汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡

目的探讨汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(Drol)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用及其与诱导凋亡的关系.方法采用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素(DNR)的细胞毒性;采用DNA凝胶电泳法观察Tet、Drol单独及联合应用对K562/A02细胞凋亡诱导作用的影响.结果 0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol均能增加DNR对K562/A02的细胞毒作用,其半数抑制量IC50分别为7.28±2.06 μg/ml和7.58±3.44 μg/ml,逆转倍数分别为2.94倍和2.82倍.两药联合作用明显增强,其IC50为1.66±0.41 μg/ml,逆转倍数达12.9倍.0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol单独及联合应用均不会诱导K562/A02细胞凋亡.结论单独应用Tet、Drol可部分逆转K562/A02细胞的耐药性,两药联用具有明显协同效应.Tet、Drol逆转耐药的机理与诱导K562/A02细胞凋亡无关.     

5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较

背景与目的:5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine,Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的作用。本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin,ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数。Westernblot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积。结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍。2.0μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用。加入1.0μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍。加入0.25、0.5和1.0μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍。1.0"mol/L的BrTet和Tet分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关。     

联合应用汉防己甲素和他莫西芬逆转K562/VCR细胞株多药耐药

目的：研究多药耐药基因（mdrl)及P－糖蛋白（Pgp)单独及联合应用汉防己甲素（Tet)和他莫西芬（Tmx)时,逆转多药耐药的效应,方法：使用MTT法对长春新碱（VCR）,Tet,Tmx单独及联合使用时抑制K562和K562／VCR细胞株的作用进行研究。结果：当单独及联合使用Tet和Tmx时,它们不会增加VCR对K562细胞株的抑制率,但能明显逆转K562／VCR细胞株对VCR的多药耐药,结论：Tet和Tmx单独使用均能逆转多药耐药,联合使用具有明显的协同作用。     

miR-155通过调节Ets-1逆转白血病细胞阿霉素耐药的研究

目的 通过检测人白血病细胞株K562及阿霉素耐药细胞株K562／A02中miR-155和Ets-1表达,探讨miR-155、Ets-1表达与白血病化疗耐药的关系。方法 利用Lipofectamine 2000将含有miR-155模拟物和miR-155抑制物的寡核苷酸探针、Ets-1过表达质粒以及Ets-1干扰质粒转染K562及K562／A02细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-155、Ets-1及多药耐药基因（MDR1）的表达,Western blotting检测Ets-1和MDR1蛋白表达水平;转染后的K562及K562／A02细胞经阿霉素处理24 h,MTT法检测细胞存活率。结果 与K562细胞相比,K562／A02细胞中miR-155、Ets-1和MDR1表达水平显著升高（P＜0.05）。抑制miR-155表达能显著增强阿霉素对K562／A02细胞的抑制作用,并抑制Ets-1和MDR1表达,而MDR1表达抑制效应可被Ets-1过表达所逆转。结论 miR-155通过调节Ets-1表达参与白血病耐药形成,miR-155有可能成为逆转白血病耐药的作用靶点。     

NF-H基因参与K562/A02细胞多药耐药机制形成的研究

目的 分析K562／A02细胞多药耐药性(MDR)分子机制,寻找可能参与K562／A02细胞耐药机制的新基因。方法 通过长期逐步增加K562细胞培养液中阿霉素(ADM)的浓度,诱导出多药耐药细胞株K562／A02,利用cDNA microarray比较K562和K562／A02基因表达的筹别,从中选择NF-H基因进行RT-PCR和免疫细胞化学验证,并利用反义核酸技术和细胞内ADM浓度的测定,进一步验证该基因与K562／A02细胞多药耐药的关系。结果 通过比较发现,有12个基因可能参与了K562／A02细胞的耐药机制,其中7个基因在K562／A02中被下调,5个基因被上调。本研究结果显示,NF-H基因在K562／A02细胞中高表达,并且,将NF-H和mdrl反义核酸同时转入K562／A02细胞后,可明显提高细胞内ADM浓度,而单独转入NF-H反义核酸效果不明显。结论 K562／A02细胞耐药表型的形成是多因素的．除了P-糖蛋白(P-gp)等常见因素外,可能还有NF-H基因的参与。     

NF-κB信号通路的激活对白血病细胞K562／A02多药耐药的影响

 目的　研究K562细胞株及其耐药细胞株K562／A02 NF-κB活性的差异性表达,探讨白血病多药耐药（MDR）发病机制。方法　用MTT法检测K562／A02的耐药倍数,观察细胞生长的形态学变化,PI单染法检测K562／S、K562／A02细胞周期分布,并用RT-PCR 方法检测mRNA的表达、流式细胞仪检测P糖蛋白（P-gp）表达及其功能,Western blotting方法检测细胞核NF-κB p65表达,比较K562与K562／A02白血病耐药细胞株之间的差异性。结果　与K562细胞不同,耐药细胞株K562／A02细胞生长特性发生改变,呈半贴壁生长,与K562／S细胞相比,K562／A02细胞的 G0／G1期、S期比例增高,G2／M期细胞比例减低,差异有统计学意义（P＜0.05）,凋亡细胞比例差异无统计学意义（P＞0.05）,且检测到mdr1 mRNA及细胞膜P-gp表达增高以及细胞核内NF-κB p65表达明显增加。结论　NF-κB信号通路的激活即NF-κB p65细胞核内转位可能参与了白血病MDR的形成。     

复方三根制剂逆转多药耐药的实验研究

[目的]探讨复方三根制剂逆转K562／ADR、K562／VCR细胞株耐药性的机制。[方法]细胞K562、K562／ADR、K562/VCR培养于RPMI-1640安全培养液中。MTT法测定两株细胞的抗药性。RT—PCR法测定给药处理后24h,48h,72k后两耐药细胞株MDR1表达量。[结果]复方三根制剂和维拉帕米对K562／ADR和K562／VCR不同时段表达MDR1的量有显著差异。[结论]推测复方三根制剂逆转多药耐药机制为在转录水平下调MDR1 mRNA．从而降低多药耐药细胞P—gp的表达。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化;以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50));高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%;同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%;同时使K562/ A02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。     

蛋白激酶C对Pgp介导的K562细胞耐药性的影响

目的：研究蛋白激酶C（PKC）在P－糖蛋白（Pgp)介导的人类白血病K562细胞多药耐药中的作用,方法：用苔盼蓝拒染法检测药物敏感性,用免疫组织化学法检测Pgp的表达,用流式细胞仪检测细胞内柔红霉素（DNR）积聚,用Takai法及Western blot法分别检测PKC活性和PKCα含量。结果：耐药株K562／D细胞对DNA及多种抗 药物显示多药耐药性,并存在Pgp过度表达,K562／D与敏感株K562／S细胞相比,PKC总活性无明显差异,但PKCα含量显著增高,PKC激活剂TPA增加K562／S和K562／D细胞的PKC活性,使PKC和PKCα由胞质向胞膜转位,K562／S和K562／D细胞的PKC活性及PKCα含量,增加K562／D细胞内DNA积聚。结论：PKCα在D562／D细胞中显著增高,上调PKC,使K562。D细胞内DNA积聚减小,下调PKC,使K562／D细胞内的DNA积聚增加,提示PKC可能通过调节Pgp的功能参与Pgp介导的多药耐药。     

卵巢透明细胞癌临床治疗效果研究

背景与目的:卵巢透明细胞癌相比于其他卵巢上皮性癌,其预后较差,本文对本院卵巢透明细胞癌患者生存率作分析比较,探讨CAP[表柔比星(E-ADM)、顺铂(DDP)加环磷酰胺(CTX)]方案加用丝裂霉素(MMC)后的治疗效果。方法:对本院于1999年1月1日至2002年12月31日接受治疗的卵巢透明细胞癌共33例(A组),同时随机取37例卵巢其他上皮性癌的患者作对照(B组)。Ⅰ期患者行全子宫 双附件 大网膜切除 阑尾切除 淋巴结分期术),2例患者需要生育的卵巢癌患者行患侧附件切除 对侧卵巢活检 大网膜切除 阑尾切除术术。Ⅱ期以上的患者行肿瘤减灭术(tumor reductive surgery,TRS)尽可能使残余灶<1cm,2组患者均在术后化疗均采用CAP方案(静脉应用),但A组患者CAP方案中加用了丝裂霉素。A组患者与仅用CAP方案的透明细胞癌患者(C组)Ⅰ/Ⅱ期15例及Ⅲ/Ⅳ期9例相比较。结果:术前A组与B组Ⅰ/Ⅱ血清CA125差异有显著性,卵巢透明细胞癌血清CA125水平值较低,Ⅲ/Ⅳ期血清CA125差异无显著性。在3次及6次化疗后与化疗前Ⅰ/Ⅱ期A组及B组血清CA125差异有显著性,而Ⅲ/Ⅳ期血清CA125下降水平差异无显著性。A组卵巢透明细胞癌患者中有11例有子宫内膜异位症(33.33%),有7例患者出现深静脉血栓(21.21%),有深静脉血栓的患者与生存率无直接关系(P=0.26)。Ⅰ/Ⅱ期患者的平均生存时间分别为:A组38.3±2.4个月,B组38.3±2.7个月,Ⅰ/Ⅱ期患者A组与B组用Log Rank检验相比较4年生存率差异无显著性(P=0.471),Ⅲ/Ⅳ期患者的平均生存时间分别为:A组20±3个月,B组34±4个月,Ⅲ/Ⅳ期患者A组与B组相比较用Log Rank检验4年生存率差异有显著性(P<0.05)。C组患者Ⅰ/Ⅱ期15例,平均生存时间为:30±3个月,与A组用MMC的透明细胞癌患者Ⅰ/Ⅱ期23例比较生存率差异有显著性(P<0.05)。C组患者Ⅲ/Ⅳ期9例,均死亡。平均生存时间为18±3个月。与A组用MMC的透明细胞癌患者Ⅲ/Ⅳ期10例比较生存率差异无显著性(P=0.430)。结论:卵巢透明细胞癌术前及化疗后血清CA125水平值较低,用CAP加丝裂霉素的规则化疗治疗透明细胞癌对Ⅰ/Ⅱ期患者有一定的治疗效果,对Ⅲ/Ⅳ期患者治疗效果不佳。卵巢透明细胞癌疾病的复发率及死亡率仍然较高。     

胰腺实性-假乳头状肿瘤研究进展

胰腺实性-假乳头状肿瘤(solidpseudopapillarytumor,SPT)是一种胰腺少见的肿瘤,主要发生在年轻女性,13~15岁的年龄段发病率最高,临床症状不明显,部分患者症状为腹痛、呕吐、腹胀和消化不良等,超声和CT上一般可见到有囊性和实性部分组成的异质性的包块,缺乏其他特征性的结构。大体为囊壁厚薄不一内含血性液体的囊肿,其中可有破棉絮状的坏死组织,组织学特点是细胞形态单一,有纤细的假乳头结构,实性区域有蜕变坏死。SPT的超微结构研究显示,细胞内有直径50~2640nm的膜包围的颗粒;免疫组化Vimentin、α1-AT、α1-ACT阳性而腺癌的标记为阴性;DNA分析发现有染色体丢失和移位。较成熟的诊断方式是影像学和病理学,实验室检查对诊断帮助不大。最佳治疗措施是手术切除,但应注意随访,因为该肿瘤有恶性潜能和复发倾向。     

Possibility of predicting the results of the surgical treatment of cancer of the thoracic portion of the esophagus

Within a 18-year period in the clinic 273 patients were subjected to radical surgery for cancer of the thoracic esophagus. 206 patients were discharged from the clinic. The survival rate for 5 years and longer was noted in 58 patients. The data and results of the treatment depending on a sum of clinical signs were treated mathematically. It is noted that the patients' survival is influenced by such factors as sex, the stage of the disease, the morphological structure of tumor, the character of course, tumor size and spread, the type of surgical intervention. An advanced course, changes in blood presence of metastases do not seem to be the reason for cancellation of the operation.     

Mandible preservation in the treatment of cancer of the floor of the mouth

A segmental anterior mandibulectomy causes severe functional disability and cosmetic problems. Many methods of reconstruction have been used but none of these procedures provides the ideal solution. There has been increasing interest in the possibility of preserving a portion of the anterior mandibular arch and still carrying out an adequate surgical excision to control the primary tumor. Over a 15-year period, 251 patients with cancer of the floor of mouth were seen and treated at Roswell Park Memorial Institute. Of this group, 34 patients underwent a marginal mandibular resection as part of their curative surgical treatment. The complication rate was acceptable and the 5-year determinate survival rate was 84%. The local control rate was excellent with only one patient developing an intraoral recurrence which was successfully treated with radiation. It is felt that these data support the theory that conservative mandibular surgery can be carried out in selected cases without jeopardizing the concept of a good cancer operation.     

Cardiac tolerance of the combination paclitaxel-anthracyclines in the context of the management of cancer of the breast

Within the past decades there has been major interest in associating the paclitaxel into the management of breast cancer patients with a strong improvement of clinical results. Moreover, doxorubicin is historically one of the major chemotherapeutic agents in breast cancer treatment. So, investigations of the combination of the paclitaxel with doxorubicin have logically taken place in the strategy of breast cancer management. Also, this association became a standard of care neoadjuvantly in locally advanced breast cancer. The aim of this review of literature consists to make a special focus on cardiac toxicity occurring after doxorubicin and paclitaxel association and to give adequate directions for the next future in this promising combination.