乙型肝炎病毒突变与阿德福韦酯临床耐药的关系

阿德福韦酯（Adefovir dipivoxil,ADV）为5＇-单磷酸脱氧腺苷（5＇-dAMP）的无环磷酸化嘌呤类核苷酸类似物,口服后在血浆或组织内迅速转化为游离ADV,在细胞激酶作用下磷酸化为有活性的代谢产物ADV二磷酸盐,在乙型肝炎病毒（HBV）复制中,与天然的三磷酸脱氧腺苷竞争结合HBV多聚酶,并能结合到HBVDVA链上,阻止其延伸,终止病毒复制。体外试验表明,HBV野毒株和YMDD突变株对ADV同样敏感,对已发生拉米夫定（Lamivudine,LAM）耐药的病例,改用或加用ADV对降低血清病毒水平有效。虽然ADV治疗期间出现病毒耐药突变的机率较LAM低,但鉴于核苷类药物需长期应用,ADV治疗引起的HBV多聚酶／反转录酶基因突变可累积增加,对于HBV突变引起的临床耐药及出现耐药后的补救治疗等问题仍是临床常见问题。     

重视抗乙型肝炎病毒药物耐药的研究

慢性乙型肝炎(CHB)抗病毒治疗的地位和作用已经得到了确立,未来几年这一领域的发展方向就是新型核苷(酸)类似物(NA)的研发。随着对CHB抗病毒治疗临床研究的不断深入,在NA抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗临床研究中发现HBV的耐药是一个普遍和突出的问题,只有充分重视HBV耐药的研究,才能更有效地贯彻长期抗病毒治疗的方针。一、乙型肝炎病毒耐药的一些基本概念HBV的基因耐药(genetic resistance)是指CHB患者血中的HBV基因序列出现了耐药相关的基因突变。如果检测到了HBV DNA耐药相关的基因序列,那么这种基因耐药肯定是存在的;如果检测…     

抗乙型肝炎病毒新药——替比夫定的临床应用

2006年10月25日美国FDA批准了新型的左旋核苷类药物替比夫定（Telbivudine，LdT）用于治疗慢性乙型肝炎。今年2月14日我国SFDA也已批准其用于慢性乙型肝炎的抗病毒治疗。LdT（β-L-2’-脱氧胸腺嘧啶苷）是目前为止FDA批准的第四个治疗慢性乙型肝炎的核苷（酸）类似物，也是唯一一种属于妊娠分类B级的药物。LdT对乙型肝炎病毒（HBV）的DNA聚合酶具有抑制作用，而对人类DNA聚合酶或其他人类病毒的活性没有影响。     

乙型肝炎病毒耐药的标准化命名、检测及处理

慢性乙型肝炎的治疗在过去的10年中取得了长足的进展,目前已经有两种干扰素以及4种核苷(酸)类药物被批准上市。然而,核苷(酸)类药物48周疗程结束后,往往很难达到对病毒的持续抑制,而长期甚至是无限期的治疗会增加病毒耐药产生的风险。病毒耐药的产生及患者依从性差是导致乙型肝炎治疗失败的最重要原因,因此,有必要对乙型肝炎病毒耐药相关的命名标准化,包括核苷(酸)类药物的基因型耐药、表型耐药以及临床耐药。DNA检测推荐用国际卫生组织(WHO)指定的标准单位(IU/ml)。一、病毒耐药的临床分类(一)原发性治疗失败(或无应答)核苷(酸)类药物…     

340例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒多位点耐药相关突变分析

目的 分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷(酸)类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义.方法 提取血清HBV DNA,扩增HBV逆转录酶基因,对PCR产物进行DNA双向测序,对测序成功的样本进行基因型分析.检测逆转录酶基因12个位点上的碱基突变情况,分析不同核苷(酸).类似物使用情况、患者的耐药相关突变情况及不同核苛(酸)类似物耐药的突变形式. 结果 检出拉米夫定耐药突变63例,阿德福韦耐药突变10例,恩替卡韦耐药突变8例,替比夫定耐药突变1例.拉米夫定耐药突变中以M204V和M204I最常见,前者通常伴随L180M突变,后者常单独出现,阿德福韦耐药中以N236T±A181位碱基替换为主;恩替卡韦耐药突变发生在拉米夫定耐药基础上,以T184位碱基替换为主;替比夫定的耐药突变为M204I.少数未接受过核苷(酸)类似物治疗的患者也可检出耐药相关突变.结论 检测HBV逆转录酶基因多位点耐药相关突变,有助于临床及时发现和确认乙型肝炎患者是否存在HBV耐药,合理进行抗病毒治疗.     

乙型肝炎病毒基因变异及耐药突变研究进展

全球有近4亿人口感染乙型肝炎病毒(HBV),HBV持续感染是当前严重威胁人类健康的全球问题之一[1]。我国是HBV感染的高发区,慢性乙型肝炎(CHB)是我国肝硬化、肝功能衰竭和原发性肝癌的主要危险因素。HBV变异给疾病的治疗、预防、诊断等方面带来了很多新的问题,同时随着核苷(酸)类似物广泛应用于CHB患者的治疗,产生的耐药问题已在一定程度上限制了其进一步应用。深入了解HBV的变异、耐药情况及解决途径对指导临床用药有重要意义。     

拉米夫定抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变的后续治疗

拉米夫定(lamivudine)抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变发生率高,文献报道在拉米夫定治疗1,2,3,4,5a时分别为14%,38%,49%,66%,69%.耐药突变可导致血清HBVDNA水平阳转或明显上升,肝功能严重受损,甚至病情恶化死亡.关于拉米夫定抗乙型肝炎病毒治疗中耐药突变的后续治疗目前国内外尚无统一用药方案,单药治疗(如:继续使用拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦)在临床使用中已经取得了一定疗效,联合抗病毒治疗和中医药治疗是今后研究的方向.     

乙型肝炎病毒耐药变异与管理

HBV耐药变异是目前困扰慢性乙型肝炎治疗的严重问题。抗病毒药物发生耐药后可导致慢性乙型肝炎患者出现HBV载量升高,ALT水平复燃,病情进展;对肝移植患者可导致移植肝发生炎症甚至坏死,肝移植失败。耐药变异还可     

核苷(酸)类耐药患者中乙型肝炎病毒逆转录酶区基因变异类型及其特点

目的 了解核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎过程中HBV耐药变异模式特点以及是否有新的变异位点产生. 方法对2005年9月-2007年6月送检的227份慢性乙型肝炎患者血清标本,应用Trugene试剂盒抽提、扩增HBV基因组聚合酶逆转录酶区,PCR产物经过CLIP反应后加到MicroCel 500电泳胶板中电泳,应用GeneObjects软件获得样本的序列,分析其突变,并应用SPSS15.0软件进行统计分析.结果 在227份标本中有111份(48.9%)发现已知耐药位点(M204V/I,L180M,V173L,V207I,N236T,A18lV/T等)变异,其中有明确用药史的共75例.在拉米夫定和阿德福韦序贯治疗的患者中出现多重耐药变异的概率较高,为25.0%(4/16),而在先用拉米夫定后联合阿德福韦治疗的16例患者中未发现后续阿德福韦耐药变异.在其他位点的变异中,以A222T、L229V和S256C频率较高.数据采用SPSS15.0软件分析,组间比较用Kruskal-Wallis和SNK方法检验. 结论在核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎过程中,出现的变异模式复杂,对拉米夫定耐药的患者,换用阿德福韦可导致多重耐药变异.     

乙型肝炎病毒前C区1896位点突变株感染在血清与单核细胞中分布模式与临床关系

ＨＢＶ变异在ＨＢＶ感染发病机制中的作用尚未阐明。ＨＢＶ感染有各种不同的临床类型 ,国内外不少研究报道认为可能与ＨＢＶ变异感染有关。但亦有人认为关系不大 ,如前Ｃ区ｎｔ1896变异株感染既可以发生在慢性ＨＢＶ携带者 ,亦可发生在重型肝炎。为了进一步了解ｎｔ1896变异株感染 (简称变异株 )与临床关系 ,我们对 112例不同临床类型的乙型肝炎患者 ,在检测血清ｎｔ1896变异株的同时 ,检测单核细胞ｎｔ1896变异株与肝功能 ,探讨变异株在血清与单核细胞内的分布模式与临床关系 ,现将结果报道如下。材料和方法一、病例112例慢性ＨＢＶ感染者…     

结核分枝杆菌Km基因突变与耐卡那霉素药物的研究

目的　分析结核分枝杆菌(T.M)耐卡那霉素(KM)和(Km)基因突变情况。方法 通过传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析127株分枝杆菌临床分离株耐KM情况和Km基因的变化。结果 药敏试验卡那霉素耐药率为35.4%(45/127),127株分枝杆菌临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。45株耐卡那霉素分离株中,12株(26.6%)Km基因SSCP泳动异常。结论 T.M对抗结核二线药物中的KM药物已出现耐药,其部分耐药原因可能是由于T.M耐KM药物的Km基因突变所致。     

心肌再生生物学机制研究现状

心肌组织一直被认为是不可再生组织,对其损伤后的治疗一般也只能采用保守方法.近年来,在成年大鼠心脏中发现的Lin-c-kitPOS细胞有向心肌细胞分化的潜力,说明成年机体心肌组织中仍可能存在干细胞;而对胚胎干细胞及骨髓干细胞在修复损伤心肌方面的相关研究也显示这些干细胞可通过分化成心肌细胞而改善心肌功能;对多种细胞因子的广泛研究也发现其能促进心肌细胞的分裂增生,多种研究结果提示心肌再生并非不可能.虽然在后续的几个大规模临床前研究中未能取得令人期待的结果,以及伦理问题和机体对不同干细胞的免疫排斥反应等问题仍待解决,但心肌再生的研究前景仍然光明.     

不同基因型乙型肝炎病毒的HBx蛋白氨基酸序列的差异及意义

目的研究不同基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列差异及差异的意义。方法从美国生物信息中心（NCBI）搜索不同基因型HBV的全HBx蛋白氨基酸序列（154aa）,使用生物信息软件Clustalw2.0对搜索到的氨基酸序列进行比对,找出不同基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列差异及可能的差异规律,并分析差异的意义。结果 1.不同基因型HBV的HBx蛋白的氨基酸序列之间的同源性为73%～100%;2.HBV的各基因型（B、C、D、F、A、H）同型间的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性分别为87%～99%、88%～96%、87%～99%、86%～96%、96%～98%、99%～100%;3.在HBx蛋白A区（1～20aa）第5位和第12位的氨基酸在各基因型变异较大,其余位置的氨基酸很保守,很少发生变异。在HBx蛋白的B区（21～57aa）的氨基酸变异较大,即使在同一基因型别内部也出现了较大的变异,变异没有规律,呈现出了随机突变的特点。在C区（58～84aa）的氨基酸比较保守,除3个H型HBx的第60位氨基酸为A（丙氨酸）外,其余HBx蛋白的第60位氨基酸均为V（颉氨酸）,第60位以外的氨基酸很少突变。HBx蛋白D区的氨基酸（85～119aa）变异较大,并且变异呈现随机突变的特点。在HBx蛋白的E区（120～140aa）的氨基酸变异比较大的位置是130/131位置的氨基酸,其余位置的氨基酸较少发生变异,不同基因型130/131位置的氨基酸变异率是不一致的。在HBx蛋白F区（141～154aa）中,150～154aa区域的氨基酸比较保守,各基因型之间无变异,其余位点变异较大,没有一定的规律性。结论不同基因型的HBV的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性低于同种基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性;即使在比较保守的HBx蛋白区域也存在变异较大的氨基酸位点。     

乙型重型肝炎基因变异与免疫异常的关系

目的 探讨在重型肝炎中,乙型肝炎病毒（HBV）前C区1896位基因突变与机体免疫水平的关系。方法 采用限制性酶切片段长度多态性分析（RFLP）检测HBV基因组前C区1896位是否存在变异,以单克隆抗体APAAP法比较末梢血T细胞亚群的分布情况,用双抗体夹心ELIS法检测血清细胞因子（TNF－α、INF-γ、IL-6、IL-8）水平。结果 23例重型肝炎中,HBV基因变异株感染率为52．2％,而22例急性乙型肝炎中仅1例为变异株感染;变异株组CD8^ T细胞百分率明显下降,CD4^ /CD8^ 比值明显增高,CD3^ 、CD4^ T细胞的百分率未见明显变化;重型肝炎中细胞因子（TNF－α、INF-γ、IL-6、IL-8）水平均明显高于急性乙型肝炎相应之细胞因子水平,而变异株组INF-γ、IL-6水平明显高于非变异株组,TNF－α和IL－8在两组间无明显差异;变异株组病死率（100％）明显高于野毒株组的病死率（9％）。结论 重型肝炎中,变异株HBV感染率很高;基因变异HBV可能通过各种途径刺激机体的免疫系统,使免疫细胞活化,从而释放大量细胞因子,导致肝细胞损伤,甚至肝衰竭。     

慢性乙型肝炎肝肾阴虚证HBV基因突变点的分布规律

目的:研究慢性乙型肝炎肝肾阴虚证HBV基因突变点的分布规律。方法:基因芯片方法检测慢性乙型肝炎肝肾阴虚证患者HBV前C区基因变异。结果:慢性乙型肝炎肝肾阴虚证患者HBV前C区变异可见于多个位点,1896位点变异率为31.37%,1764位点变异率为25.49%,1762位点变异率为24.51%,1899位点变异率为12.75%,1862位点变异率为5.88%。1762、1764、1896和1899点的突变株信号值高于野生株信号值;1862点野生株信号值高于突变株信号值,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:揭示慢性乙型肝炎肝肾阴虚证患者HBV基因突变点的分布规律,有利于进一步探讨中医药抑制HBV突变株复制的方法。     

慢性HBV携带者YMDD自然变异的追踪研究

目的 探讨慢性HBV携带者YMDD自然变异随时间的推移发生变化的情况.方法 随机选择未经抗病毒治疗的慢性HBV携带者103例,分别在开始、1年、2年时观察血清HBV DNA、HBV血清学标志物、肝功能、YMDD变异的变化情况.结果 在开始检测的103例慢性HBV携带者中,YMDD阳性27例,观察2年后4例转为非活动性H...     

脓肿分枝杆菌耐利福平机制的研究

目的 探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法 采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平机制中的作用。结果 随着TWEEN-80、Trixon X-100、甲苯、乙醚、CCCP、利血平和泮托拉唑浓度的增加,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度逐渐降低。对于TWEEN-80、Trixon X-100、CCCP和泮托拉唑,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至小于32 μg/mL,0.1%的TWEEN-80、0.006 25%的Trixon X-100、0.1 μg/mL的CCCP和32 μg/mL的泮托拉唑为最适浓度;对于甲苯、乙醚和利血平,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至64 μg/mL,0.25%的甲苯、0.25%的乙醚和8 μg/mL的利血平为最适浓度。它们均能促进利福平对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。结论 细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平的机制中有重要作用。     

特异性核酸内切酶检测结核分枝杆菌的乙胺丁醇耐药基因突变

目的 探讨Surveyor酶法在结核分枝杆菌耐药基因突变中的应用.方法 采用Surveyor酶法检测结核分枝杆菌临床分离株60株,其中已经测序证实有embB基因突变的乙胺丁醇耐药株45株,无基因突变的敏感株15株.经聚合酶链反应扩增,杂交形成异源双链,Surveyor酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳判断其有无突变存在.结果 15株敏感株均无embB基因突变,45株耐药株均存在embB基因突变热点306位密码子的点突变,其中33株为ATG→GTG,3株为ATG→ATT,5株为ATG→ATA,2株为ATG→ATC,2株为ATG→CTG.经Surveyor酶法测定,45株embB基因突变株均呈现2条带形,15株敏感株均显示1条带形.结论 Surveyor酶法与测序法的结果完全相符.采用Surveyor酶法进行异源双链分析,具有简便、稳定、低耗、灵敏性和特异性高的特点.