肾炎康血清干预嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤研究

目的:探讨复方肾炎康对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用。方法:原代培养大鼠足细胞,随机分为正常组,对照组,肾炎康低、中、高剂量组,厄贝沙坦组除正常组外,其余各组分别予以嘌呤霉素氨基核苷,正常组加正常大鼠血清,肾炎康低、中、高剂量组分别加肾炎康低、中、高剂量,厄贝沙坦组加厄贝沙坦,均干预48h。用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,实时定量PCR方法检测P53、Caspase 3 m RNA,western印迹检测细胞中P53、Caspase 3蛋白变化。结果:嘌呤霉素氨基核苷作用下的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3m RNA及蛋白表达均显著高于正常组(P0.05,P0.01),药物干预的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3 m RNA及蛋白表达均显著低于对照组(P0.05,P0.01),肾炎康高剂量组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3 m RNA及蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:中药复方肾炎康能抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡,其机制可能与抑制P53、Caspase 3表达有关。     

越婢汤和固精方对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠肾小球足细胞损伤的影响

目的探讨发汗解表法(越婢汤)与补肾固精法(固精方)治疗肾病综合征的疗效及可能机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组,每组10只。除正常组外其余各组大鼠采用单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷9 mg/100 g建立肾小球足细胞损伤大鼠模型。造模后第2天开始越婢汤组每天灌胃给予含生药越婢汤2.1 g/100 g,固精方组每天给予含生药固精方7.5 g/100 g,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,连续2周。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯,尿蛋白定量和尿肌酐,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达,观察肾小球病理改变及足细胞超微结构。结果与正常组比较,模型组大鼠尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯上升,血清白蛋白水平降低,尿蛋白肌酐比增加,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,越婢汤及固精方组血清尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、尿蛋白肌酐比下降,白蛋白上升,肾组织TRPC5、TRPC6 mRNA亦降低(P<0.05)。越婢汤组血清白蛋白、尿酸水平、肾组织TRPC5 mRNA表达低于固精方组,而TRPC6 mRNA高于固精方组(P<0.05)。结论越婢汤、固精方可能通过调控肾组织TRPC5及TRPC6表达,减轻足细胞损伤,从而改善肾病综合征的低蛋白、高血脂表现。     

雷至胶囊对嘌呤霉素氨基核苷肾病的减毒增效作用

目的:探讨雷至胶囊(雷公藤多苷10 mg.kg-1+女贞子、墨旱莲4 g.kg-1)在治疗嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病的减毒增效作用。方法:80只雄性大鼠随机分为8组:空白组、模型组、雷至胶囊高、低剂量组、雷公藤多苷高、低剂量组、雷公藤甲素组和缬沙坦组,每组10只。颈静脉注射PAN 100 mg.kg-1建立PAN肾病模型。空白组颈静脉注射等量生理盐水。其余各治疗组造模后第2天开始每日分别ig给药,持续10 d。第11天,处死大鼠,摘取肝肾,用于光镜、免疫荧光及透射电镜检测。结果:一般情况:模型鼠第5天尿量减少、腹水,而浮肿不明显,体重下降。第7～10天腹水明显,24 h尿蛋白增加,死亡率30%(3/10)。病理改变:模型鼠肾小管上皮细胞变性,电镜下,可见足细胞足突融合、消失,而空白组足细胞结构正常。各药物治疗组24 h尿蛋白、血生化、血红蛋白均有不同程度改善,各治疗组血尿素氮轻度升高(P<0.05)。雷至胶囊及雷公藤多苷10 mg.kg-1组降蛋白尿、改善贫血、降低AST疗效优于其余各组,电镜下,雷至胶囊高剂量组足突融合减轻,足突明显恢复。结论:雷至胶囊可能通过降低PAN肾病大鼠蛋白尿、改善贫血、降低AST、减轻足细胞足突融合及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增效作用。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度。方法:应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P0.01)和益气组(P0.05),而3组之间无显著差异(P0.05),益气组与对照组也无显著差异(P0.05)。含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P0.05),且4组之间无明显差别(P0.05)。(2)Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P0.05),且4组间差异不明显(P0.05)。各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P=0.0080.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响

目的观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响。探讨不同类中药治疗肾病的作用强度。方法应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组血清对小鼠足细胞表达Podocalyxin、Podocin的影响。结果益气化瘀清热方及其拆方均能影响造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,其对Podocalyxin及Podocin表达的作用强度不同。结论益气化瘀清热方及其拆方可能通过提高造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达而发挥治疗作用。     

黄芪总苷对阿霉素诱导损伤足细胞的保护作用

目的:探讨黄芪总苷保护阿霉素(ADR)诱导损伤足细胞的分子作用机制。方法:采用0.5μmol/L的ADR处理小鼠足细胞系(MPC5)条件永生型小鼠足细胞系24小时,建立足细胞损伤模型;以50、100、200μg/mL3个浓度的黄芪总苷分别处理ADR损伤足细胞24小时后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测MMP2及MMP9表达水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组凋亡相关蛋白表达水平及MT1、Nephrin蛋白质表达水平。结果:ELISA结果显示,基质金属蛋白酶(MMPs)表达水平受ADR抑制,各浓度黄芪总苷可改善该异常表达;蛋白质印迹实验结果显示,ADR可上调促凋亡相关蛋白表达水平,下调MT1、Nephrin及凋亡抑制相关蛋白的表达水平,各浓度黄芪总苷可显著改善各蛋白质的异常表达。结论:黄芪总苷对ADR损伤的MPC5足细胞具有保护作用,这可能与黄芪总苷可以下调ADR损伤足细胞Bax、P53蛋白表达水平并上调MMP-2、MMP-9、MT1及Nephr i n等蛋白表达水平有关。     

石斛合剂含药血清对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的：探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法：体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、模型组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、石斛合剂含药血清组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%石斛合剂含药血清),铁死亡抑制剂(Fer-1)组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L^-1 Fer-1)。采用试剂盒检测细胞中Fe²⁺、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、过氧化脂质(LPO)含量;荧光探针检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1)、结蛋白(Desmin)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) m RNA表达水平...     

柴苓汤可增强环孢菌素A对给予氨基核苷嘌呤霉素大鼠肾脏的保护作用

柴苓汤临床用于治疗肾病综合征及肾小球肾炎,本次对柴苓汤能否增强环孢菌素A(CyA)治疗肾病的疗效进行了探讨。 材料和方法:选用SD系雄性大鼠,单次静脉给予氨基核苷嘌呤霉素(PAN)100mg/kg制作肾病模型,对照组给予生理盐水。造模1d后即开始经口给予柴苓汤(1.0g/kg),造模6d后口服CyA(10、20、40mg/kg)。根据造模后6、11、15d尿蛋白排泄量及造模后15d血中总胆固醇、甘油三酯和白蛋白水平判断肾脏病变程度。     

黄芪总苷对阿霉素诱导的足细胞损伤的保护作用

目的:探讨黄芪总苷对阿霉素(ADR)诱导损伤足细胞的结构和功能的影响。方法:采用0.5μmol/L的阿霉素处理MPC5条件永生型小鼠足细胞系24h,以建立足细胞的损伤模型;以50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的3个浓度的黄芪总苷分别处理阿霉素损伤足细胞24h后,检测LDH、MDA及SOD生成水平或活力,以反映细胞损伤情况及氧化应激水平;MTT法检测足细胞的存活率;transwell法检测MPC5足细胞迁移能力,同时采用荧光染色法观察细胞骨架排布。结果:与空白对照组相比,足细胞损伤模型组足细胞存活率较对照组显著下降,与模型组比较,各浓度黄芪总苷均能上调阿霉素导致的损伤足细胞的存活率;同时,阿霉素可显著促进MPC5足细胞内LDH及MDA的生成量并且降低SOD活性,各浓度黄芪总苷均能抑制由阿霉素导致的MPC5足细胞内LDH及MDA的生成并增加SOD活性;细胞迁移实验结果显示,阿霉素可显著抑制MPC5足细胞的迁移能力,各浓度黄芪总苷均能改善由阿霉素导致的迁移能力下降;激光共聚焦显微镜观察结果显示,阿霉素破坏了细胞骨架完整性,50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml黄芪总苷干预均可抑制由阿霉素导致的足细胞骨架重排及破坏,100μg/ml、200μg/ml黄芪总苷干预的足细胞保持了较好的细胞骨架完整性。结论:黄芪总苷可维持处于阿霉素培养环境内足细胞内氧化应激环境的平衡、改善迁移能力、抑制细胞骨架重排与破坏及抑制细胞凋亡。因此,黄芪总苷对阿霉素损伤的MPC5足细胞具有保护作用。     

当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用。方法 用含有高、中、低剂量的当归芍药散的药物血清以及厄贝沙坦含药血清对高糖诱导的足细胞损伤进行干预,观察足细胞的凋亡及其活性,并运用免疫荧光对各组Nephrin与Podocin蛋白表达进行检测,运用Western blot对自噬相关蛋白进行检测。结果 和对照组(Normal)相比高糖组(HG)的足细胞存活率、细胞凋亡情况、免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达、Western blot中LC3Ⅱ与Beclin-1的蛋白表达明显降低(P<0.01);和HG组相比当归芍药散含药血清高(HG+DS-H)、中剂量(HG+DS-M)组,足细胞在厄贝沙坦含药血清组的干预下存活率显著增加,足细胞凋亡率降低,免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达均显著增加,Western blot中LC3Ⅱ的蛋白表达与Beclin-1的蛋白表达也都显著增加(P<0.01)。结论 当归芍药散可以调节高糖诱导足细胞的损伤,但具体机制有待进一步明确。     

黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的影响及作用机制。方法实验分为5组:对照组足细胞采用5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养,模型组足细胞采用30 mmol/L葡萄糖培养液培养,黄芪汤30μg/mL组、黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组分别采用30 mmol/L葡萄糖培养液和相应浓度黄芪汤进行培养。细胞培养48 h后,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测各组细胞标记蛋白podocin表达情况,采用Western blot检测各组细胞内质网应激通路蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、真核起始因子2α(eIF2α)]及其介导的凋亡相关蛋白[增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)]表达情况。结果模型组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组细胞存活率均明显高于模型组(P均<0.05),细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),且呈浓度依赖性。模型组podocin表达荧光强度明显弱于对照组,黄芪汤各组随着药物浓度升高podocin表达荧光强度明显增强。模型组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且黄芪汤各组随药物浓度的升高GRP78、p-PERK、p-eIF2α表达水平均逐渐降低(P均<0.05)。模型组Bcl-2表达水平明显低于对照组(P<0.05);黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组Bcl-2表达水平均明显高于模型组(P均<0.05);黄芪汤100μg/mL组与黄芪汤300μg/mL组Bcl-2和CHOP表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论黄芪汤可呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞损伤,其作用可能与抑制PERK介导的内质网应激途径有关。     

肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素肾病大鼠足细胞损伤的机制研究

目的:探讨中药复方肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素(PAN)肾病大鼠足细胞损伤的机制。方法:采用单次颈静脉注射法建立PAN肾病大鼠足细胞损伤模型。将60只SD大鼠随机分为A组(对照组),B组(模型组)、C组(肾苏Ⅳ低剂量组)、D组(肾苏Ⅳ中剂量组)及E组(肾苏Ⅳ高剂量组),每组12只。治疗第1、2、3、4、6周末检测大鼠24h尿蛋白定量(24hUpro)及血清白蛋白(ALB)水平;第1、6周末分别处死6只大鼠留取肾脏组织,检测肾小球足细胞Nephrin、CD2AP的表达变化;电镜观察肾小球足细胞超微结构的改变。结果:第6周末,C、D、E组24hUpro水平均低于B组,P0.05;C、D、E组ALB水平均高于B组,P0.05。第6周末,C、D、E组Nephrin、CD2AP表达均高于B组,P0.05。C、D、E组大鼠肾小球基底膜增厚及足突融合程度较B组均明显减轻。结论:肾苏Ⅳ可降低PAN肾病大鼠24hUpro,提高ALB水平,促进足细胞骨架结构的损伤修复,阻抑足细胞损伤。     

熊果酸对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的:通过复制糖尿病肾病大鼠模型,探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:SPF级大鼠采用链脲霉素(streptozocin,STZ)及高糖高脂饲料联合复制糖尿病肾病大鼠模型,实验分为正常组,模型组,阳性药组(厄贝沙坦,15 mg·kg-1),UA高剂量组(UA-H,60 mg·kg-1)和UA低剂量组(UA-L,30 mg·kg-1);观察大鼠血糖、尿蛋白量、肾指数的变化,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法和过碘酸-希夫(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏病理变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾脏中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,试剂盒检测肾脏组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)和podocin蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠的血糖,24 h尿蛋白量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α含量,肾脏组织中MDA含量,肾指数均显著增加,体质量,肾脏组织SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白表达量均显著降低(P0.01);与模型组比较,UA明显降低血糖值和尿蛋白量,肾指数,肾脏MDA含量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α水平,能够升高模型组大鼠体质量,肾脏SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白的表达(P0.05,P0.01),逆转糖尿病所致大鼠肾小球病变。结论:UA可通过保护肾脏足细胞作用及调节裂孔膜蛋白CD2AP和podocin表达而抑制高血糖对肾脏的病理损害、降低尿蛋白和保护肾功能。     

益智仁含药血清对脂多糖诱导小鼠小胶质细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨益智仁含药血清对脂多糖(LPS)诱导小鼠小胶质细胞(BV2)炎症损伤的影响及作用机制.方法 取健康雌性SD大鼠20只,随机分为对照组和益智仁低、中、高剂量组,每组5只.益智仁低、中、高剂量组分别灌胃5 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)、20 g/(kg·d)益智仁药粉,对照组灌胃等体积生理盐水,连续7...     

肾炎防衰液对硫酸苯酯诱导小鼠肾足细胞损伤及自噬作用机制研究

[目的] 观察肾炎防衰液对硫酸苯酯（PS）诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨其对足细胞损伤及自噬的干预作用。[方法] 选取SD大鼠,分别灌胃肾炎防衰液及缬沙坦水溶液,制备低、中、高浓度含药血清及西药对照血清。体外培养足细胞,分为空白对照组（Con）组、PS刺激（PS）组、肾炎防衰液低、中、高浓度治疗组（SYFS-L、SYFS-M、SYFS-H）、缬沙坦（XST）组。细胞活力检测（CCK-8）法筛选最合适的PS干预浓度及含药血清给药浓度,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹（Western Blot）检测Podocin、CD2AP、BNIP3、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ mRNA和蛋白表达。[结果] CCK-8法检测细胞增殖率确定了190 μmol/L浓度的PS处理足细胞24 h作为本实验的造模方法。与Con组比较,PS组CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白及mRNA表达显著下调,p62蛋白及mRNA表达显著上调;与PS组比较,肾炎防衰液给药组可明显上调CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3 mRNA和蛋白的表达,降低p62的表达,且优于缬沙坦组。[结论] PS可能通过抑制足细胞线粒体自噬造成足细胞损伤,而肾炎防衰液通过上调LC3、BNIP3,下调p62蛋白表达,增强细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善足细胞损伤。     

西红花对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:优化构建抗抑郁研究的细胞实验模型,探讨西红花对皮质酮(CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法:观察不同浓度(0、125、250、500、750、1 000μmol/L)皮质酮损伤PC12细胞24 h、36 h、48 h,CCK-8检测细胞活力,优化构建抑郁体外模型;不同浓度(2. 5、5、10μg/m L)西红花预处理PC12细胞24 h,CCK-8检测细胞活力,观察西红花对CORT(500μmol/L)细胞损伤后的保护作用;检测细胞培养上清中的LDH活性,判断药物对细胞膜的保护作用;使用Annexin V-FITC/PI双染色法检测药物对CORT诱导的PC12细胞凋亡的保护作用;检测细胞裂解液中Caspase-3活性,判断药物作用与Caspase蛋白通路相关性。结果:CORT(0～1 000μmol/L)作用PC12细胞,细胞存活率随药物浓度的增加而逐渐降低,依剂量呈线性关系;当西红花浓度 100μg/m L时,对PC12细胞存活的影响出现统计学意义;西红花预处理后,细胞存活率由模型组(53. 31±4. 18)%,上升为(57. 46±2. 76)%、(60. 48±2. 73)%、(61. 99±3. 05)%、(61. 38±2. 26)%、(59. 46±2. 41)%、(58. 64±3. 74)%;西红花预处理组LDH释放量显著低于模型组(P 0. 05);西红花能够明显抑制CORT诱导的PC12细胞凋亡,西红花可抑制Caspase-3的表达。结论:西红花对CORT诱导的PC12细胞有一定保护作用。     

从自噬机制探讨加味黄芪赤风汤含药血清对阿霉素诱导的肾小球足细胞损伤的保护作用

目的研究加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞自噬及足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及desmin表达的影响。方法采用体外培养小鼠肾小球足细胞、以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的方法制作足细胞损伤模型。随机分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组)。采用Western blot法检测各组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、desmin和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平,透射电镜下观察各组足细胞自噬超微结构变化。结果 (1)与空白组比较,模型组nephrin、podocin表达明显下降(P0.01),desmin表达明显升高(P0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin表达明显升高(P均0.01),desmin表达明显下降(P均0.01),中药低剂量组无明显改善(P0.05)。(2)模型组较空白组自噬小体数量明显增多,体积增大,细胞器减少;中药高、中剂量组及替米沙坦组较模型组自噬超微结构均有不同程度改善,而中药低剂量组无明显改变。(3)与空白组比较,模型组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上升(P0.01);与模型组比较,中药高、中剂量及替米沙坦组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显下降(P0.01),中药低剂量组无明显下降(P0.05)。结论加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,调节足细胞自噬活性可能是其足细胞保护作用的内在机制之一。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇(RSV)对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组:对照组为5 mmol/L低糖培养液(LG);模型组为30 mmol/L高糖培养液(HG);RSV干预组:HG+5μmol/L RSV;HG+10μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基(ROS)生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

中医药对足细胞损伤的干预作用研究进展

足细胞附着于肾小球基膜（GBM）外侧,是维持肾小球滤过膜结构和功能正常的主要细胞之一。足细胞被认为是各种原发或继发性肾小球痰病进展的关键细胞,足细胞的减少和丢失已成为反映肾小球损伤严重程度和肾硬化进展的重要指标,多种情况导致的足细胞损伤反应在慢性肾小球痰病发病机制中的作用受到关注,而中医药对足细胞作用的研究取得进展。