CpG基序的免疫效果和作用机理

不同于脊椎动的DNA,细胞DNA含有高得多的非甲基化CpG二核苷酸,具体说是称为“CpG基序”的碱基成分。脊椎动物的免疫系统看来可能有一种进化的将“CpG基序”视为外源物质的识别分子,能源发机体产物强烈偏向Th1型的保护性免疫应答。这些应答可以用合成的寡脱氧核糖核苷酸（ODN）来模拟,实验表明,ODN在疫苗佐剂和肿瘤及变态反应的免疫治疗方面有很大的应用潜力。     

CpG DNA,一种用于流感病毒系统和粘膜免疫的新型免疫增强剂[英]

细菌DNA中普遍存在的CpG基元,为一种非甲基化CpG双核苷酸特殊碱基序列,可促进B细胞增殖、免疫球蛋白分泌和Th1样细胞因子分泌。含CpG基元的合成寡脱氧核苷酸（ODN）也可刺激免疫应答,提示能用作疫苗增强剂。作者以合成ODN或细菌DNA作为灭活流感病毒的佐剂,肌肉或粘膜途径接种小鼠,研究其免疫增强作用。     

CpG DNA佐剂研究进展

CpG DNA是含有非甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸,通过Toll样受体9(TLR9)激活树突状细胞(DC)和B细胞产生免疫应答.CpG DNA可以促进专职抗原呈递细胞有效地呈递抗原,从而增强疫苗的特异性免疫应答.目前使用CpG DNA佐剂的疫苗免疫后能维持长期免疫,具有明显的全身和黏膜免疫效果.临床前和临床试验表明,CpGDNA佐剂安全有效,能够提高传染病和肿瘤疫苗的效能,增强疫苗的免疫原性.     

CpG基序增强DNA疫苗免疫原性研究进展

DNA疫苗广泛用于细菌、病毒性疾病以及肿瘤等的预防和治疗研究，但已报道的临床实验研究表明并未取得良好的免疫效果。未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide，ODN)具有较强的免疫佐剂特性。近年来有不少学者作了关于CpG—ODN增强DNA疫苗免疫原性的研究，本文就有关研究进展作一综述。     

新型免疫佐剂CpG DNA的性能和初步应用

脊椎动物DNA中的碱基甲基化程度高,而细菌DNA的甲基化程度低,且非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸序列结构(CpG)频率高.近年发现含CpG结构的细菌DNA或人工合成寡核苷酸,能够活化哺乳动物与人的B细胞,巨噬细胞(Mφ)和自然杀伤(NK)细胞,增强其功能和细胞因子的分泌,促进Th1型应答.初步研究显示其促进肿瘤抗原疫苗免疫应答的效能相当于弗氏完全性剂而无毒性,具有免疫性剂(特别是DNA疫苗佐剂)的应用前景.     

CpG基序的寡脱氧核苷酸对人轮状病毒乳鼠腹泻模型的保护作用

目的:探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)干预对人轮状病毒(human rotavirus,HRV)感染乳鼠的保护作用机制。方法:64只ICR乳鼠随母鼠按窝随机均分为4组:正常对照组、HRV感染组、CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组。观察各组乳鼠的治疗反应和排毒情况;免疫组化法检测小肠组织Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、IFN-γ的表达。结果:HRV感染组乳鼠的腹泻天数、排毒时间及重型腹泻发病率均高于CpG ODN预处理组和CpGODN治疗组(P<0.05);CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组TLR9、IFN-γ表达水平明显高于正常对照组和HRV感染组(P<0.01),并且两者存在正相关(P<0.05)。结论:CpG ODN预处理和治疗都能提高HRV感染乳鼠小肠组织TLR9、IFN-γ的表达,对HRV感染乳鼠有保护作用。     

CpG基序增强DNA疫苗免疫原性研究进展

DNA疫苗广泛用于细菌、病毒性疾病以及肿瘤等的预防和治疗研究,但已报道的临床实验研究表明并未取得良好的免疫效果.未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)具有较强的免疫佐剂特性.近年来有不少学者作了关于CpG-ODN增强DNA疫苗免疫原性的研究,本文就有关研究进展作一综述.     

新型疫苗佐剂——细菌CpG寡核苷酸

佐剂的优化与研制,直接关系到新型疫苗的发展,开发新型疫苗佐剂是免疫策略的重要内容.含有细菌CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN),因其具有免疫激活作用,可作为新型疫苗佐剂,以提高疫苗的免疫效应.本文就CpG ODN免疫佐剂作用机制以及相关研究进展进行了综述.       

CpG DNA可作为粘膜佐剂

细菌 DNA因含有非甲基化胞嘧啶 -鸟嘌呤双核苷酸 (Cp G)基序而具有直接的免疫刺激作用。合成寡脱氧核苷酸 (ODN)带有 1个或数个这样的基序 ,因此亦具有免疫刺激性。为此作者对 Cp G ODN作为粘膜免疫佐剂的可能性进行了研究作者以 HBs Ag为抗原 ,以霍乱毒素(CT)和 Cp G ODN为佐剂 ,肌肉注射或经鼻腔吸入免疫雌性 BALB/c小鼠 ,在免疫后的不同时间取血浆测定抗 - HBs滴度 ,同时收集粪便和肺洗液测定局部和远端粘膜 Ig A抗体水平 ,并采用51 Cr释放法测定小鼠细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL)应答。　　结果发现 ,当以大剂量 (1 0μg) C…     

新型疫苗佐剂——细菌CpG寡核苷酸

佐剂的优化与研制，直接关系到新型疫苗的发展，开发新型疫苗佐剂是免疫策略的重要内容。含有细菌CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)，因其具有免疫激活作用，可作为新型疫苗佐剂，以提高疫苗的免疫效应。本文就CpG ODN免疫佐剂作用机制以及相关研究进展进行了综述。     

含非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷寡脱氧核苷酸在非小细胞肺癌治疗中的应用进展

非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷(CpG)寡脱氧核苷酸(ODN)属于Toll样受体9(TLR9)激动剂,其功能主要通过TLR9信号系统来体现。根据构效关系,共鉴别出K型、D型、C型和P型4个类别的CpG ODN,分别对B细胞和浆细胞样树状突细胞产生不同刺激作用。无论单独应用CpG ODN,抑或联合化疗、放疗,还是联合靶向药物或疫苗,对非小细胞肺癌的治疗均有一定的增效作用。该文也简述了CpG ODN的安全性。     

反复注射含CpG基序的合成寡脱氧核苷酸可长期预防细菌感染

以往研究表明 ,含未甲基化 Cp G基序的合成寡脱氧核苷酸 (ODN)可以诱导天然免疫应答 ,产生多重活性的 Ig M和免疫调节细胞因子。小鼠单次注射表达 Cp G基序的ODN后可免受单核细胞增多性李斯特菌(Lm)和土拉弗氏菌感染 ,保护时间为两周。本研究发现反复注射 Cp G ODN可延长对小鼠的保护作用。　　实验选用的 Cp G ODN序列为 GCTA-GACGTTAGCGT和 TCAACGTTGA,而对照 ODN除 Cp G核心部分转换为 Gp C外 ,其余序列相同。实验小鼠为 6～ 8周龄无特定病原体雄性 BALB/c小鼠 ,腹腔注射 5 0 μgCp G ODN和 /或 1 0 3半数致死…     

CpG ODN纳米粒增强免疫抑制小鼠对重组乙肝疫苗的免疫应答

目的：探讨CpG ODN壳聚糖纳米粒联合重组乙肝疫苗对免疫抑制小鼠的免疫增强作用。方法：选月环磷酰胺建立免疫抑制模型小鼠。将乙肝疫苗单独或和CpG ODN或CpG ODN纳米粒经后腿胫骨前肌注射到小鼠体内，ELISA方法检测抗HBsAg IgG抗体、IL-12水平；流式细胞仪检测外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群。结果：CpG ODN纳米粒联合疫苗组的CD4^＋细胞百分数，IL-12水平及抗HBsAg IgG抗体的含量显著高于CpG ODN联合疫苗组（P〈0．05）。结论：包裹在壳聚糖纳米粒中的CpG ODN较相同剂量的CpG ODN更能增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答。     

应用包裹在纳米粒中的CpG脱氧寡核苷酸增强对乙肝疫苗的免疫应答

目的：探讨应用包裹在壳聚糖纳米粒中的胞嘧啶-鸟嘌呤的脱氧寡核苷酸（CpG ODN）增强小鼠对乙肝疫苗的免疫应答。方法：采用复凝聚方法制备CpG ODN壳聚糖纳米粒。乙肝疫苗单用或联合CpG ODN免疫小鼠，用ELISA法检测抗HBs水平，流式细胞仪检测外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群，MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果：CpGODN联合乙肝疫苗组抗HBs水平较单用乙肝疫苗组明显升高，且以CpG ODN壳聚糖纳米粒联合组产生的抗HBs水平最高；T淋巴细胞亚群分析显示，CpG ODN纳米粒联合组的CD4^＋T淋巴细胞百分比和CD4^＋／CD8^＋比值明显高于单用乙肝疫苗组；CpG ODN纳米粒联合组的脾淋巴细胞刺激指数明显高于其他组。结论：CpG ODN壳聚糖纳米粒联合乙肝疫苗不仅能诱导出高水平的抗HBs，且对细胞免疫也有调节作用。     

CpG DNA的免疫活性及应用前景

CpG DNA是一类具有免疫刺激活性的DNA序列,包括原核生物基因组DNA和人工合成的含有非甲基化CpG基序的寡核苷酸链.随着对CpG DNA的结构、功能以及作用机理的深入研究,其在预防和治疗肿瘤、变应性疾病、感染性疾病等方面的应用潜力引起了人们越来越广泛的兴趣.本文就CpG DNA的免疫活性及其应用研究进展作一综述.     

Structure-efficacy relationships of immunostimulatory activity of CpG-containing oligodeoxynucleotides on mouse spleen cells

Aim： To study the relationship between primary structures of oligodeoxynucleotides （ODN） containing unmethylated deoxycytidyl-deoxyguanosine （CpG） dinucleotide motifs and their immunostimulatory activities in mouse spleen cells. Methods： A series of CpG ODN with different primary structures were synthesized. Their capabilities to stimulate mouse spleen cell proliferation were determined by [^3H]thymidine incorporation assay. Cytokine （interleukin [IL]-6, IL-12, and IFN-α） secretion spectra induced by CpG ODN were assessed by ELISA. The ability of CpG ODN to activate natural killer cells was evaluated by standard 4 h ^51Cr-release assay. Flow cytometry was utilized to examine the expressions of various lymphocyte surface molecules on diverse immunocytes. An effective CpG ODN for murine, ODN1826, was set as the template of modification and the positive control. Results： The immunostimulatory activities of CpG ODN with different sequences and compositions varied markedly, both in character and in extent. It was useless for improving the immunostimulatory activity of ODN1826 by simply increasing the functional hexameric CpG motif number, modifying the site of CpG motifs, or changing the distance between multi-CpG motifs. However, an addition of a self- complementary palindrome structure at the 3＇-end, but not the 5＇-end of CpG ODN, aroused marked improvement in its activity. Several designed ODN had superior comprehensive immunostimulatory properties compared to ODN1826. Conclusion： The immunostimulatory activity of a CpG ODN was relevant to its primary structure. It was useless for promoting immunostimulatory activity to simply change CpG motif number, space, or distance. The 3＇-end palindrome structure of CpG ODN is associated with enhanced immunostimulatory activity.     

聚L精氨酸协同CpG-ODN增强和延长免疫应答并防止CpG-ODN诱导的促炎细胞因子的释放

含 Cp G基序的寡脱氧核苷酸 ( Cp G-ODN)可激活抗原提呈细胞并诱导 Th1型免疫应答 ,因此被用作佐剂 ,但 Cp G- ODN可能产生副作用 ,例如全身性大量促炎细胞因子产生。作者利用聚 L精氨酸 ( p R)分子带正电荷 ,而 Cp G- ODN分子带负电荷的特性 ,将基于 p R的肽疫苗与 Cp G- ODN联合制成 p R/Cp G- ODN肽疫苗 ,两种相反电荷的分子能支持其静电作用 ,并能影响其免疫调节活性。研究证实这种疫苗安全有效 ,可诱导长期且强烈的肽特异性 T细胞应答。　　雌性 C57B1 /6和 DBA/2小鼠后爪垫接种 1 0 0 μl下列制剂 :( 1 )肽 ;( 2 )肽…     

抗人TLR9抗体对CpG寡核苷酸介导的人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的：观察细胞膜上的TLR9在CpG寡核苷酸（ODN）激活的信号转导通路中的作用。方法：采用抗TLR9抗体阻断人外周血单个核细胞（hPBMCs）表面的TLR9，观察细胞膜表面的TLR9是否与CpG ODN的内化和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的释放直接相关。结果：虽然CpG ODN和GpC ODN都能被细胞吞噬，但只有CpG ODN能够引起TNF—α释放；氯喹作为内体成熟抑制剂，在抑制这两种寡核苷酸降解的过程中无显著性差别；当使用抗人TLR9抗体阻断细胞膜表面的TLR9，对CpG ODN的内化、CpG ODN诱导的TNF-α释放以及氯喹对CpG ODN诱导hPBMCs释放TNF-α的抑制作用均没有显著影响。结论：细胞膜上的TLR9对CpG ODN的内化和hPB—MCs释放TNF-α没有直接影响。     

含CpG基序的合成ODN的佐剂作用将b型流感杆菌结合疫苗转变为有效的抗多糖和抗载体多价疫苗

已经证实含有未甲基化 Cp G二核苷酸的细菌性 DNA——合成的寡脱氧核苷酸( ODN)能够激活 B细胞、NK细胞以及抗原提呈细胞。当将这种免疫刺激序列 ( ISS)与蛋白质或者肽一起接种实验动物时 ,ISS可作为蛋白佐剂引起 I型免疫应答。作者对 ISS依赖性抗 b型流感杆菌 ( Hib)疫苗载体蛋白抗体的增高是否与保护功能相关进行了讨论。　　将 2 .5μg多糖 ( CHO) -破伤风类毒素( TT)或 CHO-白喉类毒素 ( DT,CRM)单独皮内注射 ,或者与 50μg ISS或不含 ISS的ODN( M- ODN)一起接种雌性 Balb/c或CD1小鼠。 CHO- TT接种 2剂 ,而 CH…