溶菌酶3种测定方法的比较

为探讨用于测定溶菌酶（ＬＺＭ）活性的琼脂板扩散法，比浊法和琼脂糖火箭电泳示测定结果的准确性和偏差程度。我们采用同一标准品、底物和唾液样品，分别对这３种方法进行了研究，３种方法的标准ＬＺＭ线性试验，精神度和准确度试验结果表明，琼脂糖火箭电泳地的各项评价指标均优于琼脂析扩散法比浊法。用３种方法分别测定５０份唾液ＬＺＭ活性结果的比较显示，琼脂板扩散法与比浊主琼脂糖火箭电泳示的结果有显著差异。而比浊法与琼     

转基因水稻中重组人乳铁蛋白的分离纯化及其抑菌活性研究

目的研究从转基因水稻中分离纯化重组人乳铁蛋白(recombinant humanlactoferrin,rhLF),并检测其是否具有抑菌活性。方法通过饱和硫酸铵分级沉淀从转基因水稻中分离rhLF后,经CM Sepharose FF交换层析和Sephadex G25分子筛层析进一步纯化rhLF。采用微量肉汤稀释法检测不同浓度rhLF(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和5.00mg/ml)对鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌的抑制情况。结果通过分离和纯化成功获得纯度较高的rhLF(纯度约90%),经考马斯亮蓝染色,Western blot和质谱仪鉴定分析确定为rhLF,分子量约为79 kD。抑菌实验显示,5.00和4.00mg/ml rhLF对鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌有持久的抑制效果,2.00和1.00mg/ml rhLF在实验后期也表现出明显的抑菌作用,0.50mg/ml及以下浓度则没有抑菌效果。5.00和4.00mg/ml rhLF在18h内对蜡样芽孢菌表现出一定的抑制效果;5.00mg/ml rhLF对单增李斯特菌在18h内有抑制作用。结论从转基因水稻中可成功分离和纯化rhLF,纯化后蛋白仍具有明显的抑菌活性。     

重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究

目的：获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF)，并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法：收获大量培养的表达细胞，以冻融法提取蛋白质；以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF；以MTT法测定其对HepG2，T24，Fibroblast和Hela细胞的增殖效应。结果:从细胞裂解物中纯化得到20kD左右的单一蛋白条带，其纯度达89％。细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HeG2，Hela细胞有显的增殖作用，并表现出良好的量效和时效关系，而对T24，Fibroblast细胞则增殖效果不明显。结论：本研究证实，人源性肝细胞生长因于(HDSSF)转染细胞株中有20kD左右HDSSF相应蛋白表达，与HDSSF 598bp开放读码框理论值相一致，且纯度达89％，并发现其有良好的细胞增殖作用。rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质，但它也有一定的选择性，这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关。     

纸片扩散法在淋球菌药物敏感性检测中准确性的评价

目的评估纸片扩散法在淋球菌药物敏感性检测中的准确性。方法选取2021年在广西14个地市的37家医疗机构收集的584株淋球菌临床分离株, 分别使用琼脂稀释法与纸片扩散法进行大观霉素、头孢曲松和头孢克肟的药物敏感性测定, 计算纸片扩散法与琼脂稀释法的一致性。结果大观霉素、头孢曲松和头孢克肟纸片扩散法的分类一致率分别为87.64%、83.45%和80.31%, 配对χ2检验结果表明两种方法检测的药物敏感性结果存在显著性统计学差异(χ2=65.000、52.128和95.870, P均<0.001)。结论某些厂家的纸片扩散法可能不是临床实践中筛选淋球菌耐药菌株的合适选择, 未来需要更多高准确性的纸片以实现纸片扩散法在淋球菌耐药筛查中的应用, 或在使用前对不同厂家生产的纸片扩散法进行评估, 选择与琼脂稀释法一致性较好的进行测试。     

血液中念珠菌重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白磁珠富集联合重组酶辅助聚合酶链式反应检测方法的建立

目的 建立重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白（M1蛋白）磁珠富集病原体结合重组酶辅助聚合酶链式反应（RAP）巢式核酸扩增技术检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的方法,以实现对白色念珠菌血症和热带念珠菌血症的早期诊断。方法 针对白色念珠菌和热带念珠菌的内转录间隔区的高度保守区域的设计引物探针,建立检测白色念珠菌和热带念珠菌的RAP检测方法;用梯度稀释的标准菌株核酸和临床常见的血流感染病原体核酸检验灵敏度、重复性、特异性;用模拟样本进行M1蛋白磁珠富集血浆白色念珠菌和热带念珠菌RAP和实时荧光PCR的检测,并对结果进行比较。结果 建立的双重RAP方法灵敏度为2.4~2.8拷贝/反应,重复性好,特异性高;M1蛋白磁珠富集病原体结合双重RAP方法可在4 h内完成对血浆中白色念珠菌和热带念珠菌的检测,<10 CFU/ml的病原体富集后进行RAP检测样本数较PCR检测样本数多。结论 本研究建立了检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的双重RAP方法,该检测方法具备准确、快速、减少污染物的优点,在念珠菌血症快速检测中具有较好的应用潜力。