急性白血病及骨髓增生异常综合征患者p15基因甲基化模式改变及其意义

ｐ15基因是位于染色体 9ｐ2 1的一个抑癌基因 ,其编码产物ｐ15蛋白可抑制细胞周期素依赖性激酶ＣＤＫ4 6 ,使Ｒｂ蛋白磷酸化受阻 ,从而阻止细胞由Ｇ1 期进入Ｓ期。ｐ15基因的失活可导致细胞增殖失控 ,与某些肿瘤的发生有关[1 ] 。但近年研究发现 ,在某些恶性血液病 ,如急性白血病 (ＡＬ)中 ,ｐ15基因失活的主要原因并非基因缺失或突变 ,而是启动子区的异常高甲基化[2 4] ;有显著白血病转化倾向的骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)中亦发现ｐ15基因甲基化异常[5,6] 。为探讨ｐ15基因甲基化异常与ＡＬ发病及ＭＤＳ向白血病转化的关系 ,我们采用甲…     

INK4及其基因与血液系统恶性肿瘤研究进展

自从 1994年发现ｐ16基因 (ＩＮＫ4基因家族成员 )在众多肿瘤中缺失后 ,ＩＮＫ4基因已成为对抑癌基因研究的热点。我们对近几年来ＩＮＫ4、ＩＮＫ4基因失活及其与血液系统恶性肿瘤关系的研究进展综述如下。1　ＩＮＫ4概述1.1　ＩＮＫ4概念、结构及生理功能 :ＩＮＫ4(ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＣＤＫ4)是细胞周期素依赖性激酶抑制物 (ＣＤＩ)的一类。ＣＤＩ与细胞周期素 细胞周期素依赖性激酶复合物 (ＣＤＫ ｃｙｃｌｉｎ)结合而抑制细胞通过细胞周期监测点 ,导致周期阻抑。据氨基酸序列同源性将ＣＤＩ分为两类 :①ｐ2 1ＷＡＦ ＣＩＰ1 类 ,包…     

转导p16cDNA对Jurkal细胞的生长抑制作用

Ｐ16(ＭＴＳ1ＣＤＫＮ2)蛋白是细胞从Ｇ1期向Ｓ期转换的主要抑制因子,许多白血病细胞ｐ16基因缺失,尤其是急性Ｔ淋巴细胞白血病(ＴＡＬＬ),缺失率可达83%[1]。提示ｐ16基因与ＴＡＬＬ的发生、发展有关。我们构建了ｐ16的逆转录病毒载体,体外转导缺失ｐ16的Ｔ淋巴细胞白血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ,以探讨ｐ16对Ｔ淋巴细胞白血病的治疗作用。材料和方法1　细胞培养　Ｊｕｒｋａｔ细胞由中国医学科学院基础医学研究所吴宁华教授惠赠,文献报道和实验均证明其ｐ16基因纯合性缺失,Ｒｂ基因正常表达[2]。双嗜性包装细胞ＰＴ67购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司…     

共转染抑癌基因p16、p53对白血病细胞株HL-60及K562的抑制作用

人类髓系白血病细胞株ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2同时有ｐ16、ｐ5 3抑癌基因的缺失[1,2 ] 。已有研究将正常的ｐ5 3或ｐ16基因单独导入这两种细胞 ,可以不同程度地抑制肿瘤细胞的生长[1,2 ] 。如果同时将缺失的ｐ16、ｐ5 3两种基因导入ＨＬ 6 0及Ｋ5 6 2细胞中 ,可能有更好的抑制作用。材料和方法1　质粒与试剂　含野生型ｐ16ｃＤＮＡ的质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｐ16由ＧｏｒｄｏｎＰｅｔｅｒｓ教授 (ＩｍｐｅｒｉａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄ .Ｌｏｎｄｏｎ)惠赠 ,含野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ的质粒ｐＣ5 3 ＳＮ3及真核表达载体ｐＣＮｅ…     

胃癌及非典型增生中p16蛋白表达的定量分析

抑癌基因ｐ16定位于染色体 9Ｐ2 1,全长 8.5ｋｂ ,由2个内含子和 3个外显子组成。 3个外显子共同编码分子量为 15.84ｋｂ ,,由 148个氨基酸组成的单链多肽- ｐ16蛋白。ｐ16蛋白能与细胞周期素Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)竞争性结合细胞周期依赖性蛋白激酶 (ＣＤＫ4 )而调节细胞周期。当ｐ16蛋白与ＣＤＫ4 结合时 ,抑制细胞从Ｇ1期向Ｓ期转化 ,阻止细胞生长繁殖 ,起着负调节作用[1～ 3] 。本实验运用免疫组化方法及图像定量分析法对 150例标本进行了分析 ,以探讨 ｐ16蛋白表达量在胃癌发生发展过程中的意义。1　材料和方法1.1　标本来源　所有病例…     

外源性野生型p53基因对HL-60细胞的作用

野生型ｐ5 3基因是一种肿瘤抑制基因 ,急性髓系白血病(ＡＭＬ)患者伴有 17号染色体异常 [ｉ(17ｑ) ]者ｐ5 3基因点突变的发生率可高达 40 %。大多数ＡＭＬ细胞系 ,如ＨＬ 6 0、ＣＭＫ、ＭＬ 1、Ｕ937均可检出ｐ5 3基因严重缺失或者突变[1,2 ] 。我们利用脂质体介导法将两种ｐ5 3基因ｐＣ5 3 ＳＮ3(含人野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ)、ｐＮ5 3ｃＧ(Ｖａｌ135 ) (32 .5℃表现野生型ｐ5 3基因功能 )分别导入Ｐ5 3蛋白缺失的ＨＬ 6 0细胞中 ,观察它的表达及其对ＨＬ 6 0细胞的影响。材料和方法1　细胞系及培养体系　ＨＬ 6 0细胞由福建省医学科学研究…     

5—氮—2‘脱氧胞嘧啶诱导Molt4细胞系p15基因表达的研究

大量的研究证明,ｐ15基因的启动子ＣｐＧ岛甲基化以后可抑制其基因的表达,导致白血病及其它肿瘤的发生[1]。我们研究了去甲基化药物5氮2′脱氧胞嘧啶(5ａｚａｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ,ＣｄＲ)作用于急性淋巴细胞白血病细胞后ｐ15基因的表达,以及其对细胞生长、细胞周期的影响。材料和方法1　材料　ＣｄＲ购自美国Ｓｉｇｍａ公司,用含氯化钠的磷酸缓冲液(ｐＨ6.8)配制成储备液,-80℃保存。应用终浓度为25μｍｏｌＬ。ＭＬＶ、ＴｒｉｚｏｌＷｉｚａｒｄＤＮＡ树酯纯化柱均为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品,蛋白酶Ｋ为Ｍｅｒｃｏ公司产品,逆转录聚…     

非霍奇金淋巴瘤p27kip1、p57kip2及细胞周期蛋白D1的表达及其临床意义

ｐ2 7ｋｉｐ1ｐ5 7ｋｉｐ2 均为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(ＣＤＫＩ)Ｋｉｐ家族成员 ,它们的过度表达可使细胞停止在Ｇ1期 ,防止细胞过度增殖 ,是两个新的抑癌基因 ,参与人体多种恶性肿瘤细胞增殖和分化调控。细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)是Ｇ1期相关的细胞周期蛋白之一 ,它促进Ｇ1→Ｓ期的转变而使细胞持续增殖 ,被认为是一种原癌基因[1] 。我们通过观察ｐ2 7ｋｉｐ1、ｐ5 7ｋｉｐ2 及ｃｙｃｌｉｎＤ1在非霍奇金淋巴瘤 (ＮＨＬ)中的表达情况 ,分析其与临床病理的关系和对治疗与预后的影响。材料和方法1　病例　收集 1990～ 2 0 0 …     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

p15^INK4B基因甲基化在急性普细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究

为探索ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＣｐＧ岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用,应用敏感的甲基化特异的ＭＳＰ－ＰＣＲ的测定方法,测定了ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）和慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中甲基化的表达变化,研究结果表明,ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因操纵区在ＡＭＬ和ＣＭＬ中的甲基化发生率分别为８３．９％（２６／３１）和０％（０／２８）。结论提示：甲基化是ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因在ＡＭＬ中主要的失活方式之一,并可在病程进展中出现甲基化,使病情加重,在ＣＭＬ中无基化的发生,说明ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ基因的功能在ＣＭＬ中可能是完整的。     

多肿瘤抑制基因p16及其家族的研究进展

癌基因和抑癌基因是近几年肿瘤分子生物学研究的热点。特别是抑癌基因对于细胞周期的调控、维持细胞遗传稳定性和正常增殖起着重要作用 ,因其突变缺失可导致细胞周期失控 ,进而引起正常细胞癌变[1] 。本文就新的抑瘤基因ｐ16作一综述。1　ｐ16的发现　　 1993年 8月 ,Ｘｉｏｎｇ[2 ] 等在进行ＤＮＡ肿瘤病毒ＳＶ40转化人成纤维细胞时 ,首次发现了一个与周期素依赖激酶 (ＣＤＫ)有关的 16Ｋｄａ蛋白质。其特点是①在没有调节周期素存在时 ,具有与催化亚单位ＣＤＫ结合的能力 ,这是与ＣＩＰ/ＫＩＰ家族的不同之处 ;②ｐ16表达与ｐＲｂ状态有关…     

p16抑癌基因敲除小鼠髓系细胞增殖特性的研究

最近大量资料显示 ,周期蛋白依赖激酶抑制剂 (ＣＤＫＩ)家族成员之一Ｐ16蛋白竞争性地与周期蛋白依赖性激酶 4(ＣＤＫ4)结合 ,在细胞周期中起着重要的负调节作用[1 ] 。许多研究显示ｐ16外显子纯合缺失在慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)淋巴细胞急变患者中阳性率为 5 0 % [2 ] 。我们对ｐ16基因敲除(ｐ16 - - )小鼠骨髓细胞所建立的细胞系进行了细胞增殖特性的研究。现将结果报告如下。材料和方法1　ｐ16 - -小鼠　ｐ16 - -和野生型 (ＷＴ ,ｐ16 + +)小鼠由英国帝国理工大学动物研究中心提供。ｐ16 - -小鼠由Ｓｅｒ ｒａｎｏ实验室[3 ] 提供…     

白血病等恶性血液病中p15基因甲基化的检测及临床意义

p15基因位于染色体 9p2 1,是一种肿瘤抑制基因 ,其编码产物p15蛋白特异地抑制细胞周期素依赖激酶 4 6 (CDK4 6 ) ,使细胞不能通过G1 期和S期间的监测点 ,从而停留在G1 期。血液系统恶性肿瘤有高频率的p15基因失活[1 ] ,研究发现 5′启动子及转录启始区域内的CpG岛的异常甲基化是p15基因的主要失活方式[2 ] 。Herman等[3] 研究出甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。对象和方法1　研究对象　急性白血病患者共 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 14～ 76岁 ,均符合FAB诊断和分型标准 ;其中初治或…     

多发性骨髓瘤中p15^INK4B和p16^INK4A基因高基化的检测

为探索ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ和ｐ１６＾ＩＮＫ４Ａ基因的多发性骨随瘤中的甲基化的表达,采用敏感的甲基化特异的ＭＳＰ－ＰＣＲ测定方法,检测了２４例多发性骨髓瘤（ＭＭ）ｐ１５＾ＩＮＫ４Ａ基因甲基化的情况。结果显示,ＭＭ中ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ和ｐ１６＾ＩＮＫ４Ａ基因甲基化发生率分别为７０．８％（１７／２４）和５８．３％（１４／２４）,产物分别为１４８ｂｐ和１５０ｂｐ的片段,其中２例ＩＩ期和２例ＩＩＩ期的有浆细胞瘤的ＭＭ患发生２个基因同时甲基化,有５例２个基因都滑有发生甲基化,这５例的瘤分化较成熟的小浆细胞。结论提示,ｐ１５＾ＩＮＫ４Ｂ和ｐ１６＾ＩＮＫ４Ａ基因甲基化在ＭＭ细胞中有一定的发生率,可能与ＭＭ发病机制有关。     

p16^INK4a、p19^ARF、p15^INK4b基因及其在急性T淋巴细胞白血病中的研究进展

p16^INK4a、p19^ARF、p15^INK4b基因是位于染色体9p21的相邻基因。它们均为肿瘤抑制基因，但是它们的肿瘤抑制机理各不相同。已发现在急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）中其失活率很高。且它们的失活与T细胞的TCR重排有关。本对近年来p16^INK4a、p19^ARF、p15^INK4b结构与功能及其在T-ALL中的改变的研究进展作一综述，以阐明它们对T-ALL的发生与发展有极其重要的作用。     

细胞周期蛋白E与白血病

白血病细胞的细胞周期存在异常调节。细胞周期蛋白(ｃｙｃｌｉｎ)与细胞周期蛋白依赖激酶 (ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ,ＣＤＫ)结合 ,形成细胞周期调节复合物 (ｃｙｃｌｉｎ ＣＤＫ) ,激活ＣＤＫ ,使ｃｙｃｌｉｎ ＣＤＫ具酶活性 ,催化相应底物磷酸化是细胞周期进展所必需。ｃｙｃｌｉｎＥ属于Ｇ1期细胞周期的正调节因子 ,参与Ｇ1/Ｓ转换点功能的调控 ,与其他参与Ｇ1/Ｓ转换点功能调控的因子ｃｙｃｌｉｎＤＳ、抑癌基因视网膜神经胶质细胞瘤蛋白(ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａｐｒｏｔｅｉｎ ,ｐＲｂ)、转录因子Ｅ2Ｆ、抑…     

p16INK4a、p19ARF、p15INK4b基因及其在急性T淋巴细胞白血病中的研究进展

p16INK4a、p19ARF、p15INK4b基因是位于染色体9p21的相邻基因.它们均为肿瘤抑制基因,但是它们的肿瘤抑制机理各不相同.已发现在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中其失活率很高.且它们的失活与T细胞的TCR重排有关.本文对近年来p16INK4a、p19ARF、p15INK4b结构与功能及其在T-ALL中的改变的研究进展作一综述,以阐明它们对T-AlL的发生与发展有极其重要的作用.     

血液系统恶性肿瘤p16基因甲基化研究

多种肿瘤抑制因子１基因（ＭＴＳ１／ｐ１６）是１９９４年Ｋａｍｂ等［１］克隆出的一种新的抑癌基因，其失活以纯合子缺失及甲基化为主，而点突变则极少见。为进一步探讨血液系统恶性肿瘤ｐ１６基因失活的发生率及其与疾病的发生、发展、预后的关系，我们对１９９５～１...     

p16、CyclinD1及nm23在非小细胞肺癌中的表达

目的 研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３基因蛋白的表达和意义。方法 应用免疫组化ＳＰ方法检测６４例ＮＳＣＬＣ中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３蛋白的表达。结果 ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ中的表达率分别为４２．２％、６５．６％、５３．１％;ｐ１６蛋白阳性表达率与ＮＳＣＬＣ的分化程度和患者术后生存期呈正相关（Ｐ〈０．０５）;ｐ１６、ｎｍ２     

逆转录病毒介导p16基因转移引起K562白血病细胞系的增 …

为探讨ｐ１６基因对白血病细胞增殖的影响,为白血病发生机理的研究和ｐ１６的基因治疗提供实验依据,我们构建了ｐ１６的逆转录病毒载体ｐＬＭＳＮ,新型双嗜性包装细胞ＰＴ６７和单嗜性包装细胞Ψ２包装后,体外转导ｐ１６基因缺失的Ｋ５６２细胞。用ＲＴ－ＰＣＲ与荧光免疫法检测外源性Ｐ１６蛋白的表达,流式细胞术测定细胞周期,活细胞计数观察细胞增殖情况,进行软琼脂集落形成实验。结果表明,转导后Ｋ５６２－ｐ１６细胞中可