剔毒护肝方药物血清对大鼠肝星状细胞产生Ⅰ型胶原及转化生长因子β1的影响

目的：根据剔毒护肝方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞、并传代培养。用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。用^3H-TdR掺入法和MTT比色法观察细胞增殖,ELISA法测定上清液中Ⅰ型胶原含量,貂肺上皮细胞生长抑帛MTTI地检测培养上清液中的转化生长因子β1活性。结果：剔毒护肝方药物血清能显著4抑制肝星状细胞增殖,并能抑制肝星状细胞生成Ⅰ型胶原及产生转化生长因子β1。结论：剔毒护肝方能抑制肝星状细胞增殖和分泌转化生长因子β1,养活胶原生成,从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应。这可能是剔毒护肝方抗肝纤维化作用的主要机制之一。     

剔毒肝方介导HEPG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨剔毒护肝方介导HEPG2细胞凋亡的可能机制.方法培养24h的HEPG2细胞,分别给予剔毒护肝方(12.5mg/dl)及阿霉素(10μmol/ml)作用8d,同时设空白对照组,细胞凋亡采用流式细胞仪测定,Bcl-2、Bax、Fas采用S-P免疫组化法检测.结果剔毒护肝方、阿霉素及空白对照组的凋亡率分别为24.43%、10.58%、2.05%.剔毒护肝方组细胞Bcl-2、Bax、Fas的表达量分别为0.118±0.015、0.152±0.028、0.121±0.018,与空白对照组及阿霉素组相比有显著性差异(P＜0.01).结论剔毒护肝方有明显介导HEPG2细胞凋亡的作用,并可能通过介导凋亡调控基因Fas、Bax的高表达及下调Bcl-2基因的水平来介导凋亡.     

剔毒护肝颗粒含药血清对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药剔毒护肝颗粒剂(TDHGG)含药血清对人肝癌bel-7402细胞生长及凋亡的影响.方法:应用MTT比色法检测TDHGG对肝癌细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:肿瘤细胞抑制率与药物剂量呈直线相关;流式细胞仪检测结果显示含药血清大、中、小剂量处理组,肝癌细胞的凋亡率分别为23.9%、18.1%、5.8%,明显高于对照组(P＜0.05),其中G0/G1期细胞数增加,G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论:TDHGG含药血清可抑制人肝癌bel-7402细胞的生长,并可干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡.     

剔毒护肝方抗鸭乙型肝炎肝纤维化的作用

目的:观察剔毒护肝方抗肝纤维化作用。方法:用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)阳性血清反复攻击复制鸭乙型肝炎肝纤维化模型,同时用剔毒护肝方治疗,观察其对肝纤维化指标的影响。结果:剔毒护肝方能提高白蛋白和降低球蛋白含量,且有显著降低透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)的作用,能减轻肝脏胶原纤维增生程度。结论:剔毒护肝方具有抗肝纤维化的作用。     

剔毒护肝方对乙型肝炎肝纤维化麻鸭球结膜微循环和血液流变学的影响

目的 :观察剔毒护肝方对乙型肝炎肝纤维化麻鸭球结膜微循环和血液流变学的影响。方法 :用鸭乙型肝炎病毒 (DHBV)阳性血清反复攻击复制鸭乙型肝炎肝纤维化模型 ,同时用剔毒护肝方治疗 ,观察其对球结膜微循环、肝纤维化指标及血液流变学的影响。结果 :剔毒护肝方能改善肝纤维化麻鸭球结膜微循环 ,提高血清白蛋白 ,降低血清球蛋白含量 ,显著降低透明质酸、层粘蛋白和 型前胶原 ,改善血液流变学。结论 :剔毒护肝方具有防治肝纤维化和改善肝脏血液流变学的作用     

剔毒护肝方及其拆方对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的 :探讨剔毒护肝方及其组成药物黄芪、莪术、叶下珠对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法 :剔毒护肝方 (1g/ml) ,黄芪 (0 3 g/ml) ,莪术 (0 3g/ml) ,叶下珠 (0 4g/ml) ,分别制成水煎剂 ,按大鼠体重 10mg/kg ,灌喂正常大鼠 ,2次 /d ,连续 3天 ,于第 4天 ,1次给予全日剂量后 1小时采血 ,制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照 ,将药物血清温育Bel 740 2人肝癌细胞。噻唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,多聚酶链反应 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA法 )检测细胞端粒酶活性。结果 :剔毒护肝方和莪术均可抑制Bel 740 2细胞的增殖 (P <0 0 1) ,黄芪、叶下珠不能抑制Bel 740 2细胞的增殖 (P >0 0 5 )。剔毒护肝方和莪术还可抑制Bel 740 2细胞端粒酶活性 (P <0 0 1)。结论 :剔毒护肝方和莪术均可抑制Bel 740 2细胞的增殖 ,其部分机制可能在于抑制Bel 740 2细胞端粒酶活性。剔毒护肝方对Bel 740 2细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用主要是来自于方中莪术的药理作用。     

β-榄香烯对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2家族的影响

[目的]研究β-榄香烯对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关蛋白的影响。[方法]传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与不同剂量β-榄香烯(终浓度为10、5、2.5 mg/L)共同培养48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测β-榄香烯对HSC凋亡的影响,免疫组化检测凋亡相关蛋白BcL-2/Bax。[结果]β-榄香烯可使HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。[结论]β-榄香烯可通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的：研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法：传代培养的HSC—T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24小时后,采用Annexin V／PI对双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：蕲艾提取液药物血清组早期细胞凋亡率显著高于空白对照组及生理盐水血清组（P〈0．01）,并且随着血清浓度的增加,HSC—T6早期细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖关系。结论：蕲艾提取液药物血清促进HSC凋亡,这可能是蕲艾提取液药物血清抗肝纤维化作用机制之一。     

剔毒护肝方及其拆方对大鼠骨髓干细胞增殖分化的影响

目的：观察剔毒护肝方及其拆方含药血清对大鼠骨髓干细胞增殖作用和向肝系分化的影响。方法：40只Wistar大鼠被随机分为剔毒护肝方组、黄芪组、莪术组、叶下珠组、生理盐水对照组、肝再生血清组，制作药物血清；使用密度梯度离心和贴壁筛选相结合，分离骨髓干细胞；通过噻唑氮蓝（MTT）比色法检测含药血清处理48小时时骨髓干细胞的增殖率；采用免疫组化法检测骨髓干细胞肝系标志（AFP、白蛋白）表达情况。结果：经各组血清培养48小时后，剔毒护肝方组、黄芪组和肝再生血清组对大鼠骨髓干细胞增殖率分别为10.4％、14．3％和26．5％；剔毒护肝方组、黄芪组、肝再生血清组，AFP和白蛋白表达情况强于其他组；剔毒护肝方组、黄芪组、肝再生血清组可见糖原阳性表达。结论：剔毒护肝方组、黄芪组合药血清对骨髓干细胞有增殖作用，可诱导骨髓干细胞横向分化为肝实质细胞。剔毒护肝方中发挥主要作用的药物可能是黄芪，但剔毒护肝方的作用强于黄芪组，说明组成剔毒护肝方的三味药不是简单的叠加。     

肝星状细胞凋亡机制研究进展

研究肝星状细胞凋亡的机制对高选择地诱导肝星状细胞凋亡进而控制或逆转肝纤维化具有重要的意义,近年来发现多条信号通路、多种细胞因子可通过不同机制诱导肝星状细胞凋亡。     

苦参素对小鼠肝细胞Bcl-2,Bax表达的影响

目的　探讨苦参素 (OM )阻断苯巴比妥钠 (PB)诱导的小鼠肝细胞凋亡的机理。方法　 84只小鼠随机分为 4组 :空白对照组 ,阴性对照组 ,阳性对照组和OM治疗组。用免疫组织化学法和末端标记技术 (TUNEL)检测小鼠肝组织Bcl 2 ,Bax表达情况和肝细胞凋亡情况。结果　TUNEL标记显示 :阳性对照组TUNEL标记阳性 ,其它 3组为阴性。Bcl 2蛋白在OM治疗组较阳性对照组表达显著 (P <0 0 5 )。在阳性对照组 ,Bax蛋白表达水平与其他 3组相比显著增强 (P <0 0 5 ) ,其他 3组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　OM可能通过促进Bcl 2表达来阻断苯巴比妥钠诱导的肝细胞凋亡 ,PB可能通过促进Bax表达来诱导肝细胞凋亡     

不同病因对肝星状细胞基质金属蛋白酶Ⅱ表达的影响

通过不同病因诱导的肝纤维化模型,从蛋白、核酸两个方面观察基质金属蛋白酶Ⅱ（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）表达状况,综合分析在不同病因作用下,MMP-2表达变化规律,探讨其在肝纤维化演进过程中的作用。一、材料与方法1.动物模型的建立和标本收集:Wistar雄性大鼠,（15±10）g,40只,超清洁级,复旦大学医学院实验动物中心提供。动物随机分成两组,每组20只,其中实验鼠15只,对照鼠5只。分别用四氯化碳和猪血清建立肝纤维化动物模型。     

谷氨酰胺对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时肝组织谷胱甘肽含量和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨谷氨酰胺(glutamine,Gln)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)时肝组织谷胱甘肽(glutathione,GSH) 含量和细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响．方法:将48只健康♂Wistar大鼠随机分为谷氨酰胺组 (G组)和对照组(C组)．预置中心静脉导管后经此输液通道分别注入谷氨酰胺溶液和生理盐水行预处理 (3 d)．采用Pringle法夹闭肝十二指肠韧带致肝脏缺血 30 min后,去夹恢复血流为再灌注．分别于再灌注后 1、24 h抽血检测ALT的水平,然后快速切取肝组织检测其还原型GSH的含量,切取部分肝组织用于组织病理学检查,并采用S-P免疫组织化学染色方法检测肝组织细胞凋亡相关基Bcl-2和Bax的蛋白表达情况．结果:再灌注后1、24 h,G组血清ALT水平皆显著低于C组(8．3±2．0 μkat／L vs 13．7±5．5 μkat／L,P<0．05; 2．9±2．5 μkat／L vs 9．1±4．3 μkat／L,P<0．01)．肝脏组织GSH的水平:再灌注后1、24 h,G组肝组织GSH水平皆明显高于C组(1216．09±152．78 μg／g vs 856．68± 117．64 μg/g,P<0．01;899．73±57．75 μg/g vs 800．50± 94．79 μg／g,P<0．05)．肝组织损害的病理学改变:G组明显轻于C组．再灌注后1、24 h,G组肝组织Bcl-2蛋白阳性表达率明显高于C组(100．0％ vs 37．5％,P<0．05; 87．5％ vs 25．0％,P<0．05);再灌注后1、24 h,G组肝组织Bax蛋白阳性表达率明显低于C组(25．0％ vs 87．5％,P<0．05;25．0％ vs 87．5％,P<0．05)．结论:Gln对大鼠HIRI具有保护作用,其作用机制可能与维持体内GSH含量和影响肝组织细胞凋亡相关基因 Bcl-2和Bax蛋白的表达有关．     

补肝散对感染血吸虫小鼠肝损伤后肝组织Bcl-2、Bax水平的影响

目的:观察补肝散干预感染血吸虫小鼠肝损伤模型后,对肝组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响,探讨补肝散对肝损伤的防护作用机制.方法:选择健康8周龄雄性昆明小白鼠108只,随机分为5组,将血吸虫尾蚴(18条/只)经小鼠腹部皮肤攻击感染造模,每组定期随机抽取6只小鼠,处死后留取其肝脏左叶,置于10％中性甲醛(用PBS配)固定,免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果:①Bcl-2、Bax表达在模型组小鼠肝组织中的阳性率均明显升高,与正常组比较差异有显著性意义(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.05);②补肝散组与模型组相比小鼠Bel-2表达升高差异有显著性意义(P＜0.05),Bax表达升高差异无显著性意义(P＞0.05),Bcl-2/Bax比值增高差异有显著性意义(P＜0.05).结论:补肝散可促进Bcl-2表达,使Bcl-2/Bax比值上调,减少肝细胞的凋亡,进而防护血吸虫性小鼠肝损伤,发挥抗纤维化的作用.     

sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响

肝星状细胞（HSC）的活化与增殖是肝纤维化发生的关键环节。乙醛刺激HSC活化与增殖，是导致酒精性肝纤维化发生的关键因素。研究表明，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），包括细胞外信号调节激酶（ERK）、JNK、P38是HSC活化与增殖导致肝纤维化发生的主要信号传导通路之一。乙醛刺激HSC中JNK磷酸化水平随sp600125（JNK信号传导通路特异性阻断剂）浓度增加而减少。本实验用sp600125处理乙醛刺激的HSC，观察sp600125对HSC增殖以及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响，以探讨酒精性肝纤维化的发生机制。     

罗格列酮对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的研究罗格列酮激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）后对大鼠肝星状细胞（HSC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响，探讨罗格列酮对肝纤维化的影响。方法采用胶原酶原位循环灌流法分离大鼠HSC，MTT法检测不同浓度罗格列酮对HSC增殖的影响，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及酶谱法检测罗格列酮对MMP-2基因、蛋白及酶活性的影响。结果罗格列酮在0～40umol／L浓度范围内抑制HSC增殖。5umol／L、10umol／L罗格列酮对HSCMMP-2mRNA表达无明显影响。与对照组相比，5umol／L、10umol／L罗格列酮通过激活PPARγ抑制MMP-2蛋白分泌，使上清中MMP-2的酶活性呈剂量依赖性下降，10umol／L罗格列酮组可使HSC内MMP-2的酶活性下降。结论罗格列酮可抑制HSCMMP-2蛋白分泌及酶活性，这可能是其抗肝纤维化的机制之一。     

血管生成素-1对人胃癌细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1,Angl)对体外培养的人胃癌细胞MGC-803所产生的凋亡抑制作用的可能机制.方法:以适当感染复数(MOI=20)的重组腺病毒Ad-Angl和对照病毒Ad-GFP感染人胃癌细胞,对照组用无血清培养基培养,并分别通过RT-PCR、Western blot方法检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达.结果:Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量在AdAngl组中明显高于Ad-GFP组及对照组(0.609±0.01 VS 0.462±0.02,0.609±0.01 VS 0.475±0.02,均P＜0.05),Ad-GFP组与对照组相比无显著性差异;而Ad-Angl组的Bax mRNA和蛋白的表达量则低于Ad-GFP组及对照组(0.313±0.04 VS 0.413±0.02,0.313±0.04 VS 0.407±0.03,均P＜0.05),后两组相比无显著性差异;Bcl-2/Bax比值在Ad-Angl组中也明显增高.结论:Angl基因转染体外培养的人胃癌细胞后,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了细胞Bcl-2的表达,同时使Bax表达下调,Bcl-2/Bax比值增大,此途径可能为Angl抑制血浆饥饿所诱导的肿瘤细胞凋亡的机制之一.