骨髓单个核细胞移植对脊髓半横断大鼠损伤组织中髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的：研究骨髓单个细胞移植脊髓半横断大鼠脊髓损伤区域后髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）表达的影响.方法：取Wistar大鼠胫骨及股骨提取骨髓单个核细胞,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,制成细胞悬液.建立大鼠脊髓右半横断模型,造模后分为假手术组、模型组、骨髓单个核细胞移植组.于模型建立成功后7d,14d,21d,28d手术的大鼠进行BBB评分从而评估损伤脊髓神经功能恢复情况,利用RT-PCR观察MBP mRNA的表达变化.结果：术后各时间点假手术组BBB评分均明显高于骨髓单个核细胞移植组、模型组（P＜0.05）;术后随时间延长骨髓单个核细胞移植组、模型组BBB评分逐渐增加,14、21、28d时骨髓单个核细胞移植组BBB评分明显优于模型组（P＜0.05）.PT-PCR测试各时间点骨髓单个核细胞移植组和模型组大鼠脊髓中MBP mRNA的表达量高于假手术组,且骨髓单个核细胞移植组高于模型组（P＜0.05）.结论：骨髓单个细胞移植可提高脊髓组织中MBP的表达,有助于大鼠半横断脊髓损伤神经功能的恢复.     

骨髓腔内移植对异基因骨髓移植小鼠造血的影响

目的:探讨骨髓腔内骨髓移植(Intrabonemarrowbonemarrowtransplantation,IBMBMT)对异基因骨髓移植小鼠造血功能的影响。方法:将供鼠C57BL/6(H2b)骨髓细胞经微量注射器直接注入到经致死量照射后的受鼠BalB/c(H2d)胫骨骨髓腔。在骨髓移植后1,7,14d分别检测受鼠外周血红细胞、白细胞、血小板;骨髓移植后7,14d分别检测受鼠骨髓中的CFUS。结果:IBMBMT组小鼠移植后7,14d的外周血红细胞、白细胞、血小板、骨髓脾集落形成单位(CFUS)均显著高于传统骨髓移植组(IVBMT)(P<0.01)。结论:IBMBMT较IVBMT更能促进异基因骨髓移植后造血功能重建。     

川芎嗪对骨髓移植小鼠造血细胞SDF-1表达水平的影响

为探讨川芎嗪对骨髓移植(BMT)后造血重建过程中基质细胞来源因子(SDF-1)的作用,建立了典型同基因BMT小鼠模型,胃饲川芎嗪注射液每次2 mg,2次/d,分别于BMT后第7、14 d计数外周血细胞骨髓单核细胞(BMNC)并测定骨髓组织切片中SDF-1的表达.结果表明川芎嗪组BMT后第7、14 d外周血细胞计数、BMNC计数及骨髓组织切片中SDF-1表达水平均高于BMT组.提示川芎嗪能在骨髓移植造血重建早期促进骨髓基质细胞表达SDF-1,可能是促进BMT后造血干细胞(HSC)回髓、加速造血重建的机制之一.     

Effects of Ligustrazine on Expression of Bone Marrow Heparan Sulfates in Syngeneic Bone Marrow Transplantation Mice

Hematopoietic reconstitution after bone marrowtransplantation (BMT ) is a complicated process,which concerns notonly with the quality and quanti-ty of hematopoietic stem cells(HSC) ,but also withthe recovery of hematopoietic inducing microenviron-ment (HIM) .The contactof HSC and HIM,whichregulates the proliferation,differentiation and self-maintenance of HSC,is critical for hematopoietic re-constitution.Heparan sulfates (HS) are a kind of gly-cosaminoglycans macromolecules composed of…     

Rh血型不合异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血1例报告

1 病例资料 患者,女,46岁,2013年4月始出现月经量增多,开始未予重视.2013年7月因“头晕、乏力反复”至当地医院就诊,血常规示:WBC (1.40～3.08)×109/L、Hb 74～86 g/L、PLT (25～60)×109/L.进一步行骨髓检查,骨髓细胞形态学提示“骨髓增生减低,粒红比例减低,巨核细胞全片0～1个”,骨髓活检病理示“骨髓造血组织增生减低,脂肪细胞明显增多”,染色体示“46,XX”,诊断为“再生障碍性贫血”.2013年9月初开始予环孢素A(cyclosporin A,CsA) 200 mg/d口服治疗,期间曾反复多次给予血制品输注及细胞因子支持,但疗效不佳.     

Effects of Platelet Factor 4 on Expression of Bone Marrow Heparan Sulfate in Syngenic Bone Marrow Transplantation Mice

Platelet factor 4 ( PF4) is a negativehematopoietic factor.It can inhibit the prolifera-tion of endothelial cells and hematopoietic stem/progenitor cells,particularly megakaryoryocyticcells,reversibly[1] ,inhibit DNA synthesis,blockcell cycle progression during S phase and reducethe sensibility of normal hematopoietic stem/pro-genitor cells,but not some cancer or leukemia celllines,to cytotoxic drugs and ionizing radia-tion[2 - 3] ,and it also can cause a population in-crease of the stem cel…     

半相合基因骨髓细胞移植治疗小鼠肾癌的实验研究

目的探讨半相合基因骨髓细胞移植的嵌合体水平对移植物抗肿瘤效应（Graft-Versus-Tumor effect,GVT）、移植物抗宿主病（Graft-Versus-Host Disease,GVHD）的影响及其机理。方法 25只8-12周龄BALB/C小鼠随机分为3组：混合型嵌合体组（A组10只）、完全型嵌合体组（B组10只）、对照组（C组5只）。A、B组小鼠行直线加速器全身照射,剂量分别为4Gy、8Gy,照射后4-6h内经尾静脉注射入CB6F1代小鼠的骨髓细胞（5×106/只）,C组无处理。A、B、C三组均给予Renca肾癌细胞腋窝下注射,每只2.6×106个肾癌细胞。观察肿瘤生长速率,流式细胞仪测定A、B组小鼠移植后不同时间的嵌合体水平。荷瘤32d时断颈处死小鼠,剥离肿瘤称重;留取血浆,ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）方法测定血浆白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）,干扰素-γ（Interferon Gamma,IFN-γ）浓度;取肿瘤组织做成石蜡切片后行HE染色,测定肿瘤坏死面积比;留取小鼠的皮肤、肝脏及小肠用于制备石蜡切片,并行HE染色,观察GVHD。结果血液白细胞中供者源细胞比例：A组移植2周后形成混合嵌合体并达高峰,3-4周时下降至10%以下。B组小鼠移植后14d形成完全供者型嵌合体（供体细胞〉90%）,28d后仍达90%以上。与C组和A组相比,B组的肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤重量显著减小（P〈0.01）,抑瘤率高达52%,IL-2、IFN-γ水平显著升高（P〈0.01）,肿瘤组织坏死面积比显著升高（P〈0.01）。病理学检查未见肝、小肠及皮肤出现GVHD明显变化。结论完全型嵌合体水平的半相合基因骨髓细胞移植能够激发小鼠系统性的抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤生长,其机理可能是肿瘤坏死增加。     

Graft-versus-leukemia effects from donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation in mice

Background Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation has been used since the 1990s as a new hematological stem cell transplantation strategy for treating hematological diseases. The purpose of this study was to explore the graft-versus-leukemia (GVL) effects of donor lymphocyte infusions (DLIs) after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantations, while assessing the declines in treatment-associated morbidity, mortality, and graft-versus-host disease (GVHD).Methods A total of 615 (H-2k) mice were injected with L615 tumor cells and received 500 cGy (60Coγ-ray) irradiation three days later, followed by an allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT). The allo-grafts consisted of 3×10（7） bone marrow cells and 1×10（7） spleen cells from BALB/C (H-2d) donor mice. Two days after the allo-BMT, the recipient mice were given 200 mg/kg of cyclophosphamide. Subsequently, recipient mice were infused with either donor spleen cells ［2×10（7）］ on day 14 or 21, or donor spleen cells ［5×10（7）］ pretreated with hydrocortisone and cyclosporin A (CsA) in vitro on day 14 post-BMT.Results The median survival time of mice that received DLI on day 21 and pretreated DLI on day 14 post-BMT was longer than that of controls and the day 14 DLI group (P&lt;0.01). No evidence of severe GVHD was observed in the day 21 DLI group nor in the day 14 treated DLI group. Mixed chimerism was confirmed in the day 14 DLI group, the day 14 treated DLI group, and the day 21 DLI group on the thirteenth day post-transplantation; full donor chimerism was observed two weeks after DLI.Conclusion Donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative bone marrow transplantation may reduce transplantation-associated morbidity and mortality while strengthening graft-versus-leukemia effects.     

Effect of Ligustrazine on the Expression of LFA-1, ICAM-1 Following Bone Marrow Transplantation in Mice

Asablood activatingChinesedrug ,ligustrazinecanimprovethemicroenvironmentofbonemarrow ,increasetheadherentfunctionofstromalcellsandpromotethegrowthofhematopoieticcells[1] .Toin terprettherolesthatligustrazineplaysinbonemar rowhematopoieticreconstitutionan…     

双氢青蒿素和奎宁对恶性疟原虫早期配子体作用的随机比较

【目的】研究双氢青蒿素对恶性疟原虫早期配子体的抑杀作用。【方法】仅骨髓带恶性疟原虫早期配子体而骨髓与外周血液均无成熟配子体的患者11例,随机分为A、B2组。A组6例口服双氢青蒿素片7d总量480mg;B组5例口服硫酸奎宁片7d总量10500mg,定时取骨髓和外周血液涂片,观察两组配子体密度的变化。【结果】A组骨髓早期配子体药后10d全部转阴;而B组全部阳性,至药后14d仍有2/5例阳性。外周血液配子体转阴时间,A组为(4.8±0.9)d;B组为(22.0±5.8)d。【结论】双氢青蒿素能杀灭恶性疟原虫早期配子体,而硫酸奎宁似无此作用。     

壳聚糖载体加载碱性成纤维细胞因子诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的研究

利用生物材料在体外将骨髓间充质干细胞诱导为神经元样细胞。方法利用全骨髓贴壁培养法提取骨髓间充质干细胞,并利用细胞表面抗原CD45 和CD90 进行鉴定。分为3 组,单纯壳聚糖组、加载了碱性成纤维细胞因子（bFGF）的壳聚糖组和单纯bFGF组。分别在3 和7 d 时利用免疫荧光细胞化学检测神经干细胞标记蛋白Nestin、幼稚神经元标记蛋白Tuj-1 等指标的表达情况。结果加载了bFGF 的壳聚糖处理细胞时,细胞在第3 天出现了大量的Nestin 阳性细胞,虽然在其他两组中也出现了Nestin 阳性细胞,但加载了bFGF的壳聚糖组比其他两组多,且差异有统计学意义（ p<0.05）。同样的,在诱导7 d时,Nestin 和Tuj-1 双阳性的细胞在加载了bFGF 组中的比例要比其他两组要多,且差异有统计学意义（ p<0.05）。结论加载有bFGF的壳聚糖能够将成年大鼠骨髓间充质干细胞高比例诱导分化为神经元样细胞。为骨髓间充质干细胞自体移植治疗神经退行性疾病和中枢神经系统提供了理论和实验依据。     

Effect of ligustrazine on hematopoiesis in bone marrow transplantation mice

Hematopoietic reconstitution after bone marrowtransplantation is a complicated process,whichconcerns with the quality and quantity ofhematopoietic stem cell (HSC) ,and also with therecovery of hematopoietic inducing microenvironment(HIM) .The contact of HSC and HIM is critical forhematopoietic reconstitution.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　Materials1 .1 .1　 Animals　　 BALB/c mice of both sexes(clean class,close copulatory series (H- 2 d,MLSb) )were 8— 1 0 weeks old,and 1 7— 2 …     

肝细胞生长因子对骨髓移植小鼠造血重建的促进作用

目的 观察肝细胞生长因子（HGF）对骨髓移植小鼠造血重建的促进作用。方法 用BALB／c小鼠建立同基因骨髓移植模型，随机将BALB／c小鼠分A、B两组，B组移植后叶7d皮下注射HGF，A组皮下注射PBS，移植后1、7、14、21和28d检测小鼠血红蛋白、白细胞、血小板、骨髓单个核细胞及骨髓造血细胞面积。结果 B组血红蛋白在移植后7、14d与同期A组无差异（P〉0．05），B组血红蛋白在移植后21d高于同期A组（P〈0．05）；B组血小板在移植后7、14及21d高于同期A组（P值分别小于0．01、0．01和0．05）：B组白细胞在移植后7、14、21及28d高于同期A组（P值分别小于0．01、0．01、0．05及0．05）；B组骨髓单个核细胞及骨髓造血细胞面积在移植后7、14、21和28d高于同期A组（P值分别小于0．05、0．01、0．01及0．05）。结论 HGF对骨髓移植小鼠造血重建有一定的促进作用。     

造血干细胞移植治疗恶性血液病、实体瘤回顾分析

目的 探讨不同预处理方案以及不同移植方法治疗恶性血液病、实体瘤的疗效,对其移植效果及移植风险进行评价.方法 回顾分析非净化自体骨髓移植（auto-HSCT）31例,外周血干细胞加自体骨髓活化移植（PBSCT＋ABM）26例,清髓性异基因骨髓移植（allo-HSCH）18例,非清髓性异基因骨髓/外周血移植（allo-NSCT）43例,脐带血干细胞移植（CBT）7例的临床资料.PBSCT＋ABM、auto-HSCH和allo-HSCH均采用MAC方案预处理.PBSCT＋ABM系采用自身外周血干细胞及体外活化自体骨髓液750 ml回输;allo-HSCT采集供者骨髓液于移植0 d回输;allo-NSCT是采用低强度的FAAC或MAAC两种方案预处理,移植后根据嵌合体形成的情况,以递增方式将供体淋巴细胞输注（DLI）给患者.allo-CBT患儿,2例采用脐血库的干细胞,HLA配型4个以上的位点相合,5例采用同胞的脐带血干细胞,预处理采用CTX/ATG,移植的程序与上述一致.异基因移植患者常规使用免疫抑制剂（环胞霉素、氨甲蝶呤/骁悉）,并根据白细胞、血小板、骨髓恢复,ABO血型分析,STR测定嵌合体形成等情况作为植活的证据.aGVHD按Glucksberg标准分析,cGVHD根据Shulman标准分析.结果 125例患者中除有1例慢性髓性白血病（CML）NSCT移植后40 d时植入失败死于骨髓衰竭,1例急性髓性白血病（AML）NSCT在造血恢复前死于脑出血外,其余123例都预期恢复造血.异基因移植aGVHD发生率9.69%,cGVHD发生率22.23%.auto-HSCT31例,截止资料分析时生存8例（25.80%）.PBSCT＋ABM 26例,生存15例（57.69%），allo-HSCT 18例,生存11例（61.11%）,NSCT43例,生存19例（45%）.CBT7例生存2例.结论 异基因造血干细胞移植是一种根治性的治疗手段,尤其非清髓性预处理的异基因造血干细胞移植方法不仅扩大了移植的应用范围及适应证,而且提高了移植的安全性并降低了移植费用.     

血清血管内皮细胞生长因子在急性心肌梗死自体骨髓干细胞移植治疗中的作用

目的探讨急性心肌梗死患者自体骨髓干细胞冠状动脉内注射改善心功能的治疗中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的作用。方法选择因急性心肌梗死住院并行介入治疗的患者25例,按照随机分组的原则分为干细胞移植治疗组和对照组,治疗组患者在心肌梗死发生14d后进行冠状动脉内注射自体骨髓干细胞治疗。术前1周和术后6个月时,采用^99mTC—MIBI心肌灌注显像、二维超声心动图评价患者心肌灌注（SPECT积分）、左室射血分数（EF％）,术后第3、7、14、28、56天时酶联免疫吸附法测定患者血清VEGF（pg／ml）浓度。结果干细胞移植治疗组与对照组比较,自体骨髓干细胞移植前两组间心肌灌注及左室射血分数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。术后6个月时心肌灌注及左室射血分数治疗组明显好于对照组（P〈0．05）。血清VEGF浓度在细胞移植后3、56d时移植治疗组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;血清VEGF浓度在细胞移植后7、14、28d时细胞移植治疗组明显高于对照组（P〈0．05）。结论急性心肌梗死后通过自体骨髓干细胞冠状动脉内移植增加患者血清VEGF浓度,改善心肌灌注,提高患者的心功能,减少心力衰竭的发生。     

异种脱钙骨基质诱导异位骨髓形成的实验研究

目的：开展诱导异位骨髓形成的研究,探讨骨髓形成及其调控机理方法：采用异种（人）脱钙骨基质粉,植入Ｓｐｒａｑｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腹壁两侧皮下,建立异种脱钙骨基质粉诱导异位骨髓形成的动物实验模型。结果：在诱导第７天可见间充质细胞包绕并迁入骨基质性植入物的间隙,分化成原始软骨细胞、形成软骨组织。诱导第１３天,新生软骨组织进一步增加,成骨细胞,破骨细胞和血管位于其中,呈现软骨化骨现象,类骨样基质产生,成     

不同途径移植间充质干细胞对大鼠急性肝损伤的修复作用

目的:评价骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠急性肝损伤的修复作用,探讨其可行性和有效性.方法:四氯化碳(CCl4)腹腔注射复制Wistar大鼠急性肝损伤模型,造模后随机分为实验组及对照组,实验组分别通过尾静脉、门静脉、肝内注射移植经Hochest33342标记的大鼠骨髓MSCs悬液0.5 mL(约1×10 6个细胞...     

人骨髓基质干细胞体外三维立体培养的实验研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法：将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI标记和扫描电镜观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的生长和粘附情况,并测量hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率。结果：hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率为(99.1±1)%;DiI标记的细胞于接种后第2、4、7天激光共聚焦检测,见支架空隙中细胞逐渐增多;电镜观察,接种7天后,电镜下见细胞覆盖了部分脱钙骨表面;自部分脱钙骨中份切开,横断面电镜观察见断面中充满细胞。结论：hBMSCs在部分脱钙骨支架的三维立体环境中生长良好,是一种较好的体外培养方法。     

大鼠骨髓基质细胞体外分化为内皮细胞静脉移植治疗大鼠局灶脑缺血动物行为学研究

目的观察骨髓基质细胞体外诱导分化为内皮细胞后静脉移植治疗大鼠永久大脑中动脉闭塞(MCAO)模型动物行为学改善情况。方法利用高浓度(400μg/L)rhGM-CSF(重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)在体外诱导骨髓基质细胞分化为内皮细胞,在细胞移植前进行BrdU(10μmol/L)标记16 h备用。线栓法制作永久SD大鼠MCAO模型(n=45),模型动物随机分为3组:MCAO+移植细胞组(n=15):每只大鼠舌静脉移植3×106的诱导分化后的内皮细胞(相当于0.2 mL细胞悬液);MCAO+移植PBS对照组1(n=15):每只大鼠舌静脉移植0.2 mL的PBS;MCAO对照组2(n=10):血管闭塞后不给予任何干预治疗。在细胞移植前及移植后1、3、5、7、14 d分别采用下列动物行为学评价指标:姿势反射实验,肢体不对称应用试验,角落实验。结果细胞移植组动物行为学评分优于2个对照组,特别是在移植后第7天和第14天较2个对照组差异有统计学意义(P<0.05);细胞移植组在移植后动物行为学评分较移植前有改善,特别是在移植后第7天和第14天较移植后1、3、5 d有显著改善(P<0.05)。结论骨髓基质细胞体外诱导分化后的内皮细胞静脉移植可以改善大鼠局灶脑缺血的神经功能,在移植后第7天开始表现出神经功能的改善,第14天功能改善更明显,其机制尚需进一步研究。     

刺五加多糖对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的影响

本文用抗Thy-1.2单克隆抗体和补体在体外特异地去除C_(57)BL/6(H—2~b)小鼠骨髓中的T细胞,成功地对致死量照射的BALB/c(H—2~d)小鼠进行了异基因骨髓移植。移植后55天,异基因骨髓移植小鼠的免疫功能明显低于正常小鼠。在移植后45天,用每日100mg/kg剂量的刺五加多糖经腹腔连续给药10天,小鼠对胸腺不依赖抗原TNP-Ba的PFC反应以及对ConA和LPS增殖反应均较对照小鼠明显增加,但对胸腺依赖抗原SRBC的PFC反应以及BSA诱导的DTH反应无明显改善。