鱼藤酮对星形胶质细胞内游离钙浓度的影响及其机制

[目的]研究鱼藤酮引起的星形胶质细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制. [方法]以体外培养的大鼠中脑星形胶质细胞为研究对象,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度.[结果]鱼藤酮可浓度依赖性地引起星形胶质细胞内游离钙浓度升高.细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂MK-801、尼莫地平均可抑制鱼藤酮引起的细胞内钙浓度变化,但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同. [结论]细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与了鱼藤酮引起的星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,但细胞内钙释放发挥作用的时问稍迟,而鱼藤酮引起的细胞外钙内流主要由电压依赖武钙通道内流引起.     

鱼藤酮对星形胶质细胞谷氨酸摄取功能的影响

目的研究鱼藤酮对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运功能的影响。方法应用HPLC荧光法检测鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力,采用RT-PCR与Western blot技术观察谷氨酸转运体基因及蛋白表达。结果鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度明显升高,Glu摄取能力显著降低,谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate/aspartate transporter,GLAST)基因和蛋白表达均明显降低,而谷氨酸转运体-1(glutamatetransporter-1,GLT-1)蛋白表达升高。结论鱼藤酮可显著降低星形胶质细胞谷氨酸摄取功能,引起胞外Glu浓度升高;GLAST表达下调可能是鱼藤酮诱导胞外谷氨酸含量增加的主要原因之一,而GLT-1上调可能为神经细胞自我保护机制,以限制谷氨酸的神经毒作用。 更多还原     

003 有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药，对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞，反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性，研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药,对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞,反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性,研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

星形胶质细胞研究概述

神经系统的细胞主要由神经元和神经胶质细胞组成。传统认为星型胶质细胞没有动作电位,在神经系统内主要对神经元起到结构和功能上的支持作用,但随着研究的深入发现,Ast在中枢神经系统的发育及病理生理过程中都起到重要作用。本文就星型胶质细胞生物学特性、体外培养、与脑缺血的关系方面做一简要概述。     

鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用

目的观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法体外培养大鼠中脑星型胶质细胞,采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态,检测细胞活力,通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RT-PCR检测缝隙连接蛋白（connexin43,CX43）mRNA表达。结果0.5μmol/L鱼藤酮染毒24 h即可引起明显的细胞形态改变;0.75,1.0,2.0μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低,乳酸脱氢酶释放量显著增加;0.5μmol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖,CX43 mRNA表达降低。结论鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用,但与神经元比较,星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。     

工频磁场对星形胶质细胞间隙连接通讯功能的影响

目的　探讨工频磁场 (PFMF)是否有促癌或协同促癌作用。方法　利用荧光光漂白后再恢复法观察漂白细胞荧光强度的恢复以判断经间隙连接的细胞间通讯 ,以相对荧光强度恢复速率(CFIRR)作为对细胞间隙连接通讯 (GJIC)作用的评价指标 ,研究不同磁场强度单独作用或协同佛波酯(TPA)对星形胶质细胞GJIC功能的影响。结果　 3ng/mlTPA作用 1h时CFIRR的中位数 (Md)值为4 .53 % /min ,空白对照组为 9.74% /min ,两组的差异有显著性 (H =1 2 .0 84,P <0 .0 0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 4h时CFIRR的Md 分别 8.2 5、6 .68% /min ,与空白对照组比较 ,差异无显著性 (H =32 .61 7,P >0 .0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 3h ,再与TPA共同作用 1h时CFIRR的Md 分别为 3 .32、2 .85% /min ,与TPA组比较 ,差异无显著性 (H =2 .589,P >0 .0 5)。结论　 0～ 1 .6mT的 50Hz磁场单独作用不能抑制星形胶质细胞GJIC功能 ;协同TPA ,不能增强TPA对星形胶质细胞GJIC的抑制作用 ;但是磁场对星形胶质细胞GJIC的抑制作用随着磁场强度增强呈递增趋势     

氯化镉对大鼠原代星形胶质细胞凋亡的影响

目的研究氯化镉对星形胶质细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的细胞,以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L氯化镉溶液染毒12、24 h,采用MTT实验测定细胞的存活率;以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉溶液染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞的凋亡率。结果与对照组相比,5~40μmol/L氯化镉染毒12、24 h时大鼠星形胶质细胞的存活率均较低,5~20μmol/L氯化镉染毒12 h时大鼠星形胶质细胞的凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着氯化镉染毒浓度的升高,大鼠星形胶质细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。结论氯化镉对星形胶质细胞具有明显的毒性作用,可诱导星形胶质细胞凋亡。     

鱼藤酮对大鼠星形胶质细胞CaMKⅡ基因和蛋白表达的影响

目的 研究鱼藤酮对大鼠原代培养星形胶质细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)活性的影响.方法 MTT法检测染毒星形胶质细胞活力,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i),采用RT-PCR技术检测CaMK Ⅱα和CaMK Ⅱβ mRNA的表达,Western-blot技术观察磷酸化CaMK Ⅱ蛋白活性的变化.结果 1.0和2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星形胶质细胞活力明显降低,染毒星形胶质细胞[Ca2 ]i呈浓度依赖性升高,CaMK Ⅱα亚基mRNA明显下调(P<0.05),CaMK Ⅱ蛋白活性显著降低(P<0.01).结论 鱼藤酮染毒星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,CaMK Ⅱ基因表达和蛋白活性显著降低,可能是其诱导神经细胞变性损伤的重要原因之一.     

增强缝隙连接耦联对鱼藤酮染毒星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的观察增强缝隙连接耦联对鱼藤酮染毒星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响。方法体外培养大鼠中脑星形胶质细胞,随机分为对照组、鱼藤酮组(1.0μmol/L)、缝隙链接激动剂(AAP-10)干预组(50 nmol/L)和AAP-10干预组(250 nmol/L)。MTT法观察染毒星形胶质细胞活力,应用HPLC荧光法和同位素标记法检测星形胶质细胞外谷氨酸浓度和谷氨酸转运能力的变化,RT-PCR检测星形胶质细胞谷氨酸转运体(GLAST)mRNA的表达。结果鱼藤酮染毒组星形胶质细胞活力和谷氨酸转运能力明显降低,细胞外谷氨酸浓度明显增加;AAP-10干预组(250 nmol/L)星形胶质细胞活力有所升高,细胞外谷氨酸浓度明显降低,谷氨酸转运功能活性则明显增强,且GLAST mRNA表达明显上调。结论增强缝隙连接耦联能明显改善鱼藤酮所致星形胶质细胞外谷氨酸代谢紊乱,可能与其调控GLAST基因表达和功能活性有关。     

对苯二甲酸对NIH-3T3细胞间隙连接通讯功能的影响

目的 研究对苯二甲酸(TPA)对NIH-3T3细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术(scrape-loading and dye transfer,SLDT),以0、125、250、500、1000、2000μg／ml的剂量染毒细胞,同时设立溶剂对照及阳性对照,观察TPA对GJIC的影响。结果 TPA对细胞GJIC功能抑制随着染毒剂量增大和染毒时间延长而逐渐增强,呈现剂量．效应和时间．效应关系,在250μg／ml或更高剂量染毒1h或更长时间时,细胞GJIC功能被明显抑制,在染毒8h时各剂量组细胞GJIC功能抑制效应均最显著;去除TPA后,GJIC功能有恢复倾向,但在12h内仍不能恢复至正常水平;加入哺乳动物肝脏微粒体酶(S9)能加重TPA对细胞GJIC功能抑制作用。结论 TPA原形及其代谢产物对NIH-3T3细胞GJIC功能均具有抑制作用。     

几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响

目的 了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。方法 用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响。结果 不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同。槲皮素在0．1—10．0μmoly/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响。染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0．1—10．0μmob/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31．77％-37．06％,显著低于溶剂对照组(44．74％)。结论 除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用。因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重。     

工频磁场对细胞缝隙连接通讯功能的影响

为了探讨极低频（ＥＬＦ）磁场可能存有的促癌作用或协同促癌作用，观察了５０Ｈｚ磁场对ＣＨＬ细胞间缝隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能的影响。利用离子电渗注射法将荧光染料引入细胞内，以５分钟后的荧光偶合细胞（ＤＣＣ）数作为ＧＪＩＣ功能的指标。研究了不同浓度的十四酰基咐拜醇酯（ＴＰＡ）、不同强度的工频磁场及工频磁场与ＴＰＡ（５ｎｇ／ｍｌ）共同作用对ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的影响。结果表明，ＴＰＡ对ＧＪＩＣ的抑制具有浓度依赖关系，ＴＰＡ抑制ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的阈浓度在１～５ｎｇ／ｍｌ之间；ＣＨＬ细胞经０.８０ｍＴ的工频磁场暴露２４小时后的ＤＣＣ数降至６．０８±１．５９，与空白对照组（９．８４±２．２７）比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；０．２０，０．４０，０．８０ｍＴ强度的工频磁场与５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ共同作用后的ＤＣＣ数分别降至５．５２±１．５３，５．００±１．２２，４．００±１．２９，与单用５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ组（６．３８±１．３９）比较，差异也有显著性（Ｐ＜０．０５）。说明一定强度的工频磁场具有抑制或协同抑制ＧＪＩＣ的作用，提示其可能存有促癌或协同促癌作用。     

无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法 采用细胞划痕染料标记示踪技术,以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标,观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果 亚砷酸可显抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散,在0．005-5．0μmol／L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散,但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现,亚砷酸可显增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性,其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论 无机砷可显抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯,提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。     

毫米波对人角质形成细胞缝隙连接通讯功能的影响

目的　研究低功率毫米波对人皮肤角质形成细胞 (HaCaT)缝隙连接通讯 (GJIC)的影响。方法　采用荧光淬灭后恢复技术 ,用激光共聚焦显微镜检测频率为 30 16GHz、功率密度分别为1 0和 3 5mW/cm2 毫米波辐照对细胞缝隙连接通讯功能的影响。结果　 12 氧 14 酰佛波酯 (TPA)5 μg/L可抑制细胞GJIC功能 ,激光淬灭后平均荧光恢复率由正常对照的 (5 5± 17) %降至 (34±13) % ,差异有非常显著性。功率密度为 1 0和 3 5mW /cm2 毫米波单独辐照不改变细胞GJIC功能 ,其平均荧光恢复率分别为 (5 2± 16 ) %和 (5 0± 17) % ;当毫米波与TPA联合作用时 ,TPA诱导的细胞GJIC功能抑制被削弱 ,其中 1 0mW /cm2 毫米波使TPA诱导的细胞GJIC功能抑制部分恢复 ,其平均荧光恢复率为 (47± 16 ) % ,差异有非常显著性 ;而 3 5mW /cm2 毫米波使细胞GJIC功能完全恢复至正常对照水平 ,其平均荧光恢复率为 (5 0± 16 ) % ,差异有非常显著性。结论　毫米波辐照可消除或减小TPA诱导的细胞GJIC功能抑制。     

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅(SiO     

甲基对硫磷对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯和孕酮分泌的影响

目的 探索甲基对硫磷(methyl parathion,MP)对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯(gapjunctional intercellularcommunication,GJIC)和孕酮分泌的影响.方法 体外培养5周龄SPF级BALB/c小鼠黄体细胞,分别设MP暴露组(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的MP处理3h)和GJIC促进剂——1 μmol/L异丙肾上腺素预处理组及蛋白激酶A(PKA)专一抑制剂——10 μmol/L H89预处理组与蛋白激酶C(PKC)专一抑制剂——10 μmol/L恩扎妥林预处理组(预处理5 min,0.8 mmol/L MP处理3h).采用ELISA法检测培养液中孕酮含量,划痕标记染料转移法测定贴壁细胞的GJIC.结果 高浓度(0.2～1.6 mmol/L)MP可明显抑制小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌(P＜0.05);异丙肾上腺素、H89和恩扎妥林均能缓解MP对体外小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌的抑制作用(P＜0.05).结论 MP可通过抑制小鼠黄体细胞的GJIC导致孕酮分泌受抑制,而PKA与PKC参与该过程.     

高热对星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的　研究高热对大脑星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)表达的影响及后果。方法　分离培养脑星形胶质细胞 ;42℃分别作用细胞 1、2、4h后 ,进行免疫学染色 ,观察GFAP表达的变化 ;采用改良Lowry法测定星形胶质细胞条件培养液中总蛋白含量。结果　在高温条件下 ,脑星形胶质细胞反应性增生。 42℃作用 4h后 ,GFAP表达显著减少 ,细胞条件培养液中总蛋白含量减少 2 6μg/ml(由 3 83 μg/ml降低到 3 5 7μg/ml)。 结论　高热条件可以下调脑星形胶质细胞GFAP的表达 ,影响星形胶质细胞生物学功能 ,在中枢损伤的发生发展过程中发挥作用     

番茄红素对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞影响

目的观察番茄红素对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响。方法以0．5，1．0，3．0mg／（kg·bw）的番茄红素连续给雄性Wistar大鼠灌胃30d，用脂多糖制造大鼠急性肺损伤模型，分别在1，4，6h后支气管肺泡灌洗，检测肺泡巨噬细胞吞噬功能、细胞计数以及肺相对重等指标。结果在各剂量番茄红素作用下，肺泡巨噬细胞吞噬功能明显增强，与模型组相比，注射脂多糖1h后，喂饲番茄红素组吞噬功能增强，增强率分别为11．2％，27．9％，38．1％；4h后，增强率分别为5．9％，4．4％，17．0％；6h后，增强率分别为16．6％，15．2％和21．9％。番茄红素3个剂量组之间呈剂量-反应关系（P〈0．05）。结论番茄红素在0．5，1．0，3．0mg／（kg·bw）剂量下能增强肺泡巨噬细胞的吞噬功能。