生物素—链霉亲和素系统在检测HBe系统中的应用

应用链霉亲和素(SA)和生物素系统发展成ELISA 的改良法,用于检测HBeAg 和抗-HBe,取得较为满意的效果。标记SA—HRP 时,两者的重量比以0.5～0.8/1为佳,浓度以7μg/ml 时最为理想;SA-HRP 的反应时间以30 min 为适宜。本法和BA 法、普通法进行检测抗-HBe 的灵敏度比较,其相对灵敏度高于后二者。用Abbott 试剂作为标准。检测HBeAg 100人份、抗-HBe 87人份,其阳性、阴性及总符合率均高于BA 法和普通ELISA,BSA 法提高了方法的特异性及灵敏度,在应用上有着广阔的前景。     

生物素—链霉亲和素系统试剂在检测HBsAg中的应用

从ELISA用于检测抗原抗体以来,衍生的各种改良方法不断涌现,使乙型肝炎诊断技术逐步改进和完善。ELISA与生物素一亲和素系统的结合,增高了检测的敏感性,但由于亲和素(AV)对聚苯乙烯有较高的阴性显色,近几年,链霉亲和素(SA)的问世,     

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用。方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2M cAb、IL-4M cAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(b io-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认M cAb、b io-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率。结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2.0μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2M cAb、IL-4M cAb最适稀释度分别为1∶20和1∶40,b io-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10~15μg/m l和15μg/m l。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2 CD4 /IL-4 CD4 比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26。结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关。     

生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用.方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(bio-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认McAb、bio-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法.用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率.结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100 μg/L和2.0 μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1∶ 20和1∶ 40,bio-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10～15 μg/ml和15 μg/ml.20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2+CD4+/IL-4+CD4+比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26.结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态.妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关.     

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较.方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA 的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定.结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程y=0.985X-0.131,相关系数(r)=0.997.PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%.测定范围为1.50～85.μg/L.最小检测限为0.30μg/L.结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用.     

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的 评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学，发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据，并以相应软件分析这两种方法的相关性；同时对BSA-ELISA的测定范围，变异系数(CV)，最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性。回归方程Y=0．985X-0．131，相关系数(r)=0．997。PSA的批内平均CV为2．21％，批间平均CV为3．08％。测定范围为1．50～85．00μg／L。最小检测限为0．30μg／L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好，结果稳定，偏差小，可以在临床上常规应用。     

纳米级超声微泡造影剂的制备及其性状的初步研究

目的制备适用于超声诊断的纳米级超声微泡造影剂,并对其性状进行初步研究。方法通过低速离心分级分离法制备纳米级的脂膜超声微泡,检测微泡大小形态、表面电位、粒径、分布,测试其与抗体结合情况,体外初步测试其增强显像效果。结果微泡呈圆形,分布均匀,粒径均值为623.4nm;微泡表面电位均值1.3mV,与抗体结合情况良好,体外初步测试能明显增强显像效果。结论通过低速离心分级分离法可以制备纯度较高的纳米级超声微泡,为超声造影剂的小型化和靶向性发展提供重要的工作平台。     

包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA超声造影剂的制备及特性

目的 制备包载经聚乙二醇(PEG)修饰的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α高分子超声造影剂(PLGA),以改善腺病毒载体(Adv)在体内的安全性,提高Adv基因在细胞的转染效率。方法 使用活化的甲氧基PEG对重组Adv衣壳蛋白质进行修饰得到PEG化Adv(PEG-Adv),用双乳化法制备载PEG-Adv高分子超声造影剂(PLGA),观测其粒径、包封率、释放规律及释放病毒的活性,并检测其在巨噬细胞中的免疫反应程度。结果 PLGA分布均匀,平均粒径为6.23 μm;包封率为17.23%;PEG-Adv和单纯Adv从PLGA释放规律相似,但从PLGA释放出来的PEG-Adv的转染效率比从PLGA释放出来的单纯Adv高;包载PEG-Adv的PLGA产生的免疫反应强度也较低。结论 用PLGA微球包载PEG化的重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α,可改善Adv在体内安全性差的缺点,释放出来的病毒稳定性好,转染效率较高,作为心血管疾病的基因治疗载体具有较好的研究前景。     

载长春新碱长循环聚合物超声微泡造影剂的制备及性能评价

目的 制备载硫酸长春新碱的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)超声微泡造影剂,观察微泡的一般特性及体内、外显影效果.方法 采用W/O/W复乳-溶剂挥干法制备超声微泡造影剂,正交实验设计获得最佳制备工艺,采用紫外分光光度法测定微泡的包封率和载药量,光学显微镜观察微泡形态,以马尔文激光粒径测量仪测定微泡造影剂的粒径、Zeta电位,并观察微泡在兔心腔的显影效果.结果 获得的微泡造影剂为球形,平均粒径约为1.27 μm,包封率为(37.63±0.61)%,Zeta电位为-24.88 mV,静脉注射载药微泡后,能增强兔心腔超声显影效果.结论 采用复乳-溶剂挥干法成功制备超声微泡造影剂,能增强体内外超声显影效果.     

自制高分子聚合材料超声造影剂显影效果动物实验研究

目的观察自制高分子聚合材料超声造影剂“高聚显”的显影效果、特点及其安全性。方法质量浓度为5%高聚显溶液,按0.25 ml/kg剂量经兔耳缘静脉团注,采用GE Vivid 7彩色多普勒超声诊断仪,12L探头,以不同机械指数(MI),在二次谐波、彩色多普勒及能量多普勒模式下,分别实时动态观察肝血管、肝实质回声强度以及肾多普勒血流信号增强情况,并对肝实质回声强度进行动态定量分析。结果在高、低MI情况下,高聚显均能明显增强肝血管、肝实质回声强度和肾多普勒血流信号,作用时间持续约30 min;造影后肝实质峰值回声强度较造影前平均增加(10.36±2.13)dB。所有兔在实验过程中以及实验后观察2周均未发现明显异常。结论高聚显是一安全、显影效果好、持续时间长、在不同MI状态下均能实现实时超声造影的新型高分子材料超声造影剂。     

一种新型高分子聚合材料微泡超声造影剂的制备与体外显影实验

目的 探索应用人工合成高分子聚合材料制备微泡超声造影剂的方法并观察其体外显影效果.方法 采用人工合成高分子聚合物乳酸/羟基乙酸共聚物（PLGA）作为成膜材料,通过双乳化法首先制备包裹水滴的PLGA微球,再通过真空冷冻干燥使微球内的水分升华,形成空隙,然后在冷冻干燥室内缓慢冲入氟烷气体,从而制备内含氟烷气体的PLGA微泡超声造影剂高聚显.将一定浓度的高聚显溶液水囊与脱汽水水囊在体外进行超声显影实验,观察其显影效果.结果 光镜和扫描电镜观察,采用该法制备的高聚显微泡造影剂呈球形,形态规则,大小均匀,表面光滑;高聚显冻干粉复溶后分散度好;激光测径仪检测其粒径分布窄,平均粒径大小与制备过程中声振仪的设置相关;体外显影效果好.结论 采用该方法制备的PLGA微泡超声造影剂高聚显具有大小均匀、显影效果好、抗压性强等特点,同时由于其外壳材料能在体内生物降解,对人体无毒副作用,因而具有广阔的应用前景.     

超声微泡造影剂声诺维与基因转染的研究

超声微泡是一种新型基因转染的载体,超声辐照微泡（SonoVue）可增加基因在体内及体外的转染效率。若在不损伤基因和组织的前提下促进基因的转染,合适的辐照条件是非常重要的。     

自制高分子微泡超声造影机械指数与频率和峰值强度的相关性

目的 探讨兔体内自制高分子微泡CEUS机械指数和频率与峰值强度的相关性。方法 采用单乳化法制备包裹全氟戊烷的嵌段共聚物微泡造影剂,固定其他超声扫描条件,对6只新西兰大白兔于机械指数0.04、0.09、0.17、0.34和超声频率3.5、5.0、6.5、8.0 MHz下进行肾脏CEUS,分析机械指数和频率与峰值强度的相关性;静脉注射10倍造影剂量微泡,观察毒性反应。结果 自制微泡平均粒径为（3.92±1.43）μm。兔体内峰值强度与机械指数呈正相关（r=0.99,P<0.05）,与超声频率呈负相关（r=-0.93,P<0.05）;静脉注射大剂量微泡后,未见明显毒性反应。结论 采用自制高分子微泡作为造影剂对兔进行CEUS时,峰值强度与机械指数呈正相关,与超声频率呈负相关;微泡安全性良好。     

纳米靶向超声造影剂的研究进展

靶向超声造影是超声分子影像技术的重要部分。随着超声造影技术和生物纳米技术的发展,靶向超声造影剂步入纳米时代。近年来,纳米靶向超声造影剂的制备和在肿瘤诊治中的应用前景备受关注。本文就此进行综述。     

载声敏剂的高分子超声造影剂体内抑瘤效应及其副反应考察

目的通过对比观察载声敏剂血卟啉(HP)的高分子聚合材料聚乳酸羟基乙酸共聚物(PL-GA)超声微泡造影剂(HP-PLGA)的光敏副反应,并观察超声联合该载药微泡对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的声动力治疗效果。方法将35只Balb/c小鼠分为5组,分别将不同浓度的HP-PLGA与单纯HP溶液经尾静脉注入各组小鼠体内,阳光辐照后比较观察不同组小鼠眼睛、背部皮肤、尾巴及肝脏产生的副反应。另建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组进行处理,每组30只。A、B组又分为空白对照(C)组、单纯超声辐照(US)组、超声加空白微泡(US+MB)组、超声加单纯HP(US+HP)组和超声加载HPPLGA微泡(US+HP-PLGA)组,隔天处理一次,连续处理3次。A组荷瘤小鼠治疗后15d,比较各组荷瘤小鼠的质量抑瘤率;B组荷瘤小鼠治疗处理后继续喂养,观察各处理组小鼠的生存期。结果注射40mg/ml与20mg/ml单纯HP组小鼠背部皮肤出现明显的红斑焦痂,眼睛红肿,尾巴肿胀,肝脏出现损伤性病理改变,而其他各组无明显反应。与其他各处理组相比较,超声联合载声敏剂PLGA微泡组质量抑瘤率最大,平均生存天数最长,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论将声敏剂包裹进高分子造影剂内可以大大降低声敏剂的光敏毒性副反应,且该载声敏剂的高分子造影剂具有明显的体内抑瘤作用,为寻求一种安全、有效、靶向性高、毒副作用小的声动力抗肿瘤方法提供了新的思路和依据。     

肿瘤靶向声学造影剂的研究现状及发展构想

抗体偶联声学造影剂介导的靶向超声显像是新近发展起来的靶向诊断肿瘤的一种新方法,具有广阔的应用前景.本文综述目前肿瘤靶向声学造影剂的研究现状,并提出构建新型靶向声学造影剂的新设想.     

血栓靶向脂膜超声造影剂的制备与初步评价

目的制备血栓靶向脂膜超声造影剂,并对其配体结合率进行初步评价。方法通过生物素-抗生物素蛋白桥连法,制备携带血栓靶向配体的脂膜超声造影剂,非靶向脂膜微泡为对照;采用流式细胞仪初步评价靶向微泡配体结合率及其影响因素。结果靶向微泡荧光检测为阳性,对照组为阴性;流式细胞仪分析结果显示该血栓靶向微泡配体结合率达82.96%,对照组仅为0.92%、0.89%。结论采用生物素-抗生物素蛋白桥连接法,可以成功制备血栓靶向脂膜超声造影剂。微泡纯化过程中离心速度与离心时间对配体结合率的影响具有显著意义。