冠心病患者冬眠心肌中TNF-α表达及细胞凋亡的临床研究

目的 探讨冬眠心肌细胞内TNF-α mRNA与心肌细胞凋亡的变化和意义,初步探索冬眠心肌形成的分子生物学机制.方法 行冠状动脉搭桥手术(CABG)的冠心病患者10例,术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验(DSE)结合多普勒组织成像(DTI)确定冬眠心肌及正常心肌的存在部位,CABG术中根据检测结果进行取材(分别取正常心肌和冬眠心肌),并经电镜证实.取材心肌用 Tunel法检测心肌细胞凋亡情况,原位杂交法(ISH)测定TNF-α mRNA的活性.分析TNF-α mRNA与心肌细胞凋亡的关系.结果 冬眠心肌细胞凋亡数及TNF-α mRNA的表达较正常细胞高;TNF-α mRNA与冬眠心肌细胞凋亡数相关(r＝0.816,P＜0.05).结论 心肌缺血缺氧时,心肌细胞内TNF-α分泌增加,TNF-α促进冬眠心肌的形成并诱导心肌细胞凋亡.     

TNF-α在MODS鼠心肌中的表达及p38MAPK的调控作用

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在多器官功能障碍综合症(MODS)鼠心肌损伤中的作用及D38MAPK的调控机制。方法采用盲肠结扎并穿刺(CLP)来制作MODS模型。在不同时相点观察大鼠血清生化指标(GPT、BUN、Cr、CPK-MB)、TNF-α浓度及其mRNA在心肌的表达、心肌p38MAPK的活性。结果CLP术后血清TNF-α浓度进行性升高,CPK-MB显著提高。正常心肌组织不表达TNF-αmRNA,MODS时可见大量表达,且p38MAPK明显激活。血清TNF-α的水平及其mRNA在心肌中的表达与CPK-MB呈显著正相关。直用p38MAPK抑制剂SB203580后,p38MAPK激活受抑,血清TNF-α浓度显著降低,TNF-α在心肌中的表达减少,心肌损害明显减轻。结论TNF-α的大量释放及其在心肌中显著表达是MODS鼠心肌损伤的原因之-,通过调控p38MAPK信号通路可对心肌起保护作用。     

兔冬眠心肌模型骨髓干细胞动员及心肌组织中肿瘤坏死因子基因表达

目的 探讨兔冬眠心肌模型外周血骨髓干细胞的变化及缺血心肌组织中肿瘤坏死因子基因表达的变化.方法 选用雄性日本大白兔为研究对象,通过开胸不全结扎冠状动脉左前降支方法建立冬眠心肌动物模型.将成功制备的24只兔模型随机分为4组,即缺血3 d组、缺血7 d组、缺血28 d组和假手术对照组.应用流式细胞术测定各组模型动物外周血单个核细胞中CD34+细胞百分率,应用实时荧光定量PCR方法测定各组动物模型缺血心肌组织中肿瘤坏死因子mRNA表达.结果 兔冬眠心肌模型于手术后出现骨髓干细胞动员,1周内达高峰,随时间延长逐渐减弱;同时相应地出现手术后1周内缺血心肌组织中肿瘤坏死因子mRNA表达明显升高,随时间延长表达逐渐降低.结论 冬眠心肌可通过组织局部肿瘤坏死因子表达增高而动员骨髓干细胞进入外周血.     

兔急性心肌梗死心肌组织TNF-α mRNA表达的空间分布

目的研究TNF-αmRNA在实验性兔急性心肌梗死(AMI)心脏不同部位表达的特点.方法结扎兔前降支近端,用原位杂交的方法检测TNF-αmRNA在梗死区、梗死周边区及梗死区对侧左室、左心房、右室和右房的表达.结果在整个观察期内可在梗死区、梗死周边区梗死、梗死区对侧左室及左心房检测出TNF-αmRNA表达,在右室和右房无表达.结论AMI早期兔心脏的梗死区、梗死周边区梗死、梗死区对侧左室及左心房存在TNF-αmRNA表达;左室及左房非梗死区TNF-αmRNA表达的机制可能与心肌梗死后左室和左房壁张力增高有关.     

P-ERK、P-P38及iNOS、GLUT4在冠心病患者冬眠心肌中表达及意义

目的:探讨冬眠心肌细胞内P-ERK、P-P38、GLUT4i、NOS的变化和意义,分析冬眠心肌细胞内P-ERK、P-P38与GLUT4i、NOS的关系。方法:行冠脉旁路手术(CABG)的冠心病患者10例,术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验(DSE)结合多普勒组织成像(DTI)确定冬眠心肌及正常心肌的存在部位,CABG术中根据检测结果进行取材(分别取正常心肌和冬眠心肌),并经电镜证实。取材心肌用免疫印迹法(Western-blot)检测磷酸化的ERK、P38及iNOS、GLUT4的表达情况,分析磷酸化的ERK、P38与iNOS、GLUT4的相关性。结果:冬眠心肌细胞内磷酸化ERK、P38及GLUT4i、NOS水平较正常心肌高;冬眠心肌细胞内P-ERK与GLUT4表达相关(r=0.665P<0.05);P-P38与GLUT4i、NOS表达相关(r=0.708、0.676P<0.05)。结论:心肌缺血缺氧时,可触发ERK、P38的活化,活化的ERK、P38促使心肌细胞增加GLUT4及iNOS表达,促进冬眠心肌的形成。     

番茄红素对血脂及TNF-α mRNA表达的影响

目的：通过建立家兔动脉粥样硬化模型,观察TNF-α mRNA在实验性动脉粥样硬化家兔心脏和主动脉平滑肌细胞内的表达及番茄红素对其表达的影响.方法：将家兔按性别、体质量划分区组,随机分为5组,即空白组（N）、模型组（M）、番茄红素小剂量组（LS）、番茄红素大剂量组（LL）、血脂康组（X）.每组各6只,雄雌均等.空白组每日给予普通饲料,其余各组每日每只给予高脂饲料连续造模60d,从第61日起,灌胃给药,番茄红素高剂量组灌番茄红素液50mg/（kg.d）; 番茄红素低剂量组灌番茄红素液16.6mg/（kg.d）; 血脂康对照组灌血脂康56mg/（kg.d）; 空白对照组、模型组给予蒸馏水,连续用药40d后,测定血清脂质（TC,TG,HDL,LDL）含量.采用RT-PCR法检测TNF-α在主动脉和心脏mRNA的表达.所有数据经SPSS13.0软件进行统计分析.结果：番茄红素高剂量组家兔血清TG含量明显低于模型组（P〈0.05）,而番茄红素小剂量组与模型组比较无统计学差异.RT-PCR实验表明番茄红素能够抑制家兔主动脉和心脏TNF-αmRNA的表达.结论：番茄红素可以防止或延缓家兔动脉粥样硬化病变的形成,对动脉粥样硬化家兔的血脂和脂蛋白代谢紊乱具有调节作用,其作用机制可能与抑制TNF-αmRNA的表达有关.     

狗颅脑爆炸伤后脑组织中TNF-α mRNA表达的变化

目的：探讨狗颅脑爆炸伤后脑组织中TNF－αmRNA的变化及其规律。方法：应用原位杂交技术分别检测狗颅脑爆炸伤后30min和1、3、6h大脑皮质、海马、下丘脑和脑干等不同脑区脑组织中TNF－αmRNA的表达情况，并与正常对照组比较。应用电子计算机图像分析技术对其结果进行半定量分析。结果：正常对照组狗脑组织内TNF－αmRNA即有表达；颅脑爆炸伤后不同脑区组织中TNF－αmRNA的表达量均明显升高，变化幅度以大脑皮质挫伤区和同侧海马最为显著。TNF－αmRNA在伤后30min表达量即明显增加，至伤后1h达到高峰，伤后3h呈下降趋势，但仍高于正常水平。伤侧大脑半球TNF－αmRNA的表达量明显高于对侧大脑半球。结论：TNF－αmRNA在生理状态下即有表达，TNF－α参与正常的生理功能；颅脑爆炸后早期脑组织中TNF－α的表达增多，提示TNF－α可能参与了颅脑爆炸伤后的脑组织的病理改变。     

中药对哮喘大鼠IL-18 mRNA和TNF-α mRNA表达及IgE含量的影响

目的：探讨中药治疗对哮喘大鼠IL-18 mRNA和TNF-α mRNA表达及IgE含量的影响.方法：24只Wistar大鼠,随机分为中药治疗组、空白对照组和哮喘模型组.利用卵白蛋白（OVA）及氢氧化铝制作大鼠哮喘模型,在雾化激发期,中药治疗组用杏仁、甘草等中药制成的溶液雾化大鼠,其余组用生理盐水代替.支气管肺泡灌洗液中细胞分类计数,采用免疫放射法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法分别检测各组大鼠血清和肺泡灌洗液（BALF）中IgE含量以及肺组织IL-18 mRNA和TNF-α mRNA表达.结果：与空白对照组比较,模型组大鼠IgE含量、EOS计数、IL-18 mRNA和TNF-α mRNA的表达显著升高.与模型组比较,中药治疗血清IgE的含量、IL-18 mRNA和TNF-α mRNA的表达明显降低（P〈0.05）.结论：IL-18和TNF-α可能参与哮喘的发生,而中药治疗可通过抑制IL-18和TNF-α的 mRNA合成,改善哮喘炎症状态.     

TLR4和TNF-α在输卵管炎中的表达和意义

目的检测Toll样受-4（TLR4）与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在正常和炎症输卵管粘膜上皮细胞中的表达,探讨其与输卵管炎的关系。方法采用免疫组织化学染色结合病理图像半定量分析方法,检测18例正常输卵管标本（对照组）,22例炎症输卵管标本（观察组）中TLR4与TNF-α蛋白的表达情况。结果 TLR4与TNF-α蛋白在观察组的表达强度明显高于对照组,具有统计学意义（t=13.110,P=0.001;t=4.921,P=0.000）。在输卵管炎中TLR4与TNF-α的表达强度呈正相关（r=0.754,P=0.013）。结论 TLR4和TNF-α可能在输卵管炎的发生机制中起着重要作用。     

TNF-α蛋白和mRNA在大鼠药物性胃粘膜损伤表达的研究

目的：用小剂量阿司匹林灌服大鼠建立药物性胃粘膜损伤模型,探讨 TNF-α 蛋白和 mRNA 在胃粘膜细胞的表达及在胃粘膜损伤中的作用。方法：免疫组化和反转录聚合酶链反应技术检测 TNF-α 的表达。结果:实验组 TNF-α 在用药后 15 min 开始表达,3 h 达高峰,持续到 6 h,12 h 开始下降,24 h 有少量表达。实验组用药后与用药前比较 TNF-α 表达水平有明显差异。预处理组和对照组两组分别与实验组比较,TNF-α 均明显呈低水平表达。预处理组和对照组之间 TNF-α 表达水平无明显差异。结论:TNF-α 的表达在小剂量阿司匹林引起的胃粘膜损伤的发病机制中有重要意义。     

COPD肺气虚证模型大鼠血清TNF-α IL-8的表达和意义

目的:测定COPD肺气虚证模型大鼠血清TNF-α、IL-8的水平,探讨TNF-α、IL-8在COPD肺气虚证发病中的意义.方法:用烟熏并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法复制COPD"肺气虚证"大鼠模型,实验分为对照组和模型组.采用放射免疫法,测定两组大鼠血清TNP-α、IL-8水平.结果:模型组血清TNF-α、IL-8平较正常组显著升高.结论:TNF-α、IL-8可能参与了COPD肺气虚证慢性气道炎症的改变,在COPD肺气虚的发病机制中可能有重要意义.     

早产患者TNF-α基因启动子-308位点多态性与胎盘TNF-α mRNA、母血TNF-α表达关系的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子-308G→A多态性与早产遗传易感性的关系.方法 2004年9月至2005年2月对四川大学华西第二医院、四川省妇女儿童医院46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)母血、胎盘组织和同期足月正常产50例母血、20例胎盘组织进行研究.应用RT-PCR技术测定胎盘组织中TNF-α mRNA的表达水平;采用ELISA法测定母血清TNF-α水平.根据前期研究对TNF-α基因启动子-308位点的基因分型结果,分析该位点不同基因型间早产患者胎盘TNF-α mRNA和母血TNF-α水平的差异,及其不同基因型与绒毛膜羊膜炎的相关性.结果 早产感染组孕妇胎盘组织中TNF-α mRNA及血清中TNF-α水平明显高于早产非感染组和正常足月产组(P<0.05);在早产患者中TNF-α基因启动子-308位点GA(AA)基因型与GG基因型比较,其对应的TNF-α mRNA、TNF-α表达均显著增加(P<0.05),且与绒毛膜羊膜炎的发生密切相关(OR=4.22,95%CI 1.197～14.896).结论 TNF-α基因启动子-308位点多态性与早产、感染性早产的遗传易感性有关,该位点突变引起TNF-α转录、翻译水平改变;TNF-α及其基因多态性可以成为早期预测、诊断早产和官内感染的指标.     

体外循环中胃粘膜TNF-α mRNA的表达及细胞定位

目的 探讨体外循环（ＣＰＢ）过程中肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）在家兔胃粘膜中及细胞膜中的表达及细胞定位。方法 采用家兔ＣＰＢ模型,运用反转录ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ的方法,结合血浆中ＴＮＦ－α,内毒素浓度的变化,探讨了ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的及细胞定位的规律。结果 （１）ＣＰＢ过程中ＴＮＦ－αｍＲＮＡ在胃肠道的相对表达量较对照组明显增高,（２）ＣＰＢ过程中胃肠道组织中的ＴＮＦ－α呈不同程度的增高,而且胃肠     

创伤性休克大鼠肝组织TNF-α mRNA表达变化及甘氨酸对其的影响

【目的】观察创伤性休克大鼠肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达、肝功能和病理改变的动态变化及甘氨酸的干预影响。【方法】建立创伤性休克动物模型,110只Wistar大鼠随机分成3组:治疗组(n=40)、休克组(n=40)和对照组(n=30)。治疗组大鼠在复苏开始时经颈静脉输入100mg/kg的甘氨酸液;休克组输以同体积的生理盐水;对照组仅行腹腔麻醉。分别于复苏后3h、6h、12h、24h及48h五个时相点活杀大鼠。采用RT-PCR法检测肝组织TNF-αmRNA表达;观察肝组织病理改变并测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。【结果】休克组复苏后3h肝组织TNF-αmRNA表达即增加,复苏后6h达高峰。血清ALT、AST在复苏后3h有升高,且随时间延长逐渐增高;光镜下病理改变也随时间延长而呈损害加重趋势。与休克组比较,治疗组各时间点肝组织TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.05)、血清ALT和AST明显降低(P<0.05)且肝组织光镜下病理损害明显改善(P<0.05)。【结论】创伤性休克后肝组织TNF-α表达增加;甘氨酸可降低肝组织TNF-α表达,减轻创伤性休克后继发的肝脏损害。     

p38 MAPK在心肌肥厚中的作用机制

左室重量增加是心脏病死亡率的独立危险因子,持续超工作负荷使心肌肥厚代偿机制崩溃,并导致心衰.p38MAPK是细胞信号传递的交汇点,越来越多的证据表明p38丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路参与了动脉粥样硬化、心肌缺血及心肌肥厚等病理过程[1].本文旨在对p38MAPK在心肌肥厚中的作用机制作一综述.     

IL-2、TNF-α mRNA在迷路炎豚鼠耳蜗中的表达

目的:探讨迷路炎时,豚鼠耳蜗IL - 2、TNF -αmRNA的表达变化及其与迷路炎的关系。方法:随机将2 4只豚鼠分为实验组和对照组,实验组18只、36耳,将1mg .ml- 1内毒素(lipopolysaccharide ,LPS) 0 .2ml缓慢注入中耳腔,对照组6只、12耳注入等量生理盐水,观察6h、4 8h、14d耳蜗的病理变化;用原位杂交技术检测IL - 2、TNF -αmRNA在耳蜗的表达,用Tiger92 0图像分析软件分析图象。结果:(1)耳蜗形态学改变:鼓室注药后6h ,实验组豚鼠耳蜗的血管纹、螺旋韧带、蜗螺旋轴静脉等即可见充血、水肿、炎细胞浸润,Corti器支持细胞和感觉细胞轻度肿胀、变性;4 8h时加重;14d时耳蜗各部分结构恢复正常。对照组豚鼠耳蜗各部分结构无改变;(2 )IL - 2mRNA的表达:对照组耳蜗无IL - 2mRNA表达;鼓室注射LPS后6h ,实验组耳蜗的螺旋神经节、螺旋缘呈阳性表达,血管纹、螺旋韧带呈可疑阳性;而4 8h、14d无表达;(3)TNF -αmRNA的表达:对照组耳蜗无TNF -αmRNA表达;鼓室注射LPS后6h ,TNF -αmRNA广泛表达于实验组耳蜗的螺旋神经节、Corti器、螺旋缘、血管纹、螺旋韧带等部位,4 8h表达明显增强(P <0 .0 1) ,14d时仅螺旋神经节呈弱阳性染色。结论:IL - 2、TNF -α可能与急性迷路炎的发生有关,TNF -α则可能起着更为重要的作用。     

基因多态性对核因子-κB活化及TNF-α mRNA表达的影响

目的：探讨肿瘤环死因子α(TNF-α)基因组单个核苷酸多态性(SNP)影响TNF-α mRNA转录的信号转导机制。方法：选择前期课题已进行SNP基因型测定的脓毒症患者和正常健康人，每种SNP基因型各6例，取静脉血分组进行全血培养，并用脂多糖(LPS)(10μg／L)进行刺激，提取白细胞中核蛋白和总RNA，用EMSA方法测定核因子-κB(NF-κB)活化水平，用RT-PCR方法测定TNF-α mRNA表达。结果：在LPS作用后具有不同SNP基因型健康人群或脓毒症患者白细胞内NF-κB活化及TNF-α mRNA表达水平明显不同。-863A／A可降低NF-κB活化，并进一步抑制TNF-α mRNA的表达。另两种SNP均有促进NF-κB活化而随之促进细胞因子表达的作用。结论：TNF-α基因组SNP对该细胞因子表达及其上游转录因子有一定的影响，个体遗传差异在全身性炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发病机制中具有重要的作用。