激光造型及RGD表面修饰仿生基质对成骨化ADSCs的作用研究

目的 评估激光造型及RGD联合修饰支架后的细胞生物学特征,验证优化表面改性的方法.方法 Nd:YAG激光处理nβTCP/Cs/PCL仿生基质,RGD表面修饰,如下接种羊骨化脂肪基质细胞:A组(Nd:YAG激光+RGD表面改性基质+ADSCs),B组(RGD表面改性基质+ADSCs),C组(Nd:YAG激光改性基质+ADSCs),D组(无表面改性基质+ADSCs);第1、4、8、12、16、20、24、28天,倒置、荧光镜及共聚焦观察细胞生长与存活,检测碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,分析细胞的活性和功能水平.结果 A组细胞生长旺盛、细胞外基质丰富,存活率高于其他组,增殖活力0.55±0.13、碱性磷酸酶61.49±7.18及Ⅰ型胶原水平73.49±9.21均高于其他组(B组0.42±0.06、50.32±3.18、48.91±6.74;C组0.31±0.09、38.19±5.12、36.91±8.12;D组0.12±0.03、18.13±1.21、17.91±2.16),细胞骨架发育良好.结论 Nd:YAG激光及RGD联合修饰支架能促进细胞粘附与增殖,为理想的表面改性方法.     

不同时间四氢叶酸钙解救对大剂量甲氨喋呤化疗导致的大鼠肠黏膜损伤保护作用的研究

目的 观察不同时间四氢叶酸钙(CF)解救对大剂量甲氨喋呤(HD-MTX)化疗导致的大鼠肠黏膜组织形态学的改变、病死率及腹泻情况,探讨CF使用的适宜时机.方法 6周龄Wistar大鼠分5组.A组:正常对照组;B组:空白对照组;C、D、E组:实验组,分剐于腹腔注射HD-MTX后12、24、30h予以CF解救.观察各组大鼠病死率、腹泻情况及空肠大体形态,标本测肠黏膜绒毛长度和隐窝深度.结果 A组无腹泻,B、C、D、E组第2天开始出现腹泻,第3天全部出现腹泻,其中B、E组腹泻严重.A组肠壁无充血水肿,B、C、D、E组肠壁充血水肿变薄,其中B、E组最重.A组无死亡,C、D组各死亡3只,E组死亡4只,B组死亡6只.B、C、D、E组肠黏膜绒毛变短,肠隐窝变浅,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);C、D组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05);B、E组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 HD-MTX可致大鼠严重肠黏膜损伤,适宜时间CF解救可减轻HD-MTX对大鼠肠黏膜的损伤,但不能完全阻止其损伤.     

免疫性血管炎致动脉粥样硬化的实验研究

目的　探讨免疫性血管炎与动脉粥样硬化 (AS)发生的关系。方法　 4周龄日本大耳幼年家兔 6 1只及 4月龄成兔 10只分为 6组。用 10 %牛血清清蛋白重复静脉注射诱发免疫性血管炎 ,并喂饲胆固醇饲料。A组 :血管炎幼兔冠脉造影组 2 7只 ;B组 :正常成年兔冠脉造影对照组 10只 ;C组 :正常幼兔冠脉造影对照组 10只 ;D组 :血管炎加胆固醇喂饲组 8只 ;E组 :单纯胆固醇喂饲对照组 8只 ;F组 :基础喂饲对照组 8只。实验满 4周后A、B、C三组行冠状动脉造影 ;满 12周后D、E、F三组分别取心脏做主动脉冠状动脉组织病理学检查。结果　A组中 6只出现明显冠状动脉扩张 ,B组和C组冠脉无扩张。D组出现严重AS ,表现为脂质斑块厚 ,隆起于内膜表面。E组仅出现轻度AS ,表现为脂质斑块薄 ,且主要集中于主动脉根部。D组与E组比较 ,其脂质斑块面积百分比 (PA)、冠状小动脉粥样硬化发生率 (IA)和冠状动脉管腔狭窄程度 (DS)均有显著性差异 (P <0 .0 1)。F组无AS改变。结论　血清性免疫血管炎急性期可致部分幼兔冠状动脉扩张 ,并可显著加重胆固醇喂饲家兔AS形成。免疫性血管炎是AS和缺血性心脏病发生新的危险因素     

细胞复合型丝素支架材料修复兔桡骨骨缺损

目的 比较不同孔径的细胞复合型丝素支架材料体内成骨、修复兔桡骨骨缺损的治疗效果.方法 自新西兰大耳白兔股骨大结节和股骨髁处抽取骨髓,体外分离、培养、扩增兔骨髓问充质干细胞(rabbit bone marrow mesenchymal stem cells,RBMSCs),接种到3种不同孔径的丝素材料上,再移植于兔桡骨骨缺损处.根据丝素材料孔径设立实验A组[RBMSCs/SF(silk fibroin,SF)-Ⅰ]、实验B组(RBMSCs/SF-Ⅱ)、实验C组(RBMSCs/SF-Ⅲ).术后分别于2、4、8、12周大体观察、X线检查及组织形态学观察了解体内成骨、骨缺损修复及材料降解情况.另外设立二对照组,D组为缺损处仅植入丝素支架,E组为缺损处无植入物.结果 术后各组兔子均存活,无植入物毒性反应及排斥反应,材料体积不同程度降解减小,降解速度SF-Ⅰ＜SF-Ⅱ＜SF-Ⅲ.RBMSCs/SF-Ⅱ组比其他组在缺损种植处有更多的新骨形成,移植物的血管化任此B组也更好,缺损被较满意治愈.D、E二组修复骨缺损的效果明显差于细胞型丝素支架.结论 RBMSCs/SF-Ⅱ作为细胞复合型丝素支架材料表现最佳.细胞复合型丝素支架材料有望用于临床骨缺损的治疗.     

可注射性纳米组织工程骨应用于牵拉成骨的实验研究

目的将可注射性纳米组织工程骨注入骨延长区,观察其能否加速延长区的骨生成。方法用新西兰大耳白兔制作兔牵拉成骨模型,获得成功存活动物71只,分为4组,A:对照组,17只;B:注射共培养成骨细胞、内皮细胞组,18只;C:注射单纯胶体纳米材料组,18只;D:注射共培养成骨细胞、内皮细胞复合胶体纳米材料组,18只。术后5d行胫骨延长,速度1mm/d,共延长20d,延长完成后,A组不做其他治疗;B组将共培养成骨细胞、内皮细胞悬液2ml注入骨延长区,细胞总数量约1×107个;C组将单纯纳米材料2ml注入骨延长区;D组将可注射纳米组织工程骨2ml注入骨延长区,通过X线检测、骨密度(BMD)测定观察延长结束后第3、6、9周骨愈合情况。结果BMD和X线检测结果显示注射纳米组织工程骨组新生骨质量较高,骨愈合情况要优于其他组。结论可注射性纳米组织工程骨应用于牵拉成骨,可促进延长区骨生成,且优于单纯注射细胞或可注射性纳米载体材料。     

群体反应性抗体干扰脐血CD34+细胞增殖、分化的实验研究

目的 探讨血清特异性群体反应件抗体(PRA)对脐血CD34+细胞增殖、分化能力的影响.方法 取含PRA(经实验证实)的β地中海贫血患儿血清,与脐血CD34+细胞、补体孵育,观察PRA对CD34+细胞增殖、分化的影响,分A组(不加血清组)、B组(PRA血清组)、C组(PRA血清加补体组)、D组(补体组)、E组(PRA阴性血清组)共5组.孵育后以3H-TaR掺入法测定细胞DNA合成及流式细胞仪检测Annexin V和CD95表达;并进行集落培养,于第10天计数集落.结果 A组为(20.71±2.81)U/L,低于B组(64.28±5.12)U/L、C组(84.29±4.99)U/L,B组低于C组;D、E组均为(22.86±2.91)U/L和(22.86±2.91)U/L,均低于B、C组;各组氚每分钟β射线释放量(cpm):A组为(22629±3288),高于B组(4598±2178)和C组(1626±1192),A组和D、E组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);A组的总集落数、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、混合系集落形成单位(CFU-GEMM)及爆式红系集落形成单位(BFU-E)数均高于B、C组,B组的总集落数、CFU-GM及CFU-GEMM数均高于C组;D组和E组的各种集落数与A组的差异无统计学意义(P＞0.05);各组CD34+细胞Annexin V及CD95表达百分率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 特异件PRA血清对脐血CD34+细胞的增殖和分化有抑制作用,补体可增强上述作用;特异性PRA血清对脐血CD34+细胞的凋亡无明显影响.     

重型β地中海贫血患儿移植前后肠道菌群变化研究

目的 了解重型β地中海贫血(β-TM)患儿造血干细胞移植前后不同阶段肠道菌群改变及其影响因素。方法 选择2019年11月至2020年6月在血液肿瘤科行造血干细胞移植的确诊β-TM的患儿作为研究对象。收集移植启动前期(A组)、清洁肠道期(B组)、预处理期(C组)、干细胞输注期(D组)及移植后细胞植入期(E组)的粪便样本。利用16SrDNA基因V4区域的Illumina HiSeq测序系统测序粪便样本。结果 纳入37例β-TM患儿,男27例、女10例,中位年龄7.5(3.0～17.3)岁。最终纳入分析共96份样本,A组28份、B组17份、C组18份、D组21份、E组12份。A组和B组肠道菌群构成占比前两位为厚壁菌门、拟杆菌门,C、D、E组菌群占比前两位为变形菌门及拟杆菌门。5组之间厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门、梭菌门、放线菌门、疣状菌门、蓝菌门的丰度差异均有统计学意义(P<0.05)。利用Chao指数比较移植不同时期肠道菌群Alpha丰度。A组Chao指数为225.9(182.0～260.5),B组为234.6(193.0～311.3),C组为127.6(81.1～180.0),D组...     

腺病毒介导胰岛素样生长因子-1基因对链脲佐菌素诱发1型糖尿病大鼠的保护作用

目的观察腺病毒介导胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因对链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠1型糖尿病(T1DM)的预防保护作用,比较肌肉注射、腹腔注射及胰腺被膜下注射3种不同注射途径的效果。方法4～6周龄SD雄性大鼠90只,随机分为糖尿病对照组(A组)、空白对照组(B组)、腺病毒空载体对照组(C组)、肌肉注射含有IGF-1基因的重组腺病毒(Ad-rIGF-1)组(D组)、腹腔注射Ad-rIGF-1组(E组)、胰腺被膜下注射Ad-rIGF-1组(F组),每组各15只。A组、B组不做任何处理,C组注射含空载体(Ad-eGFP)的重组腺病毒液0.1mL,D组、E组、F组注射含Ad-rIGF-1的重组腺病毒液0.1mL。1周后,A组、D组、E组及F组腹腔注射STZ50mg.kg-1诱发糖尿病,每周测定体质量、血糖。5周后,处死大鼠,取其胰腺做病理切片及免疫组织化学法观察胰腺炎症浸润程度和IGF-1局部表达程度;取下腔静脉血,测定IGF-1和胰岛素水平。结果D组、E组、F组与A组比较,糖尿病发病率低,平均血糖水平低,但血糖水平明显高于B组和C组。胰腺切片HE染色显示D组、E组、F组胰腺炎症浸润程度较A组轻,但明显重于B...     

布地奈德对哮喘小鼠TGF-β/Smad 信号通路表达的影响

目的 探讨哮喘小鼠TGF-β/Smad信号通路表达及布地奈德(BUD)对其的影响.方法 昆明小鼠随机分为哮喘模型组(A 组)、治疗对照组(B组)、BUD治疗组(C组)和正常对照组(D组).A组以卵蛋白(OVA)致敏和激发复制哮喘模型.B、C 2组致敏和激发方法同哮喘模型组,激发前1 h分别吸人生理盐水(NS)和BUD.HE、PAS、VG染色观察气道嗜酸性细胞(EOS)浸润、黏液分泌、胶原增生情况.免疫组化和图像分析检测小鼠肺组织TGF-β、TGF-β受体Ⅰ、TGF-β受体Ⅱ,Smad 2/3、Smad 4、Smad 7的表达.结果 哮喘小鼠气道EOS浸润明显增多,黏液分泌亢进,胶原增生.IOD值在A、B、C、D 4组表达TGF-β为108.38±15.47、123.17±26.07、117.75±19.75、7.88±2.07,A、B、C 3组均明显高于D组;TGF-β受体Ⅰ为231.09±37.80、276.87±50.65、124.40±26.75、14.99±4.48,结果与TGF-β表达相似,但A、C 2组之间差异有统计学意义;TGF-β受体Ⅱ为200.55±26.49、150.32±31.05、193.72±34.17、243.08±54.32,4组之间差异无统计学意义;Smad2/3为206.63±36.19、202.24±28.79、138.87±14.11、24.64±6.36,A、B、C 3组均明显高于D组;Smad 4为129.50±21.51、140.48±19.31、118.70±22.96、22.77±4.86,结果与Smad 2/3表达相似;Smad 7为19.21±4.65、17.04±6.48、123.95±15.26、157.22±21.35,A、B 2组均明显低于C、D 2组,C、D 2组之间差异无统计学意义.结论 吸入BUD不能阻断哮喘小鼠气道TGF-β、TGF-β受体Ⅱ、Smad 2/3、Smad 4的表达,但可通过下调TGF-β受体Ⅰ的表达和上调Smad 7的表达抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制TGF-β所致的气道重塑作用.     

甲氧基聚乙二醇修饰对移植物抗白血病的作用

目的探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰供者小鼠骨髓移植物单个核细胞表面抗原对移植物抗白血病作用(graft versusleukemiaeffect,GVL)的影响。方法小鼠随机分为A、B、C、D四组。A组单纯接受60Coγ照射;B、C、D组每只小鼠腹腔接种1×106L615肿瘤细胞制成白血病模型;全部照射后,C、D组分别移植mPEG未修饰和修饰的骨髓、脾细胞悬液。观察小鼠一般反应、外周血涂片L615细胞计数、组织病理及生存时间。结果A组全部死于造血衰竭;B组死于白血病;C组全部出现明显移植物抗宿主病(GVHD)表现并死亡;D组部分小鼠(4/15)长期存活,11/15死于白血病,平均生存24.2天,长于其他组(P<0.05),生存率27%,高于其他组(P<0.05),两者差异有统计学意义。结论小鼠移植mPEG修饰骨髓移植物后保留了一定GVL作用,并且减轻GVHD。     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.