锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量影响

目的 探讨锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量的影响.方法 建成HepG2细胞、3T3-L1细胞和L6成肌细胞胰岛素抵抗模型后,用10^-7mol/L胰岛素和不同浓度锌(0、20、50、100、200、400 μmol/L)孵育细胞,通过MTT法和葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下3种胰岛素抵抗细胞葡萄糖的消耗量.结果 不同剂量的锌孵育3种细胞3 h后,200、400 μmol/L的锌可明显抑制各组细胞的活力(P< 0.05);50~100 μmol/L的锌干预3 h能在不同程度上提高HepG2、3T3-L1正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量,但其作用效果明显低于胰岛素;其中100 μmol/L的锌与胰岛素共同作用的效果分别优于胰岛素或锌单独作用的效果(P< 0.05);对于L6肌细胞,20、50和100 μmol/L锌均能明显提高基础状态下正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量(P< 0.05);仅有20 μmol/L锌和胰岛素共同作用的效果优于胰岛素或锌单独作用的效果(P< 0.05).结论 不同浓度的锌可以在一定程度上提高3种胰岛素抵抗的靶细胞葡萄糖摄取量,且不同的细胞具有不同的适宜作用剂量.     

糖原合酶激酶-3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠Wnt和核因子-κB信号通路的影响

目的 探讨糖原合成酶激酶 – 3β（GSK-3β）对糖尿病肾病（DKD）大鼠肾组织中骨保护素（OPG）相关通路的调控作用及意义。 方法 将大鼠随机分为对照组、模型组和氯化锂干预组。考马斯亮蓝法检测大鼠24h尿蛋白;肾脏组织切片进行苏木素 – 伊红染色,观察大鼠肾脏病理改变;RT-qPCR及免疫组化检测各组大鼠肾组织中 β-catenin和OPG的mRNA及蛋白表达。 结果 与对照组比较,模型组大鼠血糖水平[（22.63 ± 2.08）mmol/L]及24h蛋白尿[（154.17 ± 20.65）g]明显升高, 肾组织病理变化明显;与模型组比较,氯化锂干预组大鼠血糖水平[（17.98 ± 1.09）mmol/L]及24h蛋白尿[（107.2 ± 31.15）g]明显降低,大鼠肾组织病理改变减轻;与对照组比较,模型组、氯化锂干预组大鼠肾细胞胞浆内 β-catenin表达量[分别为（2.2 ± 0.31）、（2.0 ± 0.20）]明显升高（P < 0.05）;与对照组比较,模型组大鼠肾组织中OPG/RANKL mRNA表达量（0.6 ± 0.06）降低;与模型组比较,氯化锂干预组大鼠肾组织中OPG/RANKL mRNA表达量（1.6 ± 0.12）明显升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 氯化锂可减轻大鼠糖尿病肾病改变,缓解糖尿病肾病进程,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路,升高OPG表达有关。     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

亮氨酸对原代培养大鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取及蛋白激酶B表达的影响

目的以原代培养的大鼠骨骼肌细胞为研究对象,观察亮氨酸对骨骼肌细胞及渥曼青霉素(wortmannin)处理后葡萄糖摄取能力及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(AKT)表达的影响,从而为探讨亮氨酸与胰岛素抵抗的关系和相关机制提供依据。方法组织块法培养大鼠原代骨骼肌细胞,不同浓度的亮氨酸(0,0.4,2.0,4.0,8.0mmol/L)作用80min或45min,酶法测定基础状态下和胰岛素刺激下葡萄糖摄取能力,确定亮氨酸作用的最佳浓度和作用时间;在此基础上,应用PI-3K抑制剂wortmannin作用30min,测定葡萄糖摄取能力,Western blot检测AKT及磷酸化AKT表达水平。结果胰岛素刺激状态下,2mmol/L亮氨酸作用45min骨骼肌细胞葡萄糖摄取能力达最大;2mmol/L亮氨酸干预可改善wortmannin对胰岛素刺激下骨骼肌细胞葡萄糖摄取的抑制作用,显著增强胰岛素信号传导关键分子pSer473 AKT的表达。结论亮氨酸可改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗。这种作用不完全依赖于PI-3K胰岛素信号传导通路,并且可能与其增强AKT磷酸化水平有关。     

饮食控制对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中糖原合成酶激酶-3表达的影响

目的 观察饮食控制对高脂高糖饮食诱导的胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌中糖原合成酶激酶-3（GSK-3）表达的影响。方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常组、胰岛素抵抗组和饮食治疗组，每组10只。正常组以常规饲料喂养，胰岛素抵抗组和饮食治疗组均以高糖高脂饲料喂养，4周后饮食治疗组大鼠改以常规饲料喂养，持续6周。采用Western blotting法检测各组大鼠骨骼肌中GSK-3的表达，于实验第1、5和11周分别检测其体质量、血甘油三脂和胆固醇、空腹血糖和胰岛素水平，并计算胰岛素敏感指数。结果 胰岛素抵抗组大鼠骨骼肌GSK-3的表达量较正常组增高70％（P〈0．01），饮食控制6周后饮食治疗组大鼠骨骼肌中GSK．3的表达量较胰岛素抵抗组减少23％（P〈0．01），较正常组增高31％（P〈0．05）。而饮食治疗组的胰岛素敏感指数与胰岛素抵抗组相比明显上升（P〈0．05）。结论 饮食控制可降低胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞GSK-3表达水平，从而加强葡萄糖的摄取和利用，改善胰岛素抵抗。     

葡萄糖酸锌和氯化锰对二氧化硅致CHL细胞间隙连接通讯功能下调的影响

目的观察葡萄糖酸锌(ZnG)、氯化锰(MnCl2)及其联合作用对二氧化硅(SiO2)致中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)间隙连接通讯(GJIC)功能下调的影响,并寻找两者的最佳剂量组合。方法常规培养CHL细胞,按实验分组:生理盐水对照组(阴性对照组);SiO2组(100 mg/L);ZnG组(2.25 mg/L);MnCl2组(1.00 mg/L);SiO2 ZnG组(培养液除含100 mg/L SiO2外,分别含1.00,1.50,2.25 mg/L ZnG);SiO2 MnCl2组(培养液除含100 mg/L SiO2外,分别含0.25,0.50,1.00 mg/L MnCl2);ZnG和MnCl2联合作用组(每组除含SiO2100 mg/L外,采用两因素三水平正交设计,ZnG MnCl2共设9个浓度组)。培养6 h后通过划痕染料示踪技术(SLDT)观察成纤维细胞通讯连接功能。结果与SiO2组比较,ZnG和MnCl2在一定的浓度下可以减轻SiO2对中国仓鼠肺成纤维细胞通讯连接功能抑制作用(P<0.05);ZnG(1.50 mg/L)与MnCl2(0.50 mg/L)联合作用效果最好。结论ZnG,MnCl2及二者联合在体外可减轻SiO2粉尘对中国仓鼠肺成纤维细胞通讯连接功能的抑制作用。     

CD151基因对血管内皮细胞表面整合素α3β1／α6β1表达的影响

目的研究重组腺相关病毒介导的CD151基因转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对整合素α3β1／α6β1表达的影响。方法包装携带CD151、CD151-QRD和CD151-ARSA的重组腺相关病毒,转染HUVECs细胞,用Western Blot和流式细胞仪检测HUVECs细胞CD151及整合素a3131／a6131的表达。结果CD-51组及其各突变体组的CD151表达均明显高于对照组（P〈0．01）,但3组间互相比较CD151蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Western Blot及流式细胞仪检测显示CDl51组α3、α6及β1的表达明显高于对照组、CD151-QRD组和CD151-ARSA组（P〈0．05）,其余各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD151基因转染能促进整合素α3β1／α6β1的蛋白表达,其机制可能与CD151胞外大环QRD194-196。“及C末端囊泡运输基序YRSL”。。。有关。     

PI3K抑制剂对肝星状细胞PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂(PI103)对肝星状细胞(HSC)PI3K/AKT通路及Ⅲ型胶原表达的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将液氮保存下的HSC株,于37℃,5%CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空白对照组、CCl4组、CCl4+PI3K抑制剂组。QPCR方法检测PI3K、AKT信号分子mRNA水平的变化;免疫细胞化学方法测定HSC的PI3K、AKT信号分子和Ⅲ型胶原表达情况。结果 CCl4组和空白对照组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均增多,Ⅲ型胶原生成增多,差异有统计学意义(P0.05)。CCl4组和CCl4+PI103组比较,PI3K、AKT信号分子mRNA水平和蛋白表达均减少,III型胶原生成减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PI3K抑制剂可降低PI3K、AKT信号分子及Ⅲ型胶原的表达,进而阻断肝纤维化进程。     

叶酸和维生素B12对宫内生长受限大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的 探讨母鼠哺乳期补充叶酸和维生素B12对宫内生长受限(IUGR)仔鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶的蛋白激酶B(PI3K/AKT)胰岛素信号通路中关键分子磷脂酰肌醇3激酶( PI3K)表达的影响,并分析PI3K分子表达的改变与胰岛素抵抗的关系。方法 1)采用孕中晚期低蛋白及限制饮食的方法建立IUGR大鼠模型,将新生IUGR仔鼠随机分为IUGR干预组和IUGR未干预组,其中IUGR干预组的哺乳期母鼠饲以高叶酸和维生素B12的饲料(叶酸和维生素B12含量比普通饲料提高4倍),IUGR未干预组和对照组的哺乳期母鼠饲以正常标准饲料。三组仔鼠均于生后21 d断奶,饲以正常标准饲料至生后120 d。2)测定对照组、IUGR未干预组及IUGR干预组(每组各8只,雌雄各半)在生后21、60 d及120 d空腹血浆血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(IRI)。3)在生后21、60 d和120 d分别留取3组仔鼠的骨骼肌组织,采用Real-Time PCR和Western Blotting法检测三组仔鼠骨骼肌组织中PI3K mRNA和蛋白表达情况。结果 1)低蛋白组仔鼠平均出生体重[(4.44±0.58)g]低于对照组[(7.03±0.56) g],差异有统计学意义(t=15.75,P<0.05),低蛋白组仔鼠中IUGR发生率为93.3%。2)生后21 d,三组仔鼠FPG、FINS和IRI差异均无统计学意义(P>0.05);生后60 d和120 d,IUGR干预组仔鼠的FPG、FINS和IRI均显著低于IUGR未干预组,但均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。3)生后21 d、60 d和120 d,三组仔鼠PI3K mRNA和蛋白表达水平均在对照组最高,IUGR干预组次之,IUGR未干预组最低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。4)生后60 d和120 d,IUGR未干预和干预组仔鼠IRI与PI3K蛋白表达均呈负相关(P值均<0.05)。结论 母鼠哺乳期补充叶酸和维生素B12,影响了IUGR仔鼠骨骼肌PI3K/AKT胰岛素信号通路中关键分子PI3K的蛋白表达,且这些变化与胰岛素抵抗密切相关。     

不同n-3/n-6多不饱和脂肪酸构成比膳食对大鼠一磷酸腺苷活化蛋白激酶表达的影响

目的研究不同n-3/n-6配比脂肪酸对大鼠磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)蛋白及活性表达的影响。方法58只SD大鼠适应性喂养7d后,尾静脉取血。根据血清总胆固醇水平随机分为:空白(基础饲料);高脂(高脂饲料);高脂1:1(高脂饲料+n-3/n-6=1:1配方油);高脂1:5(高脂饲料+n3/n6=1:5配方油);低脂1:1(脱脂基础饲料+n-3/n-6=1:1配方油);低脂1:5(脱脂基础饲料+n3/n6=1:5配方油)6组,喂养45d,观察大鼠摄食与体重增长。于实验前1d,15d,30d,45d分别各取血测血清总胆固醇水平,于D45处死动物。Western blotting分别分析肝和下丘脑组织中AMPK-α总蛋白及其活性表达。结果添加PUFA的4个比例组血清TC、体重与高脂组相比,显著降低,且低脂2个比例组和高脂1:1组均与高脂1:5组相比有显著差异。添加PUFA的4个比例组均与高脂组相比,大鼠下丘脑AMPK-α总蛋白表达水平明显降低,肝AMPK-α蛋白表达水平均比高脂组明显升高。结论PUFA改善血脂可能是通过增加肝AMPK表达,抑制下丘脑AMPK表达,增加肝脂肪酸氧化和抑制食欲,影响血脂代谢。     

OX40L对变应性鼻炎大鼠PI3K/Akt信号通路及T细胞亚群的影响

目的 观察OX40L对变应性鼻炎（AR）大鼠PI3K/Akt信号通路相关蛋白及T细胞亚群的影响。方法将40只SPF级SD大鼠随机分为4组,各10只,各组采用既定方式造模,造模完成后对照组和模型组给予生理盐水鼻黏膜内注射干预,抗OX40L组给予抗OX40L单克隆抗体鼻黏膜内注射干预,OX40L-Ig组给予OX40L-Ig融合蛋白鼻黏膜内注射干预。造模完成后测定各组大鼠外周血OX40L表达,干预结束后观察PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达,检测T细胞亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞数量。结果 模型组、抗OX40L组和OX40L-Ig组造模后未干预大鼠OX40L表达水平明显高于对照组（P<0.01）。模型组、抗OX40L组和OX40L-Ig组均可见杯状细胞化生、炎性细胞浸润、水肿、血管扩张等表现。对照组、抗OX40L组大鼠鼻黏膜组织p-PI3K、p-Akt表达明显低于模型组（P<0.05）,抗OX40L组上述指标水平低于OX40L-Ig组（P<0.05）,OX40L-Ig组上述指标水平高于模型组（P<0.05）。模型组血清Th1、Treg含量明显低于对照组...     

妊娠期糖尿病患者血清细胞外囊泡来源的miR-122激活IKKβ/NF-κB信号通路导致妊娠大鼠胰岛素抵抗的机制分析

目的 分析妊娠期糖尿病(GDM)患者血清细胞外囊泡(Evs)来源的microRNA-122(miR-122)激活核因子-κB激酶抑制剂(IKKβ)/核因子-κB(NF-κB)信号通路导致妊娠大鼠胰岛素抵抗的机制。方法 选取18只妊娠大鼠,分为正常组、对照组及Evs注射组,每组6只。对照组尾静脉注射无菌滤过PBS 1 ml, Evs注射组给予总量为1 ml无菌滤过PBS稀释的Evs,正常组不干预。检测空腹血糖和空腹胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。在第20天终止妊娠,测量母鼠和胎鼠的发育指标。比较各组大鼠C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)RNA水平。体外使用Evs和RNA拮抗剂(Evs+拮抗剂组)对大鼠肝脏细胞进行干预,检测CRP、TNF-α、IL-6蛋白表达水平及IKKβ/NF-κB通路激活情况。筛查血清Evs中可能差异表达的microRNA,分析其与IKKβ/NF-κB通路激活和妊娠大鼠胰岛素抵抗的关系。结果 注射Evs后,妊娠大鼠空腹血糖水平和HOMA-IR明显上升,母鼠和胎鼠质量增加,肝脏组织CRP、TNF-α及I...     

生活方式干预对妊娠糖尿病产后糖调节受损者胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响

目的 研究生活方式干预对妊娠糖尿病(GDM)患者产后糖调节受损者(IGR)胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能状态的影响.方法 对2009年1-12月在宁波大学医学院附属医院及宁波妇女儿童医院产科分娩的GDM患者于产后6～8周行75 g口服葡萄糖耐量试验(OGTT),将筛选为糖耐量减低(IGT)或空腹血糖调节受损(IFG)的女性分为干预组(59例)和对照组(67例).对干预组进行2年的生活方式干预和密切随访,对照组仅发放健康宣传资料,观察其体质指数(BMI)、胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的变化.结果 与对照组比较,干预组BMI、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)下降,差异均有统计学意义( P＜0.05,P＜0.01);胰岛β细胞功能指数和早期相胰岛素分泌指数升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 对GDM产后葡萄糖调节受损者进行生活方式干预和积极随访可明显改善胰岛β细胞分泌功能及胰岛素抵抗,恢复早期分泌相,提高胰岛素敏感性.     

不同比例n-6/n-3多不饱和脂肪酸对小鼠良性前列腺增生和炎性细胞因子的影响

目的比较不同比例n-6/n-3PUFAs对小鼠良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和免疫功能的影响。方法采用油菜花粉二氧化碳超临界萃取物调节小鼠饲料中n-6/n-3PUFAs的比值。小鼠随机分为正常对照组(A组)、前列腺增生模型组(B组)、n-6/n-3PUFAs=1.7组(C组)、n-6/n-3PUFAs=5组(D组)、n-6/n-3PUFAs=10组(E组)和非那雄胺治疗组(F组)共6组。测定炎性细胞因子、双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)含量及增生的形态学变化。结果 C组和D组可显著降低前列腺增生指数(P0.01),降低前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PACP)的活性(P0.01),生长状况明显好于模型组;实验组均能降低促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,D组降幅最明显。前列腺组织切片观察D组增生减退明显,腺腔内仅有少量淡红色分泌物。C组显著降低血清中DHT含量(P0.01)。结论油菜花粉萃取物调节饲料n-6/n-3PUFAs的比值可以明显降低BPH临床症状及病理学指标,n-6/n-3PUFAs=5时具有最显著的效果,其可能的作用机制与抑制炎症发生有关。     

硒、锌对Aβ_(25-35)诱发胚鼠神经元细胞损伤和神经毒性的影响

目的研究硒、锌对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导胚鼠神经元细胞神经毒性的保护作用。方法将胚鼠神经元细胞用10mol/L Aβ_(25-35)处理,建立体外老年痴呆模型。采用细胞形态学方法、噻唑蓝比色法(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)检测法、微量丙二醛(MDA)检测法、过氧化氢(H_2O_2)含量检测法、一氧化氮(NO)含量检测法、蛋白印迹法检测糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷酸化Tau蛋白(ph-Tau)水平。结果 Aβ_(25-35)损伤组与对照组比较MTT代谢率下降,LDH释放量增多,MDA含量增高,H_2O_2含量增高,NO含量增高,GSK-3β、ph-Tau水平增高,硒、锌和硒锌联合处理组均不同程度地减少Aβ_(25-35)的细胞毒性,硒保护作用差异显著。结论微量元素硒、锌对Aβ_(25-35)处理胚鼠神经元细胞损伤和毒性具有一定的保护作用,硒比锌的保护效果好。     

n-6/n-3脂肪酸配方油对大鼠血脂和脂质过氧化的影响

目的研究不同脂肪酸n-6/n-3组成的配方油对大鼠血脂和脂质过氧化的影响.方法成年SD雄性大鼠喂饲含相同胆固醇(0.5%,W/W)、饱和脂肪酸(占供给能量10%)、单不饱和脂肪酸(占供给能量13%)和多不饱和脂肪酸(占供给能量12%),但不同脂肪酸n-6/n-3比(6.48、2.07、0.93、031)的4种配方油的高脂合成饲料60天,观察大鼠血脂及脂质过氧化的变化.结果4种配方油比猪油均显著降低血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、LDL-C/HDL-C、AI[(TC-HDL-C/HDL-C,致动脉粥样硬化指数)],升高HDL-C/TC;配方油D具有独特的升高血清HDL-C2的作用;配方油A、C、D显著降低血清TG,而配方油B作用不明显.以n-3多不饱和脂肪酸占优势的配方油C、D比以n-6多不饱和脂肪酸占优势的配方油A、B显著地升高血清丙二醛,降低血清超氧化物歧化酶、全血谷胱甘肽过氧化物酶活性.4组配方油大鼠的心、脑脂褐质含量均比实验前增高,各配方油间无显著差异;心、脑脂褐质与血脂的相关分析发现心、脑脂褐质与血清TC、LDL-C呈正相关,与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)关系不明显.结论从预防动脉粥样硬化的角度,脂肪酸n-6/n-3比在2.07～6.48范围内是合理的脂肪酸供给模式.     

锰对大鼠生精细胞半胱氨酰天冬氨酸酶-3和细胞色素C表达的影响

目的研究锰对大鼠生精细胞中半胱氨酰天冬氨酸酶-3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome-c)表达的影响。方法将健康雄性清洁级SD大鼠48只随机分为高(30mg/kg)、低剂量(15mg/kg)MnCl2染毒组和空白对照组(生理盐水),每组16只。采用腹腔注射方式染毒,每天1次,每周5天,连续染毒6周。分别于染毒第4、6周末称重,处死大鼠,分离睾丸,采用免疫组化法检测睾丸生精细胞中caspase-3与cytochrome-c的阳性细胞率。并进行病理学观察。结果与空白对照组比较,高、低剂量MnCl2染毒组大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且随着锰染毒剂量的升高,大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率呈上升趋势,cytochrome-c阳性细胞率呈下降趋势。与染锰第4周比较,高、低剂量MnCl2染毒组第6周大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。直线相关分析发现,各组大鼠生精细胞caspase-3阳性细胞率与cytoc...     

3β-羟类固醇脱氢酶对邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯处理细胞后诱导型一氧化氮合酶和蛋白激酶C信号通路的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)对MCF-7细胞中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路相关基因及蛋白表达的影响以及3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)基因在此过程中的作用。方法 用浓度为0.00~0.40 mmol/L的DEHP分别染毒MCF-7细胞、3β-HSD沉默细胞和3β-HSD高表达细胞24 h,检测细胞中iNOS/PKC相关基因表达水平的变化;应用信号通路抑制剂处理后再进行DEHP染毒,荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞中iNOS/PKC相关基因和凋亡基因表达水平的变化。结果 DEHP染毒MCF-7细胞,iNOS、PKCα在基因和蛋白表达水平均高于对照组;与同一染毒剂量的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平降低;而3β-HSD高表达细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平升高。应用iNOS 抑制剂(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)50 μmol/L处理后,DEHP染毒组iNOS、Bax、Caspase-3、Caspase-8表达下调;PKCα抑制剂(chelerythrine chloride,CHE) 0.20 μmol/L处理后,DEHP染毒组PKCα表达下调;而各抑制剂处理组中与对照组比较无明显降低的基因,其变化趋势与未加抑制剂处理的染毒组无显著差异。结论 DEHP引起的毒性作用可能与iNOS/PKC信号通路有关,3β-HSD对iNOS/PKC信号通路相关基因的表达有一定作用。     

不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca2+信号通路的影响

目的 探讨不同浓度二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法 采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h,设立BSA对照组。MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca2+浓度。结果 IL-6表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中200、400μmol/L效果最为...