铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0. 05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340 nm;柱温30℃;流速1. 0 mL·min~(-1)。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即丹霞种),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了云南广南种广西铁皮兰种),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即浙江本地种),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较丹霞种与广西铁皮兰种的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛丹霞种云南广南与广西铁皮兰种与浙江本地种的判断依据。     

铁皮石斛总黄酮碳苷含量测定方法的建立及其在不同产地药材中的含量分析

目的 为进一步完善铁皮石斛的质量标准评价体系,本研究建立一种快速、准确地测定铁皮石斛中总黄酮碳苷含量的方法,并对多个产地和不同栽培方式的19批铁皮石斛进行总黄酮碳苷含量检测.方法 利用黄酮碳苷和黄酮氧苷对强酸的稳定性的差异,经过酸水解和溶剂萃取,将总黄酮碳苷提取分离,然后采用三乙胺显色法定量测定总黄酮碳苷的含量.结果 ...     

霍山石斛不同部位总黄酮的含量比较及黄酮类成分分析

目的 比较霍山石斛不同部位的总黄酮含量,并对其叶中黄酮类成分进行定性鉴别,明确霍山石斛黄酮积累部位及黄酮化合物组成。方法 采用AlCl₃比色法测定霍山石斛不同部位的总黄酮含量;应用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定其不同部位的黄酮类化合物,使用Altima UHPLC C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以0.4%甲酸(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.9 m L·min^-1,柱温35℃。采用加热电喷雾离子化源(H-ESI),负离子模式下采集数据,使用MassLynx V4.1软件处理数据。结果 霍山石斛不同部位中总黄酮含量比较：叶>茎>根,分别为2.06、0.630、0.477 mg·g^-1,三者存在显著性差异;在霍山石斛根、茎、叶中分别鉴定出53、61、68种黄酮类化合物。其化合物的类型主要以双碳糖苷为主,苷元主要是芹菜素。结论 霍山石斛中黄酮类化合物主要在叶中积累,其化学组成类型丰富,该研究结果可为霍山石斛的...     

铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分的高效液相指纹图谱及指标成分的含量测定

 目的 建立铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,并同时测定主要成分芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷的含量,为科学评价和有效控制其质量提供依据。方法 采用XB C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,甲醇-0.4%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长335 nm。收集了14批铁皮石斛叶和3批同属不同种石斛叶进行测定,用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004AB”对其质量进行评价,同时对黄酮碳苷类成分进行主成分分析。结果 建立了铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,标定了9个共有色谱峰,并采用对照品指认了8个色谱峰。3批同属不同种石斛叶与铁皮石斛叶对照图谱明显不同。主成分分析结果表明,黄酮二碳糖苷类成分中芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷对其质量影响最为显著。结论 所建立的铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分指纹图谱特征性强,方法简便,结合主要成分含量测定可更好地控制其质量,对铁皮石斛叶的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。     

酸枣仁中的黄酮碳苷类成分研究

通过硅胶柱色谱、MPLC以及HPLC等色谱手段对鼠李科枣属植物酸枣仁脱脂后的甲醇提取物进行分离纯化,并结合一维及二维核磁共振波谱、高分辨质谱等数据进行结构鉴定.共分离得到5个黄酮碳苷类化合物,1为新化合物,命名为6"-feruloyl-6(’’’)-vanillylspinosin(1),其余4个已知化合物分别为6",6(’’’)-diferuloylspinosin(2),spinosin(3),swertisin(4),isoswertisin(5).     

不同产地铁皮石斛的质量比较研究

目的:比较云南、福建、江苏、浙江产铁皮石斛在浸出物、多糖、甘露糖、氨基酸以及微量元素上的差异,以期为铁皮石斛的质量标准及资源的开发利用提供理论依据。方法:参照2015年版《中华人民共和国药典》,采用热浸法测定醇溶性浸出物的含量;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,HPLC法测定甘露糖含量;通过酸水解法提取,采用氨基酸分析仪测定18种氨基酸的含量;采用微波消解ICP-MS法测定铁皮石斛中微量元素的含量。结果:不同产地的铁皮石斛浸出物含量以浙江、福建两省的含量较高;多糖、甘露糖含量分别在22.5%~63.5%和14.1%~49.2%,其中以浙江产含量较高;铁皮石斛中总氨基酸平均含量在24.05 mg·g~(-1),其中人体必需氨基酸占总氨基酸含量的36%,不同产地的氨基酸含量存在较大差异,以福建漳浦产含量较高;铁皮石斛中含有丰富的人体必需元素,不同产地之间以浙江产含量较高。结论:不同产地铁皮石斛的主要活性成分存在较大的差异,其品质高低受环境的影响,综合来看以浙江产品质为优,其次为福建漳浦。     

丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。     

铁皮石斛中的酚酸类及二氢黄酮类成分

 目的 研究铁皮石斛的化学成分。方法 利用硅胶、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,根据光谱数据和理化性质鉴定其结构。并利用1,1-苯基苦基苯肼（DPPH）自由基清除实验评价分得的化合物的抗氧化活性。结果 从铁皮石斛的脂溶性部位分离得到了15个酚性化合物及2个二氢黄酮类化合物,分别鉴定为：N-p-香豆酰酪胺(1),反-N-(4-羟基苯乙基)阿魏酸酰胺(2),二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯(3),二氢阿魏酰酪胺(4),4-羟基-N-[2-(4-羟基苯基)乙基]苯丙酰胺(5),丁香酸(6),丁香醛(7),香草酸(8),对羟基苯丙酸(9),对羟基桂皮酸(10),阿魏酸(11),对羟基苯甲酸(12),灯盏花苷II(13),二氢丁香苷(14),3, 5-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(15),柚皮素(16)及3′, 5, 5′,7-四羟基二氢黄酮(17)。其中化合物2、3、4、6、11及17具有抗氧化活性,但均弱于阳性对照抗坏血酸的活性。结论 化合物1~17均为首次在铁皮石斛中分离得到,化合物的活性强弱与结构之间存在一定的相关性。     

红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎不同部位主要有效成分含量测定

目的:比较西双版纳地区红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位的多糖含量、甘露糖含量、甘露糖与葡萄糖峰面积比的差异。方法:采用苯酚-浓硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比。结果:多糖含量,红杆铁皮石斛茎上、中部明显高于青杆铁皮石斛茎上、中部,而红杆铁皮石斛茎下部明显低于青杆铁皮石斛茎下部;甘露糖含量,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显高于青杆铁皮石斛;甘露糖与葡萄糖峰面积比,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显低于青杆铁皮石斛。红杆铁皮石斛的多糖含量、甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比均达到2015版《中华人民共和国药典》标准,青杆铁皮石斛仅多糖含量达到2015版《中华人民共和国药典》标准。结论:同一地区的红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位主要有效成分含量有明显的差异,建议在临床用药过程中将红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛分开使用,同时将铁皮石斛按其茎上、中、下3个部位进行分级,为铁皮石斛种质资源品质评价及临床用药提供实验基础。     

GC-MS法比较铁皮石斛试管苗不同部位中挥发油的成分

目的建立GC-MS法比较铁皮石斛试管苗不同部位中挥发油的成分。方法正己烷-水蒸气蒸馏法提取铁皮石斛试管苗根、茎和叶中的挥发油,再利用GC-MS联用仪分析鉴定其化学成分和含有量。结果共鉴定出54种化学成分,其中根中16种、茎中45种、叶中10种,而且均以有机酸(亚油酸、棕榈酸等)为主,分别占挥发油总成分的64.40%、53.48%和96.04%。其中,根中依次为酯类(12.48%)、萜烯类(4.31%)、烷烃类(4.13%)和醇类(2.41%),其他占12.18%;茎中依次为醇类(20.66%)、萜烯类(12.27%)、酯类(6.07%)和烷烃类(2.26%),其他占5.25%;叶中其他类成分仅占6.02%。结论根和茎有9种共有成分,根和叶有7种共有成分,茎和叶有5种共有成分,但根、茎和叶仅有4种共有成分。而且,茎中存在多种根、叶中不含有的成分,主要为萜烯类和烯醇类化合物。     

铁皮石斛产业发展存在的问题与对策

近年来,随着铁皮石斛产业的不断发展,以产、学、研相结合的产业联盟逐渐形成,在产业急剧扩张的背后,也暴露出很多问题如产业基础研究薄弱、开发产品品种单一,深入研究不足、质量难以保障,产业泡沫逐渐形成,为防止铁皮石斛重蹈“普洱茶”的厄运,笔者认为企业及科研院所应加强基础研究及创新应用、强化政府引导,规范市场运作,保障铁皮石斛质量,从而使铁皮石斛产业健康、可持续发展.     

高效液相色谱法测定铁皮石斛中柚皮素的含量

目的:探寻铁皮石斛中指标性成分,建立指标性成分的含量测定方法,并测定浙江省不同种植基地、不同生长年限铁皮石斛中柚皮素的含量.方法:采用高效液相色谱法测定柚皮素的含量.色谱柱为XB C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.2％磷酸水溶液为流动相,检测波长为290 nm.结果:柚皮素在0.026～0.208μg线性关系良好(r=1);平均加样同收率为96.3％(RSD 1.8％).同一生长年限不同种植基地铁皮石斛中柚皮素含量波动范围较大;并且同一种植基地铁皮石斛随着生长年限的增加柚皮素的含量先增加后降低,三年生铁皮石斛中柚皮素的含量最高.结论:该方法准确、可靠,可用于铁皮石斛药材及相关产品中柚皮素的含量测定,为完善铁皮石斛药材质量标准提供参考.     

铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的:建立铁皮石斛HPLC特征图谱,为铁皮石斛鉴别提供可靠方法.方法:采用Ultimate XB C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长280nm,柱温30℃.运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行分析.结果:以柚皮素为参照峰,初步构建了由6个特征峰组成的铁皮石斛乙醚部位HPLC特征图谱.结论:该法建立的特征图谱可为铁皮石斛鉴别提供参考.     

一种铁皮石斛立体栽培方法的研究

为了充分利用铁皮石斛设施栽培空间,揭示铁皮石斛立体栽培产量与功效成分的变化规律,提高产品质量、产量与效益。通过田间试验,研究铁皮石斛立体栽培的农艺性状、产量的变化规律;用苯酚-浓硫酸法与2010年版《中国药典》附录ⅩA测定多糖与浸出物含量。结果表明,铁皮石斛立体栽培土地利用率提高2.74倍,茎、叶、总鲜重与干重均高于地栽,多糖含量均值与地栽没有显著差异,但浸出物含量、多糖与浸出物总量明显高于地栽,特别是顶端2层多糖含量、多糖与浸出物总量明显高于其他层次与地栽。立体栽培能有效地提高空间利用率、单位面积产量,多糖与浸出物总量明显高于地栽;立体栽培层间铁皮石斛多糖存在极显著差异,可能与光照因子相关。     

铁皮石斛功效相关药理作用研究进展

根据中医药古籍中石斛功效的论述,具有“补五脏虚劳赢瘦,强阴益精,久服,厚肠胃,补内绝不足,平胃气…补肾益力,壮筋骨,暖水脏”等功效,该文通过CNKI数据库检索,结合铁皮石斛现代药理学研究和临床应用的文献,总结出铁皮石斛主要有增强免疫、抗疲劳、抗氧化、促消化、促进唾液分泌、降血糖、降血压、抗肝损伤、抗肿瘤等方面药理作用,结合健康需求进行深入分析,为铁皮石斛进一步研究与开发提供参考.     

铁皮石斛中基本氨基酸含量变异规律

目的:了解铁皮石斛种质、生理年龄对氨基酸含量的影响,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质33个样品,经盐酸水解后采用氨基酸分析仪测定基本氨基酸含量.结果:铁皮石斛中7种人体必需氨基酸的平均质量分数为0.28～2.96 mg·g-1,其他9种基本氨基酸的平均质量分数为0.53～4.20mg·g-1;种质对多种氨基酸的积累存在极显著或显著影响,生理年龄对氨基酸的积累也有显著影响,氨基酸含量随着生理年龄增加而增加.结论:铁皮石斛含有丰富的氨基酸,通过品种选育、延长采收期可以增加人体必需氨基酸和其他基本氨基酸的含量.     

铁皮石斛良种选育进展与对策

品种是中药材规范化栽培的源头,“十五”以来,随着铁皮石斛产业的快速发展,良种需求的增加,铁皮石斛品种选育开展了大量的研究,并取得了显著成效.文章系统地阐述了铁皮石斛种质资源收集与差异性评价、良种选育理论与实践、种苗组织培养与低碳高效生产、DNA分子标记与辅助育种等进展,分析了当前良种选育中存在的主要问题,提出进一步开展良种选育的重点与关键.     

铁皮石斛中11种金属元素含量的研究

目的:全面了解不同种质、采收年龄以及市场销售的石斛类药材中11种金属含量与变异规律,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质32个样品,购买市场销售的石斛类药材11个样品;经湿法消化后采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、原子吸收光谱法(AAS)测定11种金属元素含量.结果:铁皮石斛中钾、钙、镁、锰、锌、铬、铜平均质量分数分别为1205.23,766.82,158.25,31.06,4.28,8.28,0.97mg·kg(-1),砷、汞、铅、镉4种重金属元素含量除1个样品镉元素超过限量指标0.07 mg·kg(-1)外,均在规定限度范围内;种质与生理年龄对金属元素的积累存在显著的影响.结论:铁皮石斛含有丰富的人体必需金属元素,浙江产的铁皮石斛与市场销售的石斛类药材重金属限量指标整体上是安全的;通过品种选育可望增加人体必需的金属元素含量,降低有害金属元素含量;生理年龄对金属元素的影响与各种元素承担的生理生化作用有关.     

铁皮石斛附生树种对多糖含量的影响

为了揭示附生树种对铁皮石斛多糖含量的影响,通过采集野外与设施地不同树种上附生的铁皮石斛,并用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛多糖含量。结果表明,不同附生树种铁皮石斛多糖含量差异极显著,但多糖含量与附生树种树皮形态、树皮中的营养相关性不显著,而与附生树种上铁皮石斛接受的光强有关。树种通过对光照调控的生物特性对其附生的铁皮石斛多糖含量产生的影响。     

铁皮石斛人工栽培模式

进入新世纪以来,铁皮石斛人工栽培产业取得了突破性的进展.文章系统阐释了铁皮石斛设施仿生栽培、活树附生原生态栽培、林下原生态栽培、盆栽等系列栽培模式的技术要点和注意事项,为铁皮石斛产业发展与提升提供参考.