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1.
本文将采用木瓜蛋白酶水解和SPA-Sepharose4B柱亲和层析等手段获得的人IgGFc和Fab,以抗人IgGFc和抗人IgGFab单抗为参比品(Sigma).鉴定了细胞库中抗人IgG系列的部分细胞林,得到分泌特异性抗人IgGFe和抗人IgGFab单抗的细胞各一株。在此基础上。应用抗人IgGFc及抗人IgGFab单抗分别制备了Sepharose4B亲和层析柱,纯化了酶解的人IgGFc和Fab。经ELISA法鉴定,相互间无交叉反应。同时用此方法还制备了人抗HBeFab,并将此Fab标记过氧化物酶。配制HBeELISA诊断盒,证明其生物学活性未受影响,而且消除了类风湿因子引起的HBeAg假阳性现象。 相似文献
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人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的表达与纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
对已筛选到的人源性抗HBsAg特异性噬菌体抗体基因文库进行表达研究,将特异性噬粒转化大肠杆菌XL1-Blue,反复冻溶法制备可溶性Fab片段。免疫印迹实验表明大肠杆菌质周腔内有可溶性Fab片段的表达。制备羊抗人IgG Fab抗血清,建立抗人IgG Fab抗体-Sepharose 4B亲和层析柱,纯化Fab片段。SDS-PAGE显示纯化的Fab达免疫纯,点印迹法表达纯化后的Fab片段具有中和HBsA 相似文献
3.
将抗体库所获抗-HBs Fab转换为全长人IgG 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 将大肠杆菌表达的抗-乙肝表面抗原(HBs)人Fab转换为真核表达的全长人IgG1。方法 用重叠PCR法将人工合成的人Vk前导序列拼到抗-HBs的VH和VK上,构建人IgG1真核表达载体。转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹检测抗-HBs人IgG的表达。结果 用轻链和重链同时表达的单一载体在CHO细胞中获得了抗-HBs人IgG的表达。结论 通过噬菌体抗体库所获Fab段可经拼接人 相似文献
4.
抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 尝试将1株来源于人源性噬菌体抗体库的抗HBsAg人Fab,转换成完整的抗HBsAg人IgG。方法 采用重叠PCR方法,在抗HBsAg人Fab和Vκ的VH基因的5’端接上人工合成的人κ链的前导序列,构建表达完整IgG1的真核表达载体,转染GHO(DHFR^-)细胞,用ELISA、RT-PCR和免疫印迹检测抗HBsAg人IgG的表达。通过DHFR/MTX体系及金属离子诱导提高Ig表达。结果:获得 相似文献
5.
肿瘤碱性蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清肿瘤碱性蛋白(Tumourbasicpro-tein,TBP)杂交瘤细胞株(1C3、4F4、5F4、3G9),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:均为IgG2a,腹水效价为1×10-6~1×10-8。特异性测定:TBPMcAb与IgG、IgA、IgM和Alb无交叉反应。单抗相加试验证实:5F4、4F4和1C3为识别TBP上同一抗原决定簇,3G9则为识别TBP上另一抗原决定簇。分别利用单株和混合株McAb标酶建立了可应用于人血清TBP含量测定的ELISA双抗体夹心法,并用于人血清TBP含量测定。 相似文献
6.
肾综合征出血热病毒结构蛋白的纯化及免疫学特性分析 总被引:6,自引:0,他引:6
应用从肾综合征出血热(HFRS)患者血清中提取的IgG与活化的Sepharose4B偶联,制备亲和层析柱,用此亲和层析柱从HFRSV感染的小白鼠乳鼠鼠脑中提取出2种分子量为67000和55000的病毒结构蛋白。经ELISA证明,此病毒结构蛋白能与HFRS患者血清IgG及抗HFRS病毒的McAb反应,效价为160。与6株抗HFRSVMcAh试验表明,此病毒结构蛋白能与H7株反应。血凝试验证明,此病毒蛋白不能凝集鹅红细胞、鸽血球和人"O"型血红细胞。将纯化的病毒结构蛋白免疫家兔,证明其有较强的免疫原性,可刺激家兔产生特异性抗体;微量中和试验及乳鼠中和试验证明,中和效价为256,说明纯化的病毒结构蛋白具有中和抗原位点;免疫血清对感染乳鼠有一定保护作用。 相似文献
7.
本文利用硫酸铵盐析及DEAE纤维素层析提取兔抗人ClqIgG.经胃蛋白酶消化及SPA-Sepliarose4B层析,制备了兔抗人ClqIgG(Fab')_2.SDS-PAGE分析分子量为93KD;经Clq-ELISA滴定其效价为10 ̄(-4).与人IgG无交叉反应;当该制剂预先经人Clq处理后,阻断其与Clq特异结合的能力,在合适的条件下可抑制Clq与Raji细胞上ClqR的结合。表明用该法制备的兔抗人ClqIgG(Fab')_2具有较好的纯度及特异性,可用于ClqR功能的研究。 相似文献
8.
人血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)亲和层析柱的制备及PTA1/Ig的纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:制备可用于纯化血小板/T细胞活化抗原1(plateletandTcelactivationantigen1,PTA1)融合蛋白的亲和层析柱,纯化真核表达的PTA1/Ig融合蛋白,以进一步研究PTA1的功能及其配体。方法:以硫酸铵及阴离子交换色谱法纯化抗PTA1mAb,并交联Sepharose4B制备PTA1亲和层析柱。通过亲和层析法,从pPTA1/Ig表达载体转染的COS7细胞培养上清中纯化PTA1/Ig融合蛋白,用夹心ELISA及SDSPAGE鉴定纯化结果。结果:硫酸铵及阴离子交换色谱纯化后,获得纯度高和活性好的抗PTA1mAb,用其交联Sepharose4B制备PTA1亲和层析柱,交联率为96%。该亲和层析柱可从pPTA1/Ig转染的COS7细胞上清每100ml中,纯化PTA1/Ig融合蛋白约126μg。结论:制备成功可用于纯化PTA1的亲和层析柱,并获得纯化的PTA1/Ig融合蛋白,为进一步研究PTA1的功能及鉴定其配体提供了有力手段 相似文献
9.
兔抗人C1qIgG(Fab‘)2的制备及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
本文利用硫酸铵盐析及DEAE纤维素层析提取兔抗人C1qIgG.经胃蛋白酶消化及SPA-Sepharose 4B层析,制备了兔抗人c1qIgG(Fab')2.SDS-PAGE分析分子量为93KD;经C1qELISA滴定其效价为10^-4,与人IgG无交叉反应;当该制剂预先经人C1q的处理后,阻断其与C1q特异结合的能力,在合适的条件下可抑制C1q和Raji细胞上C1qR的结合。表明用该法制备的兔抗人 相似文献
10.
工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
用获得的表达人源性抗 HBsFab片段的大肠杆菌,发酵表达该抗体的可溶Fab片段。以羊抗人Fab抗体偶联HiTrap柱,用Actisepelutionmedium作为洗脱液,在FPLC上纯化。用SDS PAGE及蛋白印迹法分析、鉴定,用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ELISA显示转化菌株有抗 HBsFab片段的表达。经FPLC纯化的抗体Fab片段呈单一峰,与抗 HBs阳性血清相似。纯化后的抗体Fab片段达到电泳纯,具有较高的活性。 相似文献
11.
抗人重组SCF单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究利用PEX31B作为载体,在大肠杆菌表达出重组人SCF融合蛋白。用该蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过鼠-鼠杂交瘤技术,成功地获得4株分泌抗人重组WSCF单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经检测,它们所分泌的抗体亚类均为IgG1,免疫印迹试验和抗体特异性鉴定证实,4株单抗均能特异性地识别可溶性SCF。抗SCF单抗杂交瘤细胞系的建立,为深入研究SCF的生物学特性、功能以及SCF产品的纯化,提供了 相似文献
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gp130单克隆抗体B-S12的生物学特性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
研究gp30单克隆抗体B-S12的生学特性。方法用细胞计数和^3H-TdR掺入的方法观察人多发性骨髓瘤细胞株XG-1和XG-2在抗gp130的单抗B-S12与它们的Fab片段和F(ab’)2片段作用下,细胞增殖和生长情况;此外,也观察gp130单抗B-P8以及IL-6和IL-6R单抗B-E8和B-R6对B-S12单抗在这2个细胞株上作用的影响。结果B-S12可刺激XG-1和XG-2细胞增殖,并维持 相似文献
13.
应用常规方法制备了4株能稳定分泌抗人重组γ-干扰素单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系:3D3、3D12、3F9和3B8.经免疫琼脂双扩散法鉴定,其分泌的McAb的亚类分别为:IgG2b、IgG3、IgG1和1gG1.相对亲和常数前两株McAb为6.25×10-11、后两株McAb为6.25×10-13.问接ELISA法测培养上清的效价为2×102~1.28×105.由小鼠腹水提取的4株McAb与天然γ-干扰素均产生交叉反应,对重组的人γ-干扰素均具有中和活性.其中3F9和3D3培养上清对重组人γ-干扰素亦有明显的中和活性。用3F9McAb与溴化氢活化的SePharose4B偶联制备了亲和层析柱,用其纯化粗提的γ-干扰素纯度达到95%以上,比活性达1.9×107IU/mg蛋白. 相似文献
14.
G3是由基因工程技术构建、在大肠杆菌中高效表达获得的由GM-CSF和IL-3组成的融合蛋白,能刺激造血细胞的增殖、分化和调节免疫应答。G3的生物学活性与GM-CSF和IL-3相比有明显提高[1]。本文用抗G3单抗(MG31)分别与CN-Br-Sepharose4B和rProteinA-SepharoseFF偶联制备免疫亲和色谱(IAC)柱,对G3进行纯化,取得了满意的结果。1 材料和方法1.1 MG31单抗[2]的纯化 饱和硫酸铵溶液沉淀法。1.2 MG31-CNBr-Sepharose4B柱(… 相似文献
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抗HBs-HBsAg复合物诱生体液免疫应答的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的研究抗HBs-HBsAg复合物在BALB/c小鼠诱生体液免疫应答的特点。方法分别用鼠抗HBs-HBsAg免疫原性复合物(IC)或单独HBsAg免疫BALB/c小鼠(加或不加氢氧化铝),分析其诱生的抗HBsIgG效价及IgG亚类。结果用IC加氢氧化铝为佐剂免疫小鼠诱生的抗HBs中以IgG1亚类为主,而用HBsAg免疫鼠则以IgG2b亚类较高。IC不加氢氧化铝佐剂诱生的抗HBs中IgG1及IgG2a均高于单独HBsAg免疫鼠。研究还显示,抗HBsIgGFc段是巨噬细胞(MΦ)等抗原提呈细胞摄取IC的主要途径。结论抗HBs-HBsAg复合物免疫诱生的体液免疫应答较单独HBsAg免疫强。抗HBs主要通过Fc段的介导作用,改变了机体抗原提呈细胞对HBsAg的摄取、加工及抗原提呈,并可增强HBsAg的免疫原性。 相似文献
16.
用抗CD59单抗2A7与CNBr-Sepharose4B偶联制备亲和层析柱,从正常人红细胞膜蛋白抽提物中分离纯化出CD59分子。本法纯化的CD59分子量为18-20KDa对还原剂敏感,与McAbssMEM43和1F5有高亲和性,再掺入豚鼠红细胞后,能够抑制人体补体的反应性溶血,本文还对三株抗CD59单抗2A7,MEM43及1F5的抗原特异性进行了初步分析。 相似文献
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目的:获得人血小板/T细胞活化抗原1(plateletandTcelactivationantigen1,PTA1)胞膜外区与人IgG1Fc段融合蛋白,为PTA1配体的鉴定及其功能的研究提供有力的工具。方法:针对人PTA1cDNA序列设计3段引物,通过反转录、半套式PCR方法从活化Jurkat细胞中扩增出PTA1胞膜外区基因片段,并将其克隆入融合蛋白表达载体pIG中,通过酶切、PCR及序列测定鉴定重组表达载体。重组载体通过DEAEdextran法转染COS7细胞,经夹心ELISA及亲和层析、SDSPAGE鉴定融合蛋白的表达及免疫学活性。结果:经序列测定后证实重组表达载体含有正确的PTA1胞膜外区序列及剪接供体序列,转染COS7细胞后,通过亲和层析纯化证实融合蛋白的Mr为83000,并能被抗PTA1胞膜外区单抗及抗人IgGFc的单抗同时识别。结论:pPTA1/Ig融合表达载体的构建及表达成功,为PTA1的功能及配体(PTA1L)的研究打下了良好的基础。 相似文献
19.
抗人DAF单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:10,自引:4,他引:6
以初步纯化的人红细胞膜DAF免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得3株(DG3、DG9和DA11)抗人DAF单克隆抗体。经间接ELISA测定,3株杂交瘤细胞培养上清及腹水的抗体效价分别为10-3~10-4及10-6~10-7;3株单抗的重链为小鼠IgG1亚类,轻链为κ型。结合还原条件下的免疫印迹实验及3株单抗对DAF促衰变活性的抑制作用,推测DG9识别的抗原表位为SCR1,而DG3和DA11为SCR2至SCR4。 相似文献
20.
用聚合酶链反应(PCR)从人源噬菌体抗体库中筛选出的宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体基因扩增了重链可变区基因,将其克隆到表达载体pGEX2T内,转化大肠杆菌DH5α,获得高效表达,表达量占全菌总蛋白质的40%左右,表达出的融合蛋白分子量为4×104,以包涵体形式存在。将此融合蛋白包涵体变性、复性后通过谷胱甘肽亲和层析柱(GSTSepharose4B柱),得到电泳纯的融合蛋白,每升培养物能纯化到20~30mg融合蛋白。Westernblot分析证明宋内痢疾杆菌脂多糖鼠单抗(5B12)能特异地结合到分子量4×104的融合蛋白的带上。ELISA试验显示融合蛋白与宋内痢疾杆菌脂多糖单抗(5B12)有结合活性,而与无关单抗,如大肠杆菌J5株单抗(E3)、炭疽杆菌单抗(F8FA)、鼠伤寒沙门氏菌单抗(M467)及乙肝病毒单抗(M11)不结合。 相似文献