氯胺酮对缺氧大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究氯胺酮对缺氧马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示氨胺酮抗缺血性脑损伤的电生机机制。方法 应用膜片钳制技术记录缺氧海马神经元上的单通道电流活动,经P－clamp软件进行微机采样、储存数据和数据的分析处理。结果 氨胺酮对缺氧海马神经元KCa通道具有明显激活作用：增加通道开放概率P0,缩短通道关闭时间。结论 氯胺酮对海马神经元KCa通道的作用可能为氯胺酮治疗脑缺血损伤的另一种重要机制。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

目的　了解致痫剂马桑内酯 (CL)对培养的大鼠海马锥体神经元细胞膜钙激活钾通道 (KCa)的调节作用及癫痫的发病机理。方法　采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果　 1在内面向外式膜片下 ,KCa(12 0 .34± 2 5 .12 ) p S表现出钙离子浓度依赖性 (n=6 )、电压依赖性 (n=17)和四乙基胺 (TEA)阻断特点 ;2在细胞贴附式膜片下 ,浴液中加入 CL 可明显激活 KCa(P<0 .0 1) ;3在对称性高钾溶液中 ,使浴液 [Ca2 + ]i 为 10 - 8m ol/L,维持神经元膜电位为 2 0 m V,当 CL 为 0 μl/ m l和 1.0 μl/ m l时 ,可分别使 KCa开放概率从 0 .0 2 5增加到 0 .5 5 3(P<0 .0 1) ,通道活动的平均开放时间 (ms)从 1.875± 0 .4 12增加到 6 .82 9± 0 .136 ,平均关闭时间 (m s)从 179.342±13.831降低到 6 .4 12± 1.383(n=2 5 ,P<0 .0 1)。结论　在 CL 诱导的癫痫发病中 ,钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

异丙酚对大鼠海马神经元低电压激活钙电流的抑制作用

目的：观察异丙酚对大鼠海马锥体神经元低电压激活钙电流［low-voltage-activated calcium currents, I _Ca(LVA) ］的影响。方法：培养Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定I _Ca(LVA) 。加用不同浓度（3、10、30、100、300 μmol/L）异丙酚后,计算I _Ca(LVA)抑制率,建立异丙酚的浓度-效应曲线,选择20 μmol/L异丙酚作I_Ca(LVA)的激活及失活曲线。结果：3 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度无影响;10、30、100、300 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度抑制率分别为(12.6±4.1)%、(29.2±5.7)%、(36.6±5.3)%、(31.6±2.6)%。拟合后的浓度-效应曲线的IC₅₀为16.8 μmol/L,Hill系数为0.15。激活曲线的半数最大激活膜电位（V _1/2）由(-10±1) mV 移动到(-11±2) mV;K分别为12±1和8±1;失活曲线的V _1/2分别为(-25±1) mV和(-25±5) mV,K分别为15±1和16±3。20 μmol/L异丙酚均未使I _Ca(LVA)的激活曲线及稳态失活曲线发生明显移动。结论：异丙酚对I _Ca(LVA)通道有抑制作用,异丙酚对中枢神经系统的麻醉作用可能与I _Ca(LVA)抑制有关。     

巴曲酶对原代培养的大鼠皮层神经元钙激活钾通道的作用研究

目的观察巴曲酶对原代培养新生SD大鼠皮层神经元上钙激活钾通道(Kca)作用。方法采用细胞贴附和内面向外两种膜片钳单通道记录技术检测巴曲酶对Kca作用。结果在钙浴液内,细胞贴附式膜片上,钳制膜电位+30mV,加入不同浓度巴曲酶0.15mmol/L、0.25mmol/L、0.50mmol/L、0.75mmol/L、1.0mmol/L,通道开放概率由0.005分别增加为0.013±0.002、0.082±0.011、0.131±0.012、0.211±0.010、0.062±0.009(P<0.01),在0.75mmol/L以内表现出浓度依赖性。在无钙浴液内,细胞贴附式膜片上,钳制膜电位+50mV,随巴曲酶浓度增加为0.15mmol/L、0.40mmol/L、0.60mmol/L、1.0mmol/L时,通道开放概率由0.005分别增加为0.013±0.001、0.112±0.007、0.193±0.010、0.301±0.009(P<0.05)。6例内面向外式膜片上,钳制膜电位+40mV,分别加入巴曲酶0mmol/L、0.25mmol/L、0.50mmol/L3min后,通道开放概率分别为0.012±0.007、0.011±0.009、0.013±0.008(P>0.05),巴曲酶在胞内Kca开放概率,平均开放/关闭时间,电流幅值均无明显变化。结论巴曲酶通过影响胞内游离钙水平间接调节Kca,可能对神经元有直接保护作用。     

大鼠Meynert核神经元钠钾钙电流观察

目的:检测Meynert核团(Nucless basalis of meynert,rd3M)神经细胞膜上钠、钾、钙通道电流.方法:采用细胞急性分离技术获得单个神经元,运用单细胞膜片钳技术全细胞记录方式记录钠、钾、钙通道电流.结果:钠电流激活失活均很迅速,-50 mV时峰值电流达到最大,约3～4 nA;钾离子电流分为瞬时外向钾电流(IA)和延迟整流性钾电流(IK)两部分,IA部分失活较快,IK部分几乎不失活,峰值电流最大约为7～8 nA;记录出内向的钙电流,失活较慢,大约0～10 mV时峰值电流达到最大,通过运用CdCl2证明该电流为Ca2+离子所介导的高电位激活性钙电流.结论:在nbM神经元上能够诱导出钠、钾、钙电压门控通道电流,为进一步相关研究提供了实验依据.     

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通过电流活动,经p-CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对KCa通道具有明显的激活作用,增加通道开放概率,缩短通道关闭时间（P＜0．01）。结论 吡拉西坦可能通过激活KCa通道而对缺血神经元具有保护作用。     

铝对海马神经元电压依赖性钙电流的作用及其机制

目的探讨金属铝对急性分离的大鼠海马锥体神经元的作用及其机制。方法利用全细胞膜片钳技术研究大鼠海马CA1 区锥体神经元,观察其高电压激活钙通道电流 (IHVA)的变化。结果铝在低浓度范围 ( <0.2mM)内对IHVA的幅度具有抑制作用。8 Br cAMP并不能抵消铝在低浓度范围内对IHVA的抑制作用。结论铝对钙通道具有抑制作用可能是其导致神经毒性作用的原因之一;铝对IHVA幅度的抑制可能不是通过影响钙通道的磷酸化过程而起作用的。     

加巴喷丁对急性分离大鼠三叉神经节神经元高电压激活钙电流的影响

目的:评价加巴喷丁对急性分离大鼠三叉神经节神经元高电压激活钙电流的影响.方法:清洁级SD雄性大鼠,150～200 g,酶消化急性分离双侧三叉神经节神经元,采用全细胞膜片钳技术记录三叉神经节神经元高电压激活钙电流.记录加巴喷丁10、30、100 μmol/L (G1-3组,n=10)作用下的钙电流,计算电流抑制率;并绘制浓度依赖曲线和100 μmol/L加巴喷丁作用下钙电流-电压曲线、钙通道激活曲线和稳态失活曲线.计算半数激活电压和半数失活电压.结果:加巴喷丁(10、30、100 μmol/L)均能抑制三叉神经节神经元钙电流(P<0.05),且抑制率随浓度增加而增大(P<0.05).加入100 μmol/L加巴喷丁后,钙电流峰值降低,激活曲线和稳态失活曲线分别向超极化方向移动,半数激活电压和半数失活电压均降低(P<0.05),且稳态失活曲线移动程度大于激活曲线.结论:加巴喷丁能够抑制三叉神经节神经元高电压激活钙电流,可能与其主要改变钙通道失活动力学特征有关.该作用可能为加巴喷丁治疗三叉神经痛作用机制之一.     

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录

目的 探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法。方法 首先酶解急性分离大鼠海马神经元；利用全细胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流。结果 可记录到一系列快速的外向钾离子电流。结论 所记录到的外向钾离子电流中，快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成。     

妥泰对急性分离的大鼠海马神经元钠电流的影响

目的　在离子通道水平探讨妥泰 (Topiramax ,TPM)对大鼠海马神经元细胞的钠通道的作用。 方法　采用 7～ 10d的大鼠 ,以链霉素蛋白酶E加吸管吹打法制备海马神经元 ;利用全细胞膜片钳技术 ,观察TPM对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的作用。结果　TPM使这种河豚毒素 (Tetrodotoxin ,TTX)敏感的内向电流幅值减小 (n =2 7) ,这种作用具有浓度依赖性 ,它还可以使钠电流的稳态失活曲线负向漂移 (n =5 )。结论　TPM具有传统抗痫药物对钠电流的类似作用     

The Effect of Coriaria Lactone on NMDA Receptor Mediated Currents in Rat Hippocampal CAI Neurons

To investigate the exact mechanism of epileptogenesis induced by coriaria lactone (CL), the effect of CL on NMDA receptor mediated current (Iasp) in rat hippocampal CAI neurons was investigated by using nystatin perforated whole-cell patch clamp. 10-6-10-4 mol/L Asp acted on NMDA receptors and elicited an inward current (Iasp) at a holding potential (VH) of -40mV in presence of 10-6 mol/L glycine and absence of Mg2+ extracellularly. CL enhanced NMDA receptor mediated current induced by Asp, but had no effect on threshold concentration, EC50,Hill coefficient as well as maximal-effect concentration and reversal potential of Iasp. The effect had no relationship with holding potential. These results showed that CL could enhance NMDA receptor mediated current to increase [Ca2+]I of neurons by acting on Gly site, thereby inducing epilepsy.     

左乙拉西坦对马桑内酯致痫海马神经细胞钠电流的影响

目的 探讨左乙拉西坦 (Levetiracetam, LEV) 对马桑内酯(coriaria lactone, CL)致痫SD大鼠海马神经元钠电流增加的影响.方法 利用膜片钳全细胞模式, 记录急性分离后CL致痫的大鼠海马神经元钠电流,并给予LEV进行干预,分为对照组、LEV 150 μmol/L组、LEV 300 μmol/L组和未处理组.另用LEV 300 μmol/L预处理40 min后再给予CL致痫,观察钠电流的变化情况.结果 CL致痫后钠电流增加,加入LEV 150 μmol/L后最大电流峰值增加了36.92%±2.84%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).LEV 300 μmol/L组钠电流增加了16.58%± 1.56%(P＞0.05);但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).经LEV预处理后,CL仍使钠电流增加了32.86%±6.73%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LEV未能抑制CL致痫海马细胞钠电流的增加,其抗癫痫作用可能不是通过抑制钠电流而产生的.     

马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响

目的 研究马桑内酯(coriaria lactone,CL)对大鼠海马神经元钠离子通道电流的影响,探讨该影响在CL致痫中的意义.方法 利用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠海马神经元上记录钠电流,观察CL对电流幅度的影响.结果 经0.1 mg/mL、0.2 mg/mL的CL作用后,海马神经元钠电流有不同程度的增加[CL 0.1 mg/mL组的最大峰值电流密度为(-90.11±14.02) pA/pF,增幅为17.32%±8.52%;CL 0.2 mg/mL组的最大峰值电流密度为(-111.52±6.65) pA/pF,增幅为37.98%±4.91%];经与对照组相比,CL 0.2 mg/mL组(P＜0.05)的变化较CL 0.1 mg/mL组(P＞0.05)明显.结论 CL使海马神经元电压依赖性钠电流的幅度增大,从而改变细胞的兴奋性,引发异常放电.     

共聚焦激光扫描显微镜技术在研究大鼠海马神经元胞内钙超载中的应用

目的 观察抑制性氨基酸牛磺酸对兴奋性氨基酸谷氨酸所致胞内钙超载的影响。方法 选择Fluo-3／ AM对培养的海马神经元进行着色后,用共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)实时 扫描,动态显示海马神经元二维图像,以计算机相应软件对胞内钙的荧光强度变化进行分析统计。结果 在 0.5 mmol／L谷氨酸作用下,胞内钙荧光强度迅速升高(P<0.001);0.5 mmol／L谷氨酸与3 mmol／L牛磺酸共同 作用于海马神经元时,胞内钙荧光强度明显降低(P<0.001);灌流液中去除牛磺酸后,胞内钙荧光强度上升(P <0.001)。结论 抑制性氨基酸牛磺酸可抑制由兴奋性氨基酸谷氨酸所致神经元的胞内钙超载;CLSM以其独 特的优势,在高清晰度地显示海马神经元形态的同时,也可动态地观察活细胞在不同环境下胞内钙的快速变化 以及定量分析。该技术在动态观察和二维图像的高分辨率上比传统测钙方法有更大的优越性。     

去甲肾上腺素对大鼠海马神经细胞IL—6基因表达的影响

目的：观察去甲肾上腺素(noradrenaline,NA)对大鼠海马神经细胞IL－6基因表达的影响。方法：大鼠海马微量注射NA及其受体阻断剂和激动剂90min后,断头取海马,提取总RNA,行斑点杂交,观察海马细胞IL－6基因表达情况。结果：与生理盐水组比较：（1）NA、β1、及β2受体激动剂Dobutamine(DOB)t Metaproternol(MT)均加强海马细胞IL－6基因表达,其中NA的作用最强,DOB最弱;（2）β1受体阻断剂Meteprolol(MP) DOB组和β2受体阻断剂Butaxainie(BUT) MTxeg IL-6基因表达均降低,且后者降低更显著;（3）α及β受体阻断剂酚妥拉明（phentolamine,PH)和心得安（propranolol,PRO)明显抑制L－6基因表达,其中PRO的作用更强;（4）与NA组比较,PH＋NA组IL－6的基因表达减弱,但仍较生理盐水组强。结论：在α及β受体共同介导NA对大鼠海马神经细胞IL－6基因表达的增强作用中,β受体的作用大于α受体,β2受体的作用大于β1受体。表明中枢调节机体免疫功能中,IL－6可能具有重要作用,可能通过NA影IL－6基因表达的调节机体免疫功能。     

复聪香液对血管性痴呆模型大鼠海马神经元的影响

[目的]观察复聪香液对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元形态结构的影响。[方法]SD大鼠40只随机分为4组,分别为假手术组、模型组、脑复康对照组和复聪香液组,经反复脑缺血再灌流加降血压法造模后,分别给予生理盐水、复聪香液及脑复康溶液,连续15d后脑部取材,苏木素伊红(HE)染色观察海马CA1区组织形态变化。[结果]与假手术组比较,模型组可见大量神经细胞损伤、变性,甚至坏死;而复聪香液及脑复康均能不同程度地减轻神经细胞损伤。[结论]复聪香液对血管性痴呆模型大鼠大脑海马CA1神经元损伤具有一定的保护作用。     

大鼠睾丸支持细胞对培养海马细胞的作用

目的 研究睾丸支持细胞对于体外培养大鼠海马细胞的促进生存作用.方法 新生SD大鼠海马细胞常规酶解分离培养,12～16 d SD大鼠支持细胞采用二步酶消化和低渗分离培养,海马细胞培养分为DMEM组、支持细胞培养液(SCM)组、与支持细胞共培养组.结果 SCM组和支持细胞共培养组生存贴壁神经元数量均高于单纯DMEM组,随着培养时间的延长,3组神经元数量均逐渐减少,但神经元的平均突起数量均随时间的延长而增多,且同一时间SCM组和支持细胞共培养组生存神经元数量及平均突起数量均显著高于DMEM组,支持细胞共培养组神经元树突数量较SCM组明显增加.结论 支持细胞及其产生的可溶性因子可促进培养的海马神经元的生存和促进突起生长.     

神经生长因子NGF对原代培养的海马神经元缺氧反应的影响

目的 :观察不同浓度NGF对大鼠海马神经元缺氧的保护作用。方法 :采用MTT比色法测定NGF对缺氧神经细胞活性的影响 ,测定LDH漏出率 ,分光光度法检测MDA ,同时进行形态学观察。结果 :各浓度NGF均对大鼠海马神经元缺氧损伤具有保护作用 ,NGF明显减少缺氧所增加的LDH漏出率和MDA含量 ,且能减轻细胞的形态学损伤。结论 :NGF可以通过减少LDH漏出率和MDA含量 ,对大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用     

胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定

目的建立较理想的SD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法孕18 d(E18)SD大鼠的胎鼠,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化,并能形成典型的神经细胞网络。结论该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。