Treg/Th17细胞轴与桥本甲状腺炎自身免疫的相关性

目的 探讨调节性T细胞(Treg)/Th17细胞轴的变化及与桥本甲状腺炎(HT)自身免疫的相关性.方法 流式细胞术检测40例HT患者(HT组)和31例健康对照者(NC组)外周血单个核细胞(PBMC)中Treg和Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR检测转录因子Foxp3、RORγt mRNA的表达水平,ELISA检测血清相关细胞因子TGF-β和IL-17A的含量,电化学发光免疫分析(ECLIA)检测甲状腺功能及甲状腺过氧化物酶抗体( TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度.结果 HT组PBMC中Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均明显低于NC组(均P＜0.01);Th17细胞比例、RORγtmRNA表达及Th17/Treg比值均明显高于NC组(均P＜0.01).HT组患者血清TGF-β的含量较NC组略低,但差异无统计学意义(P＞0.05);IL- 17A的含量较NC组显著升高(P＜0.01).HT组Th17/Treg比值与血清TPOAb、TgAb滴度均呈显著正相关(r=0.349、0.502,P=-0.037、0.002).结论 Th17/Treg细胞轴在不同程度HT中呈动态改变,并且与甲状腺自身抗体滴度正相关,说明Th17/Treg细胞亚群的失平衡可能参与了HT的自身免疫损伤.     

白头翁汤对溃疡性结肠炎患者Th17/Treg细胞失衡调节作用

目的:观察白头翁汤对溃疡性结肠炎患者Th17/Treg细胞失衡的调节作用,以探讨其治疗UC的可能机制。方法:将40例UC患者随机分为中药治疗组和西药对照组,分别给予白头翁汤内服外灌及口服美沙拉嗪缓释颗粒。采用流式细胞术检测UC患者外周血中Th17细胞、Treg细胞占总CD4+T细胞百分比并计算Th17/Treg比率,采用Western blot检测结直肠组织RORγt和Foxp3蛋白的表达。结果:白头翁汤治疗后Th17细胞比例及Th17/Treg较治疗前明显减少(P0.01),较西药对照组减少(P0.05);Treg细胞比例较治疗前明显增加(P0.01),较西药对照组增加(P0.01)。白头翁汤治疗后能下调RORγt表达(P0.01),上调Foxp3表达(P0.01)。结论:白头翁汤对溃疡性结肠炎患者有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高患者Treg细胞比例、降低Th17细胞比例,进而恢复机体Th17/Treg平衡,抑制肠道炎症有关。     

梅毒血清固定患者外周血中Th17/Treg细胞、Foxp3和ROR-γt的表达水平及相关性研究

目的 通过检测梅毒血清固定患者外周血Th 17/Treg细胞比例及其特异性转录因子叉头状转录因子3(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)的mRNA表达水平以及相关的细胞因子水平,探讨其与梅毒血清固定免疫机制的关系.方法 采集60例梅毒血清固定患者(观察组)和60例健康对照者(对照组)的外周血,分离单一核细胞(PBMCs),采用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞比例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)法检测Foxp3和ROR-γt的mRNA表达水平;采用ELISA法测定PBMCs上清液中IL-17和转化生长因子-β(TGF-β)水平.结果 观察组外周血中的Treg细胞比例[(9.68±1.54)％]、Foxp3的mRNA[(2.85±0.16)％]和TGF-3[(275.15±20.89) pg/ml]的表达水平明显高于对照组[(5.96±1.27)％、(1.96±0.14)％、(156.33 ±41.49) pg/ml];观察组中的Thl7细胞比例[(1.13±0.31)％]、ROR-γt的mRNA[(0.98±0.16)％]和IL-17的表达水平[(12.21 ±4.73) pg/ml]明显低于对照组[(1.98±0.17)％、(1.85±0.15)％、(18.98±6.89) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血中Treg和Th17细胞比例的变化、Foxp3和ROR-γtmRNA表达水平的异常与梅毒血清固定的免疫机制相关,梅毒血清固定患者可能存在Treg/Th17的失衡,且向Treg细胞漂移.     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+Foxp3+Treg/Th17细胞的变化及意义。方法:分别采用流式细胞术、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测15例急性乙型肝炎(AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、40例无症状携带者(AsC)及30例健康对照者外周血外周血Treg/Th17细胞百分率、核转录因3(Foxp3)/(RORγt)mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)/白细胞介素17(IL-17)的水平。结果:AHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异;而CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义。CHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义;与正常对照组相比,AsC组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异。结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞失衡可能与HBV感染的状态、结局有关。     

TIM-3介导免疫平衡失调与支气管哮喘发病的意义及机制研究

目的:探讨TIM-3介导免疫平衡失调与支气管哮喘发病的意义及机制.方法:选取2013年1月～2014年6月在本院呼吸科就诊并诊断为支气管哮喘患者及正常健康人设为实验组和对照组,各50例,收集外周血,流式细胞仪检测两组人群外周血中辅助性T细胞17(T helper 17,Th17)及调节性T细胞(regulatory T cell,Treg细胞)比例,并检测TIM-3表达改变,分析其与支气管哮喘发病的相关性;并阻断TIM-3表达,观察其对Th17及Treg细胞的影响.结果:Tim-3抑制前,实验组患者Th17、Treg细胞比例以及Th17/treg值均高于对照组患者,差异有统计学意义(P＜0.01);Tim-3抑制后,实验组患者Th17细胞比例和Th17/treg值仍高于对照组患者,差异有统计学意义(P＜0.01),而Treg细胞比例和对照组无显著差别(P＞0.01);Tim-3抑制前后,实验组患者Th17、Treg细胞比例以及Th17/treg值均有显著变化,差异有统计学意义(P＜0.01).相关性分析的结果表明外周血中Th17细胞比例同Treg细胞为负相关关系(r=-0.436,P＜0.05).实验组及对照组患者外周血中CD4+ Tim3+细胞占CD4+细胞比例分别是(5.22±0.95)％和(2.20±0.41)％,实验组显著高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01).对照组患者Th17细胞有少量Tim-3[(0.18±0.05)％]表达,实验组患者外周血中Th17细胞基本无Tim-3表达,两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:哮喘患者外周血中Th17细胞和Treg细胞比例失衡,可能为哮喘发生的重要诱导因素,Tim-3抑制后,实验组患者Th17细胞和Treg细胞比例有显著变化,暗示Tim-3的表达对这两种细胞数量有明显的调控作用.此外支气管哮喘患者外周血T淋巴细胞中TIM-3表达有显著增高.     

Treg细胞和Th17细胞在鼻咽癌中相关性的研究

目的:检测鼻咽癌患者外周血中Treg细胞与Th17细胞的比例以及相关细胞因子如IL-6、TGF-β1的变化.方法:选取我院鼻咽癌患者50例,另选取健康志愿者50例,鼻咽炎患者50例作为对照.采用流式细胞术检测外周血中Th17细胞和Treg细胞百分率,ELISA法检测血清中细胞因子TGF-β1、IL-6的水平,分析其相关性.结果:鼻咽癌外周血中Treg和Th17细胞占CD4+T细胞的比例均升高,与鼻咽炎组、正常对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05);且Treg细胞与Th17细胞呈正相关(P＜0.05);鼻咽癌外周血中TGF-β1、IL-6的水平均明显高于鼻咽炎组、正常对照组,均有显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌患者外周血Th17细胞、Treg细胞分别与血清中IL-6、TGF-β1水平呈正相关(P＜0.05).结论:鼻咽癌患者外周血中Treg、Th17细胞比例升高,且两者呈正相关;鼻咽癌患者患者血清中TGF-β1、IL-6水平升高,可能影响Treg与Th17细胞的平衡.     

终末期肾脏病患者外周血Th17、Treg细胞表达及其平衡关系的研究

目的 探讨终末期肾脏病患者外周血CD4+T淋巴细胞、Th17细胞及CD4+CD5+CD127-调节T细胞(Treg)变化及意义.方法 采用流式细胞术检测21例尿毒症患者(尿毒症组)、21例肾移植受者(移植组)和21例健康志愿者(对照组)外周血中Th17细胞和Treg细胞占CD4+T细胞的比例.结果 尿毒症组和移植组的Th17/CD4+T细胞的比例明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);尿毒症组和移植组的Treg/CD4+T细胞的比例明显低于对照组(P ＜0.01,P＜0.01);尿毒症组的Th17/Treg细胞的比值明显高于对照组(P＜0.05,P＜ 0.01).结论 尿毒症患者外周血中存在Th 17/Treg失衡,Th 17/Treg失衡可能参与了患者的免疫异常从而导致尿毒症的发生和发展.     

免疫性血小板减少症患者Th17/Treg细胞失衡与特异性转录因子表达异常

目的探讨Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常在免疫性血小板减少症(ITP)中的临床意义。方法入组ITP患者40例,应用流式细胞术(FCM)检测Th17与Treg细胞、RT-PCR技术检测Th17特异性转录因子ROR-γt和Treg特异性转录因子Foxp3表达水平以及Aim Plex流式高通量技术检测Th17细胞因子IL-17A与IL-22以及Treg细胞因子TGF-β与IL-10水平。20例健康者作为正常对照组。结果与对照组相比较,ITP组Th17、Treg与Th17/Treg比值均显著降低(P 0.05),Th17细胞因子IL-17A与IL-22表达水平均显著升高(P 0.05),Treg细胞因子TGF-β与IL-10表达水平均显著降低(P 0.05)。Th17特异性转录因子ROR-γt与Treg特异性转录因子Foxp3表达水平均显著升高(P 0.05)。结论 ITP患者存在Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常,反应了ITP患者机体免疫功能紊乱。     

从Th17和CD4+CD25+Foxp3+T细胞功能变化探讨肺结核的耐药机制

目的 分析耐药肺结核患者外周血Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例及细胞因子的变化,从免疫学角度探讨其耐药机制。 方法 分别选取33例耐药肺结核(耐药组)、49例普通肺结核(普通组)及51例健康志愿者(对照组)展开对比研究。检测Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例;采用RT-PCR检测其特异性转录因子RORγt与Foxp3的mRNA表达水平;采用ELISA实验检测IL-17A、IL-17F、TGF-β1及IL-10的血清水平。 结果 普通组Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例和Foxp3 mRNA表达水平高于对照组,耐药组高于普通组;普通组Th17/CD4+CD25+Foxp3+T和RORγt/Foxp3低于对照组,耐药组低于普通组(P＜0.05)。普通组IL-17A、IL-17F水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组TGF-β1、IL-10水平高于对照组,耐药组高于普通组;其组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 Th17/CD4+CD25+Foxp3+T平衡向CD4+CD25+Foxp3+T偏移、免疫系统功能抑制,可能是结核病慢性化和产生耐药的重要机制之一。      

胃癌患者Th17/Treg细胞失衡的研究

目的 检测Th17和Treg细胞在胃癌患者外周血中的分布,探讨Th17/Treg细胞免疫平衡与胃癌发生发展的关系。方法 选取2010年7月—2011年9月河北医科大学第四医院住院的胃癌患者45例作为病例组,另选取同期本院健康体检者20例作为对照组。取受试者外周血5 ml,分离单个核细胞,采用流式细胞分析技术检测CD+4CD+25Foxp3+和CD+4IL-17+细胞的表达,以产生IL-17的CD+4T为Th17细胞,以CD+4CD+25Foxp3+细胞为Treg细胞,检测Th17和Treg细胞的数量和比例。结果 流式细胞术检测结果显示,病例组外周血Th17细胞比例、Treg细胞比例、Th17/Treg均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组中,外周血Th17细胞比例与Treg细胞比例呈正相关（r=0.64,P=0.003）;病例组中,外周血Th17细胞比例与Treg细胞比例无直线相关性（r=0.12,P=0.490）。多元线性回归分析结果显示,Th17细胞比例升高与TNM分期（P=0.002）、淋巴结转移（P=0.017）有关;Treg细胞比例升高与TNM分期（P=0.034）、分化程度（P=0.015）有关;Th17/Treg升高与淋巴结转移有关（P=0.036）。结论 胃癌患者Th17、Treg细胞比例及Th17/Treg明显增高,并与患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关,提示胃癌患者存在Th17/Treg细胞免疫平衡失调,这种失调可能促进了胃癌的进展。     

养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究

  目的  研究养阴清热方(YHF)对脂多糖(LPS)导致的小鼠Treg/Th17失衡的影响及机制。  方法  磁珠分选法提取小鼠脾脏CD4+ T细胞, 用LPS刺激CD4+ T细胞, 再以1、2、4 mg · mL-1的YHF水提液分别进行干预。MTT法检测细胞增殖情况; 流式细胞术检测CD4+ T细胞亚群Treg/Th17比例; ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70的含量; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Foxp3、RORγt及信号分子JAK/STAT的表达。  结果  HPLC检测鉴定出YHF水提液中8种有效成分, 分别为羟基红花黄色素A、虎杖苷、芦丁、2, 3, 5, 4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、白藜芦醇、槲皮素、大黄素和姜黄素。YHF水提液可以剂量依赖性地抑制LPS刺激的小鼠CD4+ T细胞的增殖(P < 0.05), 增加Treg的比例(P < 0.05), 降低Th17的比例(P < 0.01), 促进培养上清中Treg相关的抗炎因子IL-10和TGF-β的分泌, 抑制Th17相关的致炎因子IL-6和IL-12p70的分泌。1、2、4 mg · mL-1 YHF均能增加Foxp3蛋白的表达(P < 0.05), 减少RORγt蛋白的表达(P < 0.01)。1、2、4 mg · mL-1 YHF均能降低JAK2、STAT3及其磷酸化蛋白的表达(P < 0.05)。4 mg · mL-1 YHF与JAK2特异性抑制剂AG490联用可以增加培养上清IL-10和TGF-β含量(P < 0.05), 降低IL-6和IL-12p70含量(P < 0.05), 而且可以显著降低p-JAK2、p-STAT3和RORγt蛋白表达(P < 0.01,P < 0.001), 增加Foxp3蛋白表达(P < 0.01)。  结论  YHF可以有效抑制LPS诱导的小鼠CD4+ T细胞增殖, 通过抑制JAK2和STAT3信号分子表达, 增加Foxp3的表达和Treg数量, 减少RORγt的表达和Th17数量, 调节Treg/Th17平衡及抗炎细胞因子和促炎细胞因子的分泌。      

异基因造血干细胞移植患者外周血CD4+ T细胞中STAT3启动子区 DNA甲基化水平与急性移植物抗宿主病的关系

目的：探讨异基因造血干细胞移植患者外周血CD4+ T细胞中STAT3启动子区DNA甲基化水平与急性移植 物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的关系。方法：收集行同胞全相合异基因造血干细胞移植的40例患 者的血液样本,ELISA检测各组患者血清IL-10,TGF-β1,IL-17A,IL-17F等细胞因子水平;实时定量PCR检测各组患 者外周血CD4+ T细胞中Treg(Foxp3,CTLA4,IL-10,TGF-β1)和Th 17(RORγt,IL-17A,IL-17F)相关基因的转录水平; 实时定量PCR和Western印迹检测各组患者STAT3的表达水平;亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP) 法检测各组患者STAT3基因启动子区DNA甲基化水平。结果：与未发生aGVHD患者比较,aGVHD患者血清中IL-10 及TGF-β1水平明显降低,IL-17A及IL-17F水平明显升高;aGVHD患者外周血CD4+ T 细胞中Foxp3,CTLA4,IL-10, TGF-β1转录水平明显降低,RORγt,IL-17A,IL-17F转录水平明显升高;aGVHD患者外周血CD4+ T细胞中STAT3的表 达水平明显升高,STAT3启动子区DNA甲基化水平明显降低,且STAT3表达水平与其启动子区DNA甲基化水平呈明显 负相关。结论：Treg/Th17的比例失衡是异基因造血干细胞移植后患者发生aGVHD的重要因素,STAT3启动子区DNA 低甲基化可能介导STAT3的过度表达,参与Treg/Th 17的比例失衡。     

壮骨止痛胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Treg／Th17平衡的调节作用

目的从骨组织调节性T细胞/辅助性T细胞(Treg/Th17)平衡角度探讨壮骨止痛胶囊抗绝经后骨质疏松作用机理。方法 72只8月龄SD雌鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(0.21 mg/kg),壮骨止痛胶囊高剂量组(1.28 g/kg)、中剂量组(0.64 g/kg)和低剂量组(0.32 g/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组去卵巢复制绝经后骨质疏松动物模型。术后1周开始给药,连续给药18周,最后一次给药1 h后处死,快速取左股骨检测雌二醇(E2)、白细胞介素17A(IL-17A)、白细胞介素10(IL-10),取右股骨RT-PCR检测维甲酸相关孤体受体γt(RORγt)、叉状头转录因子(Foxp3)、IL-17A、IL-10 mRNA的表达,取左胫骨病理切片免疫组化染色检测表达RORγt、Foxp3的细胞百分数。结果壮骨止痛胶囊能显著升高去卵巢雌鼠骨组织E2、IL-10水平(P0.01),降低骨组织IL-17A水平(P0.05);显著增强骨组织Foxp3、IL-10 mRNA的表达(P0.05),显著抑制骨组织RORγt、IL-17A mRNA的表达(P0.01或P0.05);显著增加骨组织内表达Foxp3的细胞百分数(P0.05),下调表达RORγt的细胞百分数(P0.05)。Foxp3阳性细胞百分数与RORγt阳性细胞百分数比值与E2水平呈正相关(r=0.990 5,P0.01)。结论壮骨止痛胶囊通过抑制去卵巢雌鼠骨组织Th17细胞数量和功能活动,增加骨组织Treg细胞数量并增强其活动而调节骨组织Treg/Th17平衡,该调节作用可能部分通过提高去卵巢雌鼠体内E2水平而实现。     

慢性心衰患者 Th1与 Th2型细胞及 Treg细胞的表达

目的探讨Th1、Th2型细胞及Treg细胞在慢性心衰发病中的作用机制。方法采用RT-PCR技术检测62例慢性心衰患者和42例正常人外周血单个核细胞中T—bet、GATA-3及Foxp3mRNA的表达水平;ELISA法检测血浆中Th1／Th2型细胞因子IFN-γ／IL-4水平。结果慢性心衰患者T-bet表达水平高于正常对照组,GATA-3及Foxp3表达水平低于正常对照组（均P〈0．05）。慢性心衰组患者血浆中IFN-γ水平及IFN-γ／IL-4高于对照组（均P〈0．01）。结论慢性心衰患者T-bet／GATA-3及IFN-γ／IL-4升高,Foxp3降低,提示Th1细胞亚群表达升高,Th2型细胞及CD4＋、CD25＋调节性T细胞减少,细胞免疫异常可能参与慢性心衰的发病机制。