腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）基因表达对血管平滑肌（VSMC）增殖,迁移和凋亡等生物学行为的影响,用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R),体外转染VSMC,用流式细胞仪检测AT2R转染表达率,RT－PCR方法检测AT2RmRNA表达,VSMC增殖用MTT比色法和5－溴脲苷（BrdU)掺入法检测,迁移用改良Boyden趋化小室法检测,细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测,结果表明,AdCMV-AT2R转染后,VSMC表达率为89．51％,AT2R峰值表达时,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低61．4％和51．6％（P＜0．01）VSMC的跨膜迁移数减少62．2％（P＜0．05）。细胞凋亡增加约3．2倍,bax表达增加76．3％（P＜0．05）。提示AT2R表达可介导报制VSMC的增殖和迁移,并诱导其发生凋亡。     

细胞生长因子对电场诱导血管平滑肌细胞定向迁移的影响

目的:探讨细胞生长因子(GF)对生物电场(EF)诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)定向迁移的影响。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,在不同条件培养基中用150 mV.mm-1EF干预6h,显微成像及图象分析技术检测平滑肌细胞迁移情况。结果:在含有10%胎牛血清(FBS)的培养基中,VSMC在EF作用下向阴极迁移。在无血清的培养基中,细胞没有定向迁移。在无血清培养基中补充血小板源生长因子-BB、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β1(PDGF-BBb、FGF、TGF-β1)时,部分恢复细胞向阴极迁移。结论:EF诱导的VSMC定向迁移依赖于血清的存在,血清中的生长因子与EF协同作用,促进细胞向阴极迁移。     

直流电场影响血管平滑肌细胞迁移和增殖的研究

目的：探讨生物电场（EF）对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）迁移和增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉VSMC，EF干预72h，显微成像及图象分析技术检测VSMC迁移情况，免疫细胞化学染色方法观察VSMC增殖核抗原表达情况，观察细胞增殖改变。结果：在含有10％胎牛血清（FBS）的培养基中，在150mV／mm EF作用下，VSMC向阴极迁移明显，向阳极迁移受抑制。150mV／mm、250mV／mm EF干预下，细胞增殖核抗原较无EF干预培养VSMC无明显改变。结论：EF诱导VSMC定向迁移，对VSMC增殖没有明显影响。     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达

目的　以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,增强VSMC中gax基因的表达。方法　采用位置特异性重组方法构建携带大鼠 gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体(AdCMV gax) ,经 2 93细胞扩增 ,纯化制备高滴度病毒转染液 ;以病毒转染液常规转染VSMC后 ,应用RT PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中 gaxmRNA和蛋白质的表达。 结果　流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示AdCMV gax转染VSMC后 ,VSMC的Gax蛋白表达率明显增高 ,转染后 2 4小时即可达 80 %左右 ,高水平的表达可维持 5天以上 ;AdCMV gax转染前 ,PDGF BB对gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用 ,AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中 gax基因的表达均比转染前显著增高。 结论　腺病毒载体可有效地介导 gax基因转染VSMC ,并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究 gax基因对VSMC生物学行为的影响     

反义c-fos核酸对自体移植静脉血管平滑肌细胞表型的影响

目的 观察反义c-fos核酸对自体移植血管平滑肌细胞表型的影响,从基因治疗角度来探讨血管移植后再狭窄的防治疗法。方法 选择20只Wistar大鼠,利用显微外科技术建立自体静脉腹主动脉移植模型,随机等分为实验组和对照组,实验组对移植静脉血管进行反义c-fos核酸溶液浸泡,并在吻合口周围涂布含反义c-fos核酸的凝胶,术后2周取出移植血管,利用电子显微镜观察平滑肌细胞增殖情况,利用免疫组织化学方法对移植血管进行c-fos、c-myc。、PCNA表达检测。结果 实验组肌内皮结构清晰,对照组模糊不清,实验组增殖型血管平滑肌细胞数和PCNA、c-fos、c-myc阳性表达状态低于对照组。结论 反义c-fos核酸可有效抑制移植静脉血管平滑肌细胞的增殖,具有预防移植静脉血管再狭窄的作用。     

金蒸汽激光低功率照射对基因转染血管平滑肌细胞的影响

本文将体外培养的血管平滑肌细胞经波长为６２７．８ｎｍ的金蒸汽激光，以功率密度为１、１０、１００ｍＷ／ｃｍ＾２，能量密度为０．６、６、６０Ｊ／ｃｍ＾２照射后，转染Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ包课的含Ｌｓｃ Ｚ基因的质粒ＤＮＡ，经７２小时培养，测基因产物β－半乳糖苷酶的活性。结果显示，１和１０ｍＷ／ｃｍ＾２照射组酶活性分别高于对照组３和７倍，而１００ｍＷ／ｃｍ＾２照射组未见明显提高。提示适量的低功率激光照射可     

加热对血管平滑肌细胞影响的实验研究

目的：近年来，加热治疗的效果在医学界得到了普遍的认可，射频消融术即是通过热量使旁路细胞发生凝固坏死，从而治愈一些心律失常性疾病。但在血管平滑肌细胞中，尚未有加热治疗的报道。本研究探讨加热平滑肌细胞的作用，为体外加热已植入的支架治疗再狭窄提供基础研究数据。方法：采用原代 平滑肌细胞培养的方法，对培养的平滑肌细胞进行加热，温度为37℃-54℃，加热10min，继续培养，光镜观察不同培养时间的细胞形态改变，台盼蓝 鉴定细胞是否失去活力。结果：在温度小于44℃时，细胞的形态与正常相比基基无变化，培养液中也无脱落细胞，细胞生长也未受抑制。在46℃、48℃、50℃时，在随后培养10小时后，细胞开始呈圆形或椭圆型回缩，细胞浆呈串珠样改变，培养24小时，培养的细胞全部呈圆形回缩，培养液中也见大量脱落的圆形细胞；在52℃、54℃时，细胞不回缩，培养10小时后，部分培养的细胞可见边缘翘起并呈碎片状脱落，12－24小时碎片状脱浇达到高峰，脱浇到培养液中的细胞形态也为片状，无呈圆形回缩样改变。在46℃以上的温度，培养液中脱落细胞的总数比44℃时急剧增多，而脱落细胞 中被台盼蓝着色的细胞数，则在50时急剧增加，说明在44℃－50℃的温度范围内，脱落的细胞尚未失去活力，结合形态学改变可能为细胞凋亡，而＞50℃的温度，则细胞均被台盼蓝染色，且形态学上不再发生改变，为细胞坏死，相关的检测有待进一步研究。结论：加热会导致有肌细胞的生长改变，平滑肌细胞对热的反应采取三种形式，在＜45℃时，细胞生长未受到明显影响；在44℃－50℃之间时，细胞以圆形或椭圆型回缩，细胞浆呈串珠样改变为主，脱落的细胞也未失去活力；＞50℃细胞呈边缘翘起并以片状脱落，脱落的细胞均失去活力。可以设想在44℃－50℃的温度范围，细胞是以凋亡形式出现的，该温度范围允许我们以电磁场来体外加热已植入的支架，促进支架周围的平滑肌细胞凋亡，防治支架后的再狭窄。     

长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞

目的探究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE ）基因敲除小鼠（ApoE-/- 小鼠）,通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠（模型组）;12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照（negative control,NC）组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3）、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组（P＜0.05）;②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36h之后低于NC组（t36=2.683、P＜0.05,t48=2.554、P＜0.05）;划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组（t=3.136、P<0.05）;③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组（22.6%和11.7%,χ2=4.245、P＜0.05）;④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组（t分别为9.546、5.647、5.42,P＜0.05）,caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组（t=4.892、 P＜0.05）。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。     

Effect of contrast media on vascular smooth muscle cells

Purpose: In order to alleviate the adverse effects of contrast media (CMs) on the vascular system, the role of Ca²⁺ in the viability of vascular smooth muscle cells (VSMCs) was investigated.

Material and Methods: VSMCs were obtained from swine thoracic aorta. The number of VSMCs was counted under a microscope using the trypan blue dye-exclusion method 24 h after culture in RPMI containing physiological saline (SAL) as control, iothalamate (IOT), or iohexol (IOH) at 10% by volume with CaCl₂ added at 0 to 2.0 mmol/l. Free Ca²⁺ in the above media was measured using an ion-selective electrode.

Results: Free Ca²⁺ was 0.4 to 1.5 mmol/l with ionic IOT and 0.4 to 1.8 mmol/l with non-ionic IOH as well as with control. The ratio of viable cells grown in the presence of CMs to those grown in the control was optimal at approximately 0.60 near 1 mmol/l Ca²⁺ and decreased markedly to 0.00 at 1.5 mmol/l Ca²⁺ in the presence of IOT and to 0.39 at 1.8 mmol/l Ca²⁺ in the presence of IOH, while the ratios decreased gradually to 0.28 in the presence of IOT and 0.53 in the presence of IOH at 0.4 mmol/l Ca²⁺.

Conclusion: Ionic IOT is more cytotoxic to VSMCs than non-ionic IOH. However, the cytotoxicity was minimal and similar between both CMs at 1 mmol/l Ca²⁺ in accordance with the sodium-calcium balance.     

洛伐他汀对兔血管平滑肌细胞转录因子活性的影响

目的 观察洛伐他汀对兔血管平滑肌细胞转录因子AP-1和NF-κB结合活性及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 用[γ—^32P]—ATF标记寡聚核苷酸，采用电泳迁移率变动分析(EMSA)法测AP-1和NF—κB结合活性，用酶谱分析法检测MMP-9表达水平。结果 洛伐他汀抑制血管平滑肌细胞MMP-9的生成且呈剂量—效应依赖关系，该抑制作用可被甲羟戊酸和焦磷酸二香叶酯而非角鲨烯所逆转；洛伐他汀减低AP-1和NF—κB的结合活性。结论 洛伐他汀可抑制血管平滑肌细胞AP-1和NF—κB结合活性，减少MMP-9的生成。     

103Pd对平滑肌细胞凋亡的影响

目的　探讨1 0 3Pd低能γ射线对体外培养血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的作用。方法　体外猪VSMC原代、传代培养 ,不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,分别用伊红染色测定细胞活力 ,以四唑盐(MTT)测定细胞增殖力 ,以流式细胞仪测定细胞周期阻滞情况及凋亡率 ,凋亡细胞DNA断裂末端标记 (TUNEL)法测定细胞凋亡 ,放射免疫分析法测定 6酮 前列腺素 (6 K PGF1α)、血栓素 (TXB2 )及血管紧张素Ⅱ (AⅡ )。结果　不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,可见随剂量增加 ,培养液中悬浮死细胞增多 ;伊红染色细胞总数降低 ,死亡率上升 ,呈剂量依赖关系 ;MTT测定示各照射组VSMCA570nm 值均降低 ;流式细胞仪测定示受照射细胞大部分停留于G0 G1 期 ,而对照组进入S期 ,并可见亚二倍体峰 ;TUNEL法测定可见照射组阳性细胞中核固缩和核碎裂 ;细胞培养液中 6 K PGF1α TXB2 比值明显增加 ,并呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 )。 5 .5 5～ 9.2 5MBq范围内 ,VSMC增殖明显受抑制 ,而凋亡细胞增加。 2 2 .2MBq1 0 3Pd照射 2 4h后 ,会导致细胞死亡。结论　低剂量1 0 3Pd可用于内照射治疗血管损伤后再狭窄。     

gax基因对血管平滑肌细胞中PCNA和CDK2表达的影响

目的研究增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)在gax基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法以携带大鼠gax基因表达序列的重组腺病毒载体(AdCMV-gax)转染VSMC后，检测gax、PCNA和CDK2的表达及^3H-TdR掺入量的变化。结果AdCMV-gax转染后，VSMC中Gax蛋白的表达比转染前显著增高；AdCMV-gax转染后VSMC的PCNA和CDK2表达较未转染组显著降低；AdCMV-gax转染使VSMC的。H-TdR掺人量显著降低。结论gax基因抑制VSMC增殖的机制与其抑制tK2NA和CDK2的表达有关。     

酸枣仁皂苷B通过调节自噬抑制血小板衍生生长因子-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的 探讨酸枣仁皂苷B(JuB)对血管介入术后血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的潜在影响及其可能机制.方法 25 ng/mL PDGF-BB刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5建立损伤模型.不同剂量JuB预处理后,用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测A7r5活性,选出合适的用药...     

三氧化二砷纳米微粒对抑制兔血管平滑肌细胞增殖作用的实验研究

目的 了解纳米微粒与普通剂型的三氧化二砷（As2O3）对抑制体外培养的兔血管平滑肌细胞（VSMC）增殖作用的差别。方法 对照组为不加药物的细胞，实验组为3μmol／L纳米微粒和普通剂型的As2O3，干预体外培养的兔VSMC细胞72h，进行四唑氮盐（MTT）染色测定细胞吸光度（A）值。用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，提取细胞DNA，进行凝胶电泳分析，将3组的结果进行比较。结果 3μmol／L纳米剂型的As2O3，干预细胞，细胞数量随作用时间的延长逐渐减少，细胞生长明显受抑制，而普通剂型干预细胞，生长受抑制程度较纳米剂型弱。24h时，对照组、3μmol／L普通剂型组与纳米组，A值分别为0．68±0．10、0．58±0．12、0．33±0．12，48h时分别为0．79±0．11、0．48±0．14、0．28±0．11，72h时分别为0．96±0．13、0．34±0．15、0．20士0．06，差异均有统计学意义（Ⅳ值分别为10．934、15．039、15．539，P值均〈0．01）。流式细胞仪检测，纳米剂型As2O3、普通剂型As2O3干预及对照组的细胞干预48h，细胞增殖率分别为44．97％、58．54％、74．02％，早期凋亡率分别为16．89％、11．27％、11．20％，晚期凋亡率分别为26．56％、23．60％、12．46％，坏死细胞分别为11．58％、6．59％、2．32％。DNA电泳，As2O3干预细胞，可见凋亡梯形条带，部分细胞坏死，呈模糊的无间隔片状条带。纳米剂型药物作用的细胞DNA条带，梯形条带更多、更模糊。结论 As2O3，可以抑制体外培养的VSMC增殖，且纳米剂型As2O3较普通剂型的As2O3，对细胞抑制作用更强。     

γ射线对培养的兔血管平滑肌细胞的抑制作用

目的 观察体外培养的兔动脉平滑肌细胞(SMCs）对7射线照射的剂量效应关系，探讨电离辐射抑制SMCs增殖的细胞生物学机理。方法 静止期SMCs分别给予γ射线2．5，5，10，20及30Gy一次性照射后继续培养4，24或72h。以^3H—TdR掺入法、流式细胞术分析、微核实验和电镜观察γ射线对SMCs的DNA合成、增殖周期和损伤的影响。结果 在2．5Gy以上剂量γ射线一次性照射时，SMCs增殖明显抑制，细胞G0／G1期阻滞，均呈剂量依赖性。2．5Gy以下剂量γ射线照射后24h左右可见细胞凋亡增加，2．5Gy以上剂量7射线照射可使SMCs发生坏死。结论 电离辐射能抑制SMCs增殖，使细胞产生G0／G1期阻滞，并呈剂量依赖关系。SMCs死亡方式与受照射剂量有关。     

103Pd支架对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的　研究10 3 Pd支架预防血管成形术后再狭窄的作用机理。方法　将雄性新西兰大白兔 50只随机分为普通支架组及10 3 Pd支架组 ,各组再分 5个亚组 ,设正常对照。分别于术后第 3、7、14、2 8、56天取材 ,进行病理形态学、细胞凋亡定量研究 ,用原位杂交法测定凋亡相关基因bcl 2mRNA及baxmRNA的表达。结果　光镜下发现 ,10 3Pd支架组管腔狭窄程度明显低于普通支架组 ,术后第 56天最显著 (P <0 0 1)。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL)法检测发现术后 3～ 2 8d ,10 3 Pd支架组的平滑肌细胞凋亡较普通支架组明显 ,术后第 7天达峰值 (P <0 0 1)。原位杂交显示术后 3～ 2 8d 10 3Pd支架组bcl 2mRNA的表达较普通支架组降低 ,术后第 2 8天达峰值 (P <0 0 1)。而baxmRNA的表达 ,术后 3～ 2 8d10 3 Pd支架组较普通支架组显著增加 ,术后第 7天达峰值 (P <0 0 1)。术后 3～ 2 8d ,10 3 Pd支架组的bcl 2mRNA与baxmRNA比值均小于普通支架组(P <0 0 5)。直线相关分析示 ,bcl 2mRNA与TUNEL法测定的凋亡阳性率呈明显负相关 ,而baxmRNA与之呈明显正相关 (P <0 0 1)。结论　10 3 Pd支架通过诱导凋亡相关基因的表达 ,导致明显的中膜平滑肌细胞凋亡 ,使凋亡细胞比例增加 ,血管再狭窄程度