氯胺酮对大鼠海马神经元瞬间外向钾电流的抑制作用

目的：观察氯胺酮对大鼠海马锥体神经元瞬间外向钾电流（I_A）的影响。方法：酶消化法急性分离Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定I_A。加用不同浓度（10、30、100、300和1 000 μmol/L）氯胺酮后,计算I_A抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择30 μmol/L氯胺酮作I_A稳态激活（及失活）曲线。结果：10 μmol/L的氯胺酮对I_A的电流幅度无影响;30、100、300和1 000 μmol/L的氯胺酮对I_A的电流幅度抑制率分别为（11±2）%、（22±3）%、（45±5）%和(53±5)%。IC₅₀为（130±24）μmol/L, Hill系数为1.19±0.56。30 μmol/L氯胺酮使激活曲线的半数最大激活膜电位（V _{1/ 2}）从（-8.70±0.13） mV 移动到 （-11.2±2.10） mV (n=8, P<0.05), K从（15.0±4.6） mV移动到（17.6±5.7）mV (n=8, P>0.05);失活曲线的V _1/2从（-75.53±7.98） mV移动到（-91.94±11.85） mV（n=8, P < 0.05）,K从（10.5±2.2） mV移动到（8.0±1.2） mV（n=8, P>0.05）。30 μmol/L氯胺酮使I_A的激活和失活曲线均向超极化方向明显移动。 结论： 临床浓度的氯胺酮能够同时加速I_A的激活和失活过程,但加速I_A失活的能力大于其加速I_A激活的能力。氯胺酮对中枢神经系统的作用可能与I_A抑制有关。     

异丙酚对大鼠海马神经元低电压激活钙电流的抑制作用

目的：观察异丙酚对大鼠海马锥体神经元低电压激活钙电流［low-voltage-activated calcium currents, I _Ca(LVA) ］的影响。方法：培养Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定I _Ca(LVA) 。加用不同浓度（3、10、30、100、300 μmol/L）异丙酚后,计算I _Ca(LVA)抑制率,建立异丙酚的浓度-效应曲线,选择20 μmol/L异丙酚作I_Ca(LVA)的激活及失活曲线。结果：3 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度无影响;10、30、100、300 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度抑制率分别为(12.6±4.1)%、(29.2±5.7)%、(36.6±5.3)%、(31.6±2.6)%。拟合后的浓度-效应曲线的IC₅₀为16.8 μmol/L,Hill系数为0.15。激活曲线的半数最大激活膜电位（V _1/2）由(-10±1) mV 移动到(-11±2) mV;K分别为12±1和8±1;失活曲线的V _1/2分别为(-25±1) mV和(-25±5) mV,K分别为15±1和16±3。20 μmol/L异丙酚均未使I _Ca(LVA)的激活曲线及稳态失活曲线发生明显移动。结论：异丙酚对I _Ca(LVA)通道有抑制作用,异丙酚对中枢神经系统的麻醉作用可能与I _Ca(LVA)抑制有关。     

加巴喷丁对急性分离大鼠三叉神经节神经元高电压激活钙电流的影响

目的:评价加巴喷丁对急性分离大鼠三叉神经节神经元高电压激活钙电流的影响.方法:清洁级SD雄性大鼠,150～200 g,酶消化急性分离双侧三叉神经节神经元,采用全细胞膜片钳技术记录三叉神经节神经元高电压激活钙电流.记录加巴喷丁10、30、100 μmol/L (G1-3组,n=10)作用下的钙电流,计算电流抑制率;并绘制浓度依赖曲线和100 μmol/L加巴喷丁作用下钙电流-电压曲线、钙通道激活曲线和稳态失活曲线.计算半数激活电压和半数失活电压.结果:加巴喷丁(10、30、100 μmol/L)均能抑制三叉神经节神经元钙电流(P<0.05),且抑制率随浓度增加而增大(P<0.05).加入100 μmol/L加巴喷丁后,钙电流峰值降低,激活曲线和稳态失活曲线分别向超极化方向移动,半数激活电压和半数失活电压均降低(P<0.05),且稳态失活曲线移动程度大于激活曲线.结论:加巴喷丁能够抑制三叉神经节神经元高电压激活钙电流,可能与其主要改变钙通道失活动力学特征有关.该作用可能为加巴喷丁治疗三叉神经痛作用机制之一.     

氧化苦参碱对大鼠海马神经元细胞钠通道的影响

目的 研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对培养的新生大鼠海马神经元细胞膜钠电流作用,探讨OMT在离子通道水平的作用机制.方法 采用原代培养新生大鼠海马神经元细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度OMT对培养8～12天的大鼠海马神经元细胞膜钠通道的作用.结果 OMT对海马神经元细胞膜钠电流有明显的抑制作用(n=20,P＜0.05),且这种作用具有浓度依赖性,OMT对钠电流作用的半数抑制浓度为(46.1±1.3)μmol/L.在30μmol/L时,OMT可使钠电流Ⅰ～Ⅴ曲线显著上移,并且改变钠电流的翻转电位,但不影响激活电位和峰电位.通道动力学显示OMT可以促进钠电流复活曲线向右移动,减慢通道由失活状态恢复到激活状态的过程,但对激活曲线和失活曲线则没有明显的作用.结论 OMT呈浓度依赖性和电压依赖性抑制大鼠海马神经元细胞膜钠电流,并且抑制钠通道的复活过程.     

尼可刹米对新生大鼠海马神经元钠通道的影响

目的:观察尼可刹米对新生大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的影响.方法:制备大鼠海马脑组织切片,灌流含5 mg/L尼可刹米的人工脑脊液,应用全细胞膜片钳技术记录给药前、给药后10 min脑组织切片海马神经元电压依赖性钠电流,绘制给药前后钠通道的钠电流一测试电压(I-V)曲线、稳态激活曲线和稳态失活曲线.结果:尼可刹米在脑电位-50-+20 mV范围内增大钠电流.尼可刹米使钠通道稳态激活曲线中钠通道半数激活电压由(-34.6±3.07)mV变为(-37.63±3.37)mV(t=3.38,P=0.02),曲线向超极化方向变化;尼可刹米使钠通道的稳态失活曲线中钠通道半数失活电压由(-43.36±3.06)mV变为(-33.24±2.05)mV(t=6.13,P=0.002),曲线向去极化方向变化.结论:增加电压依赖性钠电流可能是尼可刹米兴奋中枢神经元的作用机制之一.     

淫羊藿苷对兔心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的:利用膜片钳技术研究淫羊藿苷(ICA)对兔单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa,L)的影响。方法:采用酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察10,20,40μmol/L的ICA对心室肌细胞ICa,L的作用。结果:①10,20,40μmol/L的ICA使兔心室肌细胞ICa,L最大峰电流密度从(15.81±1.23)pA/pF分别降至(11.27±0.89)pA/pF,(9.48±0.85)pA/pF和(6.87±0.81)pA/pF(n=6,P<0.05),抑制率分别为28.7%,40.0%和56.5%;ICA使ICa,L的电流-电压曲线上移,但不改变其基本形状;②20μmol/L ICA可以使钙通道稳态失活曲线左移并可减慢L-型钙通道失活后的恢复过程。结论:ICA对ICa,L具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其抗心律失常的重要机制之一。     

可溶性Aβ25-35对大鼠海马CA3区神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法采用酶消化法急性分离新生大鼠海马CA3区神经元,全细胞膜片钳技术观察加入可溶性Aβ25-35后IK的变化。结果可溶性Aβ25-35对IK的作用具有时间依赖性,IK随Aβ25-35作用时间的延长而减小,加药5～7min后作用趋于稳定。可溶性Aβ25-35对IK有明显抑制作用,加入5μmol/LAβ25-35前后IK峰值分别为(6.987±1.152)和(2.540±0.349)nA(n=8,P<0.01);该抑制作用没有明显的浓度依赖性,1、2.5和5μmol/L3个浓度的Aβ25-35使IK峰值减小率都在60%左右。5μmol/LAβ25-35可显著影响IK激活过程,作用前后的半数激活电压分别为(4.114±0.730)和(-5.463±0.950)mV(n=15,P<0.05),但不改变激活曲线的斜率因子。结论可溶性Aβ25-35对海马CA3区神经元IK的抑制作用可能是其产生神经毒性的作用机制之一。     

PKC抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的 观察蛋白激酶C (PKC)抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)的影响.方法 采用全细胞式膜片钳技术,检测了chereythrine对大鼠皮层神经元IK的影响.结果 ①chereythrine(20μmol/L)对大鼠皮层神经元IK有抑制作用,抑制率为(41.2±9.62)%(P<0.01);②chereythrine(20μmol/L)可使大鼠皮层神经元IK的电流-电压曲线下移,并呈现一定的电压依赖性.结论 PKC抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元IK具有抑制作用.     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

依达拉奉对海马神经元缺血缺氧损伤后线粒体膜电位的影响

目的 探讨缺血缺氧损伤后依达拉奉对海马神经元线粒体膜电位的影响.方法 原代培养海马神经元细胞,建立缺血缺氧损伤模型,分为正常细胞组、缺血缺氧组、依达拉奉干预组(分别给予1、10、100、300 μmol/L依达拉奉干预)和阳性参照药维生素C干预组,将各组海马神经元细胞用线粒体膜电位敏感性染料Rhodamine-123 进行染色后,激光共聚焦显微镜分别检测线粒体膜电位.结果 与缺血缺氧损伤组比,加入100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉可以显著提高损伤海马神经元的线粒体膜电位,达到正常神经元线粒体膜电位的82%和87%.100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉组之间对线粒体膜电位的的稳定作用没有统计学差异(P>0.05).结论 缺血缺氧损伤后海马神经元线粒体膜电位下降,依达拉奉能够促进线粒体膜电位的恢复,起到神经保护作用.