兔眼虹膜和视网膜色素上皮细胞移植的形态学观察

目的 比较有色兔虹膜色素上皮及视网膜色素上皮细胞在白兔视网膜下腔的生长状况。 方法 分离培养有色兔的IPE及RPE细胞。采用内路法在8只白兔16眼中进行了IPE和RPE细胞悬液的移植,其中左眼移植IPE细胞,右眼移植来自同一供体兔的RPE细胞。8只兔分别在2周(n=3)、4周(n=3)和6周(n=2)时处死。对眼球壁做光镜和电镜检查。 结果 IPE和RPE细胞在异体视网膜下腔存活,绝大多数贴附在Bruch’s膜上,并具有极性,细胞基底部有大量的皱褶,细胞顶部有一些微绒毛。6周时未见移植细胞周围有炎性细胞浸润。 结论 移植的IPE和RPE细胞可以在视网膜下腔存活,它们的形态均和原先RPE细胞类似。IPE细胞有望替代RPE细胞用于移植。     

兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的：探索用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，经改良的内路法，不经玻璃体切割的情况下进行视网膜下间隙的移植，方法：用酶1（含220kU/L透明质酸酶和0．1％的胰蛋白酶）松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的联接，再用酶II（含0．25％胰蛋白酶）从Bruch膜上离散RPE细胞，制成细胞悬液，用特制的注射针头，通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙，结果：术后2周供体RPE细胞层呈单层排列于受体视网膜下间隙，并存活，未见明显炎症反应，电镜观察，术后7周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘模型成镶嵌关系。结论：改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间隙，并至少存活7周，改良的内路法渴望为视网膜移植的实验室研究提供一条可供借鉴的途径。     

视网膜色素上皮移植方法的探讨

目的；探讨视网膜色素上皮移植的方法。 方法：以常规方法割备有色素兔眼视网膜色素上皮(RPE)细胞作为供体，移植到10只无色素兔眼．8只眼经外路法，即穿过巩膜和脉胳膜的方法；另10只眼内路法，即从睫状体平部进入玻璃体，制成人为的局限性视网膜脱离，将RPE细胞移植到受体眼视网膜下腔。术后第10、20、40、90天作光镜和电镜检查。 结果：内路法组，手术后40天光镜观察，移植区和非移植区神经视网膜层厚度无差别．透射电镜显示：移植的RPE细胞嵌入Bruch膜，光感受器外节在正常位置，术后90天，移植细胞内发现吞噬外节的次级溶酶体．外路法的8只眼因脉胳膜出血或视网膜穿破而失败。 结论：内路法是RPE细胞移植切实可行的方法。 （中华眼底病杂志，1997，13：160-162）     

姜黄素防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

背景先前的系列研究表明,姜黄素可以诱导体外培养的兔视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡,抑制其RPE细胞的增生,且在玻璃体内应用后不良反应较小,具有防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的潜在价值。目的探讨姜黄素玻璃体内注射对RPE细胞诱导的兔眼PVR模型的防治效果。方法新西兰白兔20只40只眼,所有兔眼玻璃体注射前先抽取0．2ml玻璃体液,然后在兔眼玻璃体内注射0．1ml（2×10^6）同种RPE细胞,每只兔随机选取1只眼立即注入1mg／L的姜黄素0．1ml作为姜黄素组（20只眼）,对侧眼注入等量的含质量分数0．5‰DMSO的生理盐水作为对照组（20只眼）。注药后1、3、7、14、21、28d裂隙灯显微镜下观察角膜、房水、晶状体的透明度及眼前节炎症反应情况;使用间接检眼镜、眼底彩色照相和B型超声检查玻璃体视网膜情况。以视网膜脱离发生眼数作为检测指标,评价姜黄素对PVR的防治效果。结果玻璃体注药后1d、3d所有兔眼发生眼前节炎症反应,玻璃体轻中度混浊,但未见增生条带及视网膜脱离。玻璃体注药后7d,所有兔眼前节炎症反应基本消退,对照组14只眼（75％）玻璃体出现增生条带,姜黄素组2只眼（10％）玻璃体内出现增生条带,差异有统计学意义（P〈0．01）,但2组均未见视网膜脱离。注药后14d,对照组11只眼（55％）出现视网膜脱离,姜黄素组2只眼（10％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）;注药后21d,对照组16只眼（80％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离;注药后28d,对照组19只眼（95％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论姜黄素玻璃体腔内注射可以有效预防RPE细胞诱导的兔眼实验性PVR的发生发展。     

视网膜下间隙移植经基因修饰的视网膜色素上皮细胞对大鼠光感受器变性及视功能的保护作用

目的 以RCS大鼠作模型,研究经基因修饰的永生化视网膜色素上皮细胞(RPE)视网膜下移植对光感受器变性的保护作用。方法 在绿色荧光蛋白基因逆转录病毒感染的基础上,利用脂质体介导节状神经生长因子(CNTF)表达质粒转移,修饰成人RPE细胞系CRL-2302。将1×105个表达绿色荧光蛋白(GFP)或GFP及CNTF的RPE细胞移植到4～5周龄RCS大鼠右眼视网膜下间隙,左眼不移植或注射。PBS作为对照。术后2、4、6、8、10和12周作荧光显微镜、光镜、电镜及电生理检查。结果 荧光显微镜观察,术后1周移植的人RPE细胞在RCS大鼠视网膜下间隙已扩散到几乎整个眼底,但随时间延长移植的细胞逐渐减少,术后6周仅残留少量移植细胞。光镜及电镜观察显示移植眼保留的光感受器数量明显较对照眼多,凋亡细胞则较对照跟少。此外,移植眼宿主RPE细胞形态较正常,并可见吞噬小体。视网膜电图(ERG)检查结果表明部分移植眼视网膜功能明显较对照眼好。结论 经过基因修饰的RPE细胞移植可延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性,为治疗视网膜变性提供了新的途径。(中华眼科杂志,2004,40:552-556)     

FK506抑制兔同种异体角膜缘移植免疫排斥反应的实验研究

目的 探讨FK506滴眼液对同种异体角膜缘移植术后排斥反应的免疫抑制作用。方法 新西兰兔48只48眼建立角膜缘缺陷症动物模型。随机分为FK506组、环孢霉素A组及生理盐水对照组3组，每组16眼。1个月后实施同种异体角膜缘移植术，眼表观察10周。结果 术后10周，对照组、环孢霉素A组、FK506组角膜新生血管指数平均秩分别为15．50、8．00、5．00。对照组角膜新生血管指数较其他2组高（P＝0．00）；而FK506组与环孢霉素A组间无显著差异（P＝0．12）；对照组上皮排斥反应发生最早，环孢霉素A组次之，FK506组最晚；术后10周，对照组、环孢霉素A组、FK506组移植排斥反应指数平均秩分别为13．67、8．07、4．58，对照组排斥反应指数较FK506组（P＝0．02）和环孢霉素A组（P＝0．00）高；环孢霉素A组移植排斥反应指数显著高于FK506组（P＝0．04）。同种异体角膜缘移植术后眼局部应用FK506滴眼液可延迟排斥反应发生，其免疫抑制效果优于环孢霉素A。     

移植视网膜组织视蛋白的测定

目的：建立玻璃体内视网膜移植的动物模型，检测玻璃体内视网膜移植片视蛋白的表达，来确定移植后视网膜的功能。材料和方法：取1－5d新生兔12只，取出神经视网膜组织，作为供体，取成年兔12只，经囊去除除晶状体，切除前段玻璃体后，将供体兔右眼视网膜移植到成年兔右眼的玻璃体腔，分别于手术后7，14，21d取出供体视网膜组织，进行视网膜总蛋白的抽取，分离兴视蛋白鉴定，结果：移植后的视网膜可以成活；在移植后7，14，21d的视网膜移植片中可检测到视蛋白存在。结论：移植到玻璃体腔内的视网膜组织可见到视蛋白的继续表达。     

软骨素酶对兔眼玻璃体及玻璃体视网膜界面的影响

目的 探讨玻璃体腔内注射软骨素酶(CA)诱导产生玻璃体液化的能力及其对玻璃体视网膜界面黏附作用的影响。方法 36只新西兰白兔随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，右眼为实验眼，各12眼，分别注射CA 0．1、0．2、1 U／0．1mL；左眼为对照眼，注射等量的平衡盐溶液(BSS)。于注射后不同时间行临床观察、电生理及组织病理学检查。结果 注射后1周，实验组兔眼即可观察到玻璃体液化，但未见玻璃体后脱离(PVD)。注射后5周，实验组全部兔眼玻璃体液化，部分兔眼发现临床可见的PVD并经组织学检查证实。对照组未见玻璃体液化及PVD。结论 CA能在较短的时间内诱导产生玻璃体液化并对玻璃体视网膜间粘连有一定的破坏作用。     

肝细胞生长因子诱导实验性视网膜脱离的病理机制研究

目的 观察肝细胞生长因子（HGF）对视网膜色素上皮（RPE）细胞屏障功能的影响以及RPE内过度表达HGF导致视网膜脱离（RD）的病理机制。 方法 编码HGF（AdCMV.HGF）、绿色荧光蛋白（Ad CMV.GFP）的E1/E3缺失的腺病毒载体，以5×10⁴ 噬斑形成单位（pfu）/眼注射到成年有色兔的视网膜下。检查注射后3、7、14、28 d时的眼底及组织病理变化,利用免疫组织化学和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HGF在视网膜和玻璃体的表达水平。 结果 对照组注射Ad CMV.GFP眼显示GFP几乎仅表达于PRE单核细胞层，AdCMV.HGF注射眼在注射点处的PRE细胞出现强的HGF免疫阳性反应。玻璃体内HGF的表达水平在注射7 d后达到最高峰、28 d后降低到基础水平。在HGF的表达期内AdCMV.HGF注射眼出现慢性RD和脉络膜慢性炎症。在RD区域，视网膜下的空间内可见增生性的RPE细胞，部分实验兔眼还产生多层的细胞膜结构。 结论 RPE内过度表达的HGF能引发慢性浆液性RD，同时伴有视网膜下RPE增生。提示HGF可能作为治疗RD的作用靶点。(中华眼底病杂志，2007，23：193-197)     

FK506缓释系统前房植入抑制兔高危角膜移植术后的免疫排斥反应

目的探讨前房植入FK506药物缓释系统（DDS）对兔高危角膜移植术后免疫排斥反应的抑制作用和FK506房水药物浓度与免疫排斥反应的关系。方法107只新西兰白兔中随机数字法选取73只兔进行角膜新生血管化模型的制作,其中68只兔作为受体成功建立高危角膜移植动物模型,随机数字法分为对照组、空白DDS前房植入组、环孢素A（CsA）DDS前房植入组（含CsA 1mg）、0．1％FK506眼液滴眼组及FK506 DDS前房植入组（含FK5060．5mg）。角膜移植术后观察各组角膜植片排斥发生的时间,移植术后1周取各组实验兔眼房水和静脉血进行FK506药物浓度检测。0．1％FKS06眼液滴眼组和FKS06 DDS前房植入组在移植术后的不同时间点抽取实验兔眼房水和静脉血,进行FK506药物浓度的检测。观察各组兔移植术后4周和观察期结束时角膜植片的病理变化,同时应用原位杂交的方法检测各组角膜植片内白细胞介素2受体a（IL-2Bot）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、Fas及FasL mRNA的表达。结果FK506 DDS前房植入组角膜植片存活时间超过180d,明显优于其他各组（F=926．37,P=0．0000）,其房水和角膜组织中的FK506药物浓度明显高于FKS06眼液滴眼组（T=21．00,P=0．0022）。FKS06 DDS前房植入组在术后24周内均能在房水中检测出FK506。术后4周对照组和空白DDS前房植入组有大量的炎性细胞浸润,并有明显的IL．2Bet和MCP-1mRNA的表达,而CsADDS前房植入组、FK506眼液滴眼组及FK506 DDS植入组角膜未见明显的炎性细胞浸润,未见IL-2Pux和MCP-1mRNA的表达。各组均未见明显的Fas和FasL mRNA的表达。结论前房植入FK506 DDS可有效地抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应的发生,房水中较高的FK506药物浓度是防治术后发生免疫排斥反应的重要因素。     

Müller细胞对大鼠光感受器变性及视功能的保护作用

目的以RCS视网膜色素变性大鼠为模型,研究经诱导产生神经干细胞特性的Müller细胞视网膜下腔移植对光感受器变性的保护作用。方法向6周龄VC大鼠玻璃体腔内注射神经毒素混合液（包含NMDA、kainate、FGF2和胰岛素）刺激视网膜Müller细胞。1周后取材分离Müller细胞体外原代培养。将细胞标记后,以每眼1×10^5个细胞密度移植到6周龄RCS大鼠右眼视网膜下腔,左眼分组注射正常Müller细胞和PBS作为同型对照及阴性对照。术后分别于第1、3、5、7周,行视网膜铺片、组织病理学及视觉电生理检查。结果培养的Müller细胞纯度可达96％以上,其中表达神经干细胞标志物的细胞占总细胞量的53％以上。组织病理学观察显示,在相同时间点移植眼保留的光感受器细胞数量明显较同型对照眼多,同型对照移植眼保留的光感受器细胞数量明显较阴性对照眼多。视网膜电图（ERG）检查结果与病理学结果相符。结论视网膜下腔移植经诱导产生神经干细胞特性的Müller细胞可以有效延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性,为治疗视网膜变性疾病提供了新的途径。     

Cyclosporine玻璃体腔内注射对异种视网膜色素上皮移植的排异抑制作用

目的 观察兔眼视网膜下腔植入人胚眼视网膜色素上皮（retinal pigment epithe-lium,RPE）后不同时期的眼底和组织学改变。研究环胞菌素A（Cyclosporines,CsA）玻璃体腔内注射能否抑制人胚眼RPE在兔眼视网膜下腔中诱导的异种移植排异反应。方法 人胚眼色素上皮片和浓缩色素上皮细胞悬液植入36只兔眼的视网膜下腔,其中16眼为对照组,用于观察排异的自然转规。分别7d(8眼）和30d(8眼）后获取组织标本。另20眼为实验组。RPE移植后,每周一次玻璃体腔内注射CsA 1mg(12眼）或CsA0.1mg(8眼）。视网膜和视神经的毒性反应使用ERG进行检查。结果 人胚眼RPE片和浓缩的RPE细胞均能在视网膜下腔短期存活。移植的RPE与视细胞结合良好并显示吞噬功能。排异反应发生时间约在术后10～30d。对照组中7d的排异发生率为0/8;30d排异发生率为7/8。排异发生后荧光造影中移植区为高荧光区,组织切片中显示有大量的组织细胞积聚。CsA1mg组30d排异发生率为0/12,0.1mg组为5/8。ERG波幅的下降与CsA剂量和注射次数呈正相关。结论 异种RPE视网膜下腔移植在无免疫抑制剂的条件下,只能短期存活。CsA玻璃体腔中注射能抑制异种RPE移植的排异反应但易引起明显的视网膜毒性反应。     

曲安奈德对视网膜裂孔光凝愈合的影响

目的观察玻璃体腔注射曲安奈德（TA）对视网膜裂孔光凝愈合的影响。方法8只实验兔双眼制作视网膜裂孔模型,光凝孔周,左眼注入4mgTA作为实验组,右眼注入平衡液作为对照组,光镜和电镜观察双眼裂孔光凝斑,Western blot法测定双眼视网膜裂孔处组织内转化生长因子β2（TGF-β2）的表达。结果光镜下两组损伤均主要累及色素上皮层、视锥视杆层、外核层。电镜下仅在对照组发现感光细胞与色素上皮细胞之间微绒毛交叉及色素上皮细胞与邻近细胞之间桥粒连接。实验组裂孔光凝后局部视网膜组织内TGF-β2的表达量为0.308±0.057,对照组为0.418±0.036,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论玻璃体腔注射TA有阻碍视网膜裂孔光凝后愈合的风险。     

兔眼虹膜色素上皮细胞自体视网膜下移植的研究

目的探讨兔眼虹膜色素上皮(IPE)细胞的自体移植技术并进行术后移植区的细胞形态学观察。方法通过虹膜全切法获取10只新西兰白兔的虹膜,采用酶-机械分离-酶消化的方法分离IPE细胞,用5溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)标记原代或一代的细胞。将标记过的IPE细胞悬液通过内路法分别植入对侧眼的视网膜下腔。术后2、4、6周摘除眼球对移植区进行光镜、电镜检查。结果经免疫学鉴定纯化培养了兔眼IPE细胞。术后光镜显示移植的IPE细胞成单层贴附在原始的视网膜色素上皮(RPE)细胞上。电镜结果证实移植的IPE细胞尖端微绒毛与光感受器外节连接,邻近的光感受器细胞显示正常结构。结论采用内路法可成功地将细胞悬液植入家兔视网膜下腔。6周内移植的自体IPE细胞在视网膜下腔存活,与原先的RPE细胞生长状态类似,邻近的光感受器细胞无形态改变。     

Scleral plug of biodegradable polymers containing tacrolimus (FK506) for experimental uveitis

PURPOSE: To evaluate the efficacy of a biodegradable polymeric scleral plug containing the immunosuppressive agent, FK506, in a rabbit model for experimental uveitis. METHODS: The scleral plugs were prepared by dissolving poly(DL-lactide-co-glycolide; PLGA) and FK506 (weight, 8.5 mg; length, 5 mm; 1% FK506). The release of FK506 was evaluated in vitro by spectrophotometry on days 1, 3, 7, 14, 21, and 35. In vivo, FK506 concentrations of the vitreous were measured by high performance liquid chromatography 2 and 4 weeks after intravitreous plug implantation in pigmented rabbits. Sixteen pigmented rabbits were immunized twice subcutaneously with 10 mg of Mycobacterium tuberculosis H37Ra antigen. Twelve days later, the right eyes of all rabbits were challenged with an intravitreal injection of 50 micro g of antigen. After the first challenge, the 16 eyes of 16 pigmented rabbits were divided into two groups. Scleral plugs were implanted into the vitreous of the right eye of eight rabbits. Eight control rabbits received a sham device. The aqueous protein concentrations and cell counts were determined on postchallenge days 7, 14, and 28. To simulated chronic inflammation, the eyes were rechallenged with intravitreal antigen on day 14 and were observed for 1 month. Inflammation of the anterior chamber and the vitreous were graded clinically by two masked observers. Retinal function was evaluated by electroretinography (ERG) and histologic examination. RESULTS: Clinical scores (anterior chamber cells, flare, and vitreous opacity) showed that treated eyes had significantly less inflammation than untreated eyes (P<0.001). Quantitative analysis of inflammatory cells (P<0.001) and protein concentrations (P<0.0001) in the anterior chamber showed significant decreases in treated eyes. Histopathologic examination showed marked inflammation and tissue disorganization in the untreated eyes. No retinal toxicity was detected, histopathologically and electroretinographically. After antigen rechallenge, inflammation in experimental eyes was still less than in control eyes. CONCLUSIONS: Intravitreal sustained-release of FK506 from a biodegradable polymeric scleral plug was highly effective in suppressing the inflammation of experimental uveitis in a rabbit model for at least 6 weeks. This device may be useful in the management of patients with severe chronic uveitis.     

Experimental intravitreal application of trovafloxacin in rabbits.

This study was performed to examine the retinal toxicity of trovafloxacin, a broad-spectrum fourth-generation fluoroquinolone, in rabbit eyes after intravitreal injection. The left eyes of 20 albino rabbits were divided into four groups, and each was injected intravitreally with 0.1 ml of trovafloxacin in a 50-microg, 100-microg, 250-microg or 500-microg concentration. The right eyes of these rabbits served as control and received normal saline solution. Retinal function was assessed from the electroretinogram (ERG), and retinal structure was also examined by ophthalmoscopy and histologic study (light microscopy). The intravitreal injections of 50 microg, 100 microg, and 250 microg trovafloxacin did not significantly change the ERG a-wave, b-wave or the oscillatory potential throughout the follow-up period of 4 weeks. While no ERG changes were observed at 4 weeks after injection, in the 3 eyes that received trovaloxacin 500 microg/0.1 ml, the a-wave amplitudes showed a diminution of 56-49% and those of b-waves one of 53-44% of the preinjection amplitudes at 4 weeks after injection, but oscillatory potentials remained unchanged in the other 2 rabbits intravitreally injected with 500 microg trovafloxacin. However, in none of the injected eyes and the control eyes in all groups were ophthalmoscopically visible fundus changes and histologic abnormality observed. The results suggest that intravitreally injected trovafloxacin at a dose of up to 500 microg is nontoxic to the rabbit retina. If future studies in other species confirm our findings, intravitreal trovafloxacin may be a good alternative in the treatment and prevention of clinical bacterial endophthalmitis.     

FK506滴眼液抑制兔同种异体角膜缘移植排斥反应的免疫病理学研究

目的 :观察同种异体角膜缘移植术后排斥反应的免疫病理学变化 ,探讨FK5 0 6滴眼液的免疫抑制作用。方法 :新西兰兔 48只 48眼建立角膜缘缺陷症动物模型。随机分为PK 5 0 6组、环孢霉素A组 (CsA )及生理盐水对照组 ,每组16眼。 1月后实施同种异体角膜缘移植术。应用免疫病理学方法检测术后 4、 8、 10周角膜缘植片CD2 5的表达和淋巴细胞浸润。结果 :术后 4、 8、 10周三组角膜缘植片CD2 5的表达和淋巴细胞浸润均有升高 ,对照组较FK5 0 6组和CsA组高 (P <0 0 5 ) ,CsA组显著高于FK5 0 6组 (P <0 0 5 )。结论 :PK 5 0 6滴眼液可抑制同种异体角膜缘移植术后植片CD2 5的表达 ,其免疫抑制作用优于CsA。     

FK506抑制同种异体角膜缘移植术兔外周血T淋巴细胞CD25的表达

目的 探讨FK506滴眼液对同种异体角膜缘移植术后的免疫抑制作用。方法 新西兰兔48只48眼建立角膜缘缺陷症动物模型。随机分为FK506组、环孢霉素A(CsA)组及生理盐水对照组,每组16眼。1个月后实施同种异体角膜缘移植术,检测术前及术后1－8周兔外周血T淋巴细胞上CD25的表达。结果 各组表达CD25的外周血T淋巴细胞数均有升高。对照组较其他两组高;而CsA组显著高于FK506组(P＜0. 05)。 结论 FK506滴眼液可抑制同种异体角膜缘移植术后T淋巴细胞上CD25的表达,其免疫抑制效果优于CsA。