半相合基因骨髓细胞移植小鼠的嵌合体程度对移植物抗肿瘤效应的影响

目的 探讨半相合基因骨髓细胞移植后受体形成的嵌合体程度对抗肿瘤效果的影响.方法 25只BALB/C青春期小鼠随机分为3组:混合型嵌合体组(A组,10只)、完全型嵌合体组(B组,10只)、对照组(C组,5只).首先,A、B组小鼠行直线加速器全身照射,剂量分别为4、8Gy,照射后4～6 h内经尾静脉注射入CB6F1代小鼠的骨髓细胞(5×106/只),C组无处理.A、B、C三组均给予Renca肾癌细胞腋窝下注射,每只2.6×106.观察所有组别小鼠的肿瘤生长速率,通过流式细胞仪测定A、B组小鼠移植后不同时间的嵌合体水平.荷瘤32 d时断颈处死小鼠,取肿瘤组织称重.结果 (1)流式细胞术鉴定血液白细胞中供者源细胞比例:A组移植后2周后形成混合嵌合体(47.51%～72.64%)并达高峰,以后逐渐下降,3～4周时下降至10%以下.B组小鼠移植后14 d形成完全供者型嵌合体(供体细胞＞90%),28 d后仍达90%以上.(2)与对照组和混合型嵌合体组比较,完全型嵌合体组的肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤重量显著减小(P＜0.01),抑瘤率高达52%.结论 半相合基因骨髓细胞移植后形成的稳定的完全型嵌合体状态是抗肿瘤效应的基础.     

白藜芦醇对小鼠甲状腺乳头癌细胞移植瘤的抑制作用及机制研究

背景与目的 白藜芦醇具有广泛的抗肿瘤作用,其可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移,但是其发挥作用的相关机制尚不清楚。因此,本研究探讨白藜芦醇对甲状腺乳头状细胞癌移植瘤的抑制作用以及其作用机制。方法 将40只裸鼠背部皮下接种甲状腺乳头状癌细胞（TPC-1）悬液建立移植瘤模型后,随机分为模型对照组和3个不同剂量白藜芦醇（2.5、5、10 mg/kg）治疗组,每组10只。白藜芦醇各剂量组裸鼠分别腹腔注射相应剂量的白藜芦醇,模型对照组裸鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,连续21 d。记录移植瘤的生长情况,绘制生长曲线。21 d后处死各组小鼠,称量肿瘤质量,计算抑瘤率;行肿瘤组织HE染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞形态和凋亡情况;用qRT-PCR法与Western blot法分别检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax、Bcl-2）与上皮-间充质转化（EMT）相关分子（E-cadherin、N-cadherin、vimentin）的mRNA与蛋白表达。结果 与模型对照组比较,3个剂量白藜芦醇治疗组的移植瘤生长速度均被抑制,21 d后的移植瘤质量均明显减小,且抑瘤率随白藜芦醇剂量的增加而加大（均P<0.05）。HE染色结果显示,模型对照组肿瘤组织中癌细胞呈片状,形态大小不一,胞浆丰富,核大,可见核分裂象,极性紊乱;3个剂量白藜芦醇治疗组细胞数量均不同程度减少、细胞排列疏松、细胞核固缩、核分裂较少、不同程度片状坏死。与模型对照组比较,3个剂量白藜芦醇治疗组的肿瘤组织中肿瘤细胞凋亡增加;E-cadherin和Bax mRNA和蛋白表达量升高,N-cadherin、vimentin和Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低;caspase-3 mRNA水平降低,切割型caspase-3蛋白表达量升高,且以上变化在3个剂量白藜芦醇治疗组均呈剂量依赖性（均P<0.05）。结论 白藜芦醇可促进甲状腺癌细胞凋亡从而抑制其在小鼠体内的生长,其作用机制可能与逆转EMT过程有关。     

嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的初步研究

目的 探讨嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的可行性。方法 采集兔骨髓干细胞，经行宫内胎鼠移植以及对新生子鼠行肝内注射，制作兔骨髓干细胞嵌合体大鼠模型。6周后将15只嵌合体大鼠分为A组（8只）、B组（7只）。将A组大鼠皮肤移植给供髓兔，将7只非嵌合体大鼠皮肤移植给非供髓兔作A组对照；将B组大鼠、7只非嵌合体大鼠（B组对照）皮肤同时移植给供髓兔。记录移植后皮片成活时间、创面愈合时间。结果A组对照移植皮片成活（9．3±1．8）d，创面于（20．9±2．1）d愈合；A组移植皮片成活（15．1±2．6）d，创面于（18．5±1．3）d愈合。B组及其对照移植皮片的成活时间、创面愈合时间与A组相似。与各自对照皮肤移植相比，A、B组皮片成活时间延长（P〈0．01），创面愈合时间缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论 嵌合体大鼠行异种皮肤移植后能诱导移植皮片免疫耐受．使其成活时间明显延长．创面愈合时间缩短。     

人源肿瘤异种移植模型的研究进展

肿瘤细胞系培养技术的出现有力地推动了肿瘤生物学研究地发展,但在肿瘤新疗法地临床转化研究中,细胞系肿瘤模型地预测能力有限,且不稳定.人源肿瘤异种移植模型能高度保留原肿瘤内基质异质性、组织学特性和分子多样性,引起研究者关注并被广泛应用于肿瘤新疗法研究,有望为肿瘤患者个体化治疗带来新突破.     

白桦脂醛对裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制研究

背景与目的 白桦脂醛是一种天然的RORγt激动剂,研究发现RORγt激动剂是潜在的肿瘤免疫治疗药物,提示白桦脂醛可能具有抗肿瘤的作用。本文通过体内实验探讨白桦脂醛对A549细胞裸鼠成瘤的影响及可能机制。方法 将A549细胞按2×10⁶个/100 μL通过腋下皮下注射植入裸鼠,成瘤后将裸鼠随机分为对照组和低、中、高3个剂量的白桦脂醛处理组,每组7只,分别给与溶剂DMSO、50 mg/kg白桦脂醛、100 mg/kg白桦脂醛、200 mg/kg白桦脂醛腹腔注射,1次/d。随后每周进行2次瘤体测量;处理3周后,取移植瘤行HE染色观察瘤体组织形态,TUNEL染色检测细胞凋亡水平,Western blot检测细胞内增殖信号通路Akt、ERK、STAT3蛋白及自噬相关蛋白LC3和P62的表达。结果 与对照组比较,各剂量白桦脂醛处理组肿瘤的生长被明显抑制（均P<0.05）;瘤体组织均出现大小不等的坏死区,TUNEL染色阳性细胞数明显增加（均P<0.05）;瘤体组织p-Akt、p-ERK、p-STAT3、p62的表达水平明显下调,LC3 II/I表达水平明显上调（均P<0.05）。以上作用均呈一定的剂量依赖趋势。结论 白桦脂醛能够降低A549细胞的成瘤能力,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,机制可能是其与对种瘤细胞内多条促增殖信号通路的抑制以及促进细胞自噬作用有关。     

猪到人异种移植抗原与移植免疫研究

同种异体组织和器官移植的供体来源有限，使异种移植再度成为研究热点。猪被认为是理想的供体之一。异种移植的主要障碍为异种抗原被人血清中天然存在的抗体结合、激活补体导致的超急排斥反应。现已认识的主要靶抗原为αＧａｌ，它的表达受α１，３半乳糖基转移酶（αＧＴ）的控制。针对αＧａｌ克服超急排斥反应的方法有：免疫吸附去除针对αＧａｌ的天然抗体，酶处理去除内皮细胞（ＰＡＥＣ）表面的αＧａｌ，基因工程获得不表达αＧＴ从而无αＧａｌ的动物。除αＧａｌ以外，还有一些抗原可与人血清抗体结合：如ＴＮＦ诱导ＰＡＥＣ表达的ｇｐ６５和ｇｐ１００，猪组织表达的人血型抗原Ａ，但这些抗原的作用还不清楚。猪ＭＨＣ（即ＳＬＡ）的作用尚有争论，异种移植细胞免疫中，直接途径和间接途径均存在。     

肾联合造血干细胞移植诱导免疫耐受的研究进展

<正>传统的免疫抑制剂导致机体非特异性免疫抑制,长期使用可引起感染、肿瘤等并发症,严重时危及生命,且目前的免疫抑制方案并不能解决慢性排斥反应导致的移植物功能进行性丧失[1]。因此临床上最有希望的解困之道是,诱导受体建立对移植物持久的特异性免疫耐受,使受体免疫系统对同种异体移植物特异性无应答,而对其它抗原的应答     

同种异基因肝脏非实质细胞对小鼠移植皮片存活的影响

目的探讨输注同种异基因肝脏非实质细胞(NPC)对小鼠移植皮片存活的影响及其机制。方法选用123只近交系小鼠,其中C3H小鼠65只、C57BL/6小鼠58只。20只C3H小鼠作移植供体;40只C3H小鼠肝脏为NPC来源;余下5只C3H小鼠作混合淋巴细胞培养(MLC)的刺激物,由每分钟放射性荧光闪烁计数(cpm)值表示。58只C57BL/6小鼠分为实验组50只、对照组8只。对照组小鼠仅作皮肤移植,未行NPC输注。实验组50只小鼠尾静脉输入由40只C3H小鼠肝脏制备的2×107个NPC,48h后腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并接受C3H小鼠皮片移植。于NPC输注前及输注后各时相点处死实验组小鼠,每时相点5只。检测血清白细胞介素(IL)4水平、脾淋巴细胞嵌合体水平及cpm值,并观察2组小鼠的存活时间。结果实验组小鼠皮片存活时间为(70.0±17.2)d明显长于对照组;NPC输注后IL4、嵌合体水平逐渐上升,而cpm值逐渐降低。NPC输注后60d实验组小鼠IL4为(251.5±11.0)ng/L,脾脏嵌合体水平达到(26.30±1.04)%。结论IL4、嵌合体水平的升高对诱导和保持免疫耐受起着重要的作用。     

供体脾细胞联合抗CD154单抗对非清髓性骨髓移植方案建立异基因嵌合体的影响

.06±3.77)%、胸腺(24.52±3.22)%]均可形成稳定的高水平嵌合,并持续超过100 d.结论 单纯2×108 Se门静脉输注只能诱导轻度免疫耐受,建立短暂(＜20 d)、低水平(＜20%)的外周性嵌合体;在此基础上联合1×108个BMc输注可延长嵌合体水平至40 d,但仍不稳定;而加入AH.F5后可显著增强BMc植入率,三者具有协同作用.外周嵌合体＞30%、中枢嵌合体＞20%是保证骨髓细胞发挥强大致耐受作用的基础.     

H-2半相合小鼠非清髓性骨髓移植模型的建立

目的　建立H 2半相合小鼠非清髓性骨髓移植模型。方法　用氟达拉滨、阿糖胞苷、环磷酰胺联合60 Co 2Gy全身照射组成预处理方案 ,以C5 7BL/ 6J(H 2 b)为供鼠 ,以C5 7BL/ 6J×BALB/c杂交F1代小鼠为受鼠 ,进行H 2半相合骨髓移植 ,采用环孢素A联合甲氨蝶呤预防急性移植物抗宿主病 (aGVHD)。观察移植后小鼠造血恢复、aGVHD发生率及死亡率 ,5 0d内存活率。结果　移植小鼠平均在 (1 2 .0± 1 .6 )d造血恢复 ,仅接受预处理而不输注供鼠细胞的小鼠在 (1 3.5± 2 .0 )d恢复自身造血 ;移植小鼠移植后 7d到 45d内均可检测到供、受者混合造血细胞嵌合体 ;移植后 2 2d～ 2 5d小鼠出现典型的aGVHD症状。环孢素A联合甲氨蝶呤预防方案可有效降低aGVHD的发生率 ,并减轻其严重程度 ;aGVHD死亡率为 6 0 %,5 0d内存活率为 70 %。结论　以氟达拉滨、阿糖胞苷、环磷酰胺联合全身照射组成的非清髓性预处理方案 ,可在H 2半相合小鼠间进行成功的骨髓移植 ,并可产生稳定的供、受者混合造血细胞嵌合体。     

Comparative analysis of immunological reconstitution induced by vascularized bone marrow versus bone marrow cell transplantation

Abstract  We have reported previously that vascularized bone marrow transplantation (VBMT) in an orthotopic hind limb graft brings about complete repopulation of bone marrow cavities in lethally irradiated syngeneic recipients within 10 days. Intravenous infusion of an equivalent volume of bone marrow cell suspension was evidently less effective. The purpose of this study was to investigate the reconstitution of immunocompetent compartments of lethally irradiated syngeneic rats after VBMT. Lewis rat hind limbs were transplanted orthotopically into irradiated recipients. Ten days after irradiation and bone marrow transplantation, bone marrow, mesenteric lymph nodes, and sera from rats were harvested. Mesenteric lymph node lymphocytes were analyzed. The responsiveness fomesenteric lymph node lymphocytes (MLNL) to mitogens and cell proliferation in the presence of sera and bone marrow cell (BMC) culture supernatants were measured. Our studies have shown that vascularized bone marrow transplantation brings about rapid replenishment of lymphoid organs of lethally irradiated syngeneic recipients. The re-populating subsets are fully responsive to mitogens. Sera from reconstituting rats had no effect on the proliferation of mature lymphocytes. Intravenous infusion of a number of BMC in suspension equivalent to that grafted in hind limb transplant was less efficient in reconstitution of lymphoid tissue.     

Pure red cell aplasia after major ABO-incompatible bone marrow transplantation: two case reports of treatment with recombinant human erythropoietin

A 34-year-old man with acute myelocytic leukemia (AML: MO) and a 32-year-old woman with AML: M2 developed pure red cell aplasia (PRCA) after receiving a major ABO-incompatible bone marrow transplant (BMT). The first patient responded to recombinant human erythropoietin (rhEPO) therapy, while the second did not. The second patient also received methylprednisolone (m-PSL) but developed reticulocytosis and hemolysis after the administration of m-PSL. Plasmapheresis was then performed and the patient promptly recovered from hemolysis and PRCA. We conclude that close attention must be paid when treating PRCA following major ABO-in-compatible BMT with rhEPO and m-PSL, as there is always the potential for massive hemolysis.     

Donor skin allograft survival after bone marrow transplantation: Case report and systematic review of the literature☆

Background

We present a case of skin allograft survival in a patient who previously received a bone marrow transplant from the same HLA-matched donor. DNA fingerprinting of skin biopsies showed mixed cellularity originating from the donor and recipient (68% and 32% donor DNA in the allograft skin and the native recipient's skin, respectively). Histologic sections demonstrated both grade 3/4 rejection and graft-versus-host-disease. We have conducted a systematic review in search for other cases of donor skin allograft survival after a bone marrow or hematopoietic stem cell transplantation.

联合成骨细胞移植促进骨髓移植小鼠的造血功能重建

目的 探讨联合成骨细胞移植对骨髓移植小鼠造血功能重建的影响.方法 Balb/c小鼠60只,取其中18只制备移植用骨髓有核细胞和成骨细胞.将其余42只小鼠分为3组.单纯移植组:小鼠18只,仅进行骨髓移植(BMT);联合移植组:18只,进行BMT的同时每只小鼠输入成骨细胞2×106个;正常对照组:小鼠6只,不做任何处理,仅作为移植前的正常对照.移植组小鼠在全身照射(TBI)预处理后4 h经尾静脉注入骨髓细胞2×106个.移植后第7、14和21天,分别处死移植组小鼠6只,对小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞(BMMNC)进行计数,采用流式细胞术测定BMMNC中CD34+细胞的百分比,使用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像系统测量骨髓造血组织面积,采用免疫组化染色法测定骨髓组织微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,单纯移植组和联合移植组小鼠外周血细胞计数及BMMNC数均明显低于正常对照(P＜0.01).第21天时联合移植组小鼠白细胞、红细胞及BMMNC数明显恢复,血小板数已接近正常对照组;单纯移植组小鼠外周血细胞数和BMMNC数虽然有所恢复,但其恢复程度明显弱于联合移植组.移植后第7、14和21天,联合移植组外周血细胞计数及BMMNC数均明显高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).移植后第7、14、21天,单纯移植组和联合移植组小鼠骨髓造血组织面积、BMMNC中CD34+细胞百分比及骨髓组织MVD均明显低于正常对照组(P＜0.01),但联合移植组均高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).结论 联合成骨细胞移植能有效促进骨髓移植小鼠骨髓造血系统的重建.

Abstract：

Objective To explore the effects of cotransplantation with osteoblasts on hematopoietic reconstitution in mice after bone marrow transplantation (BMT). Methods The typical model of syngeneic BMT was established. 18 Balb/c mice were used to prepare the bone marrow nuclear cells and osteoblasts for BMT. The 42 Balb/c mice were randomly divided into 3 group:normal group (6 mice, without any treatment), the single BMT group ( 18 mice, given 2 × 106 bone marrow nuclear cells/each mouse) and the cotransplantation group of HSC with osteoblaats (18 mice,given 2 × 106 bone marrow nuclear cells and osteoblasts/each mouse). The following factors were measured on day 7, 14, 21 after BMT: peripheral blood cells, bone marrow mononuclear cells (BMMNC), the percentage of CD34+ cells in BMMNC (assayed by flow cytometry), the hematopoietic tissue changes (detected by HPIAS-1000 image analysis system) and micro vascular density (MVD) of bone marrow tissue (with immunohistochemistry). Results The levels of periphral WBC, RBC, PLT, BMMNC in the contransplantation group were higher than those in the single BMT group (P＜0. 01 or P＜0. 05). In the contransplantation group, the percentage of CD34+ cells in BMMNC, the hematopoietic tissue area and the MVD of bone marrow were also higher than the single BMT group on the 7th, 14th, 21st day after BMT(P＜0.01 or P＜0.05). Conclusion Cotransplantation with osteoblasts could significantly promote hematopoietic reconstruction in mice after BMT. Cotransplantation may represent a promising means of achieving higher engraftment rate after BMT.     

归芪合剂在小鼠骨髓移植后造血重建中的作用

目的探讨归芪合剂对小鼠骨髓移植后造血重建的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为骨髓移植对照组(对照组)和骨髓移植归芪治疗组(归芪组)。对照组和归芪组的小鼠骨髓移植后,立即分别经胃饲生理盐水和归芪合剂0.4 ml,2次/d,直至小鼠处死为止。移植后第7、14、21 d时分别处死小鼠,计数其外周血白细胞、红细胞、血小板及骨髓单个核细胞,并作骨髓组织学观察。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测小鼠骨髓单个核细胞CD44 mRNA基因的表达水平和骨髓组织中CD44的蛋白表达水平。结果归芪组骨髓移植后第7、14、21 d外周血细胞和骨髓单个核细胞计数,骨髓组织造血面积及巨核细胞计数,骨髓CD44 mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论归芪合剂能促进小鼠骨髓移植后骨髓造血重建,其机制可能是通过增强骨髓粘附分子CD44的表达水平实现的。     

自体骨髓、骨联合移植在脊柱融合中的应用

目的 探讨自体骨髓、骨联合移植在脊柱融合中的运用。方法 84例中2例半椎体畸形、8例胸椎及胸腰椎结核、10例椎体滑脱、4例下颈椎骨折、51例胸腰段骨折、6例腰椎骨折及3例退变节段不稳患者在处理原发病的同时行植骨融合术，二期再在X线监视下行经皮注射自体骨髓移植，其中74例合并应用内固定器。结果 78例获得随访，平均随访期30．06个月。75例融合成功。3例失败，其中2例二次取内固定术中才被发现，第3例术后8个月X线片有假关节形成表现，再次术中也证实有假关节形成。无神经系统症状加重的病例出现。结论 骨髓、骨联合移植在脊柱融合中运用失败率低(3．85％)，成骨性强、生物安全性好。     

骨髓细胞移植改善宿主肝细胞功能研究

目的 观察骨髓问充质细胞(BMCs)移植能否提高严重肝功能损害合并再生障碍的同种先天性无白蛋白大鼠(F344alb)肝再生和修复能力.方法 F344大鼠为供体,F344alb受体鼠接受Retrorsine(RS)1次/2周腹腔注射2次后4周行2/3肝切除(PH).正常F344alb为组Ⅰ(n=5);BMCs移植为组Ⅱ(n=8);RS/PH预处理为组Ⅲ(n=8);RS/PH预处理后BMCs移植为组Ⅳ(n=8);RS/PH预处理后肝实质细胞移植为组V(n=8).4周后行各组大鼠肝脏形态学和组化染色研究,检测肝功能,及肝组织和骨髓基因检测.结果 (1)生存率:组Ⅳ75%,组Ⅴ 50%,组Ⅲ37.5%,组Ⅰ和组Ⅱ 100%.(2)4周后组肝再生率(67.38±8.66)%显著高于组Ⅳ、Ⅲ[(55.31±8.69)%,(44.27±6.51)%].(3)PH后1 d,组Ⅲ、Ⅳ、V血清TB、ALT显著升高;PH后2 d,组Ⅳ血清,rB、ALT显著下降.(4)组Ⅳ、Ⅴ肝组织切片白蛋白免疫组织化学染色显示白蛋白染色阳性肝细胞呈簇状分布.(5)F344来源白蛋白基因片段出现在组Ⅳ、Ⅴ大鼠肝组织内.(6)PH后2、4周,组Ⅳ、Ⅴ血清白蛋白显著升高.结论 BMCs移植可提高严重肝损合并再生障碍受体鼠肝再生能力,保护肝功能,促进肝修复.     

亲缘间单倍体相合造血干细胞移植治疗急性淋巴细胞白血病合并骨髓坏死2例

异基因造血干细胞移植是恶性血液病患者获得治愈的最有效手段,在临床上已广泛开展。急性白血病合并骨髓坏死（bone marrow necrosis,BMN）的病例临床有不少报道,但异基因造血干细胞移植治疗此类病例报道鲜见。我们于2011年收治了2例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia。ALL）合并BMN患者,经化疗诱导BMN逆转后为其实施了亲缘间单倍体相合外周血造血干细胞移植,均成功重建造血功能,现报道如下。