JAK-STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-кB（nuclear factor-кB, NF-кB）在H₂O₂预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-кB的调制。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Western blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（10 μmol/L）和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可抑制H₂O₂预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-кB介导的H₂O₂预处理的细胞保护作用。     

JAK-STAT通路调制NF-kB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的:探讨核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB)在H2O3预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-kB的调制.方法:在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300 μmol/LH2O2)损伤细胞的实验模型.应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blotting)测定NF-kB和STAT3的表达水平.结果:用100 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并明显地上调NF-kB和STAT3的表达,NF-kB抑制剂MG-132(10 μmol/L)和JAK2抑制剂AG-490(10 μmol/L)均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-kB表达的作用.结论:JAK-STAT通路调节NF-kB介导的H2O2预处理的细胞保护作用.     

ERK1／2-STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的:探讨ERKI/2一STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用.方法:在PCI2细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300 pmot/L H202)损伤细胞的模型.应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变;应用碘化丙啶(P1)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印记法(Western blotting)测定P-ERKI／2和P-STAT3的表达水平.结果:100μmol/L H2O2预处理PCI2细胞90 rain可明显抑制300μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并激活ERKl/2和STAT3;ERKI/2抑制剂U0126和JAK2抑制剂AG一490(10μmol/L)均可明显地阻断H2O2预处理引起的细胞保护作用;U0126(10μmol/L)亦能明显地抑制H2O2预处理对STAT3的上调作用.结论:H202预处理能激活PCI2细胞的ERKl/2-STAT3信号转导旁路,这可能是预处理的细胞保护机制之一.     

热休克蛋白参与NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用

目的探讨热休克蛋白(HSP)是否参与核因子-κB(NF-κB)介导的H2O2预处理的细胞保护作用。方法应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,免疫细胞化学染色法测定NF-κB的核转移。结果100μmol/LH2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300μmol/LH2O2引起的细胞凋亡,并可明显地上调PC12细胞NF-κB的表达及促进NF-κB的核转移,同时也能上调HSP70和HSP90的表达。NF-κB的抑制剂TPCK阻断NF-κB表达,并显著地阻断H2O2预处理的细胞保护作用及HSP70和HSP90的表达。结论HSP70和HSP90参与NF-κB介导的H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

Survivin在过氧化氢预处理诱导的适应性细胞保护中的作用

目的探讨H2O2预处理对存活素(survivin)表达的影响及存活素在H2O2预处理的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学改变,免疫印迹法(Westernblot)测定存活素的表达水平。结果用100μmol/LH2O2预处理PC12细胞90min可明显地抑制300μmol/LH2O2作用12h后引起的细胞毒性和细胞凋亡,并可以显著地上调PC12细胞存活素的表达;JAK2抑制剂AG-490不仅可以抑制存活素的表达,而且拮抗H2O2预处理的适应性细胞保护作用。结论存活素是JAK-STAT通路的靶基因,可能在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护机制中起着重要的作用。     

ERK1/2－STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的：探讨ERK1/2-STAT3通路在H₂O₂预处理导致的适应性细胞保护中的作用。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的模型。应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变；应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；免疫印记法(Western blotting) 测定p-ERK1/2和p-STAT3的表达水平。结果：100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可明显抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并激活ERK1/2和STAT3；ERK1/2抑制剂UO126和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可明显地阻断H₂O₂预处理引起的细胞保护作用；UO126（10 μmol/L）亦能明显地抑制H₂O₂预处理对STAT3的上调作用。结论：H₂O₂预处理能激活PC12细胞的ERK1/2-STAT3信号转导旁路，这可能是预处理的细胞保护机制之一。     

PI3K/AKT通路介导H_2O_2预处理减轻PC12细胞氧化损伤

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定AKT的表达。结果 100μmol H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300μmol H2O2引起的损伤,使细胞存活率从50.2%±4.6%升高至83.8%±3.5%,LDH活性由103%±10.2%下降至68.5%±5.3%,细胞凋亡率由65.5%±4.1%下降至37.1%±2.3%(P<0.01)。100μmol H2O2预处理诱导p-AKT的表达,PI3K抑制剂ly294002阻断了H2O2预处理引起的p-AKT表达。同时ly294002拮抗了H2O2预处理诱导的抗细胞损伤和凋亡作用。结论 H2O2预处理通过PI3K途径引起AKT的活化,PI3K/AKT通路的活化介导了H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。     

ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。     

Trx-1过表达通过NF-κB信号通路减轻MPP~+所致PC12细胞的氧化应激损伤

目的:探讨硫氧还蛋白1(Trx-1)过表达通过NF-κB信号通路减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化应激损伤的作用,探讨帕金森病的发病机制。方法:采用1、3和5 mmol/L MPP~+损伤PC12细胞,MTT法检测细胞活力,商用试剂盒检测细胞上清液中氧化应激指标乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测细胞中Trx-1蛋白的表达。以3 mmol/L MPP~+损伤PC12细胞,以含Ad-Trx-1-GFP序列的慢病毒感染建立Trx-1过表达的帕金森病细胞模型,采用MTT法、商用试剂盒和Western blot分别检测Trx-1过表达对PC12细胞活力、氧化应激反应和NF-κB信号通路的影响。给予NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA)作用于经MMP~+处理的P12细胞,观察激活NF-κB信号通路对PC12细胞活力和氧化应激反应的影响;给予NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)作用于Trx-1过表达的MPP~+损伤PC12细胞,观察Trx-1过表达通过NF-κB信号通路对PC12细胞活力和氧化应激反应的影响。结果:1、3和5 mmol/L MPP~+能够明显降低PC12细胞活力、细胞上清液中SOD活性和细胞内Trx-1蛋白的表达,升高细胞上清液中LDH活性和MDA含量,且3 mmol/L MPP~+和5 mmol/L MPP~+的作用明显大于1 mmol/L MPP~+(P0.05),而3 mmol/L MPP~+和5 mmol/L MPP~+间的差异无统计学显著性。Trx-1过表达能够明显减弱MPP~+对PC12细胞活力的抑制作用及其诱导的氧化应激损伤和NF-κB信号通路活化。NF-κB信号通路的激活促进了MPP~+对PC12细胞活力的抑制作用及其诱导的氧化应激损伤,而抑制NF-κB信号通路则增强了Trx-1过表达对MPP~+损伤的PC12细胞的保护作用。结论:Trx-1过表达可通过NF-κB信号通路减轻MPP~+作用下PC12细胞的氧化应激损伤。     

白桦脂酸对 H2O2 诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡影响 #br#

目的探讨白桦脂酸对 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和凋亡的影响。 方法PC12 神经细胞分成 Control、 Model (H2O2刺激)、 BA-L (1 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-M (2 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-H (4 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2 刺激)、 BA-H + PMA 组 (1 μmol / L 的白桦脂酸、H2O2 、 NF-κB 信号通路激活剂 PMA 刺激), CCK-8 方法分析细胞增殖活性变化, 流式细胞术分析细胞凋亡水平变化, Western 印迹分析细胞中 Bax、 Bcl-2、 P65 蛋白表达变化, 黄嘌呤氧化法检测 SOD 水平, 比色法检测 GSH-Px 水平、 硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平、 CellROX Green 荧光法检测 ROS 水平。 结果与 Control 组比较, Model 组 PC12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax 蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高, P65 蛋白水平升高。 与 Model 组比较,BA-L、 BA-M、 BA-H 组 PC12 神经细胞增殖活性逐渐升高, 细胞凋亡率逐渐降低, 细胞中 Bax 蛋白表达逐渐减少, Bcl-2 蛋白表达逐渐增加, SOD、 GSH-Px 活性逐渐升高, MDA、 ROS 水平逐渐降低, P65 蛋白水平逐渐降低。 与 BA-H 组比较, BA-H + PMA 组 C12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax、P65 蛋白表达增多, Bcl-2 蛋白表达减少, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高。 结论白桦脂酸通过下调 NF-κB 信号抑制 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。     

TLR4-TRPC6在LPS致16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)信号通路在细菌脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞16HBE内NF-κB P65表达和核转位的作用,为气道炎症的发生机制提供实验依据。方法:用LPS(1mg/L)作用16HBE细胞0、0.5、2、6、12和24 h后,分别使用RT-PCR和Western blot法检测核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB) P65的mRNA和蛋白表达情况,并用免疫细胞化学染色法检测NF-κB P65的核转位。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TLR4抑制剂CLI-095(5μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞NF-κB P65表达以及核转位的影响。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TRPC6激动剂Hyp9(10μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达以及核转位的影响。结果:LPS上调16HBE细胞NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TLR4抑制剂CLI-095抑制LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TRPC6激动剂Hyp9加重LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。结论:LPS通过TLR4-TRPC6信号通路诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位。     

SMYD2特异性抑制剂对高糖环境下大鼠肾成纤维细胞活化的影响及其机制

目的：明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖（HG）环境下大鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的影响并探索其可能机制。方法：采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞活力的影响。实验分组为正常糖（NG；含5.5 mmol/L葡萄糖）组、HG（含30 mmol/L葡萄糖）组、NG+LLY507(1.5μmol/L)组和HG+LLY507(1.5μmol/L)组，37℃培养48 h后收集各组细胞蛋白。采用Western blot实验检测SMYD2、组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、纤维连接蛋白（fibronectin）、I型胶原蛋白（Col I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB) p65、NF-κB p-p65、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3蛋白水平。结果：LLY507浓度低于1.6μ...     

MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达

目的 观察MAPK和NF-κB在经脂多糖（LPS）诱导的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）Toll-1ike受体4（TLR4）表达增强中的作用。方法 分离培养PMVECs。不同浓度的LPS与PMVECs共培养2h，或与LPS（100μg/L）作用不同时间。用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量。分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR4和TNF-α mRNA。用Western-blot检测ERK／P38MAPK和核蛋白NF-κB的表达。结果 在LPS浓度为50～500μg／L时，作用于PMVECs 2h，或LPS100μg/L作用不同时间时，培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加（P〈0．01）。PMVECs表达TNF-α及TLR4mRNA增加，6h时达高峰。分别用上述抑制剂均可缓解上述变化，而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用。上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK／P38MAPK和NF-κB蛋白增强。结论 MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达。     

外源性硫化氢通过抑制JAK/STAT通路对抗高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究外源性硫化氢(H_2S)能否通过调控Janus激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤。方法:Western blot法测定JAK2、STAT3、cleaved caspase-3的蛋白水平;CCK-8法检测细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(ROS)水平;超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测SOD活性。结果:应用400μmol/L硫氢化钠(NaHS,为H_2S的供体)预处理HUVECs 30 min能明显地抑制高糖(40mmol/L葡萄糖,HG)对p-JAK2和p-STAT3蛋白水平的上调作用。400μmol/L NaHS预处理30 min或20μmol/L JAK/STAT通路抑制剂AG490预处理30 min均能抑制高糖对HUVECs引起的损伤,使细胞存活率和SOD活性升高,cleaved caspase-3蛋白水平、ROS生成量及MMP丢失均减少。结论:外源性的H_2S通过抑制JAK/STAT通路保护HUVECs对抗高糖引起的损伤。     

探讨抑制NF-κB信号通路对TREM2表达的影响

目的通过抑制NF-κB信号通路,探讨其对原代培养小胶质细胞TREM2表达的影响。方法取新生C57BL/6小鼠大脑皮质和海马,进行原代培养,将培养至10 d的混合胶质细胞分离,纯化出小胶质细胞,将其分为空白组和1、2、4、6、8、10μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)组。继续培养24 h后,CCK8法检测小胶质细胞存活率筛选适宜PDTC浓度,Western blotting法检测小胶质细胞TREM2的表达。结果与空白组相比,给予NF-κB抑制剂后,原代培养的小胶质细胞表达TREM2的量显著增加(P0.01)。结论抑制NF-κB信号通路增加小胶质细胞TREM2的表达,进而可能有助于中枢神经系统中炎症的调控。     

血管紧张素(1-7)通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤。方法:CCK-8检测细胞存活率;Western blot法检测内皮细胞JAK2、STAT3、pJAK2、p-STAT3、cleaved caspase-3和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡数量;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞内活性氧簇(ROS)的水平。结果:应用高糖(40 mmol/L)处理HUVECs 12~48 h能明显上调JAK2的磷酸化水平,于24 h达最高峰;在24~48 h能明显上调STAT3的磷酸化水平,于36 h最高;在12~24 h能明显上调cleaved caspase-3的表达,在3~48 h随着时间延长,e NOS的表达逐渐降低。2μmol/L的Ang-(1-7)或20μmol/L的JAK/STAT通路抑制剂AG490预处理0.5 h可显著抑制由高糖引起的内皮细胞损伤,表现为p-STAT3、p-JAK2及cleaved caspase-3蛋白水平降低、细胞存活率及e NOS表达升高,细胞凋亡数量和胞内ROS生成减少。结论:Ang-(1-7)能通过抑制JAK/STAT通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤。     

Rab18通过JAK2/STAT3下调PLIN2并减少THP-1巨噬细胞脂质蓄积

目的：研究Rab18是否通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路下调脂滴包被蛋白2(PLIN2)表达,并影响人THP-1巨噬细胞脂质蓄积。方法：采用氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育人THP-1巨噬细胞不同时间（0、6、12和24 h）,用Western blot检测细胞内Rab18、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,使用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化。制备野生型、活化型和失活型Rab18巨噬细胞,予以ox-LDL孵育,Western blot和RT-qPCR检测细胞内Rab18、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,细胞免疫荧光技术观察巨噬细胞内p-JAK2和p-STAT3的核转位情况。用JAK2抑制剂AG490预处理活化型Rab18细胞,再用ox-LDL孵育该细胞,Western blot和RT-qPCR检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,细胞免疫荧光技术观察巨噬细胞中PLIN2的表达,油红O染色和GPO-PAP酶法观察细胞...     

西红花酸对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的通过H2O2诱导PC12细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,以探讨西红花酸对细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法观察不同浓度(0、50、100、200、300、400μmol/L)H2O2损伤PC12细胞12 h,用CCK-8检测细胞活力;不同浓度(0.1、1、5、10μmol/L)西红花酸预处理PC12细胞24 h,观察西红花酸对H2O2(200μmol/L)损伤细胞后的恢复作用,CCK-8检测细胞活力;罗丹明Rh123染色,流式检测线粒体膜电位(MMP);DCF-DA染色荧光照相术检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测磷酸化ERK1/2的表达情况。结果 H2O2(0～400μmol/L)作用PC12细胞12 h后,细胞活力分别为(100±4.1)%、(102±1.9)%、(89±11.2)%、(52±2.6)%、(42±1.6)%、(8±0.4)%,细胞损伤呈明显的浓度依耐性;西红花酸预处理后,细胞活力由(45.12±3.15)%,分别上升为(51.88±4.24)%、(65.14±8.19)%、(57.66±5.58)%、(53.61±4.57)%;西红花酸(1μmol/L、5μmol/L)预处理组减少了线粒体膜电位(MMP)的下降,有效清除活性氧(ROS),激活磷酸化ERK1/2。结论上述实验表明西红花酸能对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,表明西红花酸有抗氧化作用。     

H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应

目的研究H2O2诱导的PC12细胞（又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）氧化应激损伤中,热量限制（caloric restriction,CR）参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR＋H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞组织因子表达增强

目的: 研究同型半胱氨酸（Hcy）诱导人血管平滑肌细胞（VSMCs）组织因子（TF）表达的作用，及其对核转录因子（NF-κB）活性和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。 方法: 培养人脐动脉VSMCs，将不同浓度的Hcy和/或NF-κB抑制剂PDTC与VSMCs孵育不同时间，用RT-PCR方法检测TF mRNA表达，用Western blotting检测核NF-κB水平，用流式细胞术（FCM）检测细胞表面TF蛋白水平和iNOS水平。 结果: 10 μmol/L Hcy作用4 h，TF表达开始升高，500 μmol/L达峰值，Hcy能显著诱导VSMCs表达TF mRNA；对照组VSMCs细胞膜表面有低水平的TF蛋白表达，10 μmol/L Hcy作用4 h即可诱导VSMCs表达TF蛋白，500 μmol/L 达高峰，Hcy能显著诱导VSMCs表达TF；500 μmol/L Hcy作用1 h，细胞核NF-κB水平明显升高，Hcy可诱导VSMCs NF-κB活化;NF-κB抑制剂PDTC可明显抑制Hcy对TF mRNA和细胞TF表达的诱导作用；单独Hcy作用不能诱导VSMCs表达iNOS。 结论: Hcy能显著诱导VSMCs表达TF，增强VSMCs的NF-κB活化，从而介导TF基因表达和蛋白合成，通过NF-κB介导VSMCs表达TF可能是Hcy导致AS、血栓形成的重要机制。