中药强心饮含药血清对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究强心饮对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF—α）诱导新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts CFs）增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用机制。方法：采用胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNF—α诱导新生大鼠CFs纤维化病理模型,分别采用四氮唑蓝（MTT）比色法、羟脯氨酸法检测不同浓度强心饮含药血清对CFs增殖和胶原含量影响。结果：TNF—α能够刺激CFs增殖和胶原合成,与空白组相比差异显著（P〈0．05）;强心饮抑制TNF—α诱导CFs增殖和胶原合成（P均〈0．05）。结论：强心饮通过抑制TNF—α诱导的CFs增殖和胶原合成,发挥有效的抗心肌纤维化作用。     

瓜蒌薤白半夏汤对血管紧张素Ⅱ诱发心肌成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的探讨瓜蒌薤白半夏汤抑制心肌纤维化的作用机制。方法采用胰酶消化法进行新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）培养,予CFs 10-6mol/L孵育24h构建离体心肌纤维化病理模型,分别予5%、10%和15%瓜蒌薤白半夏汤含药血清干预24h。采用En-V ision免疫组织化学方法检测组织平滑肌肌动蛋白-α（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）及波形蛋白（VN）,进行心肌成纤维细胞的鉴定;MTT法和3H-TdR掺入法进行细胞增殖和DNA合成检测,羟脯氨酸法进行胶原含量检测。结果 AngⅡ10-6mol/L孵育CFs 24h后,CFs增殖及胶原合成增加;瓜蒌薤白半夏汤含药血清可以抑制CFs增殖及胶原合成。结论瓜蒌薤白半夏汤能够改善心肌纤维化,其作用机制可能与抑制CFs增殖、DNA及胶原合成有关。     

丹参酮Ⅱ_A对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA(TSN)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:①AngⅡ组OD值高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组OD值低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。②AngⅡ组有促进心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原含量低于AngⅡ组,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。③AngⅡ组Ⅰ型胶原mRNA表达高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原mRNA表达低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接诱导CFs的增殖,促进其分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;TSN对AngⅡ诱导的CFs增殖及Ⅰ型胶原分泌增加,及Ⅰ型胶原mRNA表达增强均有抑制作用。提示:TSN抗心肌纤维化作用的产生可能与丹参酮ⅡA抑制心脏局部的RAS系统有关。     

广枣总黄酮对血管紧张素Ⅱ所致大鼠心肌纤维化的影响

目的：探讨广枣总黄酮（total flavones of fructus chorspondiatisTFFC）对大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法：采用差速贴壁法培养新生大鼠CFs,在体外建立AngⅡ诱导CFs增殖模型成功后,将模型随机分为空白组（control）：未加药物;AngⅡ组：AngⅡ（100nmol／L）;TFFC＋AngⅡ组：加入AngⅡ（100nmol／L）和不同浓度（25、50、100mg／L）的TFFC）组。采用MTT实验方法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原合成。结果：100nmol／L的AngⅡ组明显促进CFs增殖（P〈0．05）,（50、100mg／L）的TFFC组明显抑制100nmol／LAngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖（P〈0．05）与胶原合成（P〈0．05）。结论：广枣总黄酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,并成浓度依赖性。     

齐墩果酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞转化生长因子β1分泌的实验研究

目的 探讨齐墩果酸(OA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞(CFs)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用胰酶消化法及差速贴壁法培养大鼠CFs,建立AngⅡ诱导的大鼠心肌间质纤维化体外模型,采用MTT法检测各组CFs增殖活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组CFs上清液中TGF-β1水平.结果 与对照组比较,AngⅡ组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平明显增加(P＜0.05);60,100μmol/L OA组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平较AngⅡ组明显降低(P＜0.05).结论 OA能抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制TGF-β1分泌有关.     

丹酚酸B抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖与分化的作用

目的:研究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与分化的影响,探讨Sal-B是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法:胰酶消化,差速贴壁分离纯化CFs,抗波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。建立AngⅡ诱导的CFs增殖分化模型。实验分为空白组(无血清DMEM),模型组(1×10~(-6)mol·L~(-1)AngⅡ),Sal-B低剂量组(2.5×10~(-5)mol·L~(-1)Sal-B+1×10~(-6)mol·L~(-1)AngⅡ)及Sal-B高剂量组(5×10~(-5)mol·L~(-1)Sal-B+1×10-6mol·L~(-1)AngⅡ)共4组。Sal-B预保护1 h,加入AngⅡ共同作用24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法分析Sal-B对AngⅡ诱导CFs增殖的细胞存活率,采用试剂盒(消化法)测定羟脯氨酸含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达情况。结果:MTT结果显示,与空白组比较,模型组AngⅡ显著诱导CFs异常增殖(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量显著抑制AngⅡ诱导的CFs增殖(P0.01);羟脯氨酸含量测定结果显示,与空白组比较,模型组羟脯氨酸含量显著升高(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组含量均显著降低(P0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组α-SMA,ColⅠ蛋白表达显著上调(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组α-SMA,ColⅠ蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01)。结论:Sal-B可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,减少α-SMA,ColⅠ蛋白的表达,对AngⅡ体外诱导心肌纤维化进程具有抑制作用。     

氧化苦参碱对转化生长因子 β1 诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖与分化的抑制作用

目的:观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)干预对转化生长因子β1 (Transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激的SD大鼠心肌成纤维细胞(Cardialfibroblasts,CFs)增殖、分化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:体外培养新生大鼠CFs,分离纯化后分为对照组(使用无血清DMEM培养)、TGF-β1组(单纯TGF-β1诱导)和观察组(使用TGF-β1加OM干预) 3组。MTT法检测CFs增殖情况,ELISA法检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,CoL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,CoL-Ⅲ)含量,RT-PCR法检测Smad2 mRNA表达,Westorn blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2及Smad3蛋白表达情况。结果:与对照组比较,TGF-β1组CFs增殖水平、CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ、PCNA、α-SMA、Smad2 mRNA及Smad2/3蛋白表达均明显升高(P 0.05);与TGF-β1组比较,观察组上述指标均降低(P 0.05),除CoL-Ⅰ外,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:OM能够明显抑制TGF-β1诱导CFs增殖、分化水平,降低胶原蛋白的合成水平,作用机制与其能够干预Smad2及Smad3蛋白表达有关,具有临床应用价值。     

广枣总黄酮抑制Ang II诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成及其机制

目的观察广枣总黄酮(TFCF)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响。方法采用差速贴壁法培养新生大鼠CFs,在体外建立Ang Ⅱ诱导CFs增殖模型。采用3H-脯氨酸掺入法及羟脯氨酸比色法检测CFs胶原合成,分别观察一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)、鸟苷酸环化酶抑制剂(ODQ)及TFCF对Ang Ⅱ诱导CFs胶原合成的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)水平;化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶(NOS)水平;放免法测定细胞内环鸟苷酸(cGMP)水平。结果 TFCF 25～100 mg/L呈剂量依赖性抑制Ang Ⅱ诱导的CFs胶原合成,但这种作用可被L-NAME及ODQ部分阻断;TFCF作用细胞后NO、NOS、cGMP水平升高。结论 TFCF在一定质量浓度范围对Ang Ⅱ诱导的CFs胶原合成有抑制作用,NO-cGMP信号通路可能是其发挥作用的途径之一。     

复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞增殖的影响

【目的】观察复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响。【方法】采用培养的新生的大鼠CFs，以四唑盐比色法MTT作为反映细胞增殖的指标；流式细胞仪分析细胞周期。【结果】复方鳖甲软肝片能明显抑制CFs增殖，并将细胞周期阻抑在G1期。【结论】复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

小檗碱对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及Akt激活的影响

目的:探讨小檗碱对高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及Akt激活影响。方法:分离新生乳鼠心肌成纤维细胞,MTT法检测不同浓度小檗碱(10⁴0μM)对高糖(25 mM)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响。采用qPCR法检测大鼠心肌成纤维细胞纤连蛋白(FN)的表达。采用Western blot法检测大鼠心肌成纤维细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Akt的表达。结果:25 mM高糖刺激48 h后心肌成纤维细胞的细胞增殖显著增加,FN、PCNA、p-Akt表达升高,小檗碱以剂量依赖性方式抑制高糖诱导上述指标的改变。结论:小檗碱可以通过抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制Akt有关。     

羌活地黄汤对佐剂性类风湿性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

目的：观察羌活地黄汤对氟氏完全佐剂诱导的类风湿性关节炎（AA）大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）的影响,探讨羌活地黄汤治疗类风湿性关节炎的可能机制,为羌活地黄汤在临床上的应用提供实验依据。方法：建立大鼠佐剂性类风湿性关节炎动物模型,将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、羌活地黄汤及甲氨喋呤组。采用灌胃给药方式进行治疗。采用酶联免疫吸附法检测AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。结果：佐剂性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均高于正常对照组（P〈0．01）;经羌活地黄汤及甲氨喋呤治疗后,羌活地黄汤组及甲氨喋呤组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于模型组（P〈0．01）,羌活地黄汤组与甲氨喋呤组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：羌活地黄汤具有抑制AA大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6的异常分泌的作用,可以阻止AA大鼠免疫性炎症的发展。提示羌活地黄汤对AA大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6的影响是其治疗RA的可能机制。     

重症急性胰腺炎大鼠促炎抗炎细胞因子的动态变化及大承气汤的调节作用

目的：研究重症急性胰腺炎（SAP）大鼠促炎抗炎细胞因子TNF-α、IL-1、IL-10不同时间点的动态变化及大黄复方的调节作用,探讨大承气汤治疗SAP的作用机制。方法：采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型。将SD大鼠随机分为假手术组、SAP模型组和大承气汤治疗组,观察各组不同时间点血清淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-10水平。结果：SAP模型组与假手术组比较,血清淀粉酶、TNF-α、IL-1水平均明显升高（P〈0.01）,IL-10水平降低（P〈0.01）,TNF-α/IL-10比值降低;大承气汤治疗组与SAP比较,血清淀粉酶、TNF-α、IL-1水平明显降低（P〈0.01）,IL-10水平不同程度上升（P〈0.05,P〈0.01）,TNF-α/IL-10比值回复接近假手术组水平。结论：大承气汤治疗SAP的作用机制可能通过下调IL-1、TNF-α等促炎细胞因子的释放,并一定程度提高抗炎细胞因子IL-10水平,重建促炎和抗炎细胞因子的平衡,进而减轻组织损伤,阻止SAP的进一步发展。     

四妙勇安汤对实验性兔动脉粥样硬化易损斑块的影响

目的探讨四妙勇安汤对AS易损斑块的影响及机制。方法随机将40只日本大耳白兔分为正常组10只,实验组30只。正常组予普通饲料,实验组利用复合因素制备兔AS易损斑块模型,8周时实验组随机分为模型组、辛伐组、四妙组,24周取材。检测动脉壁内膜厚度（IT）、内中膜厚度比（IT／MT）、斑块纤维帽厚度（FCT）、纤维帽与内中膜厚度比（FCT／IMT）、胶原含量（CA）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及核因子-κB（NF-κB）阳性面积百分比。结果模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。四妙组IT、IT／MT均低于模型组（P〈0．05）,FCT和FCT／IMT均高于模型组（P〈0．01）;斑块内CA阳性面积百分比均高于模型组（P〈0．01）,α-SMA阳性面积百分比低于正常组MMP-9和NF-κB阳性面积百分比均低于模型组（P〈0．01,P〈0．05）。结论四妙勇安汤能够稳定AS易损斑块,其作用机制可能是通过抑制MMP-9、TNF-α及NF-κB表达实现的。     

养胃解毒合剂对脓毒症模型大鼠作用的实验研究

目的观察养胃解毒合剂对脓毒症模型大鼠的治疗作用,探索养胃解毒合剂治疗脓毒症的部分作用机制。方法60只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、养胃解毒合剂组、阿莫西林组。采用盲肠结扎穿孔法对大鼠进行脓毒症模型的复制。假手术组大鼠不进行穿孔。灌胃相应药物干预．连续给药6次。采用酶联免疫吸附（ELISA）法对各组大鼠血清中内毒素、肿瘤坏死因子-γ（TNF-γ）、干扰素-γ（INF-γ）的含量进行检测。结果模型组大鼠血清中内毒素、TNF—α、IFN-γ的含量显著高于假手术组（P〈0．01）;养胃解毒合剂组大鼠血清中内毒素、TNF—α、IFN-γ的含量明显低于脓毒症模型组（P〈0．01）。结论养胃解毒合剂能够明显降低脓毒症模型大鼠血清中内毒素、TNF-α及IFN-γ的含量。     

通痹化纤方对肺纤维化大鼠肺功能及uPA、PAI-1、TNF-α表达的影响

目的观察通痹化纤方对肺纤维化大鼠肺功能及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、尿激型纤溶酶原激活剂(uPA)和纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)表达的影响,探讨该方治疗肺纤维化大鼠的作用机制。方法将70只大鼠随机分为空白组、模型组、激素组、中药组,气管内注射博来霉素造成肺纤维化大鼠模型,造模后28天予以相应药物灌胃给药,连续给药21天。检测各组大鼠肺组织病理形态学、肺功能、血清及支气管肺泡灌洗液uPA和PAI-1水平、血清TNF-α水平的变化。结果模型组呈中重度肺纤维化改变,中药和激素组肺泡炎和肺纤维化程度均较模型组明显减轻;与模型组比较,中药和激素组TNF-α水平明显降低(P<0.05);与空白组比较,其余各组大鼠血清uPA水平明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠MVV水平明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠Cydn水平明显降低(P<0.05),与模型组比较,中药和激素组Cydn水平明显升高(P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠RL水平明显升高(P<0.05),与模型组比较,中药组RL水平明显降低(P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠RE水平明显升高(P<0.05)。结论通痹化纤方可能通过降低肺纤维化大鼠血清中TNF-α水平,改善肺纤维化大鼠Cydn及RL,从而延缓肺纤维化的进程。     

护津方对急性肺损伤大鼠弹性蛋白酶及肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的：探讨护津方对细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肺损伤大鼠支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中弹性蛋白酶（Neutrophil elastase,NE）及肺组织肿瘤坏死因子-αmRNA（Tumor necrosis factor-α mRNA,TNF-α mRNA）表达的影响。方法：40只雄性Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组、LPS模型组、地塞米松组、护津方组,每组再分为4h和8h两个亚组。分别用地塞米松和护津方在LPS诱导ALI模型前预处理大鼠。分别采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR检测NE及TNF-α mRNA的表达。结果：两个时相点中,与模型组相比,护津方组BALF中NE含量均显著降低（P〈0.01）。与模型组相比,8h组中,护津方组TNF-α mRNA表达均显著降低（P〈0.01）。病理学观察,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论：护津方能减轻内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织损伤,对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机理可能与其能降低内毒素致急性肺损伤BALF中NE及肺组织TNF-α mRNA的表达有关。     

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。