单抗和超抗原的融合蛋白与5-氟尿嘧啶对人大肠癌细胞的协同抑制作用

机体存在着能识别肿瘤抗原的特异性T细胞,但由于种种因素使得抗肿瘤T细胞的质和量均不足放不能引起有效的免疫应答来抑制肿瘤生长.T细胞在肿瘤局部大量激活,可激发强烈的抗肿瘤免疫应答,这有可能成为恶性肿瘤免疫治疗的有效手段.在寻找这样有效的T细胞激活剂中,超抗原开始倍受人们关注.超抗原主要为一些细菌的毒素(如SEA、SEB),是目前已知最强的淋巴细胞激活剂之一,可通过MHCⅡ类分子的辅助,激活所有携带待殊TCR Vβ片段的T细胞,对表达MHCⅡ类的靶细胞产生细胞毒作用.为使超抗原能在肿瘤细胞靶向定位,并避免杀伤表达MHCⅡ类的抗原递呈细胞,近年来Kalland等用基因工程的方法构建了抗人大肠癌的单克隆抗体C215和C242的Fab段与SEA的融合蛋白,以增强超抗原对肿瘤细胞的靶向性.这种融合蛋白对MHCⅡ类分子的结合力大大减低而对肿瘤细胞的亲和力明显增强,使超抗原能在肿瘤局部激活T细胞,释放大量细胞因子,引起一系列抗肿瘤免疫反应,有望成为新的肿瘤生物治疗剂.本文目的在于观察融合蛋白C215 Fab-SEA和     

单克隆抗体导向的超抗原治疗肿瘤

超抗原是强有力的Ｔ淋巴细胞激活物，它以与普通抗原不同的递呈方式，经ＭＨＣⅡ类分子的辅助与ＴＣＲ和Ｖβ成分结合，促使Ｔ细胞大量增殖，产生细胞因子，发挥细胞毒作用。最近利用肿瘤特异性的单克隆抗体和超抗原的融合物定位于肿瘤细胞表面，定向活化Ｔ细胞，从而杀伤肿瘤细胞，取得一定进展，为肿瘤的免疫治疗开辟了一个新途径。     

单克隆抗体导向的超抗原抗肿瘤研究新进展

 超抗原(Superantigen, SAg)抗肿瘤是90年代才出现的肿瘤生物治疗方式。     

单克隆抗体与超抗原结合物介导的T细胞抗肿瘤作用…

超抗原是一类能高效地刺激Ｔ细胞增殖并且使之释放大量细胞因子的细胞或病毒产生。ＳＡｇ与抗肿瘤单克隆抗体的偶联物或者利用基因工程手段制成的它们的融合蛋白对ＭＨＣⅡ类分子阳性或阴性的肿瘤细胞都有强大的杀伤作用。体外细胞毒实验和动物体内实验的研究结果表明，它很有可能成为一种有效的新型肿瘤免疫导向治疗剂。     

抗大肠癌相关抗原SC系列单抗的研究及其应用

为探讨大肠癌诊治的新途径,自1982年以来先后用新鲜大肠癌实体瘤细胞免疫并经细胞的杂交融合而研制出16种抗人大肠癌相关抗原的单克隆抗(体单抗),并命名为SC 系列单抗。这些杂交瘤细胞经连续多年的培养、冻存与复苏,至今仍能稳定分泌IgGl(13种)和 IgM(3种)型的单抗。     

超抗原与肿瘤生物治疗

超抗原是潜在，高效的Ｔ细胞激活剂，与常规抗原相比具极高的Ｔ细胞激活频率。国外已将超抗原用于抗肿瘤免疫治疗，并初见成效，本文就超抗原家族及其抗癌机制，抗肿瘤应用现状，存在问题和发展前景作一简介。     

单克隆抗体与超抗原结合物介导的T细胞抗肿瘤作用研究进展

超抗原(SAg)是一类能高效地刺激T细胞增殖并且使之释放大量细胞因子的细菌或病毒产物.SAg与抗肿瘤单克隆抗体(McAb)的偶联物或者利用基因工程手段制成的它们的融合蛋白对MHCⅡ类分子阳性或阴性的肿瘤细胞都有强大的杀伤作用.体外细胞毒实验和动物体内实验的研究结果表明,它很有可能成为一种有效的新型肿瘤免疫导向治疗剂.但是目前尚未见临床应用的报道.本文综述了用McAb与SAg结合物介导的T细胞对肿瘤进行免疫导向治疗的实验研究进展.     

胶质瘤抗原联合超抗原SEC诱导杀瘤性免疫细胞的实验研究

目的：使用胶质瘤可溶性抗原（GSA）联合超抗原SEC刺激外周血淋巴细胞,诱导产生杀瘤性免疫细胞,对胶质瘤细胞进行杀伤, 探讨肿瘤免疫治疗新方法。方法：提取健康人外周血淋巴细胞,体外培养,并经GSA、超抗原SEC联合处理。流式细胞术（FCM）和细胞毒试验测定效应细胞表型和杀伤活性。结果：经GSA、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,于72h达到高峰,并且上调CD8+T细胞群, 联合刺激诱导的效应细胞对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组 （P<0.05）。结论：GSA与SEC联合应用诱导的效应细胞增殖快,细胞毒活性高,对抗原来源肿瘤细胞具有选择性杀伤作用。该实验研究为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。     

Human Monoclonal Antibody Against Colon Cancer

The purpose of the study was to produce human monoclonal antibodies (hMcAb) against human colon cancer for use in radioimmunoimaging. Human-mouse heterohybridomas were developed by fusing SHM-D33 mouse-human hybrid heteromyeloma cells with human lymphocytes from colon cancer tumor-draining lymph nodes. The hybridomas capable of secreting human monoclonal antibodies were screened by using human colon cancer cell lines and pathological biopsies with ELISA and immunohistochemical methods. hMcAb clone H11 was selected for a large-scale antibody production, which was purified from mouse ascites. Biodistribution study demonstrated that specific uptake of ¹²⁵I-hMcAb H11 by human colon cancer xenografts was significantly higher than by normal tissues. Radioimmunoimaging of human colon cancer xenografts exhibited distinct tumor visualization during the period of 72-96 hr after intraperitoneal injection of ¹²⁵I-hMcAb H11. The development of human monoclonal antibodies such as hMcAb H11 may be useful for radioimmunodetection and therapy of colon cancer.     

A Human Monoclonal Antibody Recognizing a Surface Antigen on Stomach Cancer Cells

Lymph-node lymphocytes of a patient with stomach cancer were fused with the mouse-human heterohybridoma, HM-S. A clonc (2F9) was isolated that showed stable production of an IgM antibody reactive with NUGC-4 stomach cancer cell line. This antibody reacted predominantly with a cell surface antigen on cell lines originating from gastro-intestinal cancer and adenocarcinoma of lung, whereas it was not generally reactive with other types of cancers, or with normal kidney cells or fibroblasts. Biotin-labeled 2F9 antibody clearly stained cell smears and the nude mouse tumor of NUGC-4, hut it did not show a positive reaction with stomach cancer tissues obtained from more than 10 patients, indicating that the antigen detected is very weakly expressed on tumor cells or on a limited number of stomach cancers. The antigen shed from NUGC-4 cell line was detected in the culture supernatant. 2F9 antibody precipitated a glycoprotein with a molecular weight of over 200 kilodaltons as well as a possible glycolipid, from NUGC-4 cells labeled with [³H]glucosamine or [³⁵S]-H₂SO₄. Periodic acid treatment of the tissue section decreased reactivity with 2F9 antibody, but heat, neuraminidase or protease treatment did not. These results suggested that the epitope is present on a carbohydrate moiety not containing sialic acid, and that a part of the antigen molecule is sulfated.     

RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HER2的表达

[目的] 研究短发夹状RNA（short hairpin RNA；shRNA）对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2表达的影响。[方法] 将编码针对HER2的shRNA的寡核苷酸克隆入哺乳动物表达载体psilencer3．1-H1，形成pshRNA-HER2重组质粒，在多胺的介导下转染SKBr3，RT-PCR分析HER2 mRNA的表达，免疫细胞化学的方法检测蛋白的表达。[结果] DNA测序证实了表达质粒构建成功，与对照相比，shRNA可使HER2 mRNA的水平降低60％。[结论] 构建的pshRNA-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达。     

STAT3靶向抑制剂LLL-HS-1对人结肠癌HT-29细胞和动物模型的作用

[目的] JAK2/STAT3信号是传递外膜表面信号至细胞核内的通路之一.利用结构为基础的计算机高通量虚拟筛选的设计、合成化合物LLL-HS-1,观察化合物LLL-HS-1作用结肠癌HT-29细胞和动物模型的效果.[方法]采用Western Blot检测结肠癌HT-29细胞系中STAT3蛋白表达及其磷酸化STAT3情况.人结肠癌HT-29细胞系接种到BLBA/c裸鼠左后肢上表皮,观察肿瘤生长情况,当肿瘤直径达5mm左右后随机分组(高剂量LLL-HS-1组,低剂量LLL-HS-1组,5-Fu对照组和空白对照组),每组8只,持续4周腹腔给药.以肿瘤体积大小为衡量药效的指标.[结果] LLL-HS-1对结肠癌HT-29细胞的IC50为0.1μM,化合物LLL-HS-1可以抑制STAT3酪氨酸残基705磷酸化.LLL-HS-1对肿瘤的生长具有抑制作用,以高剂量组尤为明显.[结论] STAT3抑制化合物LLL-HS-1可以成为新型的结肠癌靶向治疗药.     

单克隆抗体MG9用于肺癌的免疫组化研究

用鼠抗人胃癌单克隆抗体MG_9对147例不同组织学类型的肺癌进行了免疫组织化学研究,探讨MG_9相关抗原在肺癌组织中的表达及其临床意义。结果表明,肺癌MG_9相关抗原表达总阳性率为51.7％(76/147);不同组织学类型肺癌间阳性率差异显著,其中腺癌阳性率92.1％(47/51),显著高于鳞癌的30.2％(13/43)和小细胞癌的30.2％(16/53),P<0.001。这提示:单抗MG_9对肺腺癌有较高特异性,可作为肺腺癌的一种新的标志物。     

Therapeutic Effect of Ansamitocin Targeted to Tumor by a Bispecific Monoclonal Antibody

We have constructed a murine hybrid hybridoma that secretes a bispecific monoclonal antibody (mAb) by fusing a hybridoma secreting an anti-ansamitocins mAb with a hybridoma secreting an anti-human transferrin receptor (TfR) mAb that binds to human A431 epidermoid carcinoma cells. The bispecific mAb, reactive to both ansamitocins and TfR, was purified by a combination of hydrophobic column chromatography and hydroxyapatite high-performance liquid chromatography, and evaluated in in vivo experiments using human tumor cell-implanted nude mice. Ansamitocin P-3 targeted through one of the antigen combining sites of the bispecific mAb was potentially more effective in suppressing the growth of established A431 tumor xenografts implanted on nude mice than unconjugated ansamitocin P-3 or the immunoconjugate of ansamitocin P-3 and monospecific anti-ansamitocins antibody, and the targeted ansamitocin P-3 finally eradicated the tumor mass. The bispecific mAb also played an important role in reducing such undesirable side-effects of ansamitocin P-3 as the loss of body weight, the damage to liver functions and the decrease in the number of white blood cells.     

单克隆抗体12H6的靶抗原在肺癌细胞中的表达及功能研究

[目的]分析抗肺癌单抗12H6的靶抗原在肺癌细胞系和肺癌组织中的表达,研究单抗12H6体内外生物学功能.[方法]细胞免疫荧光、流式细胞荧光法检测单抗12H6靶抗原在3种肺癌细胞系中的表达及其定位,免疫组化法检测其在人肺癌组织中表达及特异性;Transwell法和CCK-8法分别检测12H6体外对肺癌细胞系侵袭和增殖功能的影响.共接种模型裸鼠体内治疗实验研究12H6对移植瘤生长的抑制作用.[结果]单抗12H6的靶抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达,在3种细胞系胞膜的表达比例分别为31.2％、15.4％和16.7％.单抗12H6在人肺癌组织中的表达比例为80.6％,较配对癌旁组织显著上调.单抗12H6在体外能明显抑制肺癌细胞侵袭和增殖;体内能明显抑制移植瘤生长,抑制率为40％.[结论]单抗12H6具有优良的体内外抑瘤功能,可能为肺癌靶向治疗提供潜在的靶向治疗药物.     

阿司匹林抑制肺癌细胞增殖的实验研究

 目的 观察阿司匹林在体外对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）法观察阿司匹林及与奥沙利铂联用抑制A549细胞的增殖；采用流式细胞仪（FCM）观察阿司匹林处理后A549细胞周期分布的变化；采用HE染色和DNA末端原位标记染色技术（TUNEL）观察阿司匹林处理后诱导A549细胞凋亡的作用。结果 MTT显示阿司匹林呈剂量依赖方式抑制A549细胞增殖。阿司匹林作用后，FCM显示G0／G1期细胞比例增加，S期和G／M期细胞比例降低，TUNEL显示细胞凋亡指数（AI）由3．67％±1．15％增加到26．33％±2．52％，呈一定剂量效应关系。光镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。阿司匹林（2．5mmol／L）与奥沙利铂（≥6．25ug／mL）联用可增强抑制A549增殖的作用，二者呈协同或相加作用。结论 阿司匹林可抑制肺腺癌细胞A549的增殖，其影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡可能是其重要的机制。阿司匹林及与奥沙利铂联用有显著的协同抗增殖效应。     

肺癌可溶性抗原联合超抗原诱导的DC疫苗对肺癌细胞杀伤作用的研究

背景与目的 通过经肺癌肿瘤可溶性抗原(TSA)和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合修饰致敏树突状细胞(DC)体外诱导对肺癌细胞杀伤作用的研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据.方法 3M KCI法提取人肺癌可溶性抗原;从人外周血单个核细胞(PBMC)中诱导扩增DC并鉴定;肺癌TSA和不同质量浓度的SEA联合修饰致敏DC;以联合抗原修饰后的DC、单纯肺癌抗原致敏的DC和未经抗原修饰的DC分别与同种异体T淋巴细胞共同孵育,MTT法测定混合淋巴细胞反应中DC的免疫刺激活性,诱导产生具有识别肺癌抗原的特异性CTL(作为效应细胞分别称为TSA-SEA-DCL、TSA-DCL、DCL);用流式细胞仪FCS及免疫染色法分析鉴定DC和效应细胞表型;M1T法检测各效应细胞对靶细胞体外杀伤效应.结果 诱导出表达CD1a,CD80,HLA-DR分子的DC;经肺癌TSA和SEA联合修饰致敏后,上述分子表达上调;联合修饰后的DC具有较强的免疫刺激活性,DC/T比例1:10可能为最适比例;TSA-SEA-DCL中CD3+CD8+细胞的比例大幅度增加;TSA-SEA-DCL对靶细胞GLC-82的杀伤率明显高于TSA-DCL及DCL,亦明显高于对肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的杀伤率.结论 经肺癌TsA和sE^联合修饰致敏的DC可诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CD8+表达增加的CTL;联合抗原诱导的DC疫苗对肺癌细胞有高效特异性的杀伤作用,肺癌TSA和超抗原SEA联合修饰的DC的活性明显强于单用肺癌TSA修饰.