白藜芦醇通过沉默信息调节因子1/核因子κB通路改善大鼠急性心肌梗死后炎症反应的研究

目的探讨白藜芦醇(RES)是否通过沉默信息调节因子1/核因子κB(SIRT-1/NF-κB)通路改善大鼠急性心肌梗死(AMI)后炎症反应。方法 30只成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组)、AMI组和RES组;观察4周后,采用qRT-PCR和Western blot检测心脏梗死交界区组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6及SIRT-1的mRNA含量及蛋白质表达情况。Western blot检测心脏梗死交界区组织IKK、p-IKK、p65及p-p65蛋白质表达情况。结果与Sham组相比,AMI组的IL-1β、IL-6在mRNA及蛋白水平表达显著升高(均为P<0.01),p-IKK/IKK和p-p65/p65比值明显升高(均为P<0.001),SIRT-1在mRNA及蛋白水平表达显著降低(均为P<0.001); RES组IL-1β、IL-6在mRNA及蛋白水平表达显著降低(均为P<0.01),p-IKK/IKK和p-p65/p65比值均显著减低(均为P<0.01),SIRT-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均为P<0.001)。结论 RES可通过SIRT-1/NF-κB通路改善大鼠AMI后炎症反应,其作用机制可能与RES激动SIRT-1表达、抑制IKK及p-65磷酸化、阻止NF-κB信号通路的启动有关。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβ/NF-κB表达的影响

目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中IκB激酶β(IKKβ)及核因子-κB (NF-κB)表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.Western blot检测大鼠缺血侧脑皮层IKKβ、NF-κB蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKKβ及NF-κB蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组同模型组相比,IKKβ及NF-κB蛋白表达则下调(P＜0.01).结论 眼针抑制脑皮层组织中IKKβ及NF-κB的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

外周血白细胞IKK-IκB-NFκB通路的激活与胰岛素抵抗关系的临床研究

目的 探讨不同胰岛素敏感性个体炎症因子血浆水平以及炎症通路激活状态的差异.方法 收集体检女性38例,按体重指数分为两组:肥胖组22例,正常对照组16名,稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评估研究对象胰岛素敏感性,检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β血浆水平,Western印迹法检测外周血白细胞IκB激酶(IKK)、NFκB抑制物(IκB)及其磷酸化水平,以凝胶电泳迁移率分析(EMSA)评价核因子NFκB的结合活性.结果 肥胖组空腹胰岛素[62.2(20.0～127.0)pmol/L对19.15(14.2～47.8)pmol/L,P<0.01]、HOMA-IR[2.32(0.76～5.49)对0.70(0.53～1.7),P<0.01]、HbAIC[(5.42±0.45)%对(5.08±0.38)%,P<0.05]、血甘油三酯[(1.75±0.68对1.22±0.58)mmol/L,P<0.05]、IL-6[3.15(0.03～22.2)pg/ml对1.26(0.74～6.06)pg/ml,P<0.01]和IL-1β[6.53(0.84～36)pg/ml对3.16(1.48-8.86)pg/ml,P<0.01]水平显著高于正常对照组,伴随外周血白细胞胞浆蛋白IKKα、IKKβ表达和IκBα丝氨酸磷酸化水平增高,IκBα表达下调,肥胖组NFκB结合活性较正常对照组显著增加.结论 肥胖组炎症因子IL-6、IL-Iβ血浆水平显著升高.IKK-IκB-NFκB通路的激活与肥胖个体胰岛素抵抗的发生有关.     

基于蛋白激酶B和核转录因子通路对利多卡因保护脑出血大鼠的作用机制

目的 探讨基于蛋白激酶B(Akt)/IκB激酶(IKK)/NF-κB通路对利多卡因(LID)保护脑出血大鼠的作用机制。方法 选择雄性SPF级SD大鼠90只，随机分为脑出血组，低、中、高剂量LID组，联合组(高剂量LID+LY294002),假手术组，每组15只。TUNEL染色观察神经元凋亡；ELISA检测脑组织中髓过氧化物酶(MPO)、TNF-α水平；Western blot检测Akt/IKK/NF-κB通路蛋白表达。结果 与假手术组比较，脑出血组神经功能评分、神经元凋亡率明显增高[(3.58±0.25)分vs 0分、(28.73±2.83)%vs(3.54±0.16)%,P<0.05]。与假手术组比较，脑出血组MPO、TNF-α、磷酸化IKKα/IKKα、核/质p65 NF-κB明显增高，磷酸化Akt/Akt明显降低(P<0.05)。联合组神经功能评分、核/质p65 NF-κB明显高于高剂量LID组(P<0.05)。结论 LID可能通过促进Akt活化，抑制IKK/NF-κB通路，减轻出血点炎性因子释放，实现对脑出血大鼠的保护作用。     

下调肌细胞增强因子2C基因对动脉粥样硬化血管内皮细胞增殖凋亡及核因子-κB信号通路的影响

目的探讨下调肌细胞增强因子(MEF) 2C基因对动脉粥样硬化(AS)血管内皮细胞增殖凋亡及核因子(NF)-κB信号通路的影响及机制。方法 Western印迹检测AS患者斑块组织和正常对照组MEF2C的蛋白表达;将MEF2C的特异性siRNA(si-MEF2C)及阴性对照siRNA(NC)转染人脐静脉血管内皮(ECV)-304细胞,Western印迹检测转染效果。ECV-304细胞经H_2O_2处理后转染si-MEF2C,细胞分为NC组、H_2O_2组、H_2O_2+si-MEF2C组和正常对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平; Western印迹检测核因子(NF)-κB p65、NFkappa B激酶抑制剂(IKK)α、增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达。结果 AS患者斑块组织MEF2C蛋白表达显著高于正常对照组(P<0. 05); MEF2C的特异性siRNA转染ECV-304细胞后MEF2C蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05)。H_2O_2组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著低于NC组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著高于NC组(P<0. 05),而H_2O_2+si-MEF2C组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著高于H_2O_2组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著低于H_2O_2组(P<0. 05)。结论下调AS血管内皮细胞MEF2C基因表达可提高细胞活力,抑制细胞凋亡,机制可能是细胞内ROS水平降低及NF-κB信号通路的下调。     

双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

CD137信号通过核因子κB影响小鼠主动脉平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的 探讨CD137信号是否通过核因子-κB(NF-κB)调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)表达.方法 采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养.以每孔2×105个VSMC接种于6孔板中培养,待其贴壁后,饥饿24 h,用含10％ FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α,终浓度10 ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48 h后,收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测,选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验.细胞实验分为3组,即对照组[含10％ FBS、TNF-α(终浓度10 ng/ml)、DMEM培养基共同干预]、刺激组[对照组干预基础上加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)]和抑制组[对照组干预基础上加PDTC(终浓度30 μmol/L),然后加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)].加入不同干预因素后继续培养,分别于90 min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IKB-α),24 h收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检.逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平.流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平.蛋白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平.结果 (1)TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果:TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48 h后,细胞CD137 mRNA表达均上调.RT-PCR结果示,以24 h组CD137 mRNA升高最为显著,以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较,差异有统计学意义(40.00±2.83比1,P＜0.05).流式细胞术检测亦显示24 h组CD137膜蛋白升高最为显著.(2)各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果:刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(8.34±0.28比1,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平低于对照组(1比2.70±0.28,P＜0.05).抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(1.15 ±0.14比8.34±0.28,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平则高于刺激组(1.78±0.74比1,P＜0.05).刺激组VMSC细胞核内p-NF-KB p65蛋白表达水平高于对照组(2.64±0.42比1,P＜0.05),而抑制组表达水平则低于刺激组(2.09±0.12比2.64±0.42,P＜0.05).(3)各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表达水平的检测结果:干预24 h后,刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(2.07±0.09比1,P＜0.05),NFATc1蛋白表达水平亦高于对照组(1.75±0.07比1,P＜0.05).而抑制组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平低于刺激组(1.15±0.07比2.07±0.09,P＜0.05),蛋白表达水平亦低于刺激组(0.90±0.11比1.75±0.07,P＜0.05).结论 CD137信号通过NF-κB p65影响小鼠VSMC中NFATc1的表达.     

蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞活力的影响及其机制

目的 研究蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂对胰腺癌细胞系PANC-1活力的影响及其机制.方法 用PP2A抑制剂斑蝥素和冈田酸处理PANC-1细胞.通过Western印迹检测核因子(NF) -κB通路的激活程度.通过转染PP2A活性亚基cα(PP2A cα)表达质粒、NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)α和NF-κB抑制蛋白(IκB)α的显性负性突变体、p65干扰质粒,分别从各环节阻断NF-κB通路,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力.结果 PP2A抑制剂可使IKKa磷酸化,进一步使IκBa磷酸化并降解,继而释放p65入核.过表达PP2Acα、IKKα显性负性突变体、IκBα显性负性突变体或干扰p65可分别使斑蝥素对细胞活力的抑制率下降(31.85±13.37)％、(23.48±8.98)％、(22.63±5.81)％、(20.88±3.24)％,使冈田酸对细胞活力的抑制率下降(40.17±11.65)％、(27.34±14.28)％、(24.85±3.39)％、(27.08±3.81)％.结论 PP2A抑制剂通过PP2A/IKKα/IκBα/p65依赖性通路发挥抗胰腺癌作用.     

核因子κB通路参与缺氧诱导心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α

目的:探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α),核因子κB(NF-κB)通路是否参与其中,并发挥调节作用。方法:1%O2物理缺氧刺激原代SD大鼠乳鼠心肌细胞,在不同时间点Real-time PCR检测TNF-αmRNA水平;ELISA检测培养上清中TNF-α蛋白水平;Western blot检测胞质NF-κB相关通路蛋白IKKα,IKKβ,IKKBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及胞核NF-κB p65蛋白表达;电泳迁移率实验检测NF-κB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)刺激心肌细胞,检测细胞核p65蛋白表达,TNF-αmRNA及蛋白水平。结果:缺氧诱导原代心肌细胞表达TNF-α,TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高,12h及24h达峰值;其蛋白分泌从缺氧6h开始升高,12h和24h达峰值。缺氧激活NF-κB通路:缺氧5min胞质pIKKα/IKKβ表达开始上调,30min达峰值,持续6h;IKKBα表达缺氧5min开始降低,而pIKKBα缺氧30min开始增加;胞核p65蛋白水平缺氧5min上调,1h达峰值,持续6h;NF-κB DNA结合能力缺氧5min后开始增强。PDTC抑制NF-κB活性,有效抑制TNF-αmRNA及其蛋白表达。结论:缺氧通过激活NF-κB通路,诱导心肌细胞自分泌TNF-α,NF-κB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。     

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。     

氧化苦参碱对实验性结肠炎大鼠肠黏膜细胞因子和核因子-κB p65表达的影响

目的:观察氧化苦参碱注射液对大鼠实验性结肠炎的治疗效果,探讨其作用机制.方法:将40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和氧化苦参碱(OMT)组,每组10只.正常对照组未行造模,其余3组大鼠均采用TNBS造模.模型组给予生理盐水肌注,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪混悬液灌胃,氧化苦参碱组给予氧化苦参碱注射液肌注.治疗15 d后观察大鼠的腹泻、便血症状和结肠病理组织学改变,用ELISA法检测结肠黏膜组织IL-2、IL-10的变化,并用免疫组化技术检测大鼠结肠黏膜核因子(NF)-κB p65的表达.结果:OMT组大鼠腹泻、黏液脓血便症状得到较快控制.大鼠黏膜组织损伤显著改善.与模型组比较,OMT组IL-2减少(102.93±21.10ng/L vs 23 1.48±40.78 ng/L,P<0.05),IL-10增多(50.13±1.40 ng/L vs 18.64±0.65 ng/L,P<0.05),NF-κB p65显著降低(16.02%±7.27% vs 43.05%±13.80%,P<0.01).与正常组相比,模型组结肠黏膜IL-2升高,IL-10减少,NF-κBp65表达增多,差异均有显著性意义(102.93±21.10 ng/L vs 30.44±12.03 ng/L,50.13±1.40nK/L vs 58.92±3.70 ng/L,16.02%±7.27% vs 9.57%±4.31%,均P<0.01).OMT组与美沙拉嗪组比较,IL-2、IL-10和NF-κB p65的表达无显著性差异.结论:氧化苦参碱注射液治疗大鼠实验性结肠炎有明显效果,其作用机制可能是通过减少IL-2的生成、促进IL-10分泌和抑制NF-κB p65的激活发挥治疗作用.     

阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经元炎性损伤的保护作用研究

目的观察阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经炎性反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(1L-1β)、核因子κB(NF-κB)/p65核蛋白和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKB-α)总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用。方法取孕龄17~18 d SD大鼠的海马神经元,将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20μmol/L的Aβ_(25-35);(2)低剂量阿司匹林组:加入终浓度为50μmol/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(3)高剂量阿司匹林组:加入终浓度为100μmoL/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(4)空白对照组:加入等量维持培养基。继续培养48 h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Western-Blot法检测NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β的含量明显升高(P0.01),NF-κB/p65核蛋白和pIKB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P0.01);(2)与Aβ组比较,低剂量和高剂量阿司匹林均可降低TNF-α和IL-1β的含量(P0.05),并减少NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平(P0.05);(3)低剂量和高剂量阿司匹林组两组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论阿司匹林可能通过抑制NF-KB的激活来减轻Aβ_(25-35)诱导神经元的炎性损伤。     

柴胡皂苷A对溃疡性结肠炎大鼠IKK/IKB/NF-κB信号通路及肠上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨柴胡皂苷(SS)A对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子(NF)-κB抑制物激酶(IKK)/抑制因子κB(IKB)/NF-κB信号通路及肠上皮细胞凋亡的影响。方法 制备UC大鼠模型,造模后随机分为模型组、SSA(低、中、高)剂量组、阳性对照组,每组10只;正常组10只大鼠作为空白对照。常规饲养2 d,第3天时SSA(低、中、高)剂量组分别灌胃(12.5、25.0、50.0)mg/kg SSA,阳性对照组灌胃0.5 g/kg柳氮磺吡啶(SASP),正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续5 d。苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜组织形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;TUNEL染色观察肠上皮细胞凋亡情况;Western印迹检测肠黏膜组织中IKKα、IKB、NF-κB p65、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果 正常组大鼠实验结束后毛色有光泽,大便正常;肠黏膜组织完整,肌层结构正常。模型组大鼠毛色暗淡无光...     

慢性心力衰竭患者外周血单个核细胞核转录因子κB/p65的表达及白细胞介素-10的影响

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核转录因子κappaB(NF-κB)/p65的表达及白细胞介素-10(IL-10)的干预作用.方法对15例心力衰竭患者和15例健康对照者分离出的外周血单个核细胞进行培养,并将心力衰竭患者和健康对照者培养的外周血单个核细胞分成3组空白对照组、脂多糖(LPS)组和白细胞介素-10组,共培养24小时,对3组培养后的外周血单个核细胞NF-κB/p65的表达进行免疫组化染色检测和半定量分析.结果心力衰竭患者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率非常明显高于健康对照者[(22±8)%vs(9±2)%,P＜0.01].脂多糖组,心力衰竭患者和健康对照者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率与空白对照组比较均极显著增加(P＜0.01);而在白细胞介素-10组,心力衰竭患者和健康对照者外周血单个核细胞NF-κB/p65胞核染色阳性率与脂多糖组比较则极显著下降(P＜0.01).结论心力衰竭患者NF-κB/p65表达增高,而白细胞介素-10可下调脂多糖刺激下NF-κB/p65表达增高.     

丹皮酚对大鼠急性心肌梗死后核因子-κB p65通路的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠急性心肌梗死后(AMI)心肌组织核因子(NF)-κB p65通路的影响。方法大鼠结扎左冠状动脉前降支建立AMI模型,分为模型组和丹皮酚低、中、高剂量组4、6、8 mg·kg~(-1)·d~(-1)及卡托普利组10 mg·kg~(-1)·d~(-1);另设假手术组只穿线不结扎。连续给药4 w后处死大鼠,Masson染色法分析心肌组织胶原沉积变化;免疫组化法检测p-IκB及NF-κB p65蛋白的表达。结果 4、6、8 mg·kg~(-1)·d~(-1)丹皮酚给药4 w后,大鼠心肌组织的胶原沉积量较模型组显著减少。丹皮酚还可下调心肌组织中NF-κB p65、p-IκB的蛋白表达。结论丹皮酚对大鼠AMI后心室重构有明显的治疗和改善作用,抑制NF-κB p65的表达和活化是其作用机制之一。     

p300/CBP相关因子对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究

目的探讨p300/CBP相关因子(PCAF)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取大鼠原代VSMC,使用Ad-PCAF RNAi腺病毒转染VSMC以下调PCAF表达。选择1μg/ml的脂多糖作为VSMC迁移诱导剂。将实验分为4组:不添加脂多糖(对照组)、1μg/ml脂多糖刺激(A组)、Ad-绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激(B组)、Ad-PCAF RNAi腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激(C组)。采用Transwell实验检测细胞迁移水平。免疫荧光染色实验检测VSMC中NF-κB p65的核转位情况。Western blot检测PCAF、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,A组和B组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,与对照组比较,A组和B组穿出小室细胞数明显增多,差异有统计学意义[(766.30±40.86)个/视野、(794.00±76.36)个/视野vs (202.70±22.59)个/视野,P<0.05];与B组比较,C组穿出小室细胞数明显减少,差异有统计学意义[(337.00±82.95)个/视野vs (794.00±76.36)个/视野,P<0.05]。免疫荧光染色实验结果显示,与对照组比较,A组和B组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,C组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调PCAF的表达可明显抑制VSMC迁移,其机制可能与下调PCAF后抑制NF-κB信号通路介导的炎性反应有关。     

肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导物/成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14轴及下游核因子κB通路的关键因子mRNA及蛋白表达差异与老年肥胖的相关性

目的 研究老年人外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导物(TWEAK)/成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)轴及下游核因子κB(NF-κB)通路的关键因子mRNA及蛋白表达差异与老年人中心性肥胖的相关性。方法 2017年9月至2018年5月在新疆农牧区常住居民横断面流行病学调查数据库中随机抽取80例研究对象,根据是否为中心性肥胖分为对照组(n=40)和中心性肥胖组(n=40),提取空腹外周血中PBMC,采用待实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting方法检测TWEAK、Fn14、IκB激酶α(IKKα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κBp65的mRNA、蛋白表达。采用SPSS 26.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ²检验。相关性分析采用双变量Pearson相关分析法。结果 中心性肥胖组外周血PBMC中的Fn14、IKKα、IKKβ的mRNA表达高于对照组(P<0.05);TWEAK、NF-κBp65的mRNA表达也高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。中心性肥胖...     

血管紧张素(1-7)阻断细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路影响泡沫细胞内胆固醇含量

目的研究血管紧张素(1-7)对THP-1源性泡沫细胞中细胞外信号调节激酶1/2及核因子κB信号转导通路的影响,以进一步探讨血管紧张素(1-7)促进胆固醇逆转运的调节机制以及细胞外信号调节激酶1/2与核因子κB信号通路之间是否相互影响。方法采用体外培养的THP-1单核细胞构建泡沫细胞模型,用不同的干预方法处理细胞72 h,将细胞分为单核细胞(空白对照)组、泡沫细胞组、分别预先经10-6mol/L血管紧张素(1-7)、10μmol/L核因子κB特异性阻断剂、10μmol/L细胞外信号调节激酶1/2特异性阻断剂、10-6mol/L血管紧张素(1-7)+10μmol/L核因子κB特异性阻断剂、10-6mol/L血管紧张素(1-7)+10μmol/L细胞外信号调节激酶1/2特异性阻断剂干预的泡沫细胞组。油红O染色后显微镜下观察细胞形态;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化;免疫组化法检测细胞内核因子κB(p65)活性的表达;免疫印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达。结果血管紧张素(1-7)显著降低了泡沫细胞内胆固醇的含量,下调了磷酸化细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB(p65)活性的表达(P0.05),细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路被特异性阻断后泡沫细胞内胆固醇含量降低(P0.05);血管紧张素(1-7)联用细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路的特异性阻断剂后泡沫细胞内胆固醇含量显著降低(P0.01);核因子κB信号通路被阻断后核因子κB(p65)活性表达显著降低(P0.01),而磷酸化细胞外信号调节激酶1/2活性表达无明显降低(P0.05),细胞外信号调节激酶1/2信号通路被阻断后磷酸化细胞外信号调节激酶1/2和核因子κB(p65)活性表达均降低(P0.05)。结论血管紧张素(1-7)可能通过降低磷酸化细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB(p65)的活性,减少细胞内胆固醇的蓄积;细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路被特异性阻断后可减少泡沫细胞内胆固醇的含量;细胞外信号调节激酶可能是核因子κB(p65)信号通路的上游信号。     

RhoA/ROCK通路在缺氧复氧诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用机制

目的 探讨Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路在缺氧复氧(H/R)诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的AC16细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R＋NC-siRNA组(转染NC-siRNA后构建H/R模型)和H/R＋RhoA-siRNA组(转染RhoA-siRNA后构建H/R模型),采用MTT法检测AC16细胞存活率,流式细胞术检测AC16细胞凋亡率,比色法检测AC16细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性和Caspase-3活性,ELISA检测AC16细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,试剂盒检测AC16细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量PCR检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、核因子κB(NF-κB)p65及IkB激酶(IKK)的mRNA表达水平,Western blot检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65及IKK的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,H/R组细胞存活率、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);H/R＋NC-siRNA组和H/R组之间上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与H/R＋NC-siRNA组比较,H/R＋RhoA-siRNA组细胞存活率、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)。结论 靶向抑制RhoA/ROCK通路可通过降低炎症反应、氧化应激和细胞凋亡减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。     

积雪草苷通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65减轻大鼠脑动脉瘤壁的炎症反应和瘤体大小

目的研究积雪草苷调控Toll样受体9(TLR9)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB p65(NF-κB p65)对脑动脉瘤(CA)大鼠动脉瘤壁炎症反应的影响。方法建立CA大鼠模型,随机分为模型组、积雪草苷(50 mg/kg)组、CpG-ODN(TLR9激活剂,4 mg/kg)组、积雪草苷(50 mg/kg)+CpG-ODN(4 mg/kg)组,每组12只,另取12只大鼠设为假手术组。分组处理后,检测大鼠脑血管壁厚度和动脉瘤体积,苏木精-伊红(HE)染色检测脑血管组织形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠脑血管组织和血清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测大鼠脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血管壁明显变厚,脑动脉血管隆起,呈瘤样改变等CA症状,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平明显升高(P0.05)。与模型组相比,积雪草苷组大鼠CA症状变轻,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平降低(P0.05);而CpG-ODN组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。使用积雪草苷和CpG-ODN联合处理,较积雪草苷组大鼠CA症状加重,脑血管壁厚度、动脉瘤体积、脑血管组织和血清中IL-1β及TNF-α水平、脑血管组织TLR9、MyD88及核内NF-κB p65蛋白水平升高(P0.05)。结论积雪草苷可通过下调TLR9/MyD88/NF-κB p65通路蛋白表达减轻CA大鼠脑动脉血管组织的炎症,减小瘤体。