Genistein对帕金森病模型大鼠黑质铁含量及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究染料木素（genistein）对6-OHDA制备的帕金森病（PD）模型去卵巢（OVX）大鼠黑质（SN）多巴胺能神经元、铁含量及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 应用6-OHDA制备的OVX PD模型大鼠,侧脑室给予genistein或（17-β-estradiol）17-β雌二醇.免疫组织化学染色酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元和Bcl-2蛋白.Perls铁染色检测SN铁含量.结果 Genistein和17-β-estradiol可明显减少6-OHDA制备的PD模型大鼠单侧旋转行为（P＜0.01）.在损毁侧SN,genistein和17-β-estradiol能促进TH阳性神经元数量显著增多（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达明显增加（P＜0.01）,铁染色阳性细胞数量明显减少（P＜0.01）.结论 genistein具有类雌激素样作用,通过降低SN铁含量及增加Bcl-2蛋白的表达,发挥其对6-OHDA所致PD模型大鼠SN多巴胺神经元的保护作用.     

6-OHDA制作帕金森病大鼠模型及评估

目的应用6-OHDA制作帕金森病(PD)大鼠模型,并对不同剂量6-OHDA制作的模型进行综合评价。方法取雄性SD大鼠70只,随机分成12μl单点、8μl单点、4μl单点、8μl双点和对照组,采用立体定向法,分别行左侧纹状体区相应剂量6-OHDA单点及双点注射,检测大鼠行为学变化及黑质多巴胺(DA)能神经元变化。结果双点组大鼠模型病死率高于其余各组,12μl单点组大鼠模型成功率高于其余各组,行为学检测见各单点组随6-OHDA剂量增加,其异常行为出现率增高;免疫组化检测各单点组间存在显著差异,但12μl单点组与双点组之间无显著差异。结论纹状体区对6-OHDA损伤存在剂量依赖性,12μl单点注射方法优于双点注射法。     

帕金森病SD大鼠模型的99Tcm-TRODAT-1放射自显影实验研究

目的：研究多巴胺转运蛋白（DAT）显像剂^99Tc^m -2β-[N，N’-双（2-巯乙基）乙撑二胺基]甲基3-β-（4-氯苯基）托烷（^99Tc^m -TRODAT-1）用于帕金森病（PD）早期诊断的价值。方法：将SD大鼠分成三组：①正常组；②单侧帕金森病（PD）模型组（颅内单侧纹状体毁损）；③多发性腔隙性脑梗死（简称多发性腔梗）模型组（颈动脉注射自体血栓术）。观察正常大鼠纹状体内^99Tc^m-TRODAT-1分布情况。比较各组纹状体^99Tc^m-TRODAT-1的摄取情况。结果：正常大鼠纹状体明显摄取^99Tc^m-TRODAT-1，单侧PD模型鼠毁损侧纹状体^99Tc^m-TRODAT-1摄取较健侧明显减少，多发性腔梗模型鼠的结果与正常组相似。结论：^99Tc^m-TRODAT-1显像剂被纹状体特异性摄取。能为PD病早期诊断提供有利依据。     

黑质内注射FeCl3对大鼠纹状体多巴胺释放量及含量的影响

①目的探讨黑质(SN)内注射不同剂量的FeCl3对大鼠纹状体(CPu)多巴胺(DA)释放量和含量的影响.②方法实验用SD大鼠32只,分成4组6只大鼠为正常对照组;9只大鼠左侧SN内注射 FeCl3溶液10 μg(Ⅰ组);8只大鼠左侧SN内注射FeCl3溶液20 μg(Ⅱ组);9只大鼠左侧SN内注射FeCl3溶液40 μg(Ⅲ组),3周后采用快速周期伏安法(FCV)监测纹状体D A的释放量,高效液相色谱法(HPLC)检测纹状体DA含量.③结果在FeCl3单侧损毁大鼠中,损毁侧CPu DA释放量的减少和DA含量的降低与注射FeCl3剂量之间有明显剂量依赖关系(F=93.78,164.51,q=3.50～29.79,P<0.05).Ⅲ组损毁侧CP u DA的更新率[以(DOPAC+HVA)/DA表示]明显加快,与其他组比较差异有显著性(F=13 6.22,q=22.32～22.72,P<0.05);而Ⅰ,Ⅱ组变化较小,与正常大鼠相比差别无统计学意义 (q=0.25,2.04,P>0.05).④结论黑质内Fe3+含量升高可使CPu内DA释放量和含量均降低,铁含量高可能参与帕金森病的病理改变.     

大鼠帕金森病模型99mTc-TRODAT-1的脑内分布

目的:研究多巴胺转运蛋白(DAT)显像剂99mTc-2β-[N,N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(99mTc-TRODAT-1)用于评价帕金森病(PD)大鼠模型早期改变的价值.方法:将SD大鼠分为3组:①对照组(n=14)只;②单侧PD模型组(n=14)(颅内单侧纹状体毁损);③多发性腔梗模型组(n=12)(颈动脉注射自体血栓术).观察正常对照大鼠脑内、纹状体内99mTc-TRODAT-1分布情况,比较单侧PD模型组健侧与毁损侧及多发性腔梗模型组双侧纹状体99mTc-TRODAT-1的摄取比值.结果:对照组大鼠脑内和纹状体内分布实验表明,纹状体明显摄取99mTc-TRODAT-1;单侧PD模型组大鼠分布实验表明,毁损侧纹状体99mTc-TRODAT-1摄取较健侧明显减少;多发性腔梗模型组大鼠的结果与对照组相似.结论:99mTc-TRODAT-1显像剂被纹状体特异性摄取,为PD病早期诊断提供了有力依据.     

noggin对帕金森病大鼠黑质神经元的保护作用

目的  观察noggin对6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病模型大鼠神经行为的影响及其对黑质神经元的保护作用。方法  随机将60只雄性SD大鼠,分为正常对照组、模型组和模型治疗组。采用脑立体定位右侧纹状体内注射6-OHDA构建帕金森病(PD)模型,模型治疗组纹状体内注射noggin,正常对照组与模型组同时给予等量生理盐水,术后7d于行为检测完毕后行尼氏染色、TH、TUNEL与GFAP免疫组化染色,光镜下观察3组大鼠黑质多巴胺能神经元、凋亡神经元与星形胶质细胞的形态变化并进行计量分析,电镜下观察黑质神经元超微结构变化。结果    模型治疗组大鼠的旋转次数较模型组明显改善(P<0.05),TH阳性神经元较模型组增多,凋亡神经元显著减少(P<0.05),GFAP阳性神经元较模型组减少,胞浆内GFAP阳性产物的平均光密度值亦明显降低(P<0.05);TH、TUNEL与GFAP阳性神经元主要位于黑质致密部;电镜下对照组黑质神经元结构清晰,胞核形态规则,核膜光滑、完整,染色质分布均匀;胞浆电子密度中等,细胞器丰富;模型组黑质神经元胞核皱缩,核膜凸凹不整、异染色质减少,胞浆内大量线粒体嵴断裂消失,粗面内质网扩张;模型治疗组黑质神经元细胞核形态规则,部分线粒体肿胀,细胞器丰富。结论  noggin可改善PD模型大鼠的行为能力、使凋亡神经元及反应性星形胶质细胞数目减少,这些变化可能与noggin能促进黑质内部分神经元再生有关。     

6—羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的建立与评价

目的：探讨提高6－羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法，并从行为学、黑质多巴胺神经元形态学角度对模型进行评价。方法：取SD大鼠90只，将6－羟基多巴胺立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠的行为及黑质细胞形态学变化。结果：①90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只（占71．1％）恒定转向右侧脯结果稳定，旋转圈 ＞210r /30min，被认为是成功的帕金森病大鼠模型；②除旋转行为外，部分大鼠还出现震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常表现；③随机选取10只不同时期的成功帕金森病大鼠模型，免疫组化下观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少（P＜0．001），电镜观察发现大鼠中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡改变。结论：用6－羟基多巴胺选择性损毁黑质多巴胺能神经元可较快建立稳定的成功率较高的类似于人类中晚期帕金 森病行为和病理的大鼠模型，但在病理和行为学等方面向帕金森病人仍有许多差异。     

黑质致密部和内侧前脑束注射6-OHDA 制备的帕金森病大鼠模型纹状体中 DA 含量比较

目的：：比较黑质致密部(SNc)损毁和内侧前脑束(MFB)损毁2种方法制备的帕金森病(PD)大鼠模型对纹状体中多巴胺(DA)递质含量的影响。方法：将大鼠随机分为假手术组(n=12)、SNc 损毁组(n=15)和 MFB 损毁组(n=14)。采用高效液相色谱-电化学检测法,观察3组大鼠损毁侧纹状体中 DA的含量。结果：与假手术组相比较,SNc 损毁组(P <0.001)和 MFB 损毁组(P <0.001)大鼠纹状体中 DA含量均显著降低,与 SNc 损毁组相比较,MFB 损毁组大鼠纹状体中 DA 含量下降更为显著(P =0.005)。结论：MFB 损毁制备的 PD 大鼠模型对 DA 能神经元的损伤范围较 SNc 损毁有所扩大,为不同研究选择制备模型的方法提供一定的理论依据。     

偏侧帕金森病大鼠黑质胶质细胞变化的实验研究

目的 :探讨偏侧帕金森病 (Parkinson sdisease ,PD)大鼠质致密部 (SNpc)胶质细胞的变化。方法 :6 羟多巴胺 (6 OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型。采用免疫组化方法观察大鼠质致密部酪氨酸羟化酶 (TH)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、增殖细胞核抗原 (PCNA)和S 10 0蛋白免疫阳性细胞并对其面密度进行定量分析。结果 :帕金森病组大鼠毁损侧SNpc部位的TH免疫阳性面密度较正常组大鼠明显减少 (P <0 0 1) ,而GFAP、PCNA、S 10 0免疫阳性面密度则明显增多 (P <0 0 1)。结论 :PD大鼠毁损侧SNpc部位存在明显的胶质细胞增生 ;SNpc部位的胶质细胞可能影响着PD的发生及其严重程度。     

Synphilin-1寡核苷酸对6-羟多巴胺诱导帕金森病大鼠黑质Caspase-3表达影响

目的 观察Synphilin-1寡核苷酸对6-羟多巴注(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠黑质Caspase-3蛋白表达的影响,从而探讨Synphilin-1在帕金森病发病机制中的作用.方法 Wistar大鼠60只随机分成5组,PD组、假手术组、反义组、正义组、错义组,每组12只大鼠.PD组立体定向将6-OHDA注入左侧黑质制作PD模型,反义组、正义组及错义组分别立体定向将反义、正义、错义寡核苷酸注入到各组鼠的左侧黑质,然后用与PD模型组相同的方法 注入6-OHDA,假手术组注入生理盐水作为对照.术后4周取大鼠的术侧中脑黑质,应用免疫组化方法 检测Synphilin-1及Caspase-3阳性细胞的表达.结果 与假手术组比较,PD组Synphilin-1、Caspase-3 阳性细胞表达显著增加(F=16.6、9.4,q=4.21、6.79,P<0.05、0.01);与PD组比较,反义组Synphilin-1、Caspase-3阳性细胞表达显著减少(q=5.43、 4.92,P<0.01);正义和错义组Synphilin-1、Caspase-3阳性细胞的表达与PD组比较未见明显差异(q=3.31、3.52,P>0.05).结论 Synphilin-1 反义寡核苷酸对6-OHDA诱导的PD大鼠旋转行为有明显的改善作用,提示Synphilin-1反义寡核苷酸对黑质神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能至少部分是通过调节Caspase-3 的表达来实现的.     

Ghrelin 对MPTP小鼠帕金森病模型黑质TH、Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨Ghrelin对1-甲基-4苯基-1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）造成的黑质（SN）多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠随机分为对照组、MPTP组和Ghrelin＋MPTP组。腹腔注射MPTP制备帕金森病小鼠模型；Ghrelin＋MPTP组于MPTP注射前，侧脑室微量注射Ghrelin200ng，共8d；对照组以等量生理盐水取代Ghrelin和MPTP。应用半定量RT—PCR技术检测各组小鼠SN内酪氨酸羟化酶（TH）、Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。结果MPTP导致小鼠SN内TH mRNA的表达明显低于对照组（F=34．77，q=11．91，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠SN内TH mRNA表达量较MPTP组明显增加（q=5．05，P〈0．01）。MPTP导致小鼠SN内Bcl-2／Bax由对照组的1．13±0．03减少至0．47±0．06（F=111．59，q=17．58，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠Bcl-2／Bax明显高于MPTP组（q=18．94，P〈0．01），可恢复至正常水平。结论Ghrelin预处理对于MPTP造成的TH基因表达量减少有改善作用，该作用可能通过抗凋亡途径实现。     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子(TSLC1)基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织(χ2=16.673,P<0.01)。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性(P=0.046)。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

散发性三阴乳腺癌中BRCA1启动子甲基化与蛋白表达

目的：通过检测散发性三阴乳腺癌（TNBC）中乳腺癌易感基因（breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1）启动子甲基化和蛋白表达,探讨BRCA1与散发性TNBC的关系.方法：应用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）法检测50例散发性TNBC组织及配对癌旁组织中BRCA1启动子甲基化状态,用免疫组织化学方法检测上述组织中BRCA1蛋白的表达情况,分析BRCA1启动子甲基化与蛋白表达的相关性.结果：散发性TNBC组织中BRCA1启动子甲基化率为42.0％（21/50）,癌旁组织未检测出甲基化,两者比较差异有统计学意义（P=0.000）.BRCA1蛋白在散发性TNBC癌组织中的表达率为32.0％（16/50）,明显低于癌旁组织68.0％ （34/50）（P＜0.05）.散发性TNBC癌组织中BRCA1蛋白表达与启动子甲基化呈负相关（r=-0.323,P=0.022）.结论：BRCA1启动子的高甲基化引起BRCA1蛋白表达下降或缺失,可能是散发性TNBC重要的发病机制之一.     

电刺激黑质对大鼠尾核痛兴奋和痛抑制神经元放电的影响

本实验采用细胞外记录神经元单位放电的方法,在32只大鼠上观察了电刺激黑质对尾核痛兴奋神经元(Pain-excitation neurons,PEN)和痛抑制神经元(Pain-inhibition neurons,PIN)电活动的影响。结果表明,电刺激黑质致密部可使同侧尾核大多数 PEN 诱发放电增加和 PIN 诱发抑制时程延长。这一作用可被腹腔注射氟哌啶所阻断。提示黑质致密部的多巴胺(DA)能神经元通过其轴突末梢释放 DA 影响尾核 PEN 和 PIN 的电活动而参与了中枢对痛党的整合过程。     

黑质网状带GABAB受体对大鼠运动行为的影响

目的观察黑质网状带GABAB受体激活对大鼠运动行为的影响。方法大鼠单侧黑质网状带埋置套管,恢复3d后,于清醒大鼠核团分别微量注射生理盐水、GABAB受体激动剂巴氯芬（1mmol／L）、GABAB受体阻断剂CGP55845A（1mmol／L）、CGP55845A和巴氯芬的混合物0．2μL,观察其旋转行为的变化。结果单侧黑质网状带微量注射巴氯芬,大鼠立刻出现明显的对侧旋转行为,与盐水对照组比较,差异有统计学意义（u=0．00,P〈0．01）。这种对侧旋转行为可以被CGP55845A所阻断,与单纯注射巴氯芬相比,差异有统计学意义（u=0．00,P〈0．01）;仅注射CGP55845A本身并不会产生明显的旋转行为（u=9．00,P〉0．05）。结论黑质网状带GABAB受体激活可抑制其神经元兴奋性,从而解除基底神经核对丘脑及大脑皮质运动区的抑制效应,导致运动功能增强。     

大鼠额前皮质向苍白球和黑质的分叉投射——荧光逆行双标记法研究

应用荧光逆行双标记技术,分别将荧光素二盐酸4′,6-双脒基-2-苯吲哚(4′,6-diamidino-2-pbenylindol·2HCI,DAPI)和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)注射到大白鼠同侧的苍白球和黑质,在注射区同侧的额前皮质内,可观察到数量较多的DAPl和PI单标记细胞和少量的DAPI/PI双标记细胞。表明额前皮质内存在着向同侧苍白球和黑质发出分叉投射的神经元。     

纤维化大鼠肝组织中SMAD3蛋白和ERK1的表达

目的:通过研究大鼠肝纤维化模型肝组织中细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)和SMAD3蛋白的表达及分布规律,初步探讨它们所介导的信号通路在肝纤维化发病机制中的作用。方法:雄性SD大鼠32只,质量250～300g,皮下注射CCl4制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射CCl4后1、4、8周处理动物,采用免疫组织化学方法检测肝组织中ERK1和SMAD3蛋白的表达及分布。结果:ERK1和SMAD3蛋白均主要表达于肝星状细胞中。CCl4注射诱导后,大鼠肝组织中ERK1和SMAD3蛋白的表达较正常对照明显增强(P<0.05)。且CCl4注射1、4、8周组肝组织中两者的表达强度均呈明显的逐级递增的趋势(P<0.05)。结论:ERK信号通路的激活促进肝星状细胞活化增殖;与此同时,SMAD3蛋白介导的信号通路则可能与肝星状细胞的纤维化活性密切相关,两者共同促进大鼠肝纤维化的发生发展。     

WIF-1基因甲基化及Wnt-5a蛋白在软骨肉瘤病人中表达的临床意义

目的：研究WIF-1基因甲基化及Wnt-5a蛋白在软骨肉瘤病人中的表达情况,探讨二者在软骨肉瘤病人中的临床意义。方法：选取我院病理科2008-06-2012-06收治的软骨肉瘤病人43例,另选取软骨瘤病人43例作为对照。收集病人的病历资料及临床病理表现,通过甲基化特异性PCR检测法及免疫组织化学方法,监测两组病人WIF-1基因和Wnt-5a蛋白表达情况。结果：软骨肉瘤WIF-1基因甲基化阳性率高于软骨瘤,比较差异具有统计学意义（χ^2=5.658,#P=0.003）;软骨肉瘤Wnt-5a蛋白表达阳性率高于软骨瘤,比较差异具有统计学意义（χ^2=4.656,＊P=0.006）。黏液型软骨肉瘤Wnt-5a蛋白表达阳性率明显高于普通型软骨肉瘤,差异具有统计学意义（χ^2=4.941,#P=0.002）。发生浸润转移的软骨肉瘤病人Wnt-5a蛋白表达阳性率高于未发生浸润转移的病人（χ^2=4.681,P=0.003）。结论：WIF-l基因的甲基化可能导致Wif-l蛋白表达下降,在软骨肉瘤早期作用;Wnt-5a蛋白表达可能使肿瘤更具有侵袭性,二者可能存在协同作用。