脑红蛋白在人体组织细胞的定位分布及意义

目的探讨脑红蛋白(NGB)在人体组织细胞的定位分布及其意义。方法用免疫组织化学SP法检测NGB在人体不同组织细胞的分布和定位。结果NGB主要分布在人体中枢神经系统和周围神经系统的神经细胞内,在某些内分泌组织和生殖系统亦有分布。NGB免疫反应阳性物质主要定位于细胞质中。结论NGB在人体神经组织、内分泌组织和生殖系统的表达提示NGB对这些组织的氧利用及功能活动有重要作用。     

藏羚羊脑红蛋白基因的组织表达谱分析

目的 探讨藏羚羊脑红蛋白( Neuroglobin,NGB)基因在组织中的表达谱及在不同脑区的表达情况.方法 运用RT-PCR和Real-time PCR技术对藏羚羊NGB基因的组织特异性表达进行检测、分析.结果 NGB基因在大脑皮层、海马、小脑、丘脑等不同脑区有表达,在心、肝、脾、肾和骨骼肌组织中有表达.其中以大脑皮层顶叶和海马表达量相对较高.结论 藏羚羊NGB基因在脑中广泛分布,且不同脑区NGB mRNA的表达不同.此外,NGB在藏羚羊不同组织中也有不同程度的表达,提示NGB基因并不是神经系统所特有的,它可能在机体较为广泛的区域中发挥着作用.     

脑挫裂伤后皮质神经元c-fos基因表达的意义

目的：探讨脑挫裂伤后大鼠脑皮质神经元c-fos基因表达的意义。方法：采用Feeney’s自由落体致伤法，复制大鼠大脑皮质挫裂伤动物模型。伤后1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h和72h杀死大鼠取脑组织，制作冰冻切片；SP免疫组织化学染色。结果：病灶中心区阳性细胞很少，而在挫裂伤灶周围区则阳性细胞密集。阳性细胞主要是锥体细胞和星形细胞。伤后1～2h c-fos阳性细胞密度较高；伤后48～72h阳性神经元减少或消失。结论：脑外伤可以导致皮质神经元c-fos基因表达，而且有时间依赖性。     

BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达研究

目的检测BAT2L蛋白在大鼠脑内的发育学表达情况。方法分别采用Western blot、免疫组化、免疫荧光技术检测BAT2L蛋白在胚胎18d,出生1、7、15d,成年不同时期大鼠脑内的表达、分布、定位情况。结果①Western blot结果显示,BAT2L在胚胎18d,出生1、7d大鼠脑内有高水平表达,而出生15d和成年则表达水平较低。②免疫组化、免疫荧光检测其在大鼠脑内的分布、定位情况:结果显示脑内阳性着色部位为神经元的细胞膜、细胞质,而细胞核、细胞外间质不着色;阳性神经元广泛分布于各个时期的大鼠大脑皮质、小脑皮质、海马、丘脑等部位;阳性神经元的形态在新生阶段和成年大鼠有明显差异,新生大鼠脑组织中部分神经元的突起及分支呈强阳性着色,而成年大鼠神经元突起几乎不着色。结论BAT2L蛋白特异性表达于大鼠大脑的神经元胞体、胞膜及突起中。     

亚低温对大鼠脑挫伤后神经细胞凋亡的影响

①目的 探讨大鼠脑挫伤后亚低温干预对神经元凋亡的影响。②方法 采用自由落体法建立大鼠脑挫伤模型，应用原位末端标记技术观察神经元凋亡细胞数，图像分析技术观察免疫组织化学染色后Bcl-2基因表达，并进行统计分析。③结果 在大鼠脑挫伤后0．5、1、2小时，给予持续3小时的亚低温治疗，可以有效地减少神经细胞凋亡；免疫组化结果显示亚低温干预，可以促进抑凋亡基因Bcl-2的表达。④结论 脑挫伤后，早期亚低温干预可以促进Bcl-2的表达，减少神经细胞凋亡，进而保护受损脑组织。     

水杨酸钠给药对小鼠下丘核NGB mRNA和蛋白表达的影响

目的 :观察水杨酸钠给药对小鼠下丘核NGBmRNA和蛋白表达的影响 .方法 :成年健康昆明小鼠 4 8只分为A ,B ,C ,D四组 ,每组 12只 .A为对照组 ,B ,C ,D分别为水杨酸钠 2 0 0 ,30 0和 4 5 0mg/ (kg·d)给药组 .给药 15d后处死检测 ;采用RT PCR检测实验小鼠下丘核区NGBmRNA的表达 ;Western Blot分析NGB蛋白表达 .结果 :①对照组小鼠下丘核区NGBmRNA表达明显高于三个水杨酸钠给药组 (P <0 .0 1) ;三个水杨酸钠给药组NGBmRNA表达比较以D组表达最低 ,B组表达最高 ,C组与D组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .②Western Blot检测结果显示实验各组均表达相对分子质量约为 170 0 0的NGB蛋白 .A组NGB蛋白表达明显高于其他各组 ;三个水杨酸钠给药组以B组表达最高D组表达最低 .结论 :水杨酸钠可显著降低下丘核神经元NGBmRNA和蛋白表达 ;水杨酸钠给药对下丘核神经元NGBmRNA和蛋白表达与给药剂量有关 .     

康复训练对脑梗死大鼠脑GAP-43表达的影响

目的：研究康复训练对脑梗死大鼠脑的生长相关蛋白（GAP－43）表达的影响。方法：SD大鼠采用光化学法制成脑梗死模型后,随机分康复组,制动组,自由组及正常组,每组大鼠在1,3,7,14,21,28d取脑组织免疫组化染色,以观察脑梗死大鼠各组不同时期脑的GAP－43表达。结果：1,3,7,14d脑梗死周边区可见GAP－43阳性细胞,21,28d时梗死周边GAP－43阳性细胞逐渐减少,康复组较制动组在7,14d明显增加,尤以胼胝体为。结论：康复训练可引起损伤周边区GAP－43表达的变化。提示该区有促进神经新生枝芽的生长作用。     

脑溢安颗粒对脑出血大鼠脑组织bcl—2表达的影响

目的：探讨脑安颗粒（简称脑溢安）治疗脑出血的疗效机制。方法：立体定位于苍白球内注射Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，舸用免疫组织化学法检测脑溢安组与各对照组脑组织内bcl-2蛋白表达。结果：模型组脑组织内bcl-2阳性细胞在1d开始增加，2d达峰值，7d时明显减少；脑溢安组其bcl-2阳性细胞在2d，4d，7d明显高于模型组。结论：脑溢安可上调bcl-2表达。     

神经节苷酯GM1对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨神经节苷酯GM1对脑缺血后的脑保护作用及其对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响。方法：采用Koizumi‘s线栓法制作可复流大脑中动脉闭塞大鼠模型。32只雄性、健康Wistar大鼠随机分为正常组、MCAO组、生理盐水对照组、神经节苷酯GM1治疗组。MCAO后第5天处死动物，取脑组织进行Nissl染色及HSP70免疫组化检测。检测结果经CMIAS图像分析系统进行定量分析。结果：神经节苷酯GM1治疗组组海马各区神经元损伤轻，神经元脱失相对较少；MCAO后海马各区及大脑皮层均有不同程度的HSP70阳性细胞表达，GM1治疗后，海马各区及大脑皮层HSP70阳性细胞的数密度值较MCAO组减少。结论：GM1能减轻脑缺血后的神经元损伤，具有脑保护作用；抑制HSP70的表达亦可能是神经节苷酯GM1的脑保护作用机制之一。     

大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布

目的;观察SD大鼠单侧液压脑损伤后凋亡相关基因（bcl-2,bax）在脑组织中的表达特点。方法：采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交方法,以及计算机显微图像分析技术,观察SD大鼠脑损伤后12 b脑内bcl-2、bax蛋白和mRNA的阳性细胞分布。结果：液压打击伤后bcl-2、bax基因在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,挫裂伤组织内的血肿周边bcl-2、bax基因表达亦明显增强,阳性细胞受打击能量传递的影响呈梯度分布。结论：大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布受打击能量和脑内血肿的影响,并与脑损伤后迟发性神经元死亡（delayed neuron death,DND）密切相关。     

大鼠神经球蛋白基因的克隆及其真核表达载体构建

目的 克隆Wistar大鼠神经球蛋白(neuroglobulin,NGB)基因并构建其真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,测序并利用BLAST工具对比证明该基因序列正确后,亚克隆入pCDNA3.1( )载体中,并通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确.结果 克隆了Wistar大鼠的神经球蛋白基因,有4个碱基发生了突变;成功构建了真核表达载体.结论 Wistar大鼠脑组织中有NGB表达,成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体.     

TauT转基因大鼠的构建及鉴定

目的:为研究牛磺酸转运体（TauT）在神经系统疾病中的作用，构建并繁育脑特异性表达TauT转基因模型大鼠（TauT+/-大鼠）。方法:将TAUT cDNA插入脑特异性PDGF启动子下游，构建转基因表达载体，显微注射法建立TAUT转基因大鼠。Genotype鉴定转基因大鼠的基因型。经过配种繁殖和鉴定后，绘制2～8月龄生长曲线、测定各脏器质量、脏体系数和脏脑系数；RT-PCR技术检测TauT+/-大鼠大脑组织中Slc6a6 mRNA基因表达水平；Western blot 检测TauT+/-大鼠在大脑、心、肝组织的TauT蛋白表达，并对TauT+/-大鼠大脑组织进行免疫组化染色和HE染色，IPP软件对免疫组化图像进行处理。结果:成功构建PDGF-Slc6a6表达质粒，得到3只TauT+/-大鼠F0代。经过繁殖和鉴定，与同窝阴性大鼠（TauT-/-大鼠）比较，TauT+/-大鼠大脑组织Slc6a6 mRNA基因表达水平显著升高，大脑、心、肝组织TauT蛋白表达水平没有显著性差异，HE染色和免疫组化结果显示TauT+/-大鼠脑组织海马区和皮层区未见异常，TauT蛋白表达没有显著性差异。结论:成功构建TauT转基因大鼠品系，为后续研究TauT在大脑中的作用提供一种较好的动物模型。     

SIRT6在大鼠脑组织中的表达与分布

目的研究SITR6蛋白在正常大鼠脑组织中的表达与分布。方法在常温下自由饮水与饮食的情况下喂养8周的大鼠,采用免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT6的表达与定位。结果 SIRT6是一种主要在神经元中表达的核蛋白,在大鼠正常脑组织中广泛表达,尤其在大脑组织中的皮质、髓质、海马中的神经元表达量较高;且在海马集中表达和在大脑皮质的外锥体细胞层和内椎体细胞层较明显,而在大脑髓质中表达低于海马和皮质。结论 SIRT6作为一种核蛋白,为研究SIRT6的功能提供了新的思路。     

小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因.方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)技术分析正常老化和年轻BALB/C小鼠大脑皮层mRNA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经Northern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总RNA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cDNA.结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST 42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cDNA片段,13条可能为新EST.对新EST进行Northern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDNA,得到1个新的1 382 bp的cDNA序列,命名为Arzc,获得GenBank注册号AY344585.该序列含有1个261 bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性.结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因Arzc.     

大鼠神经球蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的 克隆Wistar大鼠神经球蛋白(NGB)基因,通过原核表达制备其多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,测序证明该基因序列正确后,亚克隆人pET-28a( )载体中,通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确.转化大肠杆菌BL21菌株,获得可溶性表达产物,经鉴定、纯化后免疫新西兰兔,分离血清,ELISA法测定抗体效价.结果 神经球蛋白多克隆抗体效价达1:100 000,此多抗可以与293细胞内表达的重组蛋白发生很好的抗原抗体反应.结论 成功制备了兔抗NGB的多抗,为后续研究提供了重要的实验材料.     

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中能量代谢相关基因的表达及其意义

目的：比较正常大鼠和糖尿病心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法：（1）实验大鼠分为两组（正常对照组和糖尿病心肌病组）；（2）从心肌组织中抽提mRNA，经逆转录分别用Cy3,Cy5荧光标记，获得两组动物来源的cDNA探针；（3）cDNA 探针与基因表达谱芯片杂交，结果经扫描后并用软件进行统计分析。结果：能量代谢相关基因表达水平在糖尿病心肌病组明显下调，结论：能量代谢障碍可能在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。     

甲状腺组织中钠/碘转运体基因表达的研究

目的：研究各种病理甲状腺组织中钠／碘转运体（NIS）基因的表达情况，探讨NIS与甲状腺疾病之间的关系。方法：甲状腺组织取自3例Graves病（GD）患者，2例桥本甲状腺炎（HT），2例甲状腺乳头状癌（TC），2例癌旁正常甲状腺组织，运用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测NIS mRNA的表达情况。结果：癌旁正常甲状腺组织表达NIS mRNA,GD甲状腺组织NIS基因表达量明显增多（P＜0．05）；HT组织中，1例NIS mRNA表达量减少，1例不表达；甲状腺癌组织不表达NIS基因。结论：不同病理甲状腺组织中NIS基因表达存在一定变化，NIS可能参与自身免疫性甲状腺疾病及甲状腺癌的发病机理。     

Th1／Th2类细胞因子在脑胶质瘤中的不均衡表达及其意义

目的研究脑胶质瘤中Th1/Th2类细胞因子的不均衡表达及其意义.方法以IFN-γ、IL-2和IL-4、IL-6、IL-10、IL-13分别代表Th1和Th2类细胞因子,采用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测上述细胞因子基因在62例脑胶质瘤组织、4株脑胶质瘤细胞株、15例脑胶质瘤患者外周血单个核细胞以及人正常脑组织、良性脑膜瘤组织中的表达情况.结果脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞株Th2类细胞因子的表达明显占优势(P＜0.01),胶质瘤患者外周血亦表现出Th2类细胞因子优势表达的趋势,而人正常脑组织和良性脑膜瘤组织中两类细胞因子的表达差异无显著性.结论脑胶质瘤中Th2类细胞因子的优势表达可能与肿瘤的发生发展及免疫逃逸有关.