转化生长因子β对异种骨移植局部免疫因子表达的调节

背景：异种骨移植免疫排斥反应是影响预后的主要问题。然而，对异种骨移植中免疫因子表达和调节的认识尚少。白细胞介素1，白细胞介素6和肿瘤坏死因子α是重要的免疫因子．与移植后排斥反应密切相关。目的：观察异种骨移植局部白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达，并探索转化生长因子β对这些免疫因子的调节作用。设计：随机对照实验。单位：解放军第四军医大学西京医院骨科研究所。对象：雄性βαlb／c小鼠72只，体质量20～25g，随机分为3组，复合松质骨载体组，单纯松质骨载体组和空白对照组，每组24只。方法：实验于2003—06／2004—06在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成。复合松质骨载体组小鼠左侧股部肌间隙植入复合转化生长因子β的松质骨载体；单纯松质骨载体组植入单纯松质骨载体；空白对照组仅行手术，不植入材料。术后4，7，14和21d观察各组小鼠植骨或手术区周围组织中增殖细胞记数；应用原位杂交和免疫组化技术检测植骨局部多种免疫因子的表达。主要观察指标：各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定；移植骨局部白细胞介素1α，白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达。结果：①各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定：7d时，复合松质骨骨粒组较单纯牛松质骨骨粒组增殖组织中细胞密度明显高[（470．63&;#177;132．89），（311．46&;#177;93．69）个／视野，P＜0.01]；但14，21d时两组间则无明显差异。②各组小鼠移植骨局部白细胞介素1α，白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达：异种骨移植后的7，14d，复合了转化生长因子β的异种骨移植局部白细胞介素1α和白细胞介素6蛋白质表达分别较单纯异种骨低（7d白细胞介素1α：42．55&;#177;9．65比67．95&;#177;17．82，白细胞介素6：48．26&;#177;11．17比77．21&;#177;15．16；14d白细胞介素1αmRNA：84．77&;#177;7．42比112．94&;#177;7．02，白细胞介素6：78．10&;#177;17．22比121．18&;#177;15．44，P〈0．01），但对肿瘤坏死因子α而言，则无明显差异（P〉0．05）。结论：在异种骨移植局部，多种细胞可以表达白细胞介素1α，白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质，且这种表达受到转化生长因子β的调节。提示了转化生长因子β调节异种骨移植免疫的一种方式。     

异种骨移植中多种免疫因子的表达及转化生长因子-β的调节作用

目的:观察异种骨移植局部白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和蛋白质的表达,探索转化生长因子β(TGF-β)对这些免疫因子的调节作用。方法:将复合了TGF-β的牛松质骨骨粒或单纯牛松质骨骨粒植入小鼠股部肌肉内,于植入后第4,7,14及21天取材检测。结果:在异种骨移植标本中多种细胞成份可表达I-L1α、IL-6及TNF-αmRNA和蛋白质。复合TGFβ的骨移植局部IL1-α、IL-6和TNF-αmRNA的表达明显低于单纯异种骨移植(P<0.01)。结论:在异种骨移植局部,多种细胞可以表达IL-1α、IL-6及TNF-αmRNA和蛋白质,且这种表达受到TGF-β的调节。     

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景:白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用.但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚.目的:采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化.方法:将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置.观察刨面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间.各组分别于术后7d在部分创而取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达.结果与结论:含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短.白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱.肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱.说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一.     

细胞因子对早孕滋养层细胞侵袭性相关基因表达的调节

目的:观察表皮生长因子等多种细胞因子对滋养层细胞表达基质金属蛋白酶等侵袭相关基因的影响.方法:将分离纯化的原代培养早孕滋养层细胞分别予10 ng/mL的表皮生长因子、白细胞介素1α、白细胞介素10,5 ng/mL的肿瘤坏死因子α处理48 h后.采用RT-PCR方法检测肿瘤转移相关蛋白1和肿瘤转移抑制基因的转录表达,用ELISA检测基质金属蛋白酶-2和黏附分子CD44v6蛋白的表达.结果:表皮生长因子使早孕滋养层细胞中肿瘤转移相关蛋白1 mRNA的表达减少,肿瘤转移抑制基因KAI1 mRNA表达增加,并诱导基质金属蛋白酶-2和黏附分子CD44v6蛋白的表达;肿瘤坏死因子α可使早孕滋养层细胞中肿瘤转移相关蛋白1 mRNA表达增加,肿瘤转移抑制基因KAI1mRNA表达降低,而对早孕滋养层细胞中基质金属蛋白酶-2和黏附分子CD44v6蛋白的表达影响不明显;而白细胞介素1α、白细胞介素10抑制早孕滋养层细胞中基质金属蛋白酶-2和黏附分子CD44v6蛋白的表达.结论:表皮生长因子、白细胞介素1α、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α可能通过改变基质金属蛋白酶-2、肿瘤转移相关蛋白1、肿瘤转移抑制基因KAI1、黏附分子CD44v6等侵袭相关基因的表达,在滋养层细胞侵入的调节中扮演不同的角色.     

血清肿瘤坏死因子α及白细胞介素6水平对下肢严重创伤病情变化的预测价值

目的:分析下肢严重创伤患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平变化对病情发展的预测价值。方法:选择2000-01/2003-12广州市第一人民医院骨科收治下肢严重创伤患者36例,按下肢创伤严重度评分为(6.24±1.45)分,下肢创伤严重度评分<7分29例,≥7分7例。根据感染发生与否把患者分为感染组15例和非感染组21例。正常对照组20例,为同期健康体检者。在伤后6h及入院后1,3,5,7,10,14,21d分别采集静脉血标本,应用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平变化。结果:纳入患者36例和正常对照20例,均进入结果分析。感染组和非感染组患者肿瘤坏死因子α、白细胞介素6血清浓度与正常对照组比较均显著增高;伤后早期并发感染前,感染组患者血清肿瘤坏死因子α与非感染组相比无明显差异;并发感染后,感染组患者血清白细胞介素6在伤后6h,1,3,5,7,10,14,21d,肿瘤坏死因子α在伤后3,5,7,10,14d明显升高感染组白细胞介素6在伤后6h,1,3,5,7,10,14,21d分别为(194.93±23.55),(372.24±130.04),(520.65±136.21),(437.85±115.11),(380.21±81.22),(338.62±8.37),(230.41±51.39),(126.71±20.59)μg/L,非感染组白细胞介素6分别为(56.57±7.64),(227.15±7.21),(349.78±85.13),(201.85±73.60),(188.20±96.13),(132.07±7.42),(74.24±11.13),(22.12±6.21)μg/L,P<0.05;感染组肿瘤坏死因子α在伤后3,5,7,10,14d分别为(1.58±0.11),(1.47±0.07),(1.39±0.23),(1.38±0.06),(1.15±0.22)μg/L,非感染组肿瘤坏死因子α分别为(0.93±0.07),(0.91±0.05),(0.82±0.21),(0.81±0.28),(0.76±0.13)μg/L,P<0.05。结论:动态检测下肢严重创伤患者外周血血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的水平变化可有助于病情的评估,而动态检测下肢严重创伤患者外周血白细胞介素6的水平变化更有助于预测伤后感染并发症的发生。     

淫羊藿苷抑制钛颗粒诱导的炎症反应

背景：体外实验表明,淫羊藿苷可抑制脂多糖诱导的急性肺炎,其抗炎作用在磨损颗粒存在的条件下是否依然有效？目的：通过体内外实验相结合的方法探讨淫羊藿苷对磨损颗粒诱导炎症反应的调控作用。方法：①体内实验：将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,钛组和钛＋淫羊藿苷组采用钛诱导小鼠颅骨无菌炎症模型,对照组、淫羊藿苷组也进行相同手术过程,但不植入钛,淫羊藿苷组、钛＋淫羊藿苷组建模当天灌胃给予淫羊藿苷200 mg/（kg·d）,对照组、钛组灌胃给予等量的安慰剂,2周后酶联免疫吸附实验、定量RT-PCR检测肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β蛋白或mRNA的表达量。②体外实验：将小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分别与核因子кB受体配体、核因子кB受体配体＋淫羊藿苷、核因子кB受体配体＋钛颗粒及核因子кB受体配体＋钛颗粒＋淫羊藿苷共培养72 h,ELISA检测培养基上清中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β水平,RT-PCR分析肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β基因mRNA表达。结果与结论：①体内实验：在钛颗粒存在的条件下,口服淫羊藿苷可明显减少颗粒诱导的炎症细胞浸润,使炎性增厚的骨膜变薄,抑制颅骨标本中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β的表达。②体外实验：经钛颗粒刺激后,细胞培养基中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β质量浓度显著增加,细胞中相应mRNA表达量上调,而经淫羊藿苷干预后这两种炎性因子在蛋白和基因水平的表达量显著下调。结果表明淫羊藿苷在体内外均可显著抑制钛颗粒诱导的炎症反应。     

骨髓间充质干细胞静脉移植脊髓损伤大鼠肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β的表达

背景:研究认为间充质干细胞的营养支持在脊髓损伤治疗中起了主要作用,其同损伤宿主神经组织间的相互作用可导致一些不利于损伤修复的炎症因子表达减少。目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞静脉注射移植对脊髓损伤后肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达的影响。方法:运用改良Allen法制备大鼠T10脊髓外伤性截瘫模型,随机分为对照组和骨髓间充质干细胞移植组,设未损伤脊髓的假手术组做对照。骨髓间充质干细胞移植组、假手术组均接受大鼠骨髓间充质干细胞静脉注射移植,对照组静脉注射等量PBS。结果与结论:对照组和骨髓间充质干细胞移植组损伤脊髓肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β蛋白表达较假手术组有明显增加(P<0.05);骨髓间充质干细胞移植组与对照组比较,肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β蛋白表达受到明显抑制(P<0.05)。提示大鼠骨髓间充质干细胞静脉移植后能使损伤脊髓局部的肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达程度降低。这可能是改变脊髓损伤区的微环境,减少脊髓继发性损伤,促进损伤大鼠运动功能恢复的机制之一。     

兔外伤性白内障囊外摘除术后房水细胞因子的表达

目的:观察兔外伤性白内障囊外摘除术后房水中白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α表达水平的动态变化及与眼内炎症反应的关系。方法:实验于2004-03/2006-03在暨南大学医学院附属深圳眼科中心研究所完成。①将15只新西兰白兔采用随机数字法分成3组,正常对照组、外伤组及外伤手术组,每组5只。②外伤组、外伤手术组的实验动物在全麻下用5号针头自角膜缘穿刺进入前房,划破晶体前囊膜约5mm,制成双眼外伤性白内障动物模型。③于外伤后第3天对外伤手术组的实验动物行白内障摘除术,并于手术后当天及1,3,7,14d检查各组动物前房炎症反应情况并抽取各组实验动物的房水作房水细胞计数及分类,同时测定房水中细胞因子白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达水平和动态变化,进行统计学分析。结果:①外伤组、外伤手术组当天及1,3,7,14d房水中白细胞总数明显高于正常对照组。②术后1～14d外伤组、外伤手术组房水中的白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α含量均明显高于正常对照组(P<0.05),外伤手术组与外伤组之间差异也有显著性(P<0.05),而术后当天3组之间比较差异无显著性(P>0.05)。③各细胞因子的含量在第7天时达到高峰,14d时逐渐明显降低,但外伤组、外伤手术组仍明显高于正常对照组(白细胞介素1:(11.23±3.85),(27.62±4.35),(5.75±3.82)ng/L;白细胞介素6:(12.77±5.25),(25.79±4.85),(7.69±3.76)ng/L;肿瘤坏死因子α:(110.35±12.61),(186.33±16.79),(57.42±6.57),P<0.05)。结论:外伤及手术后眼内炎症反应的严重程度与房水中细胞因子白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达水平的动态变化密切相关,细胞因子是外伤性白内障术后眼内炎症反应的重要介质。     

舒血宁注射液干预急性心肌梗死介入治疗患者血浆糖原合成酶激酶3β水平的变化

目的:观察急性心肌梗死经皮冠脉内介入治疗患者血浆糖原合成酶激酶3β及脂质过氧化反应水平变化及舒血宁注射液的干预作用。方法:选取2004-11/2005-09在解放军总医院行急诊经皮冠脉内介入治疗的急性心肌梗死患者45例。随机数字表法分为舒血宁组23例,男15例,女8例,平均年龄(56.8±10.3)岁。在经皮冠脉内介入治疗基础上加用舒血宁注射液40mL静脉注射,1次/d,共7d。对照组22例,男13例,女9例;平均年龄(55.3±11.5)岁。行经皮冠脉内介入治疗,另取15例健康人血浆为正常对照,平均年龄(52.3±8.3)岁。分别应用ELISA法、分光光度计法、聚合酶链反应法和western blotting法,检测患者入院时及术后第1,3,7天的血浆糖原合成酶激酶3β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、超氧化物歧化酶、丙二醛水平。结果:45例患者、15名正常人全部进入结果分析。①血浆糖原合成酶激酶3βmRNA及糖原合成酶激酶3β蛋白含量:舒血宁组和对照组患者入院时、术后1d较正常组升高;术后3d和7d舒血宁组低于对照组(3d:0.224±0.023比0.321±0.036,0.401±0.044比0.524±0.054;7d:0.186±0.021比0.245±0.033,0.154±0.025比0.215±0.022,P<0.01)。②血浆超氧化物歧化酶、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平:舒血宁组和对照组患者入院时、术后1d血浆白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、丙二醛水平均高于正常组;术后3d和7d患者血浆白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、丙二醛水平显著降低,舒血宁组低于对照组,超氧化物歧化酶活性高于对照组。结论:心肌梗死经皮冠脉内介入治疗患者血浆糖原合成酶激酶3βmRNA及蛋白水平呈先上升后下降的趋势,舒血宁注射液能减轻再灌注损伤,具有心肌保护作用,该作用可能与血浆糖原合成酶激酶3βmRNA及蛋白调节有关。     

兔角膜移植后房水中血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子α表达与高压氧的影响

背景:血管内皮生长因子和肿瘤坏死因子α在角膜移植免疫反应中起重要作用,但二者与高压氧之间的关系尚不明确。目的:探讨高压氧对角膜移植后房水中血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子α表达的影响及其与角膜移植免疫反应的关系。方法:分别以鸡、兔为供、受体建立异种异体穿透性角膜移植模型。将健康新西兰白兔16只随机分为2组,高压氧组从手术当日至术后第6天行高压氧治疗,对照组未行高压氧治疗。分别于角膜移植后第3,7,14,28天抽取房水,应用ELISA双抗体夹心法检测房水中肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平的变化。结果与结论:正常兔眼房水中均可检测到少量的肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子。移植后早期两组房水中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子水平即升高,与移植前比差异均有显著性意义(P<0.05)。在移植后14d左右急性排斥反应期,肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子达最高值。高压氧组中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子的水平均明显低于对照组(P<0.05)。结果表明高压氧可通过降低房水中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子的含量,抑制角膜移植后的免疫反应。     

肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠的器官保护作用

目的 观察肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子表达以及组织病理学的影响.方法 24只SD大鼠被随机均分成对照组、失血性休克组、失血性休克+肠系膜淋巴管结扎组.采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠肠、肝、肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;苏木素一伊红(HE)染色观察各组织的病理学改变.结果 失血性休克大鼠肠、肝、肺组织TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表达均较对照组明显升高(TNF-α mRNA:肠0.54±0.07比0.37±0.05,肝1.014-0.06比0.56±0.07,肺0.94±0.07比0.62±0.06;IL-6 mRNA:肠0.89±0.12比0.50±0.09,肝1.07±0.10比0.57±0.12,肺1.09±0.09比0.67±0.06,P均<0.01);肠系膜淋巴管结扎可明显降低肠、肝、肺组织TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达(TNF-α mRNA:肠0.47±0.05比0.54±0.07,肝0.81±0.07比1.01±0.06,肺0.80±0.05比0.94±0.07;IL-6 mRNA:肠0.66±0.07比0.89±0.12,肝0.83±0.13比1.07±0.10,肺0.73±0.11比1.09±0.09,P<0.05或P<0.01).组织病理学观察显示,肠系膜淋巴管结扎可明显减轻失血性休克引起的肠黏膜绒毛坏死、脱落;减轻肝细胞变性、坏死;减轻肺水肿和炎性细胞浸润.结论 肠系膜淋巴管结扎可降低失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子TNF-α、IL-6的表达及病理损伤程度,对器官功能起保护作用.     

慢性血吸虫感染对脓毒症小鼠保护作用的研究

目的 初步探讨慢性血吸虫(SJ)感染对脓毒症小鼠的保护作用及其机制.方法 选择BALB/c雄性小鼠,按随机数字表法分组进行三部分实验.实验1:经腹部皮肤接种SJ尾蚴感染8周建立慢性SJ感染模型,分为正常组和SJ组,每组10只;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-4和IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测腹腔巨噬细胞IL-10和TNF-α的mRNA表达,了解慢性SJ感染小鼠免疫状态.实验2:以脂多糖(LPS)腹腔注射诱导小鼠脓毒症模型,分为LPS组和SJ-LPS组,每组15只;用ELISA法动态观察注射LPS后0、24、48和72 h细胞因子的变化,0 h的水平相当于正常小鼠和SJ感染8周水平,观察慢性SJ感染对脓毒症过程的影响.实验3:分别以盲肠结扎穿孔术(CLP)和LPS诱导两种不同的脓毒症模型,评价慢性SJ感染对脓毒症小鼠72 h存活率的影响.结果 实验1:SJ组血清抗炎因子IL-4[(151.35±12.24)ng/L]和IL-10[(133.22±11.09)ng/L]水平较正常组[IL-4(56.32±8.66)ng/L,IL-10(48.17±7.23)ng/L]显著升高(均P＜0.05),并可使巨噬细胞向替代活化性巨噬细胞分化,慢性SJ感染使腹腔巨噬细胞高表达IL-10 mRNA(SJ组4.46±1.82,正常组1.52±0.60),抑制TNF-α mRNA表达(SJ组1.61±0.93,正常组2.32±1.03,均P＜0.05).实验2、3:慢性SJ感染小鼠血清IL-4、IL-10于注射LPS后0 h即显著升高,随后下降,至72 h仍明显高于LPS组[IL-4(ng/L):92.2±7.6比41.5±4.5;IL-10(ng/L):92.1±7.8比35.6±4.0,均P＜0.05];TNF-α、IFN-γ均于24 h达峰值后逐渐下降,至72 h SJ-LPS组仍显著低于LPS组[TNF-α(ng/L):82.9±5.6比91.5±5.2;IFN-γ(ng/L):44.1±4.8比52.6±4.0,均P＜0.05].慢性SJ感染可明显改善CLP或LPS所致脓毒症小鼠的存活率(CLP:80%比20%,LPS:70%比30%,均P＜0.05).结论 慢性SJ感染可使脓毒症小鼠血清抗炎因子升高,存活率上升,从而起到保护作用.

Abstract：

Objective To preliminarily study the protective effect of chronic schistosoma japonica (SJ)infestation against sepsis in mice and its mechanism. Methods BALB/c male mice were used, and the experiment was divided into three parts. Experiment 1: chronic SJ infestation model was reproduced by SJ cercaria inoculation through abdominal skin for 8 weeks. Twenty mice were randomly grouped into normal group (n=10) and SJ group (n=10). The levels of interleukins (IL-4, IL-10), tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interferon-γ (IFN-γ) in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Real-time polymerase chain reaction (PCR) was employed to detect the levels of IL-10 mRNA and TNF-αmRNA in abdominal macrophages. This experiment was meant to evaluate immune state in mice with chronic SJ infestation. Experiment 2: lipopolysaccharide (LPS) was intraperitoneally injected to reproduce sepsis model. Thirty mice were randomly grouped into LPS group (n=15) and SJ-LPS group (n=15). The levels of cytokines were determined by ELISA at 0, 24, 48 and 72 hours after LPS injection. This experiment was meant to detect the effect of chronic SJ infestation in mice during the septic process. Experiment 3 : two types of sepsis model were reproduced by cecal ligation and puncture (CLP) and LPS injection, respectively. The survival rate of mice with chronic SJ infestation in 72 hours in either type of sepsis was evaluated. Results Experiment 1, compared with normal group [IL-4 (56.32±8.66) ng/L, IL-10 (48.17±7.23) ng/L],chronic SJ infestation showed an increase in serum IL-4 [(151. 35 ± 12. 24) ng/L] and IL-10 [(133. 22 ±11. 09) ng/L, both P＜0. 05]. Chronic SJ infestation also resulted in an increase in IL-10 mRNA expression (SJ group 4. 46±1. 82, normal group 1. 52±0. 60) and inhibited TNF-α mRNA expression (SJ group 1. 61±0.93, normal group 2. 32±1.03) in abdominal macrophages (both P＜0. 05), indicating that macrophages could be differentiated into alternative activated macrophages. Experiments 2 and 3 showed that the levels of serum IL-4 and IL-10 were increased at 0 hour after LPS injection, and then gradually decreased in SJ-LPS group, but the levels were still higher than those in LPS group at 72 hours [IL-4 (ng/L): 92. 2±7. 6 vs.41.5±4. 5; IL-10 (ng/L): 92. 1±7. 8 vs. 35. 6±4. 0, both P＜0. 05]; the levels of TNF-α and IFN-γ were increased at 24 hours, and then decreased in SJ-LPS group, and the levels were lower than those in LPSgroup at 72 hours [TNF-α (ng/L): 82. 9±5. 6 vs. 91. 5±5. 2; IFN-γ (ng/L): 44.1±4. 8 vs. 52. 6±4. 0,both P＜0. 05]. Therefore, chronic SJ infestation could improve the survival rate of mice with sepsis induced by CLP or LPS (CLP: 80% vs. 20%, LPS: 70% vs. 30%, both P＜0.05). Conclusion Chronic SJ infestation could elevate anti-inflammatory factors in septic mice, thus ameliorating the survival rate, so it has protective effect on mice with sepsis.     

骨髓间充质干细胞对烟雾吸入性损伤兔早期炎症因子分泌的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对烟雾吸入性损伤早期外周血及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)分泌的影响.方法 全骨髓培养法体外培养兔MSCs,用流式细胞术鉴定.将56只健康新西兰大耳白兔按随机数字表法分为正常对照组(C组,n=8)、烟雾吸入性损伤组(S组,n=24)、烟雾吸入性损伤+MSCs移植组(M组,n=24),后两组再分为伤后2、4、6 h亚组,每组8只.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆及肺组织匀浆液中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎因子IL-10的含量.结果 与C组比较,S组各时间点血浆促炎、抗炎因子均显著升高;各时间点肺组织促炎因子显著升高,抗炎因子无明显变化.与S组比较,M组各时间点血浆促炎因子显著下降,抗炎因子显著升高[6 h时TNF-α(μg/L):1.7±1.7比4.1±1.6,IL-1β(ng/L):9.9±1.7比21.2±2.6,IL-6(μg/L):1.0±0.3比1.3±0.2,IL-10(ng/L):15.2±4.4比7.9±3.5,均P＜0.05];各时间点肺组织促炎因子显著降低,而抗炎因子仅在4 h、6 h显著升高[6 h时TNF-α(ng/L):503.0±156.4比587.7±171.2,IL-1β(ng/L):0.4±0.2比0.6±0.2,IL-6(ng/L):155.2±13.7比350.2±20.3,IL-10(ng/L):23.3±5.4比11.0±5.6,均P＜0.05].结论 MSCs移植能降低烟雾吸入性损伤早期促炎因子水平,升高抗炎因子水平,改善全身炎症反应,对烟雾吸入性损伤肺组织具有一定的保护作用.

Abstract：

Objective To explore the effect of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) engraftment on secretion of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukins (IL-1β, IL-6, IL-10) in peripheral blood and lung homogenates in the early stages of smoke inhalation injury. Methods MSCs were proliferated by the method of whole marrow culture and identified by flow cytometry. Fifty-six healthy New Zealand rabbits were randomly divided into control group (C group, n=8), smoke inhalation injury group (S group, n=24)and smoke inhalation injury+MSCs engraftment group (M group, n=24). The latter two groups were subdivided into 2, 4, 6 hours after injury subgroups, with 8 rabbits in each group. The levels of TNF-α,IL-1β, IL-6 and IL-10 in peripheral blood and lung homogenates were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with C group, concent of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in peripheral blood at each time point in S group were increased significantly.The concent of pro-inflammatory cytokines in lung homogenate at each time point in S group was significantly higher than thoae in C group, and that of anti-inflammatory cytokines showed no significant changes.Compared with the S group, concent of pro-inflammatory cytokines in peripheral blood in M group was decreased significantly, and that of anti-inflammatory cytokines was increased significantly [6 hours TNF-α(μg/L):1.7±1.7 vs. 4.1±1.6, IL-1β (ng/L): 9.9±1.7 vs. 21.2±2.6, IL-6 (μg/L): 1.0±0.3 vs.1.3 ± 0. 2, IL-10 (ng/L): 15. 2 ± 4. 4 vs. 7. 9 ± 3.5, all P＜0.05]. Concent of pro-inflammatory cytokines at each time point in M group was decreased significantly when compared with S group in lung homogenate,while only anti-inflammatory cytokine at 4 hours and 6 hours was increased significantly [6 hours TNF-α (ng/L): 503. 0±156. 4 vs. 587.7±171.2, IL-1β (ng/L): 0.4±0.2 vs. 0.6±0.2, IL-6 (ng/L): 155.2±13.7 vs. 350.2±20.3, IL-10 (ng/L): 23.3±5.4 vs. 11.0±5.6, all P＜0.05]. Conclusion MSCs engraftment could decrease pro-inflammatory cytokines and increase anti-inflammatory cytokines in the early stages of smoke inhalation injury, thus amelioratea inflammatory reaponse, which confers protective effect on smoke inhalation injury.     

2型糖尿病肾病患者血中炎性因子与尿微量白蛋白的关系

目的探讨血清炎性因子超敏C反应蛋白（hs—CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）对早期糖尿病肾病的影响。方法将2010年1月至2011年9月收治的60例糖尿病患者据尿白蛋白排泄率（UAER）分为正常白蛋白尿组20例（UAER〈20μg／min）、微量白蛋白尿组20例（20—200μg／min）、大量白蛋白尿组20例（UAER〉200μg／min）。另选同期健康体检者20名作为正常对照组。检测各组血清hs—CRP、TNF-α、IL-6浓度并进行比较。结果正常对照组血清hs—CRP浓度为（1．21±O．87）mg／L,TNF-α为（1．27±0．93）ng／L,IL-6为（4．31±1．72）ng／L;正常白蛋白尿组患者的血清hs—CRP浓度为（2．31±1．07）mg／L,TNF-α为（1．95±1．34）ng／L,IL-6为（5．79±1．68）ng／L;微量白蛋白尿组患者的血清hs—CRP浓度为（3．47±1．25）mg／L,TNF-α为（2．86±1．26）ng／L,IL-6为（7．13±1．57）ng／L;大量蛋白尿组患者的血清hs-CRP浓度为（4．83±1．47）mg／L,TNF-α为（4．03±1．43）ng／L,IL-6为（9．14±2．43）ng／L;与正常对照组比较,正常白蛋白尿组和微量白蛋白尿组的hs-CRP、TNF-α、IL-6增高,差异均有统计学意义（P均〈0．01）;与正常白蛋白尿组比较,微量白蛋白尿组的hs-CRP、TNF-α、IL-6增高,差异均有统计学意义（P均〈0．05）;大量蛋白尿组的hs-CRP、TNF-α、IL-6浓度明显高于微量白蛋白尿组（P均〈0．01）。糖尿病肾病患者hs—CRP、TNF-α、IL-6浓度与尿微量白蛋白相关分析结果显示,随着血清hs-CRP、TNF-α、IL-6浓度的升高,尿微量白蛋白水平也随之增高（L值分别为0．67、0．64、0．75,P均〈0．01）。结论hs—CRP、TNF-α、IL-6炎性因子可能参与了糖尿病肾病的发生发展过程。     

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠血清肿坏死因子α及转化生长因子β1的影响

背景在前期实验的基础上,本实验进一步研究健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1含量的变化及相关性,借以深入探讨其对骨代谢的调节作用.目的观察去卵巢骨质疏松模型鼠血清中肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1含量变化以及相关性,分析补肾健脾中药健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠骨代谢的具体调节机制.设计以实验动物为观察对象,通过摸球法进行随机化分组.单位福建中医学院骨伤系、福建中医学院中心实验室.对象对象的样本量为6月龄SD雌性大鼠50只,体重350～400 g,随机分成5组,每组10只,以切除卵巢为模型,用单纯随机化方法分成5组,并规定第1组为假手术组,即行腹部切口但不切除卵巢.第2～5组为造模组,即进行腹部切口双侧卵巢切除术造模.其中第2组为单纯模型组;第3组为生理盐水组;第4组为骨松宝组(骨松宝成份淫羊藿、川芎、牡蛎等);第5组为健骨颗粒组(健骨颗粒成份煅狗骨、淫羊藿、党参等中药).方法假手术组只行腹部切口但不切除卵巢,将第2～5组切除卵巢造模.于术后3个月时腹腔注射麻醉药40mg/kg戊巴比妥处死假手术组和单纯模型组大鼠,经相关指标检测确定模型成立.第3～5组大鼠按照组别分别喂服生理盐水2 mL/(kg·d)、骨松宝1.5 g/(kg·d)和健骨颗粒2g/(kg·d),统一于术后第13周,即模型成立后给药,用药12周后在麻醉状态下统一处死.取颈动脉血检测血清中肿瘤坏死因子-α、转化生长因子-β1及雌二醇的含量,结果用x±s表示,组间比较用t检验.主要观察指标去卵巢后12周及喂服药物12周后各组大鼠血清肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1、雌二醇的含量以及其相关性.结果①去卵巢后12周,随着雌二醇水平下降,血清肿瘤坏死因子α含量明显升高,而转化生长因子β1浓度却明显降低.②当喂服健骨颗粒12周后,血清雌二醇和转化生长因子β1浓度[(54.05±15.92),(9.12±1.79)ng/L]回升明显,与同期生理盐水组相比[(27.24±2.99),(5.53±1.46)ng/L]差异有显著性意义(t=5.234,t=4.907,P＜0.01),而肿瘤坏死因子α含量与生理盐水组相比却出现下降[(32.44±3.42),(65.86±35.36)ng/L,t=2.975,P＜0.05].③血清肿瘤坏死因子α与雌二醇含量呈负相关(r=-0.324,P＜0.05);血清转化生长因子β1与雌二醇含量呈高度正相关(r=0.673,P＜0.01);血清肿瘤坏死因子α与转化生长因子β1亦呈负相关(r=-0.387,P＜0.02).结论健骨颗粒通过调整骨质疏松模型鼠体内雌二醇水平,制约肿瘤坏死因子α的合成、分泌及其活性,解除对转化生长因子β1的抑制作用,使破骨细胞的骨吸收活动减弱,成骨细胞的骨形成作用增强,改善骨代谢的负平衡.     

休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞炎症介质表达的影响

目的 观察休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)自由基及一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,进一步探讨休克淋巴液损伤PMVECs的机制.方法 原代培养大鼠PMVECs至第3代进行研究.无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型(动脉压40 mm Hg维持90 min,1 mm Hg=0.133 kPa).引流正常大鼠和休克大鼠肠系膜淋巴液及门静脉血,与PMVECs孵育6h,同时以胎牛血清(FBS)和无血清的DMEM培养液作为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α和IL-6的mRNA表达;检测培养上清液中丙二醛(MDA)、NO、TNF-α和IL-6的含量.结果 体积分数为4%终浓度的休克淋巴液作用6 h后,PMVECs中iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达以及培养上清液中MDA、NO、TNF-α和IL-6水平均显著高于空白对照组、正常淋巴液组、休克血浆组、正常血浆组和无血清对照组;且休克血浆作用PMVEC 6 h后的iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达及培养上清液中NO水平均显著高于空白对照组、正常淋巴液组、正常血浆组和无血清对照组(P<0.05或P<0.01).结论 4%终浓度的休克淋巴液可致大鼠PMVECs中iNOS、TNF-α和IL-6的mRNA表达增强,促进自由基释放,从而诱导细胞损伤.     

三种细胞因子与白血病异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病的关系

背景:目前转化生长因子α与移植物抗宿主病关系的报道较少,急、慢性移植物抗宿主病患者转化生长因子α与多种因子联合的检测值得研究.目的:分析血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4和转化生长因子α在白血病患者异基因造血干细胞移植后的变化与发生移植物抗宿主病轻重程度的关系.设计:病例对照观察.单位:解放军总医院第二附属医院器官移植中心血液科及解放军总医院第二附属医院核医学科.对象:选择2005-06/2007-06在解放军总医院第二附属医院器官移植中心血液科及解放军307医院移植科住院首次接受异基因造血干细胞移植的42例白血病患者,男23例,女19例,年龄16～68岁,平均35岁.其中急性粒细胞性白血病12例,急性淋巴细胞性白血病15例,慢性粒细胞性白血病15例,移植患者中行外周血移植37例、骨髓移植5例.异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病20例(Ⅰ～Ⅱ度18例、Ⅲ～Ⅳ度3例),未发生急性移植物抗宿主病21例,发生慢性移植物抗宿主病14例(局限型5例、广泛型9例),未发生慢性移植物抗宿主病28例.选择30名同期到院健康体检者为正常对照组,男18名,女12名,年龄20～70岁,平均44岁.所有受试对象均对实验项目知情同意,实验经过医院伦理委员会批准.方法:用放射免疫分析法检测并比较白血病异基因造血干细胞移植患者及正常对照者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4和转化生长因子α水平,同时比较移植后发生或未发生急性移植物抗宿主病,发生或未发生慢性移植物抗宿主病及发生轻重程度的白血病异基因造血干细胞移植患者3种细胞因子水平.主要观察指标:血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4、转化生长因子α水平比较.结果:白血病患者42例及健康对照者30名均进入结果分析.[1]急、慢性移植物抗宿主病患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4、转化生长因子α水平均高于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.05～0.01),未发生急性移植物抗宿主病患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素-4水平高于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01,0.05).急性移植物抗宿主病患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4、转化生长因子α水平高于未发生者,差异有显著性意义(P<0.05).慢性移植物抗宿主病患者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4、转化牛长因子α水平高于未发生者,差异有显著性意义(P<0.05).[2]急性移植物抗宿主病Ⅲ-Ⅳ度或慢性移植物抗宿主病广泛型患者血清肿瘤坏死因子α及转化生长因子α水平均高于急性移植物抗宿主病Ⅰ-Ⅱ 0或慢性移植物抗宿主病局限型,差异有显著性意义(P<0.05～0.01).结论:异基因造血干细胞移植术后动态监测肿瘤坏死因子α、白细胞介素4和转化生长因子α水平变化有助于对发生急性或慢性移植物抗宿主病预测,对判断移植物抗宿主病的轻重程度有一定意义.     

新生儿急性呼吸窘迫综合征患者血清miR-183-5p的表达及与IL-1β，IL-6和TNF-α水平的相关性

目的　探讨新生儿急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）患者血清miR-183-5p的表达及其与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的相关性。方法　选取保定市第二中心医院收治的87例ARDS新生儿为研究对象。根据ARDS患儿出院时生存情况分为生存组（n=68）和死亡组（n=24）,按照新生儿危重评分结果分为非危重组（n=53,>90 分）、危重组（n=24, 70～90 分）、极危重组（n=15, <70 分）,比较各组血清miR-183-5p,IL-1β,IL-6及TNF-α水平差异。ARDS患儿miR-183-5p与IL-1β,IL-6及TNF-α的相关性采用Pearson相关分析。结果　与生存组比较,死亡组血清miR-183-5p（2.15±0.94 vs 0.96±0.38）,IL-1β（168.20±30.62 vs 110.25±19.30,pg/mL）,IL-6（217.28±44.27 vs 151.30±32.46,pg/mL）及TNF-α（81.16±19.24 vs 48.27±14.30,pg/mL）水平均明显升高（P<0.001）。随着病情加重ARDS患儿血清miR-183-5p,IL-1β,IL-6及TNF-α水平逐渐升高,极危重组>危重组>非危重组（P<0.001）。相关分析显示,ARDS患儿血清miR-183-5p表达水平与IL-1β,IL-6及TNF-α均呈正相关（P<0.001）。结论　ARDS患儿血清miR-183-5p高表达与IL-1β,IL-6,TNF-α水平及病情严重程度相关,可能是预测ARDS患儿病情严重程度的生物学指标。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子κB信号转导的影响及其机制

背景青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体,在治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)方面,具有较明确的疗效,但其治疗机制尚不清楚.目的观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF-αmRNA、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响,以阐明该药治疗RA的可能机制.设计以细胞为研究对象,分组对照的重复测量设计.单位一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所.材料实验于2002-03/2002-10在全军烧伤研究所实验室完成.实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只.以AA大鼠为模型,收集滑膜细胞,依次作如下分组正常对照组,AA组,AA+青藤碱30 mg/L组,AA+青藤碱60 mg/L组,AA+青藤碱120 mg/L组.电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,反转录PCR检测TNF-α mRNA,IL-1β mRNA,IL-10 mRNA的表达.主要观察指标不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞NF-κB活性,TNF-1β mRNA,IL-1β mRNA及IL-10 mRNA的对比结果.结果与正常对照组相比,AA后滑膜细胞内NF-κB活性与TNF-α mR-NA,IL-1β mRNA,IL-10 mRNA的表达均显著升高,分别为17±6,0.570±0.047,0.730±0.093,0.683±0.081(t=2.71～4.07,P<0.05).经青藤碱作用后,NF-κB活性的变化趋势与TNF-α mRNA,IL-1 mRNA的相关性较好(r=0.810,P<0.001;r=0.562,P<0.05),与IL-10 mRNA无统计学上的相关性,青藤碱在一定的浓度范围(30～120 mg/L)内呈浓度依赖性抑制NF-κB活性与TNF-α mR-NA,IL-1β mRNA的表达,而对IL-10 mRNA的抑制效应与浓度无关.结论青藤碱可能通过抑制NF-κB活性而降低滑膜细胞内TNF-α mR-NA及IL-1β mRNA的表达.