紫草素对糠秕马拉色菌作用下HaCaT细胞增殖的影响及其对缺氧诱导因子1α表达的调控

目的:观察紫草素对糠秕马拉色菌作用下角质形成细胞增殖的作用及其对缺氧诱导因子1α（hypoxic-inducible factor-1α,HIF-1α）蛋白及mRNA的作用,探讨紫草素通过抑制低浓度糠秕马拉色菌上调皮肤角质细胞的增殖与HIF-1α信号在银屑病中的可能机制。方法：培养人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞及糠秕马拉色菌,适合浓度糠秕马拉色菌诱导HaCaT细胞增殖,CCK-8法观察细胞增殖、蛋白免疫印迹法（Western Blotting）及实时荧光定量PCR(RT-PCR)法分别检测HIF-1α的蛋白及mRNA表达情况。结果：低浓度糠秕马拉色菌浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖（P<0.01）;紫草素抑制低浓度糠秕马拉色菌对HaCaT细胞的促增殖作用（P<0.01）;紫草素抑制低浓度糠秕马拉色菌对HaCaT细胞HIF-1α蛋白及mRNA表达的作用（P<0.01）。结论：低浓度糠秕马拉色菌通过HIF-1α信号通路上调皮肤角质形成细胞的增殖能力;紫草素拮抗低浓度糠秕马拉色菌上调皮肤角质形成细胞的增殖可能与抑制HIF-1α信号通路有关。     

地塞米松对HaCaT细胞核因子-κB/IκB表达的影响

目的:探讨地塞米松对角质形成细胞核因子(NF)-κB活性及其抑制蛋白(IKB)α表达的调节作用.方法:采用反转录-荧光实时定量PCR和蛋白印迹试验.观察经不同浓度及不同时间的地塞米松作用下.培养的人角质形成细胞HaCaT细胞的IκBα mRNA和蛋白质的表达;用蛋白印迹试验检测NF-κB核蛋白的表达情况.结果:地塞米松可诱导HaCaT细胞IKBα的表达而抑制NF-κB核转位,此作用呈浓度依赖性效应,在36 h时作用最明显.结论:糖皮质激素通过调控人角质形成细胞NF-κB/IκB信号通路.可抑制皮损局部的炎症反应.     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响.方法 用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平.结果 不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48 h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18.9％、23.7％、35.1％、44.6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).罗格列酮处理HaCaT细胞后,β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调.结论 罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关.     

降钙素基因相关肽对HaCaT细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的 研究降钙素基因相关肽对体外培养角质形成细胞HaCaT株神经型一氧化氮合酶(NOS)mRNA、蛋白表达和NO释放的调节作用。方法 应用NO试剂盒(酶法)检测培养细胞上清液中NO水平,RT-PCR和免疫组化(SP)方法检测HaCaT细胞神经型NOSmRNA和蛋白的表达水平。结果 体外正常培养的HaCaT细胞表达和释放基础水平的神经型NOS和NO,降钙素基因相关肽上调HaCaT细胞神经型NOS表达和NO释放,降钙素基因相关肽受体抑制剂CGRP-8-37抑制降钙素基因相关肽的作用。结论 降钙素基因相关肽诱导角质形成细胞表达神经型NOS并促进神经型NO释放。     

3种糖皮质激素对HaCaT细胞核因子-κB/抑制蛋白IκBα调节的比较

目的:比较3种不同糖皮质激素对角质形成细胞的核因子(NF)-kB/IkBα调节效应的差异.方法:将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松组、地塞米松组、倍他米松组,采用反转录(RT)-PCR和蛋白印迹试验检测各组HaCaT细胞的IkBα mRNA和蛋白质表达,用蛋白印迹试验检测NF-kB核蛋白的表达情况.结果:3种糖皮质激素均具有诱导HaCaT细胞IkBα的表达而抑制NF-kB核转位的作用,其中氢化可的松作用最弱,地塞米松与倍他米松无明显差异.结论:不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞NF-kB/IkBα的调节效力不同.提示临床上正确选用不同效力糖皮质激素外用制剂的必要性.     

银屑病患者皮损中诱生型一氧化氮合酶mRNA、热休克蛋白70和细胞周期蛋白D1的表达

一氧化氮 (NO)作为小的气体分子有多种活性,热休克蛋白（ heat shock proteins, HSPs ）可保护细胞之间平衡,细胞周期蛋白 D1（ cyclinD1）是哺乳动物 G1期的限速控制器。 Sirsj等发现诱生型一氧化氮合酶（ iNOS）在银屑病皮损中过表达,为探讨iNOS过表达是由于银屑病表皮角质形成细胞摄取外源性 iNOS还是角质形成细胞自身产生合 成,并且作为与炎症和免疫调节有关以及和细胞增生有关的 iNOS、 HSP70、 cyclin D1在 银屑病皮损中表达情况和相互关系,我们研究了银屑病皮损中 iNOSmRNA、 iNOS、 HSP70和 cyclin D1的表达…     

地塞米松和他克莫司对HaCaT细胞热休克蛋白90表达影响的研究

目的:比较地塞米松和他克莫司对HaCaT 细胞热休克蛋白90(HSP90)表达的影响,并探讨其潜在的临床意义.方法:以含10-6 mol/L 地塞米松或10-6 mol/L 他克莫司的DMEM(高糖)培养基培养细胞,在24 h 和48 h 的不同时相点,采用Real timePCR和Western blotting 检测HSP90 的表达.结果:地塞米松作用24 h 后,HSP90 mRNA和蛋白表达水平均升高,48 h 后进一步升高(P ＜ 0.05);而他克莫司作用于HaCaT 细胞后的不同时相点,HSP90 mRNA 和蛋白水平与未处理组相比差异均无统计学意义(P ＞ 0.05).结论:地塞米松可上调角质形成细胞中HSP90 的表达,他克莫司不影响角质形成细胞HSP90 的表达.     

磷酸二酯酶4抑制剂Hemay005对角质形成细胞炎性因子产生的影响

目的 为了探讨磷酸二酯酶4抑制剂Hemay005对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞炎性因子产生的影响.方法 分别用重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）、重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）和312 nm窄波UVB诱导,采用MTT法检测Hemay005对HaCaT细胞增殖的影响,用ELISA法检测其对HaCaT细胞白细胞介素（IL）-8、sICAM-1和肿瘤坏死因子（TNF）-α产生的影响.结果 Hemay005对HaCaT细胞增殖及25 μg/L rhTNF-α诱导的IL-8产生无明显影响,但能剂量依赖性地抑制1 000 U/mL rhIFN-γ诱导的HaCaT细胞产生sICAM-1和124.2 mJ/cm2窄波UVB照射引起的HaCaT细胞产生TNF-α.结论 Hemay005可通过抑制角质形成细胞炎症因子的表达发挥抗炎作用.     

《中国皮肤性病学杂志》2004年18卷总目录索引

皮肤科学基础　正常人表皮真皮结合珠蛋白mRNA表达研究 1 8(1 ) :1……………　氮芥对体外培养HaCaT细胞白细胞介素分泌的影响 1 8(1 ) :3……　TNF α和IL 1 β对HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶表达的影响 1 8(2 ) :68………………………………………………　α 硫酸锌对体外培养的黑素细胞影响的实验研究 1 8(2 ) :71………　TNF α对体外培养的黑素细胞活力的影响 1 8(2 ) :1 2 8……………　单味中药对黑素细胞黏附和迁移的影响 1 8(9) :52 6………………　碱性成纤维细胞生长因子对体外培养黑素细胞迁移和[Ca2 ]i的影响 1 8(1 …     

抗菌肽LL-37对中波紫外线辐射HaCaT细胞核因子-κB的影响

目的 探讨抗菌肽LL-37对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)辐射HaCaT细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达及转录活性的影响.方法 120 mJ/cm2 UVB辐射培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,加入不同浓度的LL-37(0～20 mg/L)共同孵育4h,分别应用免疫印迹(western blotting)和电泳迁移率实验(electrophoretic motility shift assay,EMSA)方法,检测HaCaT细胞NF-κB的蛋白表达和转录活性.结果 UVB辐射可增加HaCaT细胞NF-κB的蛋白表达和转录活性,而这种效应可被LL-37显著抑制(P＜0.01),且这种抑制具有剂量依赖性.结论 LL-37能抵抗UVB辐射HaCaT细胞引起NF-κB的蛋白表达和转录活性的增加,这种抵抗可能是人皮肤对UVB辐射的一种防御反应.     

长波紫外线照射对HaCaT细胞iNOS/NO表达的影响

目的 探讨不同剂量长波紫外线 （UVA） 照射HaCaT细胞后不同时间点诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达情况。方法 1 J/cm2、5 J/cm2和10 J/cm2 UVA照射HaCaT细胞后继续培养24 h、48 h和72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;分别用RT-PCR、Western印迹和Griess法检测HaCaT细胞iNOS mRNA、蛋白及NO的表达。结果 所有UVA剂量组HaCaT细胞iNOSmRNA在光照后24 h有表达,48 h达高峰,72 h后下降,各时间点间表达量差异有统计学意义（P < 0.05）;1 J/cm2 UVA照射后3个时间点均未见iNOS蛋白表达,而5 J/cm2和10 J/cm2 UVA照射后iNOS蛋白在24 h增加,48 h达高峰且显著高于24 h（P < 0.05）,照射后72 h无iNOS蛋白表达。所有UVA剂量组HaCaT细胞NO表达量在24 h升高,48 h显著升高,72 h平稳升高,3个时间点NO表达量均比正常对照组明显增加（P < 0.05）。对照组HaCaT细胞无iNOS mRNA和蛋白表达,NO表达量低。结论 HaCaT细胞iNOS和NO的表达变化与UVA照射存在时间和剂量关系。     

长波紫外线照射和基因甲基化状态对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:5 J/cm<'2>UVA照射HaCaT细胞后24 h、48 h和72 h及1μmol/L 5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24 h、72 h和120 h后,采用反转录(RT)-PCR、Western blot方法和巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction,N-PCR)分别检测iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达情况.结果:HaCaT细胞正常对照组无iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达;5 J/cm<'2> UVA照射后,HaCaT细胞的iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达在24 h时出现,48 h达高峰,且明显高于24 h(P<0.05),72 h无表达:5-azaC处理HacaT细胞24 h后,仅有iNOS cDNA表达,72 h和120 h有iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达,且120 h表达量强于72 h(P<0.05).结论:HaCaT细胞iNOS表达与UVA照射存在一定的时间关系,iNOS基因甲基化状态的改变可以影响其表达.     

清热利湿饮对HaCaT细胞衰老的影响及其机制分析

目的观察清热利湿饮对人角质形成细胞株HaCaT细胞衰老的影响,探讨其分子作用机制。方法使用SA-β-Gal(β-半乳糖苷酶)染色法检测清热利湿饮对细胞衰老的影响;Brd U检测细胞DNA合成,Western blot和realtime PCR检测细胞衰老基因的表达情况。结果与对照组相比,清热利湿饮药物处理可明显促进HaCat细胞衰老;Western blot结果示清热利湿可促进p21蛋白表达上调,抑制p21蛋白表达可缓解清热利湿饮导致的细胞衰老。结论清热利湿饮能通过上调p21蛋白表达促进HaCaT细胞衰老。     

佛波酯对HaCaT细胞环氧合酶-2表达水平的影响

目的 研究佛波酯对培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞环氧合酶-2（COX-2）表达水平的影响，探讨佛波酯的皮肤细胞毒性机制。方法 以体外培养的HaCaT细胞为对象，采用RT－PCR和Western印迹方法，检测HaCaT 细胞经0.1，1.0，10 mg/L佛波酯处理24 h后COX-2 mRNA和蛋白表达情况。结果 对照组HaCaT 细胞COX-2 mRNA和蛋白微弱表达或不表达，1.0，10.0 mg/L佛波酯组COX-2 mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组和0.1 mg/L佛波酯组（P值均 < 0.01），而且10.0 mg/L佛波酯组均高于1.0 mg/L佛波酯组，差异均有统计学意义（P < 0.01）。结论 佛波酯可能通过上调HaCaT细胞表达COX-2，促进前列腺素的合成释放，参与皮肤角质形成细胞恶性肿瘤的发生。     

CD147在角质形成细胞分化过程中的表达和作用

目的 明确CD147在正常角质形成细胞和鳞状细胞癌细胞分化过程中的表达和作用。方法 运用免疫组化法检测不同分化水平的寻常疣以及良性、癌前和恶性表皮肿瘤中CD147的表达。运用免疫印迹法观察CD147在培养角质形成细胞(HaCaT)和鳞状细胞癌细胞(HSC-5)钙诱导分化过程中的表达变化。并观察高钙培养和CD147抗体对HaCaT和HSC-5细胞分化相关形态学的影响。结果 寻常疣及脂溢性角化病的CD147表达方式与正常表皮相同。光线性角化病及Bowen病中部分病例阳性。鳞状细胞癌中CD147的表达随分化降低而显著升高。HaCaT及HSC-5细胞中CD147的表达均随钙诱导的分化过程而降低。CD147抗体可与高钙培养一样诱导HaCaT及HSC-5细胞的分化。结论 CD147分子是一种新的低分化角质形成细胞标志蛋白,并可能抑制正常角质形成细胞和鳞状细胞癌细胞的分化。     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响。方法用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平。结果不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18．9％、23．7％、35．1％、44．6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。罗格列酮处理HaCaT细胞后,p-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调。结论罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关。     

miR-128-3p靶向沉默HO-1促进角质形成细胞炎症介质分泌

目的 探讨miR-128-3p对角质形成细胞HaCaT促炎介质分泌的影响及机制。方法 收集银屑病患者的皮损组织和正常皮肤组织,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-128-3p和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达,并对两者的相关性进行分析。生物信息学预测和荧光素酶报告基因分析miR-128-3p与HO-1之间的靶向作用关系。培养HaCaT细胞,在脂多糖处理后,转染miR-128-3p mimic/inhibitor, qRT-PCR检测白介素(IL)-1β和IL-6 mRNA表达,qRT-PCR和Western blot检测HO-1表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-6水平。以HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)处理HaCaT细胞后再用miR-128-3p inhibitor转染,qRT-PCR检测IL-1β和IL-6 mRNA表达,ELISA检测上清液中IL-1β和IL-6水平。结果 银屑病患者皮损组织中miR-128-3p表达上调,HO-1表达下调,两者呈负相关。HO-1为miR-128-3p的靶基因,miR-128-3p在转录...     

白藜芦醇对UVA照射人角质形成细胞株的保护作用及机制探讨

目的 研究白藜芦醇对UVA照射后人角质形成细胞的保护作用及其机制。方法 5 J/cm2 UVA照射人角质形成细胞株HaCaT细胞后,立即予以0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇干预,噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,半定量RT-PCR和Western印迹方法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA和蛋白的表达,电镜观察细胞形态学方面的改变。结果 UVA照射组HaCaT细胞的增殖活性（A490为0.542 ± 0.004）较未照射对照组（A490为0.889 ± 0.083）明显下降,iNOS mRNA和蛋白的表达水平（1.532 ± 0.041和1.331 ± 0.046）较未照射对照组显著增加,电镜下可见典型的凋亡细胞。HaCaT细胞经UVA照射加0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇处理后,细胞的增殖活性升高,A490为分别为0.753 ± 0.435和0.892 ± 0.173,iNOS mRNA和蛋白的表达水平分别为0.853 ± 0.038/0.809 ± 0.018和0.392 ± 0.033/0.412 ± 0.026,与单独UVA照射组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而且0.1 mmol/L白藜芦醇组作用效果更明显。另外,电镜观察UVA + 白藜芦醇组未见凋亡细胞及明显的细胞坏死征象。结论 白藜芦醇对UVA照射损伤的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与白藜芦醇抑制UVA诱导的iNOS表达有关。     

芦荟甙对中波紫外线辐射HaCaT细胞表达诱导型一氧化氮合酶及核因子κB的影响

目的 探讨芦荟甙对中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞诱导核因子kB(NF-KB)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的抑制作用。方法 采用MTT法测定HaCaT细胞的增殖变化,生化比色法检测培养细胞上清液中NO含量,RT-PCR法检测HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达变化,免疫荧光细胞化学染色测定NF-kB P65的激活表达。结果 30 mJ/cm² UVB辐射HaCaT细胞,细胞的增殖明显下降,NO的合成分泌增加,iNOS mRNA表达显著增加,同时NF-kB被激活,从细胞浆易位到细胞核。芦荟甙对HaCaT细胞的增殖有显著促进作用。用不同浓度芦荟甙预处理HaCaT细胞,可以显著抑制UVB辐射诱导的NF-kB激活,下调iNOS mRNA表达及NO合成分泌。经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 芦荟甙通过抑制UVB辐射诱导的NF-kB P65激活,下调iNOS mRNA表达,减少NO合成分泌,发挥防护紫外线辐射损伤的作用,在炎症性皮肤病防治中可能发挥重要作用。     

尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin的表达

目的探讨β-catenin与尖锐湿疣皮损角质形成细胞增生的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法检测尖锐湿疣皮损感染的HPV分型,将HPV16/18型皮损分为高危型组(CA1),HPV6/11型皮损分为低危型组(CA2),每组30例;分别应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在CA1组和CA2组角质形成细胞中的表达。结果在正常皮肤组织中β-catenin蛋白阳性物质均表达于胞膜;CA1组和CA2组中主要表达于胞核和胞质,CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin蛋白均呈异常表达,异常表达率(分别为86.70%,40.00%)均显著高于正常对照组(0);CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin mRNA的表达水平(阳性分别为23例,18例)亦均显著高于正常对照组(阳性10例)。结论尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin表达异常,在胞膜、胞浆及胞核的分布与正常角质形成细胞不同,可能与细胞过度增殖有关。