局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的研究

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和不同时间点脑组织病理学改变及相应时间点大鼠神经功能评分的关系。方法 将成年Wistar大鼠55只，随机分为脑缺血组、假手术对照组、糖缺血再灌注组，应用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，并采用HE染色TUNEL法检测再灌注损伤后细胞凋亡情况。电镜观察脑缺血再灌注后细胞凋亡形态的改变。结果 脑缺血再灌注0～6h神经功能缺损程度最重，随再灌注时间延长逐渐改善，24h症状又有加重，提示再灌注引起继发性脑损害。神经细胞出现坏死或凋亡与缺血程度和持续时间有关。TUNEL标记缺血1h后再灌注48h之内，皮层区细胞凋亡指数（AI）随再灌注时间的延长不断增加。结论 线栓法成功制备的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，可用于缺血再灌注神经细胞损害及脑保护的研究。缺血性神经原死亡经历凋亡和坏死两种途径，中度、重度缺血以坏死为主，轻度缺血以凋亡为主。     

甘草酸二铵对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后炎症影响的研究

目的 研究甘草酸二铵对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-KB、ICAM-1、TNF-α的表达.方法 雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组40只,夹闭左右肾动脉之间腹主动脉制作脊髓缺血再灌注损伤模型.实验组缺血前10min舌下静脉注射甘草酸二铵20mg/Kg,对照组注射同量生理盐水.再灌注3、24、72和168h不同时间点各取10只大鼠腰段脊髓组织,免疫组化法检测NF-KB和ICAM-1表达及ELISA法检测TNF-α的表达.结果 3种炎症因子在两组脊髓组织中的表达水平有统计学意义(P<0.05),甘草酸二铵对各时间点脊髓组织中NF-KB表达的抑制率分别是15.40%、20.17%、19.28%、11.11%.结论 甘草酸二铵对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-KB、ICAM-1和TNF-α表达有抑制作用,抑制了早期炎症反应的发生.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡的动态变化

目的：观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的动态变化。方法：采用健康雄性大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型，阻断大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注，在0．5h，6h，12h，24h和48h不同时间点断头取脑，连续取脑进行TUNEL染色。结果：①假手术组、缺血再灌注组非缺血侧大脑半球未见阳性的凋亡细胞。②脑缺血再灌注早期部分神经细胞发生了凋亡。随着再灌注时间的延长，凋亡细胞数目逐渐增多，12h～24h达到高峰。③凋亡细胞主要分布在梗死灶的边缘区，梗塞灶中心区和正常区无凋亡细胞。结论：神经细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤时起着重要作用。     

甘草酸二铵对脊髓缺血再灌注损伤后IL-4/IL-8/TNF-α表达的影响

目的初步探讨甘草酸二铵（Diammonium Glycyrrhizinate,DG）对脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织中炎性细胞因子IL-4、IL-8、TNF-α表达的影响。方法雄性SD大鼠90只,随机分为空白对照组、阴性对照组、DG干预组三组,通过外科手术法造成大鼠腰段脊髓的缺血再灌注损伤,组织匀浆后采用ELISA检测IL-4、IL-8、TNF-α的表达。结果与阴性对照组比较：空白对照组IL-4在24、72、168h有统计学意义（P〈0.05）,DG干预组IL-4在3、24h时间段有统计学意义（P〈0.05）;阴性对照组IL-8各时间段均有统计学意义（P〈0.05）;DG干预组IL-824、72h时间段有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组TNF-α各时间段均有统计学意义（P〈0.05）;DG干预组TNF-α全部时间段均有统计学意义（P〈0.05）。结论脊髓缺血再灌注损伤后IL-4、IL-8、TNF-α的表达明显发生变化,DG可能通过影响IL-4、IL-8、TNF-α的表达发挥保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因表达的研究

目的探讨在局灶性脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡及相关基因表达的影响及脑缺血后神经细胞凋亡的调控机制。方法利用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，采用免疫组化和逆转录聚合酶链（RT—PCR）反应方法分别检测脑缺血再灌注不同时间细胞洲亡及相关基因bcl-2和bax、Caspase-3表达的动态变化。结果轻度脑缺血和再灌注早期，bcl-2表达升高，具有神经保护作用，但重度脑缺血和再灌注后期，其保护作用不足以抑制神经细胞凋亡。Bax表达于神经细胞删亡时空分布一致，可反映缺血后脑损伤的程度。Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中起重要作用，其表达的升高早于细胞凋亡，直接参与神经细咆凋亡的执行。结论脑缺血再灌注能够引起Bcl-2基因和Caspase-3基因表达的改变。导致神经细胞凋亡的发生。     

自藜芦醇苷对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨白藜芦醇苷（P0lydatin，PD）对缺血再灌注脑损伤的保护机制。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察PD对缺血再灌注脑损伤凋亡的影响。结果：再灌注2h己开始发生部分神经细胞的凋亡，随着再灌注时间的延长，凋亡细胞逐渐增多，24h达高峰，以后逐渐减少。PD组在各个观察时间点凋亡细胞数明显低于模型组（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注的迟发性损伤阶段，细胞凋亡是神经元死亡的主要方式。PD可通过抑制缺血再灌注脑损伤后神经元的凋亡发挥保护作用。     

白藜芦醇苷对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇苷(Polydatin,PD)对缺血再灌注脑损伤的保护机制.方法:采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察PD对缺血再灌注脑损伤凋亡的影响.结果:再灌注2h己开始发生部分神经细胞的凋亡,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24h达高峰,以后逐渐减少.PD组在各个观察时间点凋亡细胞数明显低于模型组(P＜0.05).结论:脑缺血再灌注的迟发性损伤阶段,细胞凋亡是神经元死亡的主要方式.PD可通过抑制缺血再灌注脑损伤后神经元的凋亡发挥保护作用.     

缺血再灌注后脑细胞凋亡率的测定

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞凋亡率的时程变化。方法：插线法制备大 鼠大脑中动脉梗塞再灌注（ＭＣＡＯ／Ｒ）模型,用流式细胞仪检测缺血２ｈ再灌注６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 的凋亡率。结果：缺血再灌注４８ｈ内,随再灌注时间的增加,脑细胞凋亡率逐渐升高,以再灌注４８ｈ凋 亡率最高（１３．１０％± １．３７％）,明显高于再灌注６ｈ（３．３８％±０．７６％）, １２ｈ（６．９８％± １．６３％）,与再灌 注 ２４ｈ（１１,６８％±１.４４％）无明显差别;灌注 ７２ｈ（１０．２０％±２．３０％）明显降低。结论：ＭＣＡＯ２ｈ再灌 注后,脑细胞凋亡的出现是一个动态过程,初期升高,２４ｈ～４８ｈ达到高峰,然后缓慢下降。     

缺血后处理对家兔缺血再灌注心肌窦房结细胞凋亡的影响

目的：在家兔急性心肌梗死模型中观察缺血后处理对家兔心肌窦房结细胞缺血再灌注（IR）的作用及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：在体成年家兔右冠状动脉缺血再灌注模型分4组：正常对照组、IR组、缺血预处理（IPC）组、缺血后处理组。观察缺血后处理对家兔在体窦房结细胞IR损伤及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果：对照组细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达极少;IPC、缺血后处理组较IR组窦房结细胞凋亡数目显著减少,Bcl-2蛋白表达显著增强,Bax蛋白表达显著减弱;IPC组与缺血后处理组细胞凋亡数目、Bcl-2和Bax蛋白表达无显著差异。结论：IR损伤可诱导窦房结细胞凋亡,IPC、缺血后处理可通过提高Bcl-2蛋白表达同时下调Bax蛋白表达水平从而减少窦房结细胞凋亡,但两组干预效果无明显差异。     

甘草酸二铵对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响

目的:本实验通过观察甘草酸二铵注射液对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响,初步探讨其可能机制。方法:健康SD大鼠32只,雌雄不限,体重175~250 g,随机分为实验组和对照组(n=16),在大鼠背部制作以尾端为蒂的8 cm×2 cm(长宽比4∶1)大小的超长随意皮瓣。术前10 min及术后连续6 d,实验组予甘草酸二铵2 mg/100 g qd腹腔注射,对照组予等量5%葡萄糖注射液腹腔注射。于术后24 h每组随机选择8只大鼠处死,取皮瓣组织检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)。术后第7 d处死其余大鼠,计算皮瓣成活率,取皮瓣组织检测SOD、MDA,并取皮瓣近、中、远段进行HE染色,在光镜下观察皮瓣组织学改变。结果:术后第24 h,实验组皮瓣SOD含量高于对照组(P<0.01),MDA含量低于对照组(P<0.01)。术后第7 d,实验组皮瓣成活率高于对照组(P<0.05),SOD含量高于对照组(P<0.01),MDA含量低于对照组(P<0.01)。组织学观察显示,实验组近、中、远段皮瓣与对照组相比,组织水肿程度较轻,炎性细胞浸润较少,血管扩张增生较明显,坏死程度较轻。结论:甘草酸二铵能改善大鼠背部超长随意皮瓣的成活率,其作用机制可能与减少氧自由基生成,减轻炎性细胞浸润有关。     

甘草酸二铵对人肺癌细胞A549增殖作用的影响

目的研究甘草酸二铵对人肺癌细胞系A549增殖的影响。方法采用A549细胞体外培养的方法，以MTT、^3[H]-TdR掺入法及流式细胞术观察细胞的增殖情况。结果甘草酸二铵能促进A549细胞代谢MTT，增加其^3[H]的掺入率，并呈现剂量依赖性。在100ng／ml时，流式细胞术显示，甘草酸二铵可抑制A549细胞由静止期进入DNA合成期。结论甘草酸二铵能呈剂量依赖型抑制A549细胞的分裂增殖。     

黄连素对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol/ L、1.5× 10 - 4 mol/ L 三种浓度分别加入培养基中 ,预处理 2 4h后 ,再置于上述缺氧复氧环境中培养 ,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶 ( L DH)、丙二醛 ( MDA)、超氧化物歧化酶 ( SOD)含量 ,并检测各组细胞的凋亡率。结果　与正常对照组相比 ,缺血及再灌组细胞上清液中 L DH、MDA含量明显升高 ( P<0 .0 1) ,SOD活力则显著降低 ( P<0 .0 1) ,缺血组和再灌组凋亡率均升高明显 ( P<0 .0 1)。而用黄连素预处理后缺血及再灌组的 L DH、MDA显著低于用药前 ( P<0 .0 1) ,SOD则高于单纯缺血和再灌组 ( P<0 .0 1) ,上述作用在本实验黄连素浓度为 1.5× 10 - 6 m ol/ L～ 1.5× 10 - 4 mol/ L 范围内 ,随浓度升高而更加明显。特别是用黄连素 1.5× 10 - 5mol/ L 浓度预处理后 ,缺血组和再灌组的细胞凋亡率分别是 14.4%和 2 0 % ,分别与用药前 ( 17.4%和 41% )比较有显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论　黄连素对缺血再灌心肌细胞有保护作用 ,其作用与浓度有一定依赖关系     

缺血再灌注诱导大鼠脑毛细血管内皮细胞凋亡

研究了大鼠大脑中动脉短暂闭塞后血脑屏障通透性与凋亡脑毛细血管内皮细胞的关系。结果表明，血脑屏障受损程度与凋亡脑毛细血管内皮细胞数量随缺血时间延长而增加，脑毛细血管内皮细胞凋亡可能参与了血管源性脑水肿的形成机制。     

丙泊酚及缺血预处理对大鼠肝缺血－再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的：探讨丙泊酚及缺血预处理对大鼠肝脏缺血－再灌注损伤时细胞凋亡的影响。方法：成年健康SD大鼠72只，随机分为4组：假手术组（Sham组）、缺血－再灌注组（IR组）、缺血预处理组（IP组）、丙泊酚组（P组）。制作70％肝脏缺血－再灌注模型，实验结束后即刻取肝左叶。用免疫组化法检测Bcl-2与Bax蛋白表达量，TUNEL法检测肝细胞凋亡指数（AI）。结果：与Sham组比较，各组肝组织Bcl-2、Bax蛋白表达水平、凋亡指数均增加（P〈0．05）；与IR组比较，IP、P组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达和AI减少（P〈0．05）；与IP组比较，P组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达和AI减少（P〈0、05）。结论：丙泊酚及缺血预处理通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达，使肝细胞凋亡减轻，对大鼠缺血再灌注肝脏可能有一定的保护作用。     

乌司他丁对大鼠肝脏冷缺血-再灌注肺损伤的影响

目的 研究乌司他丁（UTI）预处理对肝缺血-再灌注肺损伤（IRI）的影响.方法 将SPF级SD大鼠30只随机分为3组：假手术组（S组,n=10）大鼠仅进行单纯开关腹手术,游离相应血管;模型对照组（M组,n=10）大鼠采用肝脏冷缺血-再灌注模型手术,不给予任何干预措施;UTI组（U组,n=10）大鼠采用肝脏冷缺血-再灌注模型,在切皮时经尾静脉给予UTI,10万U/kg.各组于缺血再灌注后12 h收集血清和肺组织标本,利用ELISA检测TNF-α和IL-6表达水平;切取肺组织,测定肺组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量,光学显微镜下观察肺组织病理学结果.结果 与S组相比,M组和U组大鼠血清TNF-α和IL-6浓度及肺组织MDA含量均升高（P＜0.05）,肺组织SOD活性均降低（P＜0.05）;与M组相比,U组血清TNF-α和IL-6浓度及肺组织MDA的含量均降低（P＜0.05）,肺组织SOD活性均升高（P＜0.05）.结论 UTI预处理可明显减轻大鼠肝脏冷缺血-再灌注后肺损伤;肝脏移植.     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠半暗带区神经细胞凋亡与即早基因表达的影响

目的：探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质半暗带（ischemic penumbya, IP）区神经细胞凋亡与即早基因c-fos、c-jun、c-myc表达的关系。方法将48只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,脑缺血再灌注（模型）组,尼莫地平组及丹龙醒脑方小、中、大剂量组（丹小组、丹中组、丹大组）。后五组用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注（MCAO/R）模型,再灌注24 h进行神经功能缺损评分后,取缺血侧大脑皮质,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡的神经细胞,免疫组化法分别检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白。结果与假手术组比较,其余各组的神经功能缺损评分、神经细胞凋亡指数（AI）及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的积分光密度（IOD）值均升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,尼莫地平组和丹龙醒脑方各剂量组的神经功能缺损评分、神经细胞AI及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的IOD值均减小,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;尼莫地平组、丹龙醒脑方各剂量组组间比较,各指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论丹龙醒脑方能显著降低脑缺血后神经功能缺损和减少神经细胞凋亡,其机制可能与下调即早基因c-fos、c-jun和c-myc的表达有关。     

干扰素-ε诱导K562细胞凋亡的研究

目的：研究应用不同浓度的干扰素（IFN-ε）对K562细胞中野生型p53mRNA和Survivin mRNA表达影响及诱导凋亡作用。方法：应用RT—PCR法检测野生型p53 mRNA和Survivin mRNA的表达。结果：不同浓度的IFN-ε均可抑制Survivin基因的表达，并存在剂量与时间依赖性；可促进野生型p53mRNA的表达上调，但无剂量与时间依赖性。结论：IFN-ε可诱导K562细胞发生凋亡，促进野生型p53 mRNA表达上调和抑制Survivin mRNA的表达可能是其机制之一。     

NGF对丙烯酰胺引起小脑神经元凋亡的影响

目的 研究NGF对丙烯酰胺引起小脑神经元细胞凋亡的影响。方法 建立丙烯酰胺诱导的小脑神经细胞凋亡模型，并利用腹腔注射方法观察NGF的保护作用。结果 从行为学检测丙烯酰胺诱导神经细胞调亡后自主行为活动情况，结果 显示模型对照组自主性行为的活动次数明显减少。生化指标模型对照组与实验组比较，模型对照组大鼠的小脑组织中谷光甘肽和肌酸激酶含量明显减少(P＜0．01)。从形态学观察模型对照组小脑皮质蒲肯野细胞层和颗粒细胞层凋亡明显，细胞数明显减少。NGF(1000，2000u/kg)能够使谷光甘肽和肌酸激酶含量增加，细胞形态结构损伤明显减轻。结论 NGF能够抑制丙烯酰胺诱导的小脑神经细胞凋亡。     

清开灵对大鼠脑细胞凋亡的保护作用

目的探讨清开灵注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的保护作用。方法48只SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、清开灵注射液A组(12.8mg/kg)、清开灵注射液B组(4.3mg/kg)。线拴法制作大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注22h进行神经功能评分,再灌注24h后,应用化学比色技术检测线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的变化,应用Hoechst33258荧光染色检测脑细胞凋亡。结果模型组大鼠脑缺血再灌注后神经功能障碍症状加重,脑组织线粒体SDH活性明显降低(P<0.05),皮质脑细胞凋亡增多。清开灵注射液干预后,神经功能障碍症状明显改善,可以促进线粒体SDH活性的恢复(P<0.05),细胞凋亡减少。结论清开灵注射液保护脑细胞凋亡,部分是通过促进线粒体SDH活性恢复、保护线粒体整体功能起作用的。     

插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型

目的 :比较两种大脑中动脉闭塞 (middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型 ,寻找一种更加理想、稳定和可靠的模型。方法 :选用 Ethicon缝线 (直径 0 .16 mm )和 Takeno钓鱼线 (直径 0 .2 0 mm ) ,按 Koizumi和 L onga插线法制作局灶性脑缺血再灌注模型。缺血 2 h再灌注 4h和 2 2 h神经病学评分计算有效率和死亡率。TTC染色计算梗死面积百分比。结果 :Koizumi模型再灌注 4h有效率和 2 2 h梗死面积百分比较 L onga法为高 ,而再灌注 4h死亡率较低。结论 :大鼠 MCAO局灶性脑缺血再灌注模型采用 Koizumi法优于 L onga法。理想的大鼠插线模型受插线直径、插线头端形态、插入深度和大鼠体重等因素影响。