丹参成分抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖及胶原表达的研究

目的 研究丹参成分丹参酮ⅡA、丹参素、丹参多酚酸盐、原儿茶醛对系统性硬皮病（SSc）成纤维细胞增殖和I型、Ⅲ型前胶原mRNA合成的影响程度。方法 培养来自SSc患者及正常对照皮肤的或纤维细胞各5株四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定丹参酮ⅡA、丹参素、丹参多酚酸盐、原儿茶醛对成纤维细胞增殖的影响,逆转录-聚合酶链反应测定硬皮病组和正常对照组以及各药物对硬皮病组的成纤维细胞I型和Ⅲ型前胶原mRNA合成的影响。结果 丹参酮ⅡA、丹参素、丹参多酚酸盐和原儿茶醛都对硬皮病成纤维细胞的增殖具有抑制作用（均P〈0．01）,丹参酮ⅡA作用最强。4种成分都对成纤维细胞I型和Ⅲ型胶原mRNA基因表达具有抑制作用（均P〈0．01）,丹参酮ⅡA最强,可以使I型前胶原mRNA减少47％,Ⅲ型前胶原mRNA减少45％。结论 4种丹参成分中丹参酮ⅡA对系统性硬皮病成纤维细胞增殖和I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达抑制作用最强,具有较强的抗纤维化作用。     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

六种常用抗癌中药对肝癌细胞株BEL-7402的作用

目的:研究六种抗癌中药对肝癌细胞株BEL7402增殖的抑制作用。方法:将6种临床上常用的抗肝癌中药通过水煎醇沉法制成中药制剂后,采用不同浓度直接加入培养液的给药方式,以MTT法测定肝癌细胞株BEL7402的增殖情况。结果:白花蛇舌草(75mg/mL、100mg/mL)、半枝莲(100mg/mL)具有显著抑制细胞增殖作用,且二者随着浓度的增大对细胞增殖的抑制作用逐渐增强,呈明显的量效关系;丹皮在25mg/mL时明显促进细胞增殖,而在100mg/mL时则有显著抑制作用;赤芍、生地、白芍对细胞增殖无抑制作用。结论:白花蛇舌草、半枝莲、丹皮具有较强的抑制肝癌细胞株BEL7402增殖的作用。     

尿道瘢痕成纤维细胞培养及药物对其生长的影响

目的　探讨丹参和川芎嗪对尿道瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法　建立尿道瘢痕成纤维细胞的体外培养 ,并以此为模型研究丹参和川芎嗪对其生长的影响及其作用机理。结果　 1丹参和川芎嗪能使尿道瘢痕成纤维细胞形态发生明显改变 ,细胞由梭形变为椭圆形。 2丹参和川芎嗪均可抑制尿道瘢痕成纤维细胞的增殖 ,当抑制率为 5 0 %时 ,药物浓度分别为 2 .5 mg/ m l和 75μg/ ml。其机制与药物抑制细胞分裂密切相关 ,而并非是使细胞产生坏死和降解。结论　丹参和川芎嗪可望成为有效的瘢痕抑制剂 ,在尿道瘢痕狭窄的治疗中发挥作用     

川芎嗪对成纤维细胞及TGF-β/Smads信号传导的影响

目的研究川芎嗪对成纤维细胞和TGF-β信号传导通路的影响,探讨其抗纤维化作用的机理。方法以NIH3T3成纤维细胞为模型,通过H3-thymidine DNA掺入量测定川芎嗪对成纤维细胞生长和增殖的影响;通过Ⅰ型胶原的免疫荧光染色实验,观察川芎嗪对成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响;并利用Mv1Lu-(CAGA)12-Luc稳定细胞系,探讨川芎嗪对TGF-β/Smads信号传导通路的影响。结果川芎嗪可抑制成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。无病理因子刺激的情况下,川芎嗪在0.2~20 mg/L剂量范围内对NIH3T3细胞增殖和TGF-β信号传导的影响不明显;而在TGF-β刺激的情况下,在川芎嗪浓度为20 mg/L时,对NIH3T3细胞增殖出现明显的抑制作用(P<0.05)。川芎嗪在0.2~20 mg/L剂量范围内,对于正常情况下TGF-β响应的细胞荧光酶活性影响不明显;而在TGF-β(2μg/L)刺激的情况下,各剂量组都对TGF-β响应的荧光酶活性表现了明显的抑制(P<0.05或P<0.001)。结论川芎嗪能抑制成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达和成纤维细胞的增殖,抑制TGF-β/Smads信号传导通路,可能是其发挥抗纤维化作用的机理之一。     

尿道瘢痕成纤维细胞培养及药物对其生长的影响

目的 探讨丹参和川芎嗪对尿道瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 建立尿道瘢痕成纤维细胞的体外培养，并以此为模型研究丹参和川芎嗪对其生长的影响及其作用机理。结果 （1）丹参和川芎嗪能使尿道瘢痕成纤维细胞形态发生明显改变，细胞由梭形变为椭圆形。（2）丹参和川芎嗪均可抑制尿道瘢痕成纤维细胞的增殖，当抑制率为50%时，药物浓度分别为2.5mg/ml和75μg/ml。其机制与药物抑制细胞分裂密切相关，而并非是使细胞产生坏死和降解。结论 丹参和川芎嗪可望成为有效的瘢痕抑制剂，在尿道瘢痕狭窄的治疗中发挥作用。     

抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清农度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加.表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成.与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.在10-10～10-8mol/L浓度范围内.AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用.并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强.同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用.④结论 AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用.     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

黄芪多糖对糖尿病足部溃疡部位成纤维细胞增殖功能的促进作用

目的 探讨黄芪多糖对糖尿病足部溃疡成纤维细胞增殖功能的影响.方法 选择糖尿病足部溃疡患者15例,取患者创面边缘全厚皮片,分离、培养、传代成纤维细胞.比较不同浓度黄芪多糖对成纤维细胞增殖功能的影响.结果 各组间吸光度A值比较差异有显著统计学意义（F=21.357,P＜0.01）,其中100μg/mL组和500μg/mL组显著高于对照组,而500μg/mL组又显著高于100μg/mL组（t=3.926、7.254、4.359,P均＜0.01）.结论 黄芪多糖能够促进糖尿病足部溃疡成纤维细胞的增殖,并且随着浓度的增加,促进作用越强.     

仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）为研究对象,采用四氮唑盐（MTT）比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响（以OD值反映细胞活性）,采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在一定浓度范围内（0.0625～0.5mg/mL）,仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖,同时促进PCNA蛋白的表达,并随着仙人掌浓度的增加,成纤维细胞数量和PCNA蛋白的表达均不断增加,在0.5mg/mL浓度时达到高峰,呈现明显的剂量-效应关系（r分别为0.761,0.783;P均＆lt;0.01）。结论：在一定浓度范围内,仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用,并表现为明显的量-效关系。     

基于网络药理学探讨丹参治疗骨质疏松症的作用机制

目的:采用网络药理学方法分析中药丹参防治骨质疏松症(osteoporosis,OP)的药效物质基础及其分子作用机制。方法:通过TCMSP数据库筛选出丹参的活性成分及其作用靶点;检索OMIM、GeneCards和DisGeNET数据库获得OP的相关靶基因;绘制韦恩图获得丹参-OP共有靶点。通过Cytoscape软件构建疾病-药物-有效成分-靶点相互作用网络;利用Bioconductor工具对共有靶点进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果:共获得OP相关基因2 026个,丹参抗OP潜在有效成分21个,包括丹参素、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、木樨草素等,这些有效成分共作用于474个靶点,其中有53个与OP相关,其潜在调控信号通路139条,包括AGE-RAGE、PI3K-Akt、JAK-STAT等与各种骨细胞增殖、分化密切相关的信号通路。结论:丹参抗OP具有多成分、多靶点、多途径的作用特点,网络药理学为丹参抗OP作用机制的阐明提供了科学依据,并为中药的防病治病机制研究提供参考思路。     

桃红四物汤加丹参对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨桃红四物汤加丹参时活化的人肝星形细胞（HSC）增殖和凋亡的影响，阐明其时肝纤维化的防治作用。方法将人肝星状细胞体外培养，加入不同浓度桃红四物汤加丹参干预48h后，采用MTT法以及流式细胞仪检测其增殖及凋亡情况。结果桃红四物汤加丹参0．4mg／mL、0．2mg／mL两种浓度均能抑制肝星状细胞增殖，并能促进其凋亡。结论桃红四物汤加丹参具有抑制人肝星状细胞的增殖，诱导肝星状细胞凋亡的作用。可能为肝纤维化的中医药防治研究提供新的思路。     

丹参川芎嗪联合降纤酶治疗进展性脑卒中的疗效观察

目的观察丹参川芎嗪联合降纤酶治疗进展性脑卒中的临床疗效。方法 64例进展性脑卒中患者随机分为两组,对照组(n=32)在常规治疗基础上加用降纤酶治疗,观察组(n=32)在对照组治疗基础上加用丹参川芎嗪注射液治疗。两组治疗后比较临床疗效及神经功能缺损评分等。结果观察组治疗总有效率(87.5%)明显高于对照组(71.9%)(P<0.05);两组治疗后第7天、第14天神经功能缺损较治疗前均明显改善(P<0.05),且观察组改善显著优于对照组(P<0.05)。结论丹参川芎嗪联合降纤酶治疗进展性脑卒中疗效显著,不良反应少,值得临床推广应用。     

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后，取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用，且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

黄芪与丹参注射液对慢性肾炎气虚血瘀证临床疗效比较

目的:探讨中药制剂黄芪注射液和丹参注射液对慢性肾小球肾炎气虚血瘀证蛋白尿、肾功能、细胞免疫功能、尿FDP等的影响及比较。方法:严格按照要求选择入选病例,采用随机双盲法随机分为黄芪组、丹参组、对照组,每组各30例。黄芪组、丹参组:基础治疗基础上用黄芪注射液、丹参注射液各40mL﹢5%GS(或GNS250mL)VD30gtt/min,日1次;对照组:基础治疗的基础上加用细胞色素C15mg、辅酶100U、三磷酸腺苷20mg+5%GS(或GNS250mL)VD30gtt/min,日1次,每个疗程1个月连续观察3个月。结果:黄芪、丹参均具有降低尿蛋白、降低肌酐、尿素氮、提高免疫功能等作用,从而提高临床疗效。结论:黄芪、丹参防治慢性肾小球肾炎具有广阔的前景。     

Inhibitory Effect of Oxymatrine on Quartz-induced Secretion of TNF-α by the Pulmonary Alveolar Macrophages in the Fibroblast Proliferation

The massive proliferation of pulmonary fibroblasts is the common consequence shared by lung diseases. The over-expression of TNF-α plays an important role in the proliferation of pulmonary fibroblasts[1, 2]. Under patho-logical conditions, TNF-α is predominantly secreted by activated alveolar macrophages of lung. The high level of TNF-α acts on the receptors on the cell membrane of fibroblasts, mediates the conduction of intracellular sig-nals and eventually activates the nuclear factor…     

壁虎粗多肽对3种消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的 探讨壁虎粗多肽(GCPS)对消化道肿瘤细胞体外增殖的抑制作用.方法 用不同浓度 (0.375、0.75、1.0、1.5、3.0 mg/mL) 的GCPS处理食管癌细胞EC109、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC803,于24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,并使用MTT法观察GCPS对3种人消化道肿瘤细胞增殖的影响.结果 与空白对照组比较,在倒置显微镜下可观察到GCPS作用24、48、72 h后的细胞形态有不同程度的改变.MTT法结果显示GCPS具有抑制人消化道肿瘤细胞增殖作用,且作用呈浓度和时间依赖性;48 h后GCPS作用于上述3种细胞的IC50为1.1、1.2 和1.6 mg/mL.结论 壁虎粗多肽可抑制HepG2、EC109和MGC803这3种消化道肿瘤细胞增殖.     

川芎嗪防治增殖性玻璃体视网膜病变的实验研究

目的探讨川芎嗪对实验性增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的疗效.方法将30只新西兰大白兔的60只眼随机分为3组,分别在玻璃体腔内注入自血0.1ml及生理盐水0.1ml、自血0.1ml加川芎嗪0.2mg、自血0.1ml加川芎嗪0.5mg,观察川芎嗪对眼内纤维增生的抑制作用.结果注入川芎嗪的实验组玻璃体增生较对照组少,高浓度组的川芎嗪较低浓度组抑制作用无明显差异.结论川芎嗪对防治PVR有效,本研究为川芎嗪应用于临床提供了依据.     

川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的增殖与胶原合成的影响。方法用消化法培养新生SD大鼠的CF，用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成．观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响。结果随着TMP浓度的升高，MTT比色法A490值呈下降趋势；CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势。结论TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。