利多组套式引物的测庚型肝炎病毒RNA

利用庚型肝炎病毒ＮＳ３－５区序列合成了四组套式引物，建立了灵敏，特异的 型肝炎病毒ＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法，用此方法检测了１０份庚型肝炎病毒抗体阳性患者血清及１０份阴性的健康人血清。前者不同组引物的检出率为ＮＳ３（１）引物９份了是性，ＮＳ３（２）引物８份阳性，ＮＳ４引物４份阳性，ＮＳ５（１）引物５份阳性，ＮＳ５（２）引物９份阳性；后者各组引物匀为阴性。结果表明，庚型肝炎病毒不同区域引物用于     

逆转录—巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法…

庚型肝炎病毒基因组为单链，正肌ＲＮＡ，全长９３９２ｂｐ。根据５‘－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应用逆转录－巢式聚合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带，其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异性扩增带。     

用逆转录-套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝炎/肝病患者中庚型肝炎病毒感染

目的为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法根据已发表的ＨＧＶ的５’端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性７９份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５０例，阳性率为１９．６％。原因不明的或非甲～戊型肝炎患者４３例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１３例，阳性率为３０．２％。丙型肝炎阳性的职业献血员５７例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１６例，阳性率为３０．２％。结论提示ＨＧＶ感染在我国多种人群中普遍存在，它不仅可能是引起非甲～戊型肝炎的重要病原之一，也可能是引起输血后肝炎的病原因子     

逆转录－巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法的建立及初步应用

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因组为单链、正股ＲＮＡ，全长９３９２ｂｐ。根据５’－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应用逆转录－巢式聚合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带，其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异性扩增带。特异扩增片断大小与设计相符，并经序列分析及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交给予证实。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

PT—PCR检测庚型肝炎病毒和GB病毒感染

ＨＧＶ和ＧＢＶ是近二年发现的新肝炎病毒，引起非Ａ￣Ｅ肝炎。目前实验室检测ＨＧＶ和ＧＢＶ感染主要靠ＲＴ－ＰＣＲ。本文就ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＧＶ和ＧＢＶ ＲＮＡ的临床标准处理、引物、扩增条件、产物检测和目前临床应用研究予以介绍。     

用逆转录—套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝？…

目的 为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法 概括已发表的ＨＧＶ的５‘端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应检测ＨＧＶＲＮＡ。结果 从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性９７份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５     

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

广州地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒核酸检测和病毒核苷酸测序

目的 了解广州地区肝炎患者中庚型肝炎病毒（HGV）的感染情况及基因型特点。方法 采用逆转录－套式聚合酶链反应（RT－nested PCR)方法检测出肝炎患者血清中HGV RNA,引物位于HGV基因组的非编码区,并对扩增产物进行直接测序。结果 251例急慢性肝炎血清中共检出25例HGV RNA阳性,总阳性率为9．96％,其中56例非甲－戊型肝炎中要出4例阳性（7．14％）,77例乙型肝炎（HB）中检出8例阳性（10．39％）,118例丙型肝炎（HC）中检出13例阳性（11．17％）;2株HGV广州核苷酸之间的同源性为98．0％,与非洲洲的同源性分别为81．7％和84．2％,与美国株的同源性均为91．1％。结论 广州地区肝炎患者中存在HGV感染,2株HGV广州株可能为同一基因型,且与HGV美国株具有较高的同源性。     

深圳地区不同人群庚型肝炎病毒感染的分子流行病学调查

在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因５’端非编码区（５’－ＵＴＲ）设计两对套式引物，建立检测ＨＧＶＲＮＡ的逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）。对深圳地区１０６例职业献血员、１６８例肝炎病人及８０例静脉毒瘾者进行ＨＧＶＲＮＡ的检测，阳性率分别为８．５％、７．７％与４６．３％，前两者与后者相比较差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。６１例慢性乙型肝炎与３３例慢性丙型肝炎病人ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为８．２％与２１．２％。３３例慢性丙型肝炎病人中，１５例接触过血液或血制品的病人ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４０．０％，明显高于１８例无血液或血制品接触史者（Ｐ＜０．０５）。本研究结果提示深圳地区职业献血员中ＨＧＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＨＧＶ感染的高危人群；慢性丙型肝炎常重叠ＨＧＶ感染，主要与接触血液或血制品有关。故对献血员进行ＨＧＶ筛查将减少输血后ＨＧＶ感染的发生     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法

目的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５’－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶链反应，并初步应用于１５３例标本。结果该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测     

不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检测及其临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ含量的临床意义。了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫标志不同状态的慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度及其临床意义。方法应用建立的竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法定量检测慢性肝炎（ＣＨ）５１例、肝硬化（ＬＣ）３６例、原发性肝癌（ＰＨＣ）３８例的血清ＨＢＶＤＮＡ浓度。结果ＨＢＶＤＮＡ阳性的ＣＨ患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度为４．３６ｌｏｇ１０ＨＢＶＤＮＡ拷贝５０μｌ（下同），ＬＣ为４．５５，ＰＨＣ为４．４３，三组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；血清ＨＢＶ五项免疫标志均阴性或抗－ＨＢｓ阳性的慢性肝病患者中，有３７．５％患者存在低水平ＨＢＶ复制；ＨＢｅＡｇ阳性患者的ＨＢＶＤＮＡ浓度总体上明显高于抗－ＨＢｅ阳性组，但其中部分患者的ＨＢＶＤＮＡ浓度也很高。结论提示ＨＢＶ的复制状态与慢性肝病的病期无明显关系；在抗－ＨＢｅ阳性的患者中存在个体差异，故不能仅依据抗－ＨＢｅ阳转来判断ＨＢＶ复制减少或停止。     

检测HBV基因组nt585位突变的特异性聚合酶链反应

目的　为调查乙型肝炎病毒(HBV)nt585位A→C变异株在国内的流行情况提供方法学。方法　根据已知的HBV基因组序列并结合国内主要流行adr和adw亚型的特点,合成在nt585位分别为A和C的2套4对引物,建立了突变特异性聚合酶链反应(msPCR)方法。结果　利用msPCR对由25份乙型肝炎免疫失败儿童患者血清和32份成人乙型肝炎患者血清扩增的HBVS基因片段进行了初步检测。结果表明该法可特异性扩增nt585为A和C的HBVDNA。结论　该法是鉴定HBV基因组nt585位A→C变异株的特异而敏感的方法。     

丙型肝炎病毒感染的血清学检测

目的了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染及病毒血症存在情况。方法用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对不同人群的血清标本做了抗－ＨＣＶ、抗－ＨＣＶＩｇＭ和ＨＣＶＲＮＡ的检测，并对三项指标间的关系进行了对比分析。结果抗－ＨＣＶ在普通成年人、献血员、急性肝炎和肝硬化患者中的检出率分别是３５７％，８５８％，６２５％和４８３８％；与ＨＣＶＲＮＡ的符合率分别是１１４３％，６１１１％，８００％和７３３３％。相同人群抗－ＨＣＶＩｇＭ与ＨＣＶＲＮＡ的符合率分别是７５％，９０９％，８１８１％和１００％。结论抗－ＨＣＶＩｇＭ比抗－ＨＣＶ能更客观地反映ＨＣＶ病毒血症的情况，个别抗－ＨＣＶ阴性血清检测到了抗－ＨＣＶＩｇＭ和ＨＣＶＲＮＡ。     

肝病患者庚型肝炎病毒感染的研究

目的 研究肝病患者庚型肝炎病毒感染状况。方法 用酶链免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测１５４例门诊和住院肝病患者（均无输血史）的抗－ＨＧＶ,１５４例中有５４例同时采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ ＲＮＡ,分别计算抗－ＨＧＶ和ＨＧＶ ＲＮＡ的阳性率。以ＨＧＶ ＲＮＡ阳性为ＨＧＶ感染的判断标准,来分析各类肝病患者ＨＧＶ感染状况。结果 １５４例肝病患者抗－ＨＧＶ阳性者３１例,阳性率２０．１３