氟致离体人肝细胞凋亡及硒的保护作用研究

目的 研究硒、氟对离体人肝细胞周期和凋亡的影响。方法 体外培养的人肝细胞接触氟和（或）硒12h后,用流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分率和细胞周期构成比。结果 氟可使肝细胞凋亡百分率明显升高,S期细胞数增加,但G0／G1期和G2／M期细胞数无明显改变;加硒可明显拮抗氟的这种影响。结论 氟对人肝细胞的损害与氟诱导细胞凋亡和改变细胞周期分布有关,一定 量的硒可明显拮抗氟诱导的肝细胞凋亡及其对细胞周期的影响。     

氟中毒与氧化应激

复习了氟中毒与氧化应激关系的有关文献。从近年来多数研究资料来看,氟中毒的一定阶段确可发生自由基增高和氧化应激反应,但要确定氧化应激与氟化物所致各种损害之间的因果联系,则还有许多工作要做。     

氟中毒家免肝细胞凋亡与肝功能损害

目的：观察中毒对家兔肝功损害及肝细胞凋亡的影响,方法：给家兔饮水投氟3个月,采用流式细胞术检测肝细胞凋亡百分率及细胞周期,全自动徨化分析仪检测血清蛋白含量和有关酶活性改变,结果：氟中毒家兔肝细胞凋亡随投氟剂量的增加呈上升趋势,血清白蛋白,总蛋白含量较对照组明显中毒损害的敏感器官。     

氟中毒大鼠肝细胞凋亡研究

目的研究氟化物对肝细胞凋亡的影响。方法用偏食饲料、饮水加氟化钠１００ｍｇ／Ｌ或同时加碳酸钙３２００ｍｇ／ｋｇ饲料喂饲大鼠２个月,用流式细胞术检测肝细胞凋亡小体百分率,同时检测了谷胱苷肽过氧化物酶活性和脂质过氧化物含量。结果发现氟中毒组大鼠肝细胞凋亡小体百分率较对照组明显升高（Ｐ＝０．０１～０．０５）,加钙可使这种改变更为明显（Ｐ＜０．０１）;而ＧＳＨ－ｐｘ活性则明显降低。结论氟化物的毒性可导致肝细胞凋亡,对机体抗氧化能力的降低可能起一定作用。     

过量氟对大鼠肝细胞内钙水平和肝细胞凋亡的影响

目的 研究在大鼠过量摄氟后体内对肝细胞中游离钙([Ca~(2+)]i)水平和肝细胞凋亡的影响。方法 应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,采用Fura-2/AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度的变化,同时利用流式细胞术测定肝细胞凋亡率。结果 过量氟可刺激肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度增高,常食(高钙饮食)投氟组与常食对照组相比差异显著(P<0.05),偏食低钙投氟组高于低钙对照组,差异显著(P<0.05);肝细胞凋亡率在正常饮食加氟组与对照组相比差异无显著性(P>0.05),低钙饮食加氟组肝细胞凋亡率明显增高,与低钙对照组相比,差异显著(P<0.05);相关分析显示,低钙饮食投氟组肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度增高与细胞凋亡率有相关性趋势(r=0.576)。结论(1)过量氟所致的大鼠肝细胞内[Ca~(2+)]i持续增高对肝细胞凋亡有不同程度的影响,可能在氟骨症病理过程中起重要作用;(2)投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca~(2+)]i超负荷和细胞凋亡,提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系;(3)肝细胞内[Ca~(2+)]i增高与肝细胞凋亡率之间有无相关性有待于进一步研究证实。     

过量氟对大鼠脑肝肾细胞周期与细胞凋亡的影响

目的 研究氟对大鼠脑、肝、肾组织细胞凋亡和细胞周期的作用特点与 氧化侵袭之间的关系,进一步探讨氟中毒发生机理。方法 在常规食、偏食条件下,经饮水投不同剂量氟,应用流式细胞仪方法检测脑肝、肾组织细胞凋亡,细胞周期与活性氧产生状态。结果 常规食投氟100－150mg/L、偏食投氟50－100mg/L对脑、肝、肾组织活性氧产生无明显影响。氟对脑组织神经细胞周期的影响主要在S期,可明显减少S期神经细胞数量;对肝细胞周期的作用主要在G1期和G2期,偏食投氟各组G1期细胞数目普遍低于常食投氟组,G2期细胞数目则高于常规投氟组。过量氟对肾组织的作用,主要为偏食投氟100mg/L情况下,可明显诱导细胞凋亡的变化。结论 过量氟对细胞周期的影响,对不同组织的作用时相似有一定程度的差别,对脑神经细胞主要作用于S期,肝细胞的影响主要是G1、G2期;对肾细胞主要表现为诱导细胞凋亡过程。     

氟诱导细胞凋亡的机理研究

氟低剂量时是人体必需的，但有潜在毒性的一种微量元素。大量研究表明，过量的氟对机体具有多系统毒性作用，可导致多种细胞发生凋亡。有关氟与细胞凋亡，近年来在分子水平上展开了广泛的研究，涉及G蛋白调控学说、氧化应激／脂质过氧化／自由基系统、细胞色素C／Ca^2 稳态／线粒体系统、原癌基因／caspase／细胞信号转导系统以及DNA断裂与修复／细胞周期系统等多个方面。现将氟与细胞凋亡关系的研究综述如下。     

细胞凋亡与细胞增殖在人肝细胞癌中的表达和意义

目的：为了解人肝细胞癌中细胞凋的形态与分布规律，探索细胞凋亡标记率和增殖标记率与肝细胞癌组织学分级的关系。方法：对21例人肝细胞癌和17例慢性肝病分别作TUNEL标记和PCNA免疫组化检测，采用图像细胞仪作阳性细胞计数。结果：(1)细胞核染色质浓缩、边聚、胞浆嗜酸性变及核周空晕与TUNEL标记有极好的相关性：(2)凋亡细胞多呈弥散分布，以癌坏死区周围多见，包膜浸润处少见；(3)增殖细胞和凋亡细胞率与肝癌组织学分级呈正相关，Ⅲ级组肝细胞癌中增殖细胞率为278±6．4高于Ⅱ级组141±35(P<0．01)，又高于Ⅰ级组7．4±0．8(P<0.001)，Ⅲ级组肝细胞癌中凋亡细胞率为21±0．97高于Ⅱ级组0.92±O.26(P<0.05)，又高于Ⅰ级组0．45±0.08(P<0．001)(4)包膜浸润和门脉癌栓组凋亡细胞率和增殖细胞率均高于无包膜浸润和门脉癌检组结论：本研究提示细胞凋亡和细胞增殖与肝细胞癌组织学分级、包膜浸润和门脉癌检密切相关。     

氟中毒大鼠肝肾细胞凋亡与p53的关系

目的 研究氟中毒大鼠肝、肾细胞凋亡与相关基因p53的关系。方法 用流式细胞术检测氟中毒大鼠及氟加硒大鼠肝、肾细胞凋亡百分率及相关基因p53。结果 氟中毒大鼠组及氟加硒组肝、肾细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.01）且相关基因p53的表达也明显高于对照组（P＜0.01)。并且加硒组肝、肾细胞凋亡率明显低于氟中毒组。结论 氟可以导致细胞凋亡，加硒可保护细胞减少细胞凋亡。p53参与并介导细胞凋亡。     

自由基损伤及细胞凋亡与氟中毒发病研究进展

20世纪90年代至今,大量的实验结果证明氟可致机体抗氧化功能异常,由此提出自由基代谢紊乱是氟中毒发病中的一个重要环节。晚近由于医学分子生物学技术的发展和大量应用,高氟与机体细胞凋亡,基因表达和信息传导相互关系及在氟中毒发病中的作用受到高度重视。本文就近年来自由基代谢、细胞凋亡与氟致机体损伤及与氟中毒发病研究进展综述如下。     

氟对原代培养大鼠海马细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察氟诱导的大鼠原代培养海马细胞氧化应激损伤和凋亡及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法采用原代细胞培养的方法,将大鼠海马细胞暴露于20、40、80 mg／L氟化钠中,24 h后检测海马细胞存活率、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)及细胞凋亡。结果与对照组比较,各染氟组细胞存活率降低(9．1％、 12．2％、25．0％),但组间比较差异无统计学意义(F=106．8．P>0．05)。各染氟组MDA(5．06、7．66、 9_82 nmol／mg Pr)明显高于对照组(2．34 nmol／mg Pr),组间比较差异有统计学意义(F=7．151,P<0．05)。氟对海马细胞的损伤呈明显的剂量-效应关系,染氟40、80 mg／L组细胞内ROS和细胞凋亡率高于20 mg／L组和对照组,细胞凋亡率与ROS水平存在明显正相关关系(r=0．913,P<0．05)。结论氟可引起大鼠海马细胞发生氧化应激反应及凋亡,活性氧可能在氟诱导细胞凋亡中起重要作用。     

DNA damage, apoptosis and cell cycle changes induced by fluoride in rat oral mucosal cells and hepatocytes

AIM:To study the effect of fluoride on oxidative stress,DNA damage and apoptosis as well as cell cycle of ratoral mucosal cells and hepatocytes.METHODS:Ten male SD rats weighing 80～120 g wererandomly divided into control group and fluoride group,5 animals each group.The animals in fluoride group hadfree access to deionized water containing 150 mg/L so-dium fluoride(NaF).The animals in control group weregiven distilled water.Four weeks later,the animals werekilled.Reactive oxygen species(ROS)in oral mucosa andliver were measured by Fenton reaction,lipid peroxida-tion product,malondialdehyde(MDA),was detected bythiobarbituric acid(TBA)reaction,reduced glutathione(GSH)was assayed by dithionitrobenzoic acid(DTNB)reaction.DNA damage in oral mucosal cells and hepa-tocytes was determined by single cell gel(SCG)electro-phoresis or comet assay.Apoptosis and cell cycle in oralmucosal cells and hepatocytes were detected by flowcytometry.RESULTS:The contents of ROS and MDA in oral mucosaand liver tissue of fluoride group were significantly high-er than those of control group(P<0.01),but the level ofGSH was markedly decreased(P<0.01).The contents ofROS,MDA and GSH were(134.73±12.63) U/mg protein,(1.48±0.13)mmol/mg protein and(76.38±6.71)mmol/mg protein in oral mucosa respectively,and(143.45±11.76)U/mg protein,(1.444-0.12)mmol/mg protein and(78.83±7.72)mmol/mg protein in liver tissue respective-ly.The DNA damage rate in fluoride group was 50.20%in oral mucosal cells and 44.80% in hepatocytes,higherthan those in the control group(P<0.01).The apop-tosis rate in oral mucosal cells was(13.63±1.81)% influoride group,and(12.76±1.67)% in hepatocytes,higher than those in control group.Excess fluoride coulddifferently lower the number of oral mucosal cells andhepatocytes at G_0/G_1 and S G_2/M phases(P<0.05).CONCLUSION:Excess fluoride can induce oxidative stress and DNA damage and lead to apoptosis and cellcycle change in rat oral mucosal cells and hepatocytes.     

过量摄氟对大鼠脑组织氧化侵袭与细胞凋亡的影响

目的研究过量摄入氟对大鼠神经系统损伤过程脑细胞氧化应激相关指标和脑细胞周期变化与细胞凋亡率的关系。方法应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,测定大鼠脑细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)产生水平以及脑细胞周期变化及细胞凋亡率。结果过量氟可使脑细胞氧化应激能力发生改变,SOD活力水平投氟实验组与对照组相比差异不明显(P>0.05),在投氟实验组MDA生成与对照组相比差异不明显(P>0.05),慢性氟中毒大鼠GSH-Px活力增高,在低钙投氟组高于低钙对照组差异显著(P<0.05);低钙饲养组脑细胞增殖能力普遍降低,S期细胞比例降低,脑细胞凋亡率高钙投氟组与高钙对照组相比差异不明显(P>0.05),低钙投氟组明显高于低钙对照组差异显著(P<0.001);低钙投氟组大鼠GSH-Px活力增高与脑细胞凋亡率呈正比。结论过量氟所致的大鼠脑细胞增殖能力下降和脑细胞凋亡率增高,与氟神经毒性作用机制有关,低钙营养可加重氟的神经毒性作用;过量氟可引起脑细胞抗氧化酶类发生不同程度的变化,其中抗氧化酶类活性增强可能是脑神经细胞对氧化侵袭的自身保护性生理调节作用的表现;氧化侵袭对神经系统损伤的确切机制尚需进一步研究。     

Relationship between oxidative and occupational stress and aging in nurses of an intensive care unit

Stressful conditions lead to formation of excessive reactive oxygen species (ROS) and cause oxidative stress and aging. The aim of this study was to determine superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activity, and malondialdehyde (MDA) levels in nurses of a hospital intensive care unit according to demographic and occupational parameters, and to analyse the relationship with aging. Thirty-two nurses working in an intensive care unit and 35 aged-matched healthy individuals of both sexes as a control group were surveyed. No significant variations with respect to sex were detected in SOD, CAT, MDA and burnout levels. MDA levels increased with age in both the control group and the nurses, and we observed significant differences in MDA levels between the control group and nurses for all age groups. Significant variations in MDA levels were detected between single (286.12 ± 8.41) and married (318.82 ± 6.02), people, between those who frequently practice some kind of sport (281.41 ± 7.32) and those who never participate in sport (298.24 ± 8.11) ,and between those who frequently eat fruit and greens (289.75 ± 8.41) and those who never eat them (315.12 ± 7.21). Significant differences were detected between smokers and nonsmokers in SOD, CAT and MDA, but not for alcohol, coffee, tea or cola consumption. Higher SOD activity and MDA levels were detected in nurses on evening and night shifts (P < 0.01); these nurses also scored significantly higher on burnout subscales. These results suggest that: (1) occupational stress increases oxidative stress levels as a response to elevated ROS generation; (2) occupational stress increases MDA levels as a response to an elevation in free radical generation and can lead to aging; (3) working evening and night shifts increases oxidative and burnout levels. It is evident that preventive changes in job conditions and lifestyle are necessary to improve the quality of life of nurses who work in intensive care units.     

硒与GSH联合对氟致大鼠脂质过氧化作用的影响

目的　研究抗氧化剂硒及与不同剂量 GSH联合对氟所致脂质过氧化作用的影响。方法　采用动物实验。结果　饮含氟化钠 (15 0 mg/ L)水可使大鼠肝、肾及血清中 L PO含量显著增加 ;SOD活性、GSH- Px活性、GSH含量均显著下降 ;饮含氟水同时给亚硒酸钠 ,可使血清中 L PO含量显著下降 ;SOD活性、GSH- Px活性、GSH含量显著升高。说明硒对氟引起的脂质过氧化有拮抗作用。饮含氟水同时给 Se与不同剂量 GSH后 ,结果显示 :Se与低、中、高 3个剂量 GSH均可使血清中 L PO含量显著下降 ,全血中 SOD活性显著增强 ,呈剂量—效应关系 ,使肝、肾及全血中 GSH- Px活性不同程度增强 ,表明 Se与 GSH联合可有效拮抗氟所致的脂质过氧化作用 ,恢复机体抗氧化能力。结论　 1氟可引起大鼠肝、肾及全血中脂质过氧化物含量升高 ,抗氧化能力下降 ;2硒及与不同剂量 GSH联合具有不同程度拮抗氟诱导的脂质过氧化作用 ,恢复机体的抗氧化能力     

Significant reduction of apoptosis induced via hypoxia and oxidative stress in isolated human islet by resveratrol

Background and aimsSuccessful islet transplantation as a promising treatment of diabetes type 1 is threatened with the loss of islets during the pre-transplant culture due to hypoxia and oxidative stress-induced apoptosis. Therefore, optimization of culture in order to preserve the islets is a critical point. In this study, we investigated the effect of resveratrol, as a cytoprotective agent, on the cultured human islets.Methods and resultsIsolated islets were treated with different concentrations of resveratrol for 24 and 72 h. Islets' viability, apoptosis, apoptosis markers, and insulin and C-peptide secretion, along with the production of reactive oxygen species (ROS), hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1α), and its target genes in the islets were investigated. Our findings showed that the islets were exposed to hypoxia and oxidative stress after isolation and during culture. This insult induced apoptosis and decreased viability during 72 h. The presence of resveratrol significantly attenuated HIF-1α and ROS production, reduced apoptosis, promoted the VEGF secretion, and increased the insulin and C-peptide secretion. In this regard, resveratrol improved the islet's survival and function in the culture period.ConclusionsUsing resveratrol can attenuate the stressful condition for the islets in the pre-transplant culture and subsequently ameliorate their viability and functionality that lead to successful outcome after clinical transplantation.     

氟致骨组织中细胞核转录因子-κB相关基因表达改变与破骨细胞凋亡的关系

目的 探讨慢性氟中毒大鼠骨骼损伤时细胞核转录因子-κB(NF-κB)相关基因表达改变与破骨细胞凋亡的关系,深入研究氟骨症的发病机制.方法 健康SD大鼠36只,体质量100 ～ 120 9,按体质量随机分为3组,每组12只.对照组饮用自来水(含氟量＜1 mg/L),低氟组和高氟组分别饮用含5、50 mg/L氟化钠的自来水.大鼠饲养8个月,建立慢性氟中毒模型,股动脉放血处死.取大鼠股骨干骺端,光镜观察骨组织形态学改变;采用酶联免疫吸附法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b (TRACP 5b)水平;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞并计数;采用Real-time PCR和免疫组织化学方法检测骨组织中p50、IKBα和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达水平.结果 染氟大鼠股骨干骺端呈骨质硬化表现.低氟组血清TRACP 5b水平、破骨细胞数[(3.45±1.85)U/L、(6.75±1.29)个/切片]显著高于对照组[(1.26±0.23)U/L、(3.92±1.38)个/切片,P均＜0.05],高氟组[(2.74±1.85) U/L、(3.33±1.07)个/切片]较低氟组降低(P均＜0.05).低氟组p50、IκBα、Bcl-2、Bax mRNA表达水平(4.41±0.44、1.15±0.25、2.02±0.11、1.25±0.22)显著高于对照组(1.46±0.10、0.26±0.07、1.00±0.06、0.74±0.09,P均＜0.05),高氟组(0.69±0.09、0.14±0.03、0.95±0.08、0.62±0.08)较低氟组降低(P均＜0.05).低氟组p50、IκBα蛋白表达水平(152.96±7.87、156.20±9.75)显著高于对照组(125.63±9.85、118.97±6.94,P均＜0.05),高氟组(120.56±9.57、114.50±7.61)较低氟组降低(P均＜ 0.05);低氟组Bcl-2、Bax蛋白表达水平(170.61±6.60、160.77±7.66)和Bcl-2/Bax比值(1.07±0.08)较对照组(110.73±5.27、114.64±5.83、0.96±0.04)升高(P均＜0.05),高氟组(81.70±8.00、99.93±3.83、0.81±0.08)较对照组和低氟组降低(P均＜0.05).p50、IκBα蛋白表达水平与Bcl-2/Bax比值呈正相关关系(r值分别为0.587、0.676,P均＜0.05).结论 慢性氟中毒可引起骨组织NF-KB相关基因表达改变以及破骨细胞凋亡,氟骨症的机制可能与NF-κB p50和IKBα表达改变引起的破骨细胞凋亡失常有关.     

急性胰腺炎与氧化应激

氧化应激是在机体内活性氧生成和抗氧化物质失衡状态下,直接或间接通过信号转导通路引起细胞的损伤,是许多疾病的病因,同时又是许多疾病发生、发展的结果.研究表明,氧化应激在急性胰腺炎的发病中发挥重要作用,还与胰腺炎时胰腺外器官,如心、肝、肺、肾、消化道等的损伤有密切联系.氧化应激产生大量的活性氧和活性氮,引起炎症反应及微循环障碍,通过不同途径引起细胞坏死或凋亡,造成胰腺及其他脏器的功能障碍甚至衰竭.抗氧化剂可减少氧自由基的产生或直接清除机体产生的氧自由基,并增强机体的抗氧化能力,对急性胰腺炎具有较好的治疗作用.     

氟对原代培养大鼠肝细胞的氧化损伤作用研究

目的探讨氟对原代培养大鼠肝细胞的氧化损伤作用。方法采用半原位酶消化法分离大鼠肝细胞，氟化物染毒24h后用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率，检测培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量。结果氟对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用，表现为细胞存活率下降，ALT、AST的活性升高，MDA含量增加。结论脂质过氧化引起的氧化损伤作用是氟致原代培养大鼠肝细胞毒性的主要原因。