多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与AmpC耐药基因的研究

目的了解我院临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant Acinetobater baumannii,MDRAB）的耐药性和AmpC耐药基因的存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征。结果检出结构基因ampC型49株,占81.7%;blaADC基因型50株,占83%;ACT基因型2株;41株菌同时携带blaADC和ampC结构基因,占68%;2株同时携带blaADC、ACT和ampC结构基因;未检测到其它AmpC耐药基因（MOX、CIT、FOX、DHA）。携带AmpC耐药基因的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对于丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌的blaADC耐药基因和ampC结构基因同时携带率高,并且是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

60株鲍曼不动杆菌耐药基因携带情况分析

目的研究临床分离的60株鲍曼不动杆菌耐药谱及Ⅰ型整合子和β-内酰胺酶等基因携带情况。方法用微量肉汤稀释法测定16种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;PCR检测β-内酰胺酶、Ⅰ型整合子和外排泵基因,对阳性基因进行序列分析。结果60株菌中,多重耐药株53株,占88.3%;6株携带OXA-23基因,均对包括碳青霉烯在内的5类以上抗菌药耐药,并具有高耐药特性;38株携带PER-1基因,对头孢菌素类耐药率显著高于PER-1基因阴性菌株(P<0.01);45株检出Ⅰ型整合子结构基因,多重耐药率明显高于Ⅰ型整合子阴性菌株(P<0.01);Ⅰ型整合子和PER-1基因同时阳性25株,与7株两者同为阴性菌株相比,多重耐药率增高(P<0.01),但耐药程度无显著差别。结论Ⅰ型整合子基因及β-内酰胺酶类基因的作用是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因;OXA-23基因阳性菌株多为泛耐药和高耐药株,有必要采取有效措施控制其传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因检测分析

目的为了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶（BLA）基因、氨基糖苷类修饰酶（AMFs）基因、消毒剂与磺胺类耐药基因（qacE△1-sul1）和1类整合子酶基因（intl1）存在情况。方法对2005年1—6月份临床分离的31株多重耐药菌株（耐哌拉西林、第三代头孢菌素、环丙沙星和阿米卡星），应用聚合酶链反应及序列分析方法分析其BLA、AMEs、qacE△1．sull和intl1基因类型。结果31株多重耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素B敏感，有3株（9．7％）对受试的其他18种抗菌药物均耐药。19株（61．3％）检出了β-内酰胺酶基因，其中TEM、PER、DHA阳性率分别为61．3％、19．4％、3．2％，未检出SHV、OXA-23、OXA-24、GES、IMP和VIM等基因。25株（80．6％）检出氨基糖苷类修饰酶基因，其中aac（3）-I、aac（6’）-I、ant（3”）-I、ant（2”）-I、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ阳性率分别为67．7％、45．2％、29．0％、22．6％、9．7％、3．2％。qacE△A1-sul1、intl1阳性率分别为80．6％、58．1％。分离株常见的基因组合是TEM＋qacE△1-sul1＋intl1和TEM＋PER＋qacE△1-sull＋intl1，分别占25．8％和19．4％。分离株AMEs的常见的基因组合是aac（3）-I＋aac（6’）-I和nnc（3）-I＋aac（6’）-I＋ant（2”）-I，分别占19．4％和12．9％。结论临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌TEM、nnc（3）-I、nnc（6’）-I、ant（3”）-I、ant（2”）-I、qacE△1-sul1和intl1基因携带率高。     

不同抗菌药物组合对多重耐药鲍曼不动杆菌的作用研究

目的 评价18组抗菌药物组合对临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌( MDRAB)的体外抗菌效应.方法 收集2009年10月-2010年5月首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的非重复鲍曼不动杆菌,肉汤微量稀释法测定抗菌药物单药MIC,棋盘肉汤微量稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度( FIC)值.根据FIC值判别药物组合的作用类型.对实验菌株,同一药物组合表现矛盾作用的,用PCR扩增其外排泵基因.结果 体外联合作用中利福平+多黏菌素B、亚胺培南+庆大霉素、头孢吡肟+左氧氟沙星协同作用比例大,分别达到68.1％、45.5％、40.9％,米诺环素+利福平、氨苄西林/舒巴坦+妥布霉素、头孢他啶+环丙沙星具有较高的相加作用,分别为81.8％、68.2％、68.2％.有些组合对实验菌株出现协同和拮抗的矛盾作用.选择协同作用的No.19和拮抗作用的No.21、No.26进行耐药基因扩增,基因型表现不同,其中No.19扩增adeS( -),No.21和No.26扩增adeS(+).结论 18种药物组合里利福平+多黏菌素B存在较高的协同作用,在严重MDRAB感染情况下可以考虑应用该组合.亚胺培南+庆大霉素、头孢吡肟+左氧氟沙星也具有较高的体外协同作用,但是在部分菌株的试验中存在拮抗作用,可能是由于菌株存在adeS基因,某些抗菌药物的应用会激活adeS,使外排泵表达或者过量表达,反而使进入细菌细胞内的药物被泵出,表现为拮抗作用.     

鲍曼不动杆菌临床株的外排泵研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC、AdeIJK、AdeFGH、AbeM、AbeS、CraA、MdtL的表达与耐药的关系.方法 收集多重耐药鲍曼不动杆菌临床株32株和敏感株10株,PCR扩增泵基因;选取主要克隆型的21株多重耐药株和10株敏感株,实时荧光定量RT-PCR方法检测泵基因adeB、adeJ、adeG、abeM、abeS、craA、mdtL的mRNA相对表达水平,PCR扩增泵调控基因adeRS、adeL并测序分析.结果 32株多重耐药鲍曼不动杆菌临床株中携带泵结构基因片段adeB100％、adeJ 100％、adeG 100％、abeM 96.88％、abeS 100％、craA 100％、mdtL 93.75％,10株敏感株均存在7种泵结构基因片段;主要克隆型的21株多重耐药株和10株敏感株adeB、abeM、mdtL的mRNA相对表达水平的差异有统计学意义( P＜0.001,P=0.001,P=0.013),选取多重耐药株AbR3和AbR11检测外排泵AdeABC调控基因adeRS序列出现氨基酸替代及缺失,而外排泵AdeFGH调控基因adeL序列无基因突变.结论 鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC、AbeM、MdtL的表达可能与耐药性有关.     

鲍曼不动杆菌临床株多重药物外排泵AdeABC的研究

目的 研究鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)临床株外排泵AdeABC的表达与耐药的关系及表达调控.方法 微量肉汤稀释法检测鲍曼不动杆菌临床株对抗菌药物的敏感性及泵抑制剂作用,RT-PCR检测泵基因adeB的mRNA表达水平,PCR扩增泵调控基因adeRS并测序分析.结果 30株多重耐药的鲍曼不动杆菌临床株及5株敏感株均存在泵结构基因片段adeB和调控基因adeRS,随机选取15株多重耐药株中均检测到adeB的mRNA表达,而在5株敏感株中无表达.测定2株多重耐药株调控基因adeRS序列均出现基因突变,发生氨基酸替代及缺失.结论 鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC的表达可能与耐药性有关,在多重耐药株中存在着调控基因adeRS的基因序列变化.     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药分子机制及质粒谱分析

目的了解我院临床分离的66株多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）的耐药性和整合子（qacE△1-sull）、转座子（tnpU）存在状况,并对菌株质粒谱进行分析。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,并对该细菌进行总DNA的提取。用聚合酶链反应（PCR）检测qacE△1-sull及tnpU,提取质粒进行同源性分析。结果 66株鲍曼不动杆菌中整合子qacE△1-sull基因阳性率为31.8%,转座子tnpU基因阳性率为30.3%。携带遗传标记的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%;有19株对亚胺培南耐药,其中整合子阳性率63.2%,转座子阳性率36.8%。检出质粒的46株（70%）临床分离菌出现1～3条大质粒带,大小在1～20kb间,其中出现1条带的有33株、2条带8株、3条带5株,有12株菌提取到大小相同的质粒。结论多重耐药鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的耐药现象严重;整合子、转座子遗传标记的携带率高,可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌耐药性分析及AmpCβ-内酰胺酶基因研究

目的：了解临床标本分离的鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii,Ab）对常见抗生素的耐药现状并研究Ab中质粒及染色体介导的AmpCp．内酰胺酶基因的分布特点。方法：应用VITEK．2微生物分析系统对中南大学湘雅医院2010年11月至2011年4月临床标本进行分离培养、鉴定和药物敏感性分析,采用PCR扩增方法对173株非重复AbblaMOX,blaCMY-2,blaDHA,blaACC,blaACT-1,blaFOX．blaADC六种耐药基因进行分析。结果：173株临床分离菌株对第一、三代头孢菌素,青霉素,磺胺类复合制剂及呋喃妥因的耐药率均超过70％;对喹诺酮类药物中左旋氧氟沙星、环丙沙星耐药率分别为23．7％和89．0％;对氨基糖苷类抗生素耐药率为58．4％～85．5％;对氨曲南的耐药率为51．4％;对碳青霉烯类、第四代头孢菌素及β-内酰胺β-内酰胺酶抑制剂复合物耐药率为8．7％～89．6％（其中耐药率最低的为头孢哌酮,舒巴坦）。173株Ab中携带blaADC基因的为154株f89．0％1,且产blaADC基因的菌株对头孢曲松、庆大霉素、妥布霉素、复方新诺明、环丙沙星、亚胺培南的耐药率高于不产blaADC基因的菌株,两组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。未扩增出blaMOX,blaCMY-2,blaDHA,blaACC,blaACT．1,blaFOX五种耐药基因。结论：头孢哌酮／舒巴坦可作为治疗A6感染的推荐药物。产ADC型AmpCβ-内酰胺酶是A6菌株对头孢曲松、庆大霉素、妥布霉素、复方新诺明、环丙沙星、亚胺培南耐药的重要原因之一。     

鲍曼不动杆菌多重耐药性与主动外排机制的相关性研究

目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统及双组分调节系统编码基因的携带情况,并观察外排泵抑制剂对多重耐药鲍曼不动杆菌耐药水平的影响程度,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药性与胞膜主动外排系统的关系.方法 PCR方法 扩增外排泵编码基因adeB及双组分调节系统编码基因adeR和adeS.采用琼脂稀释法测定50株多重耐药鲍曼不动杆菌对环丙沙星、阿米卡星、头孢噻肟和亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC),并观察在含25μg/ml利血平条件下MIC值的变化程度.结果 50株多重耐药鲍曼不动杆菌adeB、adeR及adeS基因的携带率分别为94%、96%及92%.以环丙沙星、头孢噻肟、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有49、50、50和46株菌在含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上,呈现明显的外排作用.结论 主动外排机制是本地区鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一.     

鲍曼不动杆菌对主要抗菌药物耐药机制

从目前来看,鲍曼不动杆菌感染日益增多,同时,也会对许多抗菌药物产生一定的耐药情况.本文分别从鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗菌药物、甘氨环素及四环素类抗菌药物、喹诺酮类抗菌药物的耐药机制等方面进行探讨,具有一定的参考价值.     

鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性变迁

目的了解鲍曼不动杆菌在临床标本的分离率和病区分布及耐药性变化趋势。方法菌株鉴定采用法国梅里埃VITEK32细菌鉴定系统进行鉴定,药敏试验采用K-B法,药敏试验结果判定以CLSI/NCCLS标准进行。结果 2004-2010年共收到26670份标本,分离出阳性细菌7065株,其中鲍曼不动杆菌471株（6.67%）,分离率为1.77%（471/7065）。在471株鲍曼不动杆菌中,从痰液标本分离出最多有409株（86.83%）,分离率最高的是ICU,占49.3%。鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性普遍较高,且呈逐年升高趋势,部分表现出多重耐药特征。结论鲍曼不动杆菌的耐药状况日益严重,应重视临床鲍曼不动杆菌的感染与分离,谨防多重耐药鲍曼不动杆菌的院内感染及暴发流行。     

鲍曼不动杆菌armA基因的分布与耐药性的研究

目的 调查我院鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化基因armA的分布以及与鲍曼不动杆菌耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用.方法 收集72株鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,后采用PCR筛选鲍曼不动杆菌的16S rRNA甲基化基因armA,并利用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型.统计各鲍曼不动杆菌菌株对多种氨基糖苷类药物的药敏结果,并分析基因型与耐药性的关系.结果 根据PCR产物片段大小,72株鲍曼不动杆菌共有armA基因阳性菌株20株(27.8%).含有armA基因型鲍曼不动杆菌菌株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率均为90%;随机扩增多态性DNA法显示20株armA基因阳性的鲍曼不动杆菌主要分为7型,A型为优势克隆株.结论 产16S rRNA甲基化基因armA的鲍曼不动杆菌菌株可对多种氨基糖苷类抗生素高水平耐药.同一克隆菌株在病房内和病房间的传播为我院armA基因传播的主要方式.     

Multiple carbapenem hydrolyzing genes in clinical isolates of Acinetobacter baumannii

Purpose: Carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii has become highly rampant, which has been ascribed to the presence of multiple carbapenemases. The objective of the present study was to prospectively investigate the presence of multiple carbapenemase encoding genes in clinical isolates of A. baumannii. Materials and Methods: A total of 30 imipenem resistant, consecutive non-repeat clinical isolates A. baumannii from a Tertiary Care Centre of Delhi were subjected to antimicrobial susceptibility testing (AST), screening for carbapenemase production by modified Hodge test (MHT) and determination of minimum inhibitory concentration for imipenem by E-Test®. These were subjected to Real time PCR for bla_{IMP-1 and 2}, bla_{VIM-1 and 2}, bla_{OXA23, 24, 51 and 58} using SYBR green-I. These were grouped together on the basis of their genotype as each isolate harboured multiple carbapenemases and correlated with their AST profile. Detection of the novel carbapenemase bla_NDM-1 was performed by real time PCR using TaqMan probes on 14 isolates. Results: Colistin appeared to be the most effective drug in vitro, followed by tetracycline and beta lactam/beta lactamase inhibitor combinations. All, but one isolate were positive for the MHT. All 30 isolates were positive for bla_OXA-51 like gene as well as bla_IMP-1 and bla_VIM-1 genes. bla_{OXA 24 and 58} were not detected in any of the isolates. bla_IMP-2, bla_VIM-2, bla_OXA-23 were present in 15, 6 and 14 isolates respectively. Grouping based on the genotypic profile did not correlate with susceptibility pattern. Nine among the 14 isolates also harboured the novel bla_NDM-1 gene. Conclusions: This is the first study from North India, which comprehensively detected the presence of multiple carbapenemases as well the bla_NDM-1 gene. The presence of the novel gene bla_NDM-1indicated ability of A. baumannii to acquire new carbapenemase genes despite the existence of multiple carbapenemase genes. The present study confirmed the presence of multiple genetic mechanisms for carbapenemases production among the clinical isolates of A. baumannii in north India.     

Integron-mediated antibiotic multiresistance in Acinetobacter baumannii clinical isolates from Spain

Objective  To determine whether non-epidemiologically related, antibiotic-resistant isolates of Acinetobacter baumannii from different geographical origins posses common type 1 integrons.
Methods  The epidemiologic relationships between seven A. baumannii strains recovered from different Spanish hospitals were established by pulsed-field gel electrophoresis, the presence of integrons being determined by PCR and DNA sequencing.
Results  Integron analysis showed the presence of four different integrons, containing six different known genes ( aacC1, aacA4 , aadA1 , aadB , oxa21 and oxa37 ) plus an ORF. It was found that the same integron was present in different unrelated strains and that related strains could have different integrons.
Conclusion  These results show the potential risk of integron dissemination among different strains of A. baumannii .     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药分析及基因型研究

目的分析20株鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药性及对碳青霉烯酶基因的研究。方法用API鉴定条进行细菌鉴定及K-B法进行药敏试验,用碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增和基因型的测序分析,并通过网上Genbank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对左旋氧氟沙星、丁胺卡那霉素、多粘菌素B的耐药率分别为50%、25%、4%。其它抗生素的耐药率均在90%以上。携带D类碳青霉烯酶OXA-23基因有17株（85%）,携带OXA-51基因有15株（75%）,OXA-24、OXA-58基因引物PCR扩增为阴性,随机各抽取3株OXA-23基因阳性株进行测序后通过在网上Genbank比对发现与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-51标准株98%同源。结论本院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药率最低,其次是丁胺卡那霉素,以携带OXA-23型碳青霉烯酶基因为主,应引起临床高度重视,防止在院内广泛传播。     

重症监护病房环境与临床分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的REP-PCR分型研究

目的 调查上海市重症监护病房(ICU)环境中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的流行型别,并分析ICU的环境分离株与临床分离株的同源性.方法 对上海市21所医院ICU环境分离到的61株CRAB及其中一所医院(S医院)ICU临床分离到的14株CRAB,采用DiversiLab自动化重复序列(REP) -PCR分型系统,进行基因分型.结果 61株ICU环境分离的CRAB共分7型,其中G1型又分3个亚型,共46株细菌,占全部细菌的75.4％,分布于上海市的13所医院;G2、G3、G4、G5、G6和G7型分别为8株(13.1％)、2株(3.3％)、1株(1.6％)、1株(1.6％)、2株(3.3％)和1株(1.6％).在检出CRAB的13所医院中,除了D医院外,其他医院均分离到G1型CRAB.上海市S医院ICU共检出25株CRAB(14株临床株和11株环境株),分4型:其中G1型17株,为主要流行型别.由临床株和环境株的分布示意图显示:在外科ICU(SICU)中,环境株和临床株均以G1型为主,多个邻近床位病人检出G1型CRAB;心外科ICU(CICU)环境株以G1型为主,临床株以G2型为多,其中19床的病人及周围环境均检出G1型CRAB.结论 上海市ICU环境中普遍存在G1型CRAB流行株,各医院ICU环境中存在流行株交叉污染的现象,ICU临床分离的CRAB与环境分离株有较高的相关性.应加强ICU环境消毒和手卫生,防止医院感染的暴发和流行.     

Carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii: mechanisms and epidemiology

The increasing trend of carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii worldwide is a concern since it limits drastically the range of therapeutic alternatives. Metallo-beta-lactamases (VIM, IMP, SIM) have been reported worldwide, especially in Asia and western Europe, and confer resistance to all beta-lactams except aztreonam. The most widespread beta-lactamases with carbapenemase activity in A. baumannii are carbapenem-hydrolysing class D beta-lactamases (CHDLs) that are mostly specific for this species. These enzymes belong to three unrelated groups of clavulanic acid-resistant beta-lactamases, represented by OXA-23, OXA-24 and OXA-58, that can be either plasmid- or chromosomally-encoded. A. baumannii also possesses an intrinsic carbapenem-hydrolysing oxacillinase, the expression of which may vary, that may play a role in carbapenem resistance. In addition to beta-lactamases, carbapenem resistance in A. baumannii may also result from porin or penicillin-binding protein modifications. Several porins, including the 33-kDa CarO protein, that constitute a pore channel for influx of carbapenems, might be involved in carbapenem resistance.     

Trends in antimicrobial resistance of Acinetobacter baumannii clinical isolates from hospitalised patients in Greece and treatment implications

This study analysed the proportions of Acinetobacter baumannii isolates resistant to various antibiotics that were recovered from patients hospitalised in Greek hospitals between 1996 and 2006. The microbiological data were derived from the ongoing WHONET Greek System for the Surveillance of Antibiotic Resistance. There were increases in the proportions of A. baumannii isolates resistant to imipenem from patients hospitalised in intensive care units, medical wards and surgical wards during the study period from 0% to 91%, 8% to 71%, and 5% to 71%, respectively.