PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

SOX2通过PI3K/AKT通路调控口腔鳞癌细胞迁徙的机制研究

目的:研究过表达SOX2通过PI3K/AKT通路促进口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞迁移及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用及机制.方法:收集OSCC组织及正常口腔黏膜组织,培养OSCC细胞株Tca83、SC...     

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的 检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法 体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达的影响。结果 三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组（P〈0.05）,细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论 低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。     

三氧化二砷对舌鳞癌细胞凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的　研究三氧化二砷(As2O3)对舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERT mRNA)的作用,并初步探讨三氧化二砷的作用机制。方法　以舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,采用噻唑蓝 (MTT)、Annexin V/碘化丙锭(PI)染色法检测细胞生长抑制率和细胞凋亡率;采用Western blot检测细胞hTERT蛋白 的表达;采用RT-PCR法检测细胞hTERTmRNA的表达情况。结果　As2O3能够明显抑制Tca8113细胞增殖,诱导 细胞凋亡,并有浓度、时间依赖性。5μmol/L As2O3组72 h细胞生长抑制率为83·40%±7·31%,细胞凋亡率为 26·40%±3·42%。As2O3能抑制hTERTmRNA的表达和翻译,随As2O3作用时间、浓度增加,细胞hTERTmRNA和蛋 白表达减弱,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0·05)。结论　As2O3可以明显抑制Tca8113细胞增殖, 诱导舌癌细胞凋亡,并抑制端粒酶催化亚基基因的表达,诱导细胞凋亡和抑制hTERT转录和翻译可能是其作用机 制之一。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

沙培林对人舌鳞癌细胞株的抑制作用

沙培林(Sapylin)在临床上治疗口腔鳞癌具有一定效果。本文研究了 Sapylin 对舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞的抑制作用机理。实验证实:Sapylin 能抑制 Tca8113细胞的 DNA 合成;Sapylin 含量为0.015KE/ml～0.00375KE/ml,其抑制率为53.8%～61.3%。含量为1.0KE/ml时,培养8天后的Tca8113细胞集落形成率为0。提示 Sapylin 有抑制舌鳞癌细胞 Tca8113的作用。     

Buparlisib通过PI3K/AKT通路调控人口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的研究

目的:研究PI3K抑制剂Buparlisib对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的增殖抑制及诱导凋亡作用,及Buparlisib对PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用OSCC细胞系SCC131为研究对象,分析Buparlisib在低、中、高3种剂量(1μmol/...     

Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tea83增殖和凋亡的影响

目的 观察Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83的增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT方法和Annexin V-FITC/PI 染色法观察Zyflamend对Tca83的增殖和凋亡的影响.结果 0.1、0.5、1μl/ml Zyflamend对Tca83细胞增殖有明显的抑制作用,随着Zyflamend浓度增大,抑制作用逐渐增强,呈一定浓度依赖关系.24h和48h时,0.1μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率未见明显增加(P>0.05);0.25μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83有抑制增殖的作用,0.1μl/ml Zyflamend能够诱导Tca83细胞凋亡.     

干扰素诱导蛋白10对舌鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的: 探讨干扰素诱导蛋白10（IP-10）对舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡的影响以及与CXCR3A、CXCR3B基因表达的关系。方法: 将CAL-27 细胞分为 3 个实验组和 1 个对照组,3 个实验组分别采用10、20、40 ng/mL 的IP-10刺激,对照组不予刺激。刺激12、24、48、72 h时,利用CCK-8法检测 4 组细胞的增殖活性;24 h 时,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用Q-PCR检测10 ng/mL IP-10作用下,CAL-27细胞在12、24、48、72 h时CXCR3A、CXCR3B mRNA的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果: 12 h和24 h 时,3种浓度的IP-10 均能促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.05）;在 48 h 时,只有40 ng/mL的 IP-10 能够促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.01）; 而在72 h时,3种浓度的 IP-10对 CAL-27 细胞的增殖均无促进作用（P>0.05）。24 h后,3个实验组与对照组相比,CAL-27细胞的增殖率降低。24 h 时,3种实验组细胞凋亡率分别为（3.377±0.575）%、（6.867±2.848）%和（5.317±2.794）%,与对照组相比具有显著差异（P<0.05）,但各实验组间无显著差异（P>0.05)。12、24、48、72 h时,CXCR3A mRNA的表达量分别为0.0130±0.0007、0.0274±0.0005 、0.0204±0.0011和0.0174±0.0006,组间差异显著（P<0.05）;CXCR3B mRNA的表达量分别为0.0124±0.0015、0.0209±0.0016、0.0297±0.0013和0.0386±0.0010,组间差异显著（P<0.05）。结论: IP-10既能促进舌鳞癌细胞CAL-27增殖又能够诱导其凋亡,随着作用时间的推移,细胞增殖率降低;CXCR3A mRNA的表达先升高后降低,而CXCR3B mRNA的表达逐渐升高。CXCR3A、CXCR3B可能参与调控IP-10诱导下的舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。     

内质网应激诱导的TRB3在人舌体鳞状细胞癌细胞中抑制AKT磷酸化

目的:研究在人舌体鳞状细胞癌发生内质网应激后,TRB3与AKT磷酸化的关系。方法:在人舌体鳞癌细胞Tca8113及CAL-27中,使用毒胡萝卜素或衣霉素诱导内质网应激,采用腺病毒质粒转染及短发夹RNA干扰技术验证TRB3与AKT磷酸化的关系。结果:Tca8113及CAL-27细胞通过毒胡萝卜素或衣霉素诱导24h后,TRB3mRNA及蛋白表达升高。在Tca8113细胞中,通过腺病毒质粒转染上调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达下降;通过短发夹RNA干扰下调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达升高。结论:在人舌体鳞癌细胞发生内质网应激后,TRB3蛋白表达上调并且抑制AKT磷酸化。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的：探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白（P-glycoprotein,P—gP）、多药耐药相关蛋白1（muhidrug resistance associate protein 1,MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π（glutathione S—tranferase π,GST-π）表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA细胞在放疗后4hP—gP,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24h耐药蛋白的表达明显升高（P〈0．01）,Tca8113细胞的耐药蛋白表达在4h和24h时均有明显上升（P〈0．01）。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降。结论：放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。     

舌鳞癌抗原提呈相关基因表达的研究

目的：分析舌鳞状细胞癌组织中抗原提呈相关基因的表达。方法：选取2008年12月～2009年12月在南京市口腔医院口腔颌面外科就诊的30例原发舌癌患者的肿瘤及癌旁组织标本,采用实时定量PCR检测TAP-1和Tapasin的mRNA相对表达量,同时检测正常黏膜角化上皮细胞及舌鳞癌细胞系中TAP-1和Tapasin的表达。结果：与癌旁组织相比,肿瘤标本中TAP-1和Tapasin的表达显著下降,并且其mRNA表达水平与肿瘤的病理分级有显著相关性（P=0.001）。与正常口腔黏膜上皮细胞相比,肿瘤细胞中TAP-1和Tapasin的表达亦呈明显降低。结论：舌鳞癌中TAP-1和Tapasin的表达明显降低,可能是导致肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。     

Areca nut extract upregulates vimentin by activating PI3K/AKT signaling in oral carcinoma

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 160–166 Background: Areca nut is a group I carcinogen. Areca nut extract (ANE) is known to activate signaling pathways in oral epithelial cells. Activation of the serine/threonine protein kinase AKT/pKB (AKT) signaling pathway is known to be important during the neoplastic process. Vimentin is a mesenchymal intermediate filament and a regulator of tumor progression. This study investigated the impact of ANE on PI3K/AKT activation during vimentin expression. Materials and methods: Oral carcinoma cells were treated with ANE to explore the signaling changes underlying vimentin expression. Oral carcinoma tissues were subjected to immunohistochemical analysis to study the implications that vimentin expression has on patient survival. Results: After ANE treatment, the OECM‐1 and Fadu cells developed a fibroblastoid morphology and there was an increase in vimentin expression. The treatment also induced the phosphorylation of AKT and glycogen synthase kinase 3β in OECM‐1 cells. Blockage of phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3K)/AKT signaling attenuated vimentin expression when it was induced by ANE. However, it did not affect ANE‐mediated extracellular signal‐regulated kinase (ERK) activation or cyclooxygenase 2 (COX‐2) upregulation. Oral carcinoma tissue samples were found to have significantly higher levels of vimentin and pAKT expression than their controls. Tumors exhibiting no vimentin expression and weak AKT phosphorylation were found to be associated with better survival than groups with high levels of expression. Conclusion: Our results imply that PI3K/AKT activation and vimentin expression are important pathogenic cascades in areca‐associated oral carcinogenesis.     

miRNA-31和STAT-3在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-31和STAT-3在舌鳞状细胞癌中的变化及相关性。方法:收集137例舌鳞状细胞癌患者组织标本,利用荧光原位杂交法检测miRNA-31在组织中的表达情况,利用SP免疫组化法检测STAT-3在组织中表达情况,分析miRNA-31和STAT-3在不同分化程度舌鳞癌组织中表达,利用Kaplan-meier法分析miRNA-31和STAT-3表达与生存期的关系。结果:miRNA-31在低分化、中分化和高分化组织中阳性表达率分别为(80.6±14.3)%、(58.5±15.7)%和(23.7±9.4)%,STAT-3分别为(85.9±12.7)%、(51.7±16.3)%和(17.6±9.1)%,差异均具有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,舌鳞癌组织中miRNA-31和STAT-3表达呈正相关(r=0.614,P<0.05);生存分析显示,miRNA-31高表达组患者中位生存期37个月,低表达组患者中位生存期65个月,STAT-3高表达组患者中位生存期38个月,低表达组患者中位生存期66个月,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论:miRNA-31和STAT-3舌鳞癌组织中表达与组织分化程度有关,且miRNA-31和STAT-3呈正相关,高表达可影响患者预后。     

3种方式处理下颌骨对舌鳞癌患者手术预后的影响

目的：探讨舌癌病人下颌骨的不同处理方法与手术远期预后的关系,为舌癌患者的手术选择提供参考。方法：随访71例接受手术治疗的舌癌患者5年,分析术后影响预后因素,评价3种不同的下颌骨处理方式与患者预后的关系。结果：下颌骨处理方式对于舌鳞癌患者生存率有直接影响,其中未处理下颌骨患者5年总体生存率56.3%,边缘性去骨截骨患者的5年总体生存率为53.6%,而节段性截骨患者的仅为51.7%。结论：舌癌的预后不完全由下颌骨的切除方式决定的,而是由其侵袭性决定的,因此对于舌癌患者要根据不同情况选择不同方式处理下颌骨,在提高患者生存率的情况下,尽量保存下颌骨的完整性。     

HMGB 1在舌鳞状上皮癌中的表达及临床意义

目的:探讨舌鳞癌中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达及其对淋巴结转移和疾病转归的关系。方法:收集51例有完整临床及随访资料的舌鳞癌石蜡标本,采用免疫组织化学染色法观察HMGB1在不同分类的口腔鳞癌组织中的表达,并分析HMGB1与肿瘤分化程度、淋巴结转移及患者预后之间的关系。结果:HMGB1在舌鳞癌组织中呈高表达,阳性率92.2%;HMGB1表达与肿瘤分化程度在统计学上无显著相关性;有淋巴结转移的高表达率为81.2% ,无淋巴结转移的高表达率为32.6%,其差异具有统计学意义(P＜0.05)。高表达HMGB1的舌鳞癌患者较低表达者转归差,其生存率较低(P＜0.05)。结论:舌鳞癌组织中HMGB1与淋巴结转移及转归密切相关; HMG1的表达在一定程度上可用作反映舌鳞癌预后的重要生物学指标。