靶向survivin的shRNA对人胆管癌QBC939细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌QBC939细胞体外增殖及凋亡的影响。方法:合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA(shRNA)的双链寡核苷酸并构建pSilence2.1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果:neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。RT-PCR及Western blot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达,抑制率分别为66.2%和61.8%。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆形成率明显减低(P<0.01)。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNA ladder、透射电镜观察及流式细胞术定量研究显示转染细胞凋亡比明显增多。结论:靶向sur-vivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长。     

尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化.方法:应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白表达的影响.结果:尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖,高浓度(200μmol/L)尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡.流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加.免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白的表达明显减弱.结论:尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与PCNA,Survivin蛋白的表达下调有关.     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响

目的：观察选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化。方法：应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白表达的影响。结果：尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖，高浓度（200μmol／L）尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖，而且诱导其凋亡。流式细胞仪研究显示，随药物浓度增加，细胞凋亡率显著增加。免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白的表达明显减弱。结论：尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与PCNA，Survivin蛋白的表达下调有关。     

紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究

目的：探讨紫杉醇对胆管癌QBC939细胞作用的敏感性并研究紫杉醇对胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,并初步探讨紫杉醇诱导胆管癌细胞发生凋亡的机制,为胆管癌的临床治疗寻找新的治疗药物。方法：体外培养胆管癌细胞QBC939,采用不同浓度紫杉醇予以干预,通过细胞形态观察和Mrrr实验,初步研究紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939的敏感性;应用流式细胞仪检测紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡,同时对细胞周期的变化和动力学予以检测。结果：各浓度紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939生长均有明显抑制作用;胆管癌细胞被紫杉醇明显阻滞在S期及G2／M期,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应。结论：紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应;紫杉醇能诱导人胆管癌QBC939细胞发生凋亡。     

KIF14在肝内胆管癌中的表达及对胆管癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨KIF14在ICC中的表达情况及对胆管癌细胞生物学行为的影响。方法:通过qRT-PCR法检测ICC组织和癌旁组织中KIF14的mRNA表达水平;通过免疫组织化学染色方法检测ICC组织和癌旁组织中的KIF14的蛋白表达情况,并分析KIF14的表达与临床病理特征之间的关系;利用siRNA技术抑制QBC939细胞中KIF14的表达,并检测抑制效果;利用Western blotting实验检测抑制QBC939细胞内KIF14的表达对AKT信号通路的影响;分别利用MTT实验、Transwell实验检测抑制KIF14表达对胆管癌QBC939细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:qRT-PCR结果提示ICC组织中KIF14的mRNA表达水平明显高于癌旁组织;免疫组织化学染色结果提示ICC组织中KIF14表达水平高于癌旁组织,KIF14的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关;siRNA技术能有效抑制QBC939细胞中KIF14的mRNA表达和AKT磷酸化水平,MTT实验和Transwell实验表明抑制KIF14的表达可抑制QBC939细胞的增殖能力和侵袭能力。结论:KIF14在ICC组织中高表达,其高表达与不良临床病理特征相关;KIF14可通过AKT信号通路促进胆管癌细胞的增殖和侵袭。     

维拉帕米联合化疗对胆管癌QBC939细胞株的抑制作用

目的 探讨维拉帕米(VER)联合化疗药物对胆管癌细胞株增生的抑制作用及其机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测VER、多柔比星(ADM)、丝裂霉素(MMC)、长春地辛(VDS)及VER分别联合ADM、MMC、VDS对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响.流式细胞术(FCM)观察上述各组细胞生长周期及凋亡率的变化.免疫组织化学检测胆管癌细胞株QBC939细胞多药耐药P糖蛋白(P-gp)的表达.通过FCM观察胆管癌细胞株QBC939细胞内ADM的变化.结果 ADM、MMC、VDS对胆管癌细胞株QBC939的抑制率分别为48.84%、44.19%、45.76%,VER分别联合ADM、MMC、VDS对胆管癌细胞株QBC939的抑制率分别显著提高至64.37%、52.68%、65.90%.凋亡率也由11.37%、7.25%、9.04%提高为20.66%、14.18%、21.91%.细胞周期分布显示,加用VER对ADM和MMC组各个周期影响不明显,而VDS组阻滞于G2/M期的细胞明显增多.胆管癌细胞株QBC939细胞P-gp的表达率为38.00%.与ADM单独作用相比,联合VER后细胞内ADM的含量有一定增加.结论 VER可增加化疗药对胆管癌QBC939细胞株的抑制作用,增强胆管癌细胞对化疗药物的敏感性.     

紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究

目的:探讨紫杉醇对胆管癌QBC939细胞作用的敏感性并研究紫杉醇对胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,并初步探讨紫杉醇诱导胆管癌细胞发生凋亡的机制,为胆管癌的临床治疗寻找新的治疗药物.方法:体外培养胆管癌细胞QBC939,采用不同浓度紫杉醇予以干预,通过细胞形态观察和MTT实验,初步研究紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939的敏感性;应用流式细胞仪检测紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡,同时对细胞周期的变化和动力学予以检测.结果:各浓度紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939生长均有明显抑制作用;胆管癌细胞被紫杉醇明显阻滞在S期及G2/M期,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应.结论:紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应;紫杉醇能诱导人胆管癌QBC939细胞发生凋亡.     

PTEN基因转染联合奥沙利对胆管癌细胞生长的影响

目的: 〖HT5"SS〗观察脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（LOHP）对胆管癌细胞生长的影响,探索人类胆管癌的生物治疗方法。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗将携带PTEN基因的真核表达载体pBPPTEN和不含该基因的空载体转染胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养,SP免疫组化法检测转染前后PTEN阳性表达率。实验分组为QBC939、QBC+LOHP、PTENQBC和PTEN+LOHP 4组,以MTT法检测癌细胞生长活性,透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化,流式细胞仪分析转染前后细胞周期变化和凋亡情况,体外细胞侵袭力抑制试验观察转染及用药前后细胞侵袭力的变化。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达、PTEN阳性表达率升高(P<0.05);基因转染后肿瘤细胞活性下降(P<0.05);细胞周期G1～S期抑制、细胞凋亡率增加(P<0.01);透射电镜下显示细胞较成熟、分化好、线粒体增多;细胞侵袭力明显抑制(P<0.05),其中以PTEN+LOHP抑制作用最强,LOHP抑制作用次之。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗PTEN基因转染生物治疗联合奥沙利铂化疗对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用。     

circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制

目的：探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法：收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平。体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系。结果：胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织（3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05）,而miR-4429的表达量低于癌旁组织（0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05）。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞...     

去甲斑蝥素对人类胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡作用的实验研究

 【摘要】　目的　研究去甲斑蝥素（NCTD）对人类胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的QBC939细胞系,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）,流式细胞术及免疫组织化学SP法进行检测。结果　0.125、0.75、2.5、10、120 μg／ml NCTD作用48 h,对QBC939细胞系均有抑制作用（P＜0.05）,且具有浓度依赖性,绘制浓度效应曲线,得出半数抑制浓度（IC50）为（3.66±1.14）μg／ml;在分别作用12、24、36、48、72 h后,生存率有随时间增加而下降的趋势（P＜0.05）。流式细胞术结果表明,随着NCTD浓度的增加,凋亡率逐渐增高,各浓度组分别为（8.6±0.4）%、（17.6±0.3）%、（22.9±0.4）%、（25.5±0.9）%、（31.1±1.5）%（P＜0.001）;质量浓度为2.5 μg／ml的NCTD作用QBC939细胞48 h后,出现G2／M期阻滞现象,NCTD与对照组分别为（14.1±1.0）%和（5.7±0.3）%（P＜0.05）。不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后,与对照组相比Caspase-3蛋白表达均增加。结论　NCTD具有抑制人类胆管癌细胞系QBC939增殖的作用,这种作用可能与诱导细胞凋亡,干扰细胞生长周期有关。     

GRK6在胆管癌组织中的表达及对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:检测GRK6在胆管癌组织及相应癌旁正常胆管上皮组织内的表达情况,并探究抑制GRK6的表达对胆管癌细胞克隆增殖及侵袭的影响.方法:通过qRT-PCR及免疫组织化学染色检测GRK6在胆管癌及癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与不同临床病理因素之间的关系.通过RNA干扰技术抑制QBC939细胞中GRK6的表达,检测si...