性鉴别。     

不同氮磷钾用量对黄花蒿产量的影响

目的探讨氮磷钾肥用量对黄花蒿产量的影响。方法采用4因素3水平正交试验方法进行田间试验。结果不同氮磷钾用量对黄花蒿产量的影响不显著。结论钾肥用量对叶蕾产量影响较大,适宜用量为每亩8kg;氮肥用量对种子产量影响较大,适宜用量为每亩12kg。     

解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织P16和P53表达的影响

目的:探究解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织中P16、P53表达的影响。方法:选取SD雌性未孕12周龄大鼠50只,随机分为正常组、模型组、方药组、三苯氧胺组、乳癖消组5组,每组各10只。药物治疗4周后检测各组大鼠乳腺组织P16和P53表达情况。结果:模型组较正常组比较,P16和P53呈现高表达,其差异有统计学意义;药物治疗后的3组大鼠P16和P53表达均减弱,其中方药组及三苯氧胺组比乳癖消组减弱明显,其结果有统计学意义(P0.01,P0.05);而方药组与三苯氧胺组差异无统计学意义(P0.05)。结论:解毒胶囊能够干预乳腺增生大鼠的乳腺组织P16和P53的表达情况,对乳腺增生大鼠有调节和治疗作用。     

Rapid semi-quantitative spot test for determination of thebaine and differentiation of Papaver bracteatum from P. orientale and P. pseudo-orientale.

The alkaloids, orientalidine, oripavine, thebaine, narceine, narceine, codeine, papaverine, isothebaine, alpenigenine and morphine react with a solution of sulfuric acid containing molybdate to give specific colors. Using the acid solution permitted the differentiation of Papaver bracteatum latex from P. orientale latex and P. pseudo-orientale latex.     

血清P53抗体与原发性肝癌P53基因治疗效果的相关性分析

目的观察原发性肝癌患者血清P53抗体与P53基因治疗效果的相关性,并探讨P53基因治疗后血清P53抗体与肿瘤标志物、肝功能水平、肝内肿瘤情况以及Child-Pugh评分的关系,为原发性肝癌的P53基因治疗提供合理的依据。方法 40例原发性肝癌患者均给予速溶表柔比星+今又生处理,分析行TACE半年后血清P53抗体水平与P53基因治疗效果以及具体指标的相关性。结果①术后半年的低Child-Pugh评分组、低水平肿瘤标志组、高肝功能组的血清P53抗体水平高于相对应组,且具有统计学差异(P<0.05或0.01);②不同肝内肿瘤个数的血清P53抗体水平比较无显著性差异,但小肿瘤组的血清P53抗体水平高于大肿瘤组(P<0.01);③血清P53抗体水平与AFP、CEA、AST/ALT、GGT/ALT呈显著负相关。结论采用P53基因治疗药物今又生治疗原发性肝癌效果显著,且血清P53抗体水平与治疗后的各项指标具有相关性,可进行治疗效果的评价和预测。     

连萸清降汤联合西药治疗反流性食管炎疗效及对P16、P53、PCNA表达的影响

目的观察连萸清降汤联合西药治疗反流性食管炎的疗效及对P16、P53、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法将80例反流性食管炎患者随机分为对照组与观察组,每组40例。对照组给予西药曲美布汀与奥美拉唑治疗,观察组在对照组治疗基础上给予连萸清降汤治疗,观察2组治疗效果、用药安全性及治疗前后P16、P53、PCNA表达情况。结果治疗2个疗程后,观察组治疗总有效率显著高于对照组(P0.05);观察组治疗1个月、2个月后P16、P53、PCNA阳性表达率及中医症状积分均显著低于对照组(P均0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论连萸清降汤联合西药治疗反流性食管炎患者,可提高临床疗效,改善中医症状,抑制P16、P53、PCNA表达,且安全。     

Comparative hepatoprotective activity of three Phyllanthus species,P. urinaria,P. niruri and P. simplex,on carbon tetrachloride induced liver injury in the rat

The effect of alcohol extracts of three Phyllanthus species was compared on carbon tetrachloride-induced (chronic) hepatic damage in rats. Alcohol extracts of P. niruri, P. urinaria and P. simplex were administered orally at three different doses. Statistically significant reversal of the elevated serum levels of transaminases (GOT and GPT) were used as the biochemical indices for hepatoprotection. The results of the study indicated that only the extracts of P. niruri and P. urinaria afforded protection of liver in the chronic model. The hepatoprotective activity of P. urinaria is about 60% in comparison with P. niruri. Therefore, P. urinaria may be considered as a good substitute for P. niruri in cases of liver disorders in actual practice.